必需磷脂具有下列生理功能, 通过直接影响膜结构使受损的肝功能和酶活力恢复正常, 调节肝脏的能量平衡, 促进肝组织再生, 稳定胆汁[1,2,3]。
泛酸是辅酶A的组成部分, 参与蛋白质、脂肪、糖在体内的新陈代谢。动物实验表明泛酸缺乏可引起神经肌肉变性和肾上腺皮质功能不全[4]。本试验建立了准确, 可靠、精密度良好、回收率较高的高效液相色谱法测定必需磷脂注射液中右旋泛酸钙的含量。
测定方法:色谱条件与系统适用性试验。用氨基键合多孔硅胶为填料;以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液 (30:70) , 用磷酸调节pH至4.7为流动相;流速为1.0 mL/min;检测波长为214 nm;进样量为20μL;右旋泛酸钙和其他峰之间分离度应符合规定, 理论板数按右旋泛酸钙峰计算应不低于2 000。
精密吸取本品2 mL, 置10 mL的容量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 作为供试品溶液;另精密称取右旋泛酸钙对照品适量, 加水配制成每1 mL中约含60μg的溶液, 作为对照品溶液。取供试品溶液和对照品溶液各20μL注入液相色谱仪, 记录色谱图, 按外标法计算含量。
精密称取右旋泛酸钙对照品约15 mg, 置于50 mL的容量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀;分别精密吸取适量, 用水稀释成每1 mL中含右旋泛酸钙为15、30、60、90、120、150 g的溶液, 取上述溶液各20μL注入液相色谱仪, 记录色谱图, 以峰面积A对浓度C进行线性回归, 计算回归方程及相关系数, 结果显示右旋泛酸钙在15.11～151.1μg/mL的浓度范围内, 峰面积与浓度之间呈良好的线性关系。
分别精密称取右旋泛酸钙对照品约12 mg (80%处方量) 、15 mg (100%处方量) 、18 mg (120%处方量) , 每个处方量各称三份, 各按50 mL的处方量加入处方中的其他成分, 并按其工艺流程制成均一澄清的溶液, 作为供试品溶液;另精密称取右旋泛酸钙对照品适量, 加水制成每1 mL中约含60μg的溶液, 作为对照品溶液。分别取上述溶液各20μl注入液相色谱仪, 记录色谱图, 计算回收率, 结果见表1。
从上述试验结果可看出, 采用HPLC法测定本品中右旋泛酸钙的含量, 高、中、低3种浓度的回收率结果均在98.0%～102.0%之间, 相对标准偏差<1%, 说明用该法测定右旋泛酸钙含量回收率高, 准确性好。
由不同分析者在不同时间用不同仪器按右旋泛酸钙含量项下的方法测定本品中的右旋泛酸钙的含量, 结果见表2。
本品三批样品由不同人在不同时间用不同的仪器所测得右旋泛酸钙含量的RSD%均<1%, 证明该法精密度较好。
精密吸取本品2 mL, 置于10 mL的容量瓶中, 加水稀释至刻度, 置于室温下避光保存, 分别于0、1、2、4、6、8 h取20μL注入液相色谱仪, 试验结果显示, 按右旋泛酸钙含量测定项下方法配制的供试品溶液在2 h内比较稳定, 2h后峰面积开始下降, 说明该溶液应在2 h内检测完毕。
取本品三批样品, 照含量测定项下的方法, 依法测定三批样品中右旋泛酸钙的含量, 结果见表3。
由表3可知, 三批样品中泛酸钙的含量测定结果均符合规定。
右旋泛酸钙易溶于水, 微溶于乙醇。
通过以上一系列的方法学研究结果表明, 高效液相色谱法测定必需磷脂注射液中右旋泛酸钙的含量, 该法灵敏度高、重复性好、在测定浓度范围内, 峰面积A与浓度之间呈良好的线性关系, 回收率高, 且处方中其他成分对右旋泛酸钙含量测定无干扰, 故本法可以作为必需磷脂注射液中右旋泛酸钙的含量测定方法。
摘要：目的 建立测定必需磷脂注射液中右旋泛酸钙含量的测定方法。方法 在214nm波长条件下测定必需磷脂注射液中右旋泛酸钙的含量。结果 右旋泛酸钙在15.11～151.1μg/ml的浓度范围内, 峰面积与浓度之间呈良好的线性关系 (r=0.99997) ;平均回收率为100.11%, RSD=0.54% (n=9) 。结论 本法准确, 可靠、精密度良好、回收率较高, 可用于必需磷脂注射液中右旋泛酸钙含量的测定。
关键词：必需磷脂注射液,右旋泛酸钙,含量测定,高效液相色谱
[1] 吴建梅, 陈大为, 孙波, 等.天然活性成分磷脂复合物药学研究概述[J].中国药学杂志, 1998, 33 (1) :9-11.
[2] 刘方, 李三鸣, 苏德森.药物磷脂络合物的研究进展[J].国外医药合成药、生化药、制剂分册, 1996, 17 (5) :300-303.
[3] 翟光喜, 娄红祥, 邹立家, 等.药物磷脂复合物的研究进展[J].中国药学杂志, 2001, 36 (12) :800-803.
[4] 周正华.高效液相色谱法测定D-泛酸钙的含量[J].山东化工, 2007, 36 (5) :35-37.
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