液相色谱仪调研报告（精选11篇）
笔者首次利用液相阻断ELISA试验检测牛羊O型口蹄疫免疫效果, 检测牛45头份, 羊45只份, 现将检测结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 检测样品
1.1.1 郭勒木德镇的拖拉海村和阿拉尔生态畜牧业合作社分别无菌采集牛血45份, 羊血45份, 共计牛90份, 羊90份。
1.1.2 倾斜试管静止24 h, 待血清自然析出, 分装、标记、冷藏保存运送至实验室。
1.2 器材准备
1.2.1 移液器。0.2~10 u L、5~50 u L、50~200 u L、50~300 u L12道移液器各一把;U型微量血凝板18块。
1.2.2 纯水仪制作纯净水。
1.3 试剂
1.3.1 从2℃~8℃冰箱取出口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒回归室温 (20℃~25℃) 30min。该试剂盒由青海省动物疫病预防控制中心提供, 中国农业科学院兰州兽医研究所生产, 有效期为6个月, 批号:2014120901-3。
1.3.2 将本试剂盒配备的25倍PBST浓缩液用纯净水稀释成1倍PBST:按1∶25倍稀释 (1份浓缩液加入24份纯净水进行稀释) 。
1.3.3 底物溶液的配制。取一片柠檬酸-磷酸盐片剂溶于100m L纯净水中, 溶化后, 取50 m L本溶液, 再加一片邻苯二胺 (OPD) 片剂, 充分溶解, 分装, 避光, 临用前加每1 m L底物溶液加10u L3%双氧水。
2 操作方法
2.1 抗原抗体反应
在U型反应板上, A1-A10孔每孔加75 u L的1x PBST和25 u L被检血清, 以50 u L/孔的量稀释至1∶512;在A11孔加50 u L1x PBST和50 u L标准阳性血清, 以50u L/孔的量稀释至1∶1 024;A12孔和B12孔稀释阴性对照血清, 从1∶2稀释至1∶4;E12-H12孔为病毒抗原对照。
2.2 加病毒抗原
将病毒抗原用1x PBST稀释至1∶5的工作浓度, 以50 u L/孔量加入到被检血清、阴阳性对照的每一个孔中, 4孔病毒抗原对照仅加入100 u L/孔稀释好的病毒抗原。每孔加入50u L病毒抗原, 封板, 振荡, 置4℃冰箱过夜。
2.3 移板
将抗原抗体混合液从U型板上按次序以50u L/孔的量移至已包被口蹄疫O型兔抗的ELISA板上, 封板, 37℃温育60min。
2.4 加豚鼠抗体工作液
洗板5次, 甩干, 以50u L/孔加口蹄疫O型豚鼠抗体工作液, 封板, 置37℃温箱温育30min。
2.5 加兔抗豚鼠Ig G-HRP工作液
洗板5次, 甩干, 以50 u L/孔加兔抗豚鼠Ig G-HRP工作液, 封板, 置37℃温箱温育30 min.
2.6 加底物溶液
洗板5次, 直接加底物溶液每孔50 u L (加底物溶液之前, 按1 m L底物溶液加10 u L3%双氧水) , 37℃温箱温育15 min。
2.7 加终止液
每孔直接加50 u L终止液, 置酶标仪上读取OD492nm值。
3 结果判定
3.1 判定试验是否成立
设立的4孔病毒抗原对照OD492nm值均在1.0~2.0内;阳性对照效价在1∶1024滴度以内;阴性对照抗体效价<1∶8。故而本次试验成立。
3.2 判定被检血清抗体效价
病毒抗原4孔, 弃去最高和最低OD492nm值, 剩余2孔的平均值除以2, 即为50%对照值, 该值就表示阻断50%反应的对照OD492nm值即临界值。被检血清的OD492nm值大于临界值的孔为阴性孔, 小于等于临界值的孔为阳性孔。若临界值与稀释倍数最高阳性孔的OD492nm值相同, 则以被检血清阳性孔的最高稀释倍数作为该份血清的抗体效价;若临界值处于两个孔之间, 抗体效价取上下两孔稀释倍数的反对数中间值。
3.3 判定检测结果
被检血清抗体效价大于或等于1∶128判为口蹄疫O型抗体阳性;小于1∶128判为抗体效价阴性[1]。据统计共检测牛血清45份, 抗体阳性34份, 阳性 (合格) 率75.6%;检测羊血清45份, 抗体阳性42份, 阳性 (合格) 率93.3%。
4 结果分析
此次引用液相阻断ELISA试验检测牛羊O型口蹄疫免疫抗体各45份, 抗体效价均达到农业部规定的标准 (群体抗体效价70%) 。抽检样品的群体均在2014年10月份注射过口蹄疫双价苗, 截止液相阻断ELISA试验操作虽比正向间接血凝试验 (PHA) 繁琐, 但它的精确性、稳定性远远高于正向间接血凝试验[2]。在操作中几个关键点把握不好, 也会导致实验结果发生偏差或试验失败, 笔者简要介绍液相阻断ELISA操作中的几点注意事项。
5 小结
5.1 试剂的回温及室温孵育试剂盒中所有试剂, 包括包被反应板, 在使用之前恢复至室温 (20℃~25℃) , 特别是冬季气温较低, 充分的回温尤为重要。室温孵育时, 控制室温在20℃~25℃, 避免在冷气、光照、热源或通风口等温度不均匀的位置进行检测, 注意不要把反应板直接放在冰冷的实验桌面上, 可以垫上东西作为缓冲[3]。
5.2 反应时间每次加样最好按统一顺序加, 计时要准确。反应板多时, 要记得依次加样。
摘要：利用液相阻断ELISA方法检测郭勒木德镇拖拉海村和阿拉尔村的健康牛、羊O型口蹄疫免疫抗体牛45头份、羊45只份, 检出牛血清样品阳性 (合格) 34份, 阳性 (合格) 率75.6%;检出羊血清样品阳性 (合格) 42份, 阳性 (合格) 率93.3%。
关键词：液相阻断ELISA,检测,免疫抗体
参考文献
[1]马军武, 刘湘涛, 胡弘博, 等.液相阻断ELISA检测口蹄疫病毒抗体方法的建立[C].中国畜牧兽医学会第九次全国口蹄疫学术研讨会论文集.兰州:中国畜牧兽医学会口蹄疫分会, 2003, 364~368.
[2]马军武, 林密, 祁淑芸.检测口蹄疫Asia-Ⅰ型病毒抗体液相阻断ELISA的特异性和敏感性[C].中国畜牧兽医学会第九次全国口蹄疫学术研讨会论文集.兰州:中国畜牧兽医学会口蹄疫分会, 2005, 378~380.
分析：XXX 我来研究院已经一年多，主要做基本分析操作，需要负责液相，为了严格保证分析数据的准确性，必须以严谨科学的态度对待，从制备样品过程到仪器采集过程都要非常谨慎、认真。
这次有幸得到公司提供的培训机会，去上海Agilent科技大学培训中心参加了为期四天的液相色谱培训。培训期间老师讲述了从硬件、软件及维护保养各个方面的问题，让人一下充实了不少。
通过这次的学习培训，使我对分析过程有了深入的理解，并对高效液相色谱仪的使用和维护有了更全面的了解和更多的认识，现在做总结如下：
液相色谱主要分为：溶剂柜、脱机机、泵、自动进样器(手动进样器）、柱温箱、检测器。各个模块由CAN 线进行通讯连接，使得各个模块形成一整套系统。化学工作站和仪器系统之间用LAN线连接。
一、硬件
1、在线脱气机
2、泵（我公司使用的是四元泵，当使用盐溶液和有机溶剂时，建议将盐溶液接到四元比例阀下面的通道上（A或D），有机溶剂接到上面的通道上（B或C）。如果经常使用盐溶液，建议定期用水冲洗所有的通道以去除阀口上可能出现的盐沉淀。）
3、进样器（我公司为标准自动进样器。进样体积重复性高，进样动态范围宽，连续冲洗流路并有洗针功能，降低样品残留，可以容纳不同规格的样品瓶。灵活的进样程序编程可以进行样品前处理，使用旁路可以降低延迟体积。）
4、柱温箱
5、检测器（我公司使用的是VWD检测器用于产品开发及质量控制。）
二、化学工作站
1、方法的编辑和保存
2、谱图处理及优化
3、积分参数优化
4、光谱功能
5、校正表建立，设定报告，报告设计
三、日常维护和常见色谱故障
1、溶剂准备：溶剂过滤是要防止固体颗粒损伤仪器或柱头。常用0.45um的滤膜，使用色谱纯的溶剂。定期更换溶剂，避免溶剂瓶直接日照，每两天更换或过滤溶剂，用滤膜过滤溶剂去除微生物，在使用时一定要脱气。
2、保护色谱柱
①过滤所有的溶剂和样品 ②使用保护柱
③仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液 ④在适当的溶剂中保存柱子 ⑤柱子在不使用时，两端密封保存 ⑥注意色谱柱的pH值使用范围 ⑦不要高压冲洗柱子
⑧不要高温下过长时间使用硅胶键合相
3、常见色谱故障 ① 双峰
原因：柱头塌陷或柱床运动、柱前滤芯堵塞、样品量过大、进样器流路存在分叉流路。
② 基线噪音、基线漂移
原因：检测池脏、灯能量下降、流动相脏、温度不稳定。③ 鬼峰、柱外扩散、峰扩展、拖尾峰、前伸峰、负峰 原因：流动相尤其水脏、连接接头不匹配、进样体积大、色谱柱过载、溶解样品溶剂通过色谱柱时平衡破坏。
④ 压力过高、压力过低、压力波动
原因：色谱柱过滤芯被污染、毛细管进样针或针座阻塞、阀失灵、密封垫老化、泵内有气泡。
⑤ 常规维护区域：溶剂入口、泵、检测器
四、Agilent Lab Advisor 软件
Agilent Lab Advisor是独立化学工作站之外的一个工具，这个工具提供维护、诊断、监控及警告功能。
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气相色谱仪检漏技术总结与应用
周正雄
（呼伦贝尔金新化工有限公司工艺部中心化验室，内蒙古呼伦贝尔 021506）
摘 要：气相色谱法是一种以惰性气体（又称载气）作为流动相、以固定液或固体吸附剂作为固定相的分析方法。气路系统的气密性良好是保证得出可靠数据最重要的前提条件之一。本文重点叙述气相色谱仪的气路结构特点与实用检漏方法，并列举了其在测定微量CO2出现倒峰时的应用，为色谱初学者了解和使用气相色谱仪提供一些帮助。
关键词：气相色谱仪；检漏技术；微量CO2；倒峰1 气相色谱仪的气路结构 1.1 概述
载气、燃气、助燃气是一台具备FID检测器的气相色谱仪必备的三路气体，若是只带TCD检测器的气相色谱仪则只有载气。燃气、助燃气用于维持FID火焰的燃烧，使碳氢化合物发生电离，所以调节好流量后一般直接通向FID检测器的喷嘴处，气路比较简单。
而载气引入色谱仪先要进入稳压阀，然后分别进入两个稳流阀形成两个相互独立的气路。稳流阀分两路出来后一支进入压力表，一支直接进入汽化室或六通阀，然后带着样气一同进入色谱柱。若有隔垫吹扫，则少量载气会从进样隔垫旁侧放空；若有分流，则有一定量的混合气会放空，剩下的气体进入色谱柱分离。
分离后的气体一般直接进入检测器测定。若装有加氢转化炉，则先进转化炉加氢后再进检测器，之后放空到大气中。1.2 气路系统涉及到的部件
1.2.1稳压阀：用以稳定载气（或燃气）的压力，常用的是波纹管双腔式稳压阀。
1.2.2稳流阀：当气体阻力发生变化时，仍然能维持气体流速稳定的装置。
1.2.3汽化室：能将液体样品瞬间气化为蒸汽。
汽化室实际上是一个加热器。
1.2.4六通阀：通过旋转或伸缩使载气能在定量管与色谱柱入口之间进行切换的取样器。1.2.5色谱柱：根据物质与固定相之间的吸附作用或溶解效果来分离不同气体组分的装置。分为填充柱与毛细管柱。
1.2.6分流阀：用于调节分流比的手动调节阀。1.2.7进样隔垫：用硅橡胶制作，用于注入液体样品，同时可以使外界与汽化室隔绝。1.2.8尾吹阀：用于调节尾吹流量的调节阀。1.2.9 TCD检测器：通过不同气体导热系数不同的性质来定量的浓度型检测器。
1.2.10 FID检测器：通过碳氢化合物在氢火焰中燃烧能产生带电离子流的性质来定量的质量型检测器。
1.2.11 加氢转化炉：能在加热与镍触媒条件下使碳氧化物与氢气反应生成甲烷的装置。2 气相色谱仪的检漏 2.1 气路系统漏气的危害 ①基线稳定性变差；
②信噪比减小，最小检测浓度可能达不到要求； ③在程序升温分析时出现“鬼峰”； ④分析重复性变差；
⑤影响仪器，尤其是极性色谱柱寿命；
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⑥浪费气，若使用氢气会发生危险。2.2 检漏的注意事项
①检漏液最好用GC专用检漏液，代用品可用稀释的洗涤剂溶液，不能用肥皂水；
②对于全程无法检漏的气路，可以采用半程检漏； ③有条件时，柱温最好在低于40℃下检漏； ④用分子量小的气体要比用分子量大的气体检漏要求低，即用氢气或氦气检漏合格的气路，可用于氮气、空气气路，反之不合适；
⑤气路检漏目前仍主要用涂发泡剂的方法，但为了避免对气路系统的污染，应尽量少用，在毛细管气路中最好不用；
⑥系统检漏不合格时，应找到漏气部位，只需重新拧紧那些漏气的接头，决不能盲目的把所有接头都拧紧一遍，否则引起接头永久变形，不但影响寿命，还会出现不应有的漏气。2.3 常用气路系统检漏方法 2.3.1一般方法
把气路系统或某段通气封死，通过在一定时间内观察管内压力下降幅度，判断漏气的大小。当不合格时，用发泡剂涂抹有关接头，寻找漏气部位。此方法工作原理简单，任何单位人员均可操作，但操作中应注意：
a，操作FID进行全系统检漏有时困难时，可选半程检漏；
b，微小漏气很难查处；
c，检漏段若有漏气点，压力下降速度和检漏段内总体积有关，若遇到加装过滤器时，相同时间内允许的压力下降值应适当减小;d，为了有效寻找漏点，检漏段内通的气体最好用小分子的氦气或氢气；
e，由于使用任何检漏液或多或少总有污染物存在，在检漏时尽量少用，用后擦干； 2.3.2分段检漏法
稳压阀-稳流阀装在仪器内部，出厂检验合格后一般不会漏气，主要检查气化室、气化室与色谱柱连接处、色谱柱与检测器连接处、检测器至出口部分。
采用分段检测的步骤如下；
1）更换一只新的进样口密封垫，将气化室柱接头用一密封堵头封闭，开启钢瓶总阀，调节减压阀手柄是其输出压力只是为0.4~0.5MPa，调节稳压阀使其压力指示为0.3MPa,观察柱前压力，应缓慢上升至稳压阀的输出压力0.3MPa，这时表明气化室不漏气；压力下降表明有漏气现象，检查气化室密封垫、柱连接处，再者就是载气气路管与气化室焊接处（这一步只能拆开气化室检查）。2）拆下气化室堵头，接上色谱柱将色谱柱出口堵死，带有热导检测器的用户可将色谱柱接在热导池检测器上，将热导池检测器出口处堵死，重复上一步的检查步骤，压力缓慢上升至稳压阀的输出压力（0.3MPa）,表明不漏气，压力上不去，表明漏气，上升但达不到0.3MPa，表明有轻微的漏气现象，这时可用试漏液检查。2.3.3 甲烷气检漏法
在用氮气做载气时，可将一股探测气体射向被怀疑可能漏的部位，然后根据检测器的响应信号大小和时间来判断漏气情况。探测气的种类，系选用的检测器而定。如FID习惯用甲烷或天然气。此方法灵敏度高，可用于检查任意点，但操作比较麻烦，需具备一定条件。
①这是检漏毛细管系统的一种方便和无污染的方法，是用气渗透原理。漏气处存在一个很大的压差，当漏气点存在着对检测器敏感的气体时，只要能渗透进很少量的气体，就会引起很大的响应。当然漏气点位置不同响应时间会有差别，如漏气点在柱下游，反应会十分迅速；若在柱上游，则因检漏气体在柱中有一定的保留时间，会有一定
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滞后。
②配有FID的气路系统，检漏步骤是把检测器和柱箱温度升到所需温度，并把火点燃，柱箱温度为室温，灵敏度调到比较高的位置，把甲烷或天然气连到一个可用针阀调节的直径为Φ3*1mm、长100mm的不锈钢管上，调节流速使火焰长1.5*20mm左右，然后灭火，把气体喷嘴对准漏气的检测点几秒，如检漏点在柱下游，记录笔会马上偏移，对于灵敏度在10的11A/mV时，偏移若大于满刻度的5%，说明漏气比较大；如漏气点在柱上游，并使用天然气，由于柱子的分离作用，记录将会出现几个小峰。另外气体也可以用丙烷或丁烷。
2.3.4 外气路的检漏
1）将气体钢瓶减压阀逆时针旋转关闭，逆时针打开钢瓶总阀，待压力表压力指示稳定后，顺时针关闭总阀，观察其压力，如果下降表明有漏气现象，观察十分钟以上如果压力下降小于0.01MPa,表明不漏气；这一步检查的部位是：减压阀与钢瓶连接接头和减压阀总压力表是否漏气，有漏气现象后再用试漏液检查具体部位；
2）将减压阀出口气路管路卸下，用一堵头螺帽密封，减压阀处于关闭状态，打开钢瓶总阀，待压力稳定后，顺时针旋转打开减压阀，调节其输出压力为0.3MPa,这时再关闭钢瓶总阀，观察其压力是否下降，下降表明有漏气现象，主要检查的部位是：减压阀、输出压力表、气路管连接头，其具体部位使用试漏液检查；
3）取下减压阀气路堵头，接上气路管，将气路管另一头用一两通密封，在减压阀关闭的情况下，打开总阀，再打开减压阀，调节其输出压力为0.3MPa,观察其压力表是否下降，这一步主要检查的是气路管。其余净化器-脱氧管-气路管-气路与仪器接头的检漏以此类推。检漏技术在工作中的应用
我们曾在测定空分分子筛出口空气中微量CO、CO2的一台气相色谱仪上出现过CO出正峰、CO2出倒峰的情况，这是一个典型的漏气现象导致的问题。漏气问题本身不难解决，而困难的是寻找漏气点的过程，这里就要用到前面所述的相关检漏方法。3.1实验条件 3.1.1色谱参数
气相色谱仪型号：重庆川仪SC-3000B 载气：N2，20mL/min 燃气：H2，30mL/min 助燃气：空气，120mL/min 进样器：手动平面六通阀 定量管：1mL 柱箱温度：100℃ 控温精度：±0.1℃ 色谱柱型号：GDX 101
色谱柱规格：2mΦ3不锈钢填充柱 检测器种类：FID 检测器温度：230℃ 标气组分： CO：1.1ppm CO2：5.1ppm 余：氢气 3.1.2气路描述
样气通过进样六通阀被载气带入色谱柱分离，CO、CO2被分开后依次进入加氢转化炉，CO先进去，CO2后进去，反应生成甲烷后直接进入FID检测器，以甲烷的信号出现在谱图上。3.2初步分析与判断
3.2.1通过调节载气流速与柱温，得到一张分离良好的曲线图：
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图1 从图中看出，CO较高，CO2较低，而CO2的含量几乎是CO的5倍，可以看出CO2是有疑问的。3.2.2大约两天后，再次在实验条件相同的情况下进标样，得到这样两张谱图：
图2
图3 根据CO峰面积大小看出进样操作没有问题，根据倒峰保留时间这个地方应该出CO2，所以得出这是CO2的倒峰。出现这种情况的原因是载气进入定量管之前就已经含有CO2，并且含量要比标气中CO2含量高，致使标气对载气中的CO2进行了稀释，才出现倒峰。3.3排查漏点 3.3.1漏点定位
图4
不仅出现倒峰现象，而且基线不稳，难以满足分析需求。
由此进一步得出存在漏点的结论，因为是在定量管之前漏气，所以省去气化室、气化室与色谱柱连接处、色谱柱与检测器连接处、检测器至出口部分的检查，直接检查色谱仪上的载气入口至定量管之间的部分，即2.3.2分段检漏法。同时气瓶间钢瓶出口至净化器-脱氧管-气路管-气路与仪器接头这段外气路也是检查重点，除此之外，气瓶里面的气体质量也可能引入CO2杂质。3.3.2载气入口至定量管的检漏
由于检测器是FID检测器，该段主要是稳压阀与稳流阀以及附属管线，根据倒峰的大小可以判断是微漏，所以优先采用2.3.3甲烷气检漏法。按照上述甲烷气检漏法的条件要求准备相应实验器材，由于没有纯甲烷气与天然气之类，这里用
75%甲烷标气（余氢气）代替甲烷气也是可以的。
图5
调整好甲烷流量对各个主要连接处进行吹扫，并停留足够长时间后，得到图5这样的曲线图，图
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中显示的是基线依然很差，没有预计中的大甲烷峰。于是得出仪器内气路的气密性是良好的。3.3.3载气质量检测
将气瓶间的在用气瓶搬到仪器旁边，用聚四氟乙烯管直接将其连到色谱仪氢气、氮气入口（空气不会影响，所以不用换），得到如下谱图：
图6 该图显示，气瓶里面没有引入CO2，出峰是正常的。于是，漏点锁定在气瓶间一级减压阀至用气终端及净化管这一段。3.3.4查出漏点
用2.3.4中所述方法，用发泡剂检测载气管线的各个部位连接处，未见漏气，而且该载气系统为最近新建的，已经验收合格，因此把主要精力集中于净化管上。用发泡剂检测净化管的有机玻璃与端部接口处时发现有明显漏气现象！取下干燥管重接气路，得到如下曲线：
图7 通过进一步测定ppm级的CO、CO2在加氢转化炉中的转化率与各自峰面积对照，得出气路中不再含有CO2杂质的干扰。总结
4.1气相色谱仪的检漏需要理论联系实际，要对整个气相色谱气路系统有很深入的了解。4.2要结合当前实际情况，仔细分析异常现象，将彼此联系起来，发现最可能漏气的地方，并优先去检查那里，尽量少走弯路。
4.3做好仪器维护台账，将每台色谱出现过的问题记录下来，以便日后出现类似问题时翻阅。
参考文献
[1]化验员读本（第四版）.化学工业出版社.[2]气相色谱仪器系统.化学工业出版社
液相色谱流动系统的流体动力学研究
以流体机械能守恒定律为依据,建立了流动相在液相色谱系统中的流体动力学模型P=k1+k2 qu,并以典型的液相色谱系统证明了其正确性,即流动相的体积流量和其在色谱流动系统中产生的`压强降为线性关系,而流动相的粘度对压强的影响表现在系数k2上的不同,粘度增加,k2值增大.此研究为高效液相色谱分析中色谱柱、流动相及其体积流量的优化选择及辅助系统的设置提供了理论依据和指导.
作 者：庞秀言 孙汉文 申世刚 作者单位：河北大学,化学与环境科学学院,河北省分析科学与技术重点实验室,河北,保定,071002刊 名：河北大学学报(自然科学版) ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF HEBEI UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)年，卷(期)：24(5)分类号：O643.1关键词：高效液相色谱 机械能守恒定律 流体动力学模型 体积流量 粘度
液相色谱法是分析化学中发展最快、应用最广的一种分析方法,特别是高效液相色谱仪已经成为生命科学、材料科学、环境科学等方面必不可少的重要检测方法。现代科学技术的发展使得分析对象越来越复杂,分析要求越来越高,液相色谱的强大功能使其成为新世纪中解决生命科学、材料科学、环境科学等复杂体系发现难题的最有力的技术和方法。
高效液相色谱仪它是在经典液相色谱的基础上,引入气相色谱的理论和技术而发展起来的。在高效液相色谱中,流动相与组分之间有一定的亲和力,分离过程的实现是组分、流动相和固定相三者间相互作用的结果,分离不但取决于组分和固定相的性质,还与流动相的性质密切相关,一般情况下,高效液相色谱仪的分析可在室温下进行,由于采用颗粒极细的固定相,柱内压降很大,加上流动相黏度高,因此必须采用高入口压,以此来维持一定的流动相线速。高效液相色谱仪对于挥发性低、热稳定性差、分子量大的物质特别有利,它在医药、生化等方面具有非常重要的作用。
1 高效液相色谱仪的组成
高效液相色谱仪是实现液相色谱分析的设备。高效液相色谱仪主要由贮液器、脱气器、高压泵、进样器、色谱柱和检测器等组成。
1.1 贮液器
贮液器是用于存放溶剂的装置。贮液器中的溶剂必须很纯,贮液器材料要耐腐蚀,对溶剂呈惰性,一般情况下通常采用1升~2升的大容量玻璃瓶,也可采用不锈钢制成的容器,贮液器应配有溶剂过滤器,以防止流动相中的颗粒进入泵内,溶剂过滤器一般用耐腐蚀的镍合金制成,孔隙大小一般为2μm。
1.2 脱气器
脱气的目的是为了防止流动相从高压柱内流出时释放出气泡进入检测器而使噪声剧增,至使不能正常检测,一般情况下通常采用氦气鼓泡来驱除流动相中溶解的气体,因为氦气在各种液体中的溶解度极低,所以必须先用氯气快速清扫溶剂数分钟,然后再使氦气以极小流量不断流过此溶剂。
1.3 高压泵
泵应耐压、耐腐蚀、密封性好。高压泵主要用于输送流动相,其压力一般为几兆帕至数十兆帕。这是液体的黏度比气体大100倍,同时由于固定相的颗粒极细,柱内压降大,为保证一定的流速,必须借助高压迫使流动相通过柱子。高压泵应无脉动或脉动极小,以保证输出的流动相具有恒定的流速,同时采用脉动阻尼装置可将产生的脉动除去,使流动相的流量变动范围不宜超过2%~3%。
高压泵主要分为恒压泵、恒流泵和螺旋传动注射泵三类。
1.3.1 恒压泵
恒压泵输出的压力恒定,当具有一定压力的气体作用在一个大面积活塞上,大面积活塞再驱动一个小面积活塞,小面积活塞承受的压力是大面积活塞的几十倍,从而得到压力恒定的流出液。
1.3.2 恒流泵
恒流泵的主要功能是输出的流量恒定,如往复柱塞泵、螺旋传动注射泵等。往复柱塞泵与恒压泵不同,通常采用电驱动活塞,当活塞迅速向上动时,由于减压使入口止逆阀开启,出口止逆阀关闭,贮液器中的流动相被吸入柱内,形成一个循环,然后再开始下一个循环。使用这种泵时一定要连接脉动阻尼器,将产生的脉动除去,若采用双活塞泵,使双活塞在相移180°下工作,可使脉动互相抵消,减小噪声。往复柱塞泵的流量与外界阻力无关,恒流泵具有体积小的特点,非常适合于梯度洗脱。
1.3.3 螺旋传动注射泵
螺旋传动注射泵是用电力以很慢的恒定速率驱动活塞,使流动相连续输出,当活塞到达末端时,输出中止,然后由另一个吸入冲程使溶剂重新充满再开始第二次输出,输出时间的长短决定于泵腔体积及输出流量。
1.4 梯度洗脱
梯度洗脱是在分离过程中通过逐渐改变流动相的组成增加洗脱能力的一种方法。通过梯度装置将两种或三种、四种溶剂按一定比例混合进行二元或三元、四元梯度洗脱。梯度洗脱一般采用低压梯度的方法,低压梯度采用低压混合设计,只需要一个高压泵在常压下将两种或两种以上溶剂按一定比例混合后再由高压泵输出,梯度的改变可呈线性、指数型或阶梯型。
1.5 进样器
高效液相色谱仪进样器普遍使用高压进样阀,用微量注射器将样品注入样品环管,使用的样品环管分别有不同的尺寸,可根据分析要求选用。当进样阀手柄放在吸液位置时,流动相直接通过孔的通路流向色谱柱,样品通过注射器从另外的位置进入样品环管,如果有过量的样品则会从出口孔排出,然后将手柄转到进样位置,此时流动相便将样品带进了柱子。
1.6 色谱柱
色谱柱是整个色谱系统的心脏,它的质量优劣直接影响到分离的效果,一般情况下色谱柱通常采用优质不锈钢管制成,并且柱内壁必须光洁平滑,否则内壁的纵向沟痕和表面多孔性也会引起谱带的展宽,柱接头的体积应尽可能小,柱长一般为10 cm~25cm,内径4 mm~5mm。若使用直径为5μm~10μm固定相颗粒,理论塔板可达到5×104/m。尺寸排阻色谱柱的内径通常大于5mm,制备色谱柱则会更大;为了减少溶剂用量,可采用微径柱,内径为1mm,长度为30mm~75mm,若采用3μm颗粒,理论塔板数高达1×105/m。为了保护分析柱不被污染,有时需在分析柱前加一短柱,约数厘米长,此柱称为卫柱,为了防止卫柱过分增加柱阻力,在卫柱中使用的颗粒大小约为10μm~30μm。
1.7 检测器
高效液相色谱仪常用的检测器有紫外吸收、示差折光率、荧光和安培检测器等,对它们的要求和性能指标与气相色谱检测仪基本相同。检测器主要分为紫外吸收检测器、荧光检测器和示差检测器。
1.7.1 紫外吸收检测器
紫外吸收检测器是一种选择性浓度型检测器,它不仅对那些在紫外波长下有吸收的物质有响应,并且还具有灵敏度高、噪声低等优点,在高效液相色谱中应用最广,约占70%。
紫外吸收检测器通常采用氘灯作光源,氘灯发射出紫外线并在可见区范围内可以进行连续的辐射,同时安装一个光栅型单色器,通过扫描获得所需的工作波长,检测器它有两个流通池,一个作参比用,一个作测量用,光源发出的紫外光照射到流通池上,若两流通池通过纯的均匀溶剂,它们在紫外波长下几乎无吸收,光电管上接收到的辐射强度则相等,无信号输出;当组分进入测量池时,吸收一定的紫外光,使两光电管接受到的辐射强度不等,这时有信号输出,输出信号的大小与组分浓度有关,紫外吸收检测器的灵敏度很高,许多功能团在紫外区具有很高的摩尔吸收系数,若采用可调波长的氘灯作光源,在组分的最大吸收波长处进行检测,其检测灵敏度可达0.002AUFS(满刻度吸收单位),最小检测量为几个ng。紫外吸收检测器适用于梯度洗脱,对流动相速度变化不敏感,流动相组成的变化对检测响应几乎无影响,但是只有在检测器所提供的波长下有较大吸收的分子才能进行检测,而且流动相的选择会受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶剂不能作流动相。每种溶剂都有紫外截止波长。当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时,溶剂的透光率才能降到10%以下。因此检测器的工作波长不能小于溶剂的紫外截止波长。从氘灯发出的紫外-可见辐射穿过光闸,光闸是惟一可以移动的部件,它用于暗电流的测量和波长的校正,此辐射不经分光直接通过吸收池、狭缝至衍射光栅经光栅分光的辐射分别投射到约千个二极管阵列的检测器上,约10ms可以测出一次信号,获得数据如此高速,可以使保留时间极短的色谱组分的光谱图不失真,固定光栅和二极管阵列可以消除因机械传动的不确定性而带来的误差,并且此数据的重现性好,灵敏度高,适用于痕量分析,这种检测器的最大优点是可以同时获得吸收值,其保留时间和波长函数图类似于等高线的三维图。由于可以同时获得多种信息,使每个组分在整个波长范围内的光谱信息将会增加,而且可以及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据,从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长,它可以与色谱工作站联用,通过评估程序可以从比较光谱图获得样品纯度的信息,而且可对每一个峰从程序库中进行检索来确定该化合物。
1.7.2 荧光检测器
荧光检测器是一种最灵敏的高效液相色谱检测器。它属于选择性浓度型检测器,光源发出的光束通过透镜和激发滤光片,分离出特定波长的紫外光,此波长称为激光波长,再经聚焦透镜聚集于吸收池上,此时荧光组分被紫外光激发而产生荧光,在与光源垂直的方向上经聚焦透镜与荧光聚焦,再通过发射滤光片分离出发射波长,并投射到光电倍增管上,荧光强度与组分浓度成比例,荧光检测器的灵敏度比紫外吸收检测器约高二个数量级,因此特别适合于痕量分析,非荧光物质可通过与荧光试剂反应变成荧光物质后再进行检测,使荧光检测器扩大了该检测器的应用范围。
1.7.3 示差折光率检测器
示差折光率检测器是一种通用性检测器,只要组分折光率与流动相折光率不同,就能进行检测。反射型示差折光率检测器根据Fresnel反射定律设计,光源发出的光束分别投射到测量池和参比池上,其中有一部分入射光在液体和棱镜界面上就被反射出来,而另一部分则穿过液体后被棱镜底部的不锈钢板反射出来,投射到光电管上。由于流经参比池和测量池的液体的折光率不等,因此反射出来的两束光强就有差别,导致光电管产生信号。示差折光率检测器的通用性好,可以检测的化合物范围广,特别是在尺寸排阻色谱中用得较多。
2 液相色谱仪的进展
二维色谱联用技术主要是在二种色谱之间采用柱切换技术,用多通切换阀来改变色谱柱之间的连接和溶剂流向,实现将一根色谱柱上未分开的组分在另一根柱上用不同的分离原理加以完全分离,尤其适合复杂体系样品的分析。将样品的预处理、分离反应、检测、收集等一个实验室的功能聚集在一个小块玻璃或高分子聚合物芯片上,微流控芯片在芯片基质上蚀刻了各种管道和反应池。通过电渗透、微泵乃至离心等各种方法来实现分离,如测DNA序列的芯片在3cm距离内,只加20V/cm的电压就可在13分钟内测定40BP的序列,分离度大于0.5,高于3000万理论塔板数/米。
随着计算机技术和信息科学在液相色谱技术中的广泛应用,结合人工智能技术能模拟某个领域内专家的思维过程,并且能够解决只有人类专家才能解决问题的智能计算机程序系统。目前已有的各种色谱专家系统能推荐最佳柱系统(包括分离模式、固定相、流动相、等条件)和色谱定性等内容。色谱工作站可以很方便地进行数据处理及仪器管理等工作,如鉴定色谱峰,计算出出峰的时间、峰高及峰面积,组分含量等,对检测结果作出定性及定量结论;还可以对仪器的工作过程、工作条件进行自动控制,如流量、压力、温度、检测条件控制等。
液相色谱仪以独特的特点及其技术的发展,已被广泛地应用到化工、食品分析、环境分析、天然产物分析以及医药、生化、临床检验,它对于疾病的诊断和疗效监测起到了非常重要的作用。如医药方面,高效液相色谱仪可以分析药物的含量,药物在体内的残留量,测定药物在体内的代谢情况等。在生化方面高效液相色谱仪可以分离分析与生命密切相关的多种物质,如氨基酸、肽、蛋白质、核酸、维生素、酶、糖等。临床检验方面可以对疾病的变化通过对人体组织或体液中的异性物质进行含量改变的分析,对于疾病的诊断和疗效监测将会起到重要的作用。
摘要：本文主要阐述了高效液相色谱仪的系统组成。分别介绍了系统贮液器、色谱柱等各部件的功能和工作原理以及在使用过程中应注意的问题。
关键词：高效液相色谱仪,色谱柱,液相色谱,气相色谱,检验仪器
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[9]N,W.Smith and M.B.Evans,Chromatographyia,(1994)98-102.
液相色谱法测定土壤中苯并(a)芘
摘要：用快速溶剂萃取法ASE300对土壤样品进行前处理,以配有荧光检测器的高效液相色谱仪分析土壤样品中苯并(a)芘的含量,该方法以乙腈、水梯度比例混合作为流动相,流速为1.0ml/min;激发波长和发射波长分别为255nm和420nm;保留时间为27.58min.样品的称样量为25g时,测定检出限为8.2810-5mg/kg,相对标准偏差(RSD)为1.0%～12%,回收率为60%～87%,以上指标均能满足环境中土壤样品的检测要求.作 者：周梦春 李刚 ZHOU Meng-chun LI Gang 作者单位：新疆环境监测总站,新疆,乌鲁木齐,830011期 刊：干旱环境监测 Journal：ARID ENVIRONMENTAL MONITORING年，卷(期)：,24(1)分类号：X830.2关键词：土壤 苯并(a)芘 液相色谱法
建立了高效液相色谱法同时测定金银花中3种有机酸(绿原酸、咖啡酸、阿魏酸)和3种黄酮(芦丁、木犀草苷、槲皮素)的`方法.样品中6个组分用50%甲醇在80℃水浴浸泡提取1 h,采用Agilent TC-C18色谱柱分离,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,用紫外二极管阵列检测器检测,方法的加标回收率为93.3%-98.6%.实验结果表明该方法的精密度和重现性良好,操作简单、准确,可同时测定金银花中的有机酸类和黄酮类成分.
作 者：胡海山 余燕影 万春花 鄢兵 龙洲雄 Hu Haishan Yu Yanying Wan Chunhua Yan Bing Long Zhouxiong 作者单位：胡海山,Hu Haishan(南昌大学化学系,南昌,330031;江西省分析测试研究所,南昌,330029)
余燕影,Yu Yanying(南昌大学化学系,南昌,330031)
万春花,鄢兵,龙洲雄,Wan Chunhua,Yan Bing,Long Zhouxiong(江西省分析测试研究所,南昌,330029)
1 方法原理
采用液相色谱中的正相色谱分离法。选用极性固定相 (如硅胶、氨基等) 和非极性流动相 (如正己烷等) 的色谱分离模式, 在一定的条件下, 对柴油中的非芳烃 (包括开链烃及环烷烃、单烯烃) 、单环芳烃 (包括苯类、四氢化萘类、茚满类、噻吩类、共轭多烯烃类) 、双环芳烃 (包括菲类、茚类、屈类、三苯撑类及苯并蒽类) 进行分离, 用示差折光检测器检测, 依据组份的峰面积, 利用标准曲线计算出各组份的含量。
2 实验部分
2.1 仪器设备
(1) 高效液相色谱仪;
(2) 容量瓶:10mL;
(3) 微量注射器:100uL。
2.2 村料与试剂
(1) 环己烷:
纯度大于99%。
(2) 邻二甲苯:
纯度不低于98%。
(3) 二苯并噻吩:
纯度不低于95%。
(4) 9-甲基蒽:
纯度不低于95%。
(5) 1-甲基萘:
纯度不低于98%。
(6) 菲:
纯度不低于98%。
(7) 正己烷:
HPLC级, 作为HPLC流动相。
2.3 典型的试验条件, 见表1。
2.4 分辨率的测定
(1) 配制以下溶液, 用分辨率的测定。
在100m容量瓶中, 分别称取环己烷 (1.0±0.1g) , 邻二甲苯 (0.5±0.05g) , 二苯并噻吩 (0.05±0.005g) 及9-甲基蒽 (0.05±0.005g) 。然后, 用正戊烷稀释至刻度。在不加正戊烷之前必须保证二苯并噻吩及9-甲基蒽完全溶解于邻二甲苯和环己烷的混合物种。
(2) 待仪器稳定后取约80μl的上述样品, 注入定量管 (10μl) 中, 启动色谱仪进行测定。见图1。
分辨率undefined
其中:t1=以秒为单位的环己烷峰的保留时间;
t2=以秒为单位的邻二甲苯峰的保留时间;
y1=以秒为单位的环己烷峰的半峰宽;
y2=以秒为单位的邻二甲苯峰的半峰宽。
计算环己烷与邻二甲苯之间的分辨率, 如果大于5, 则能满足组份分离的要求。
2.5 多环芳烃反冲时间的确定
在预定的时间内, 双环芳烃冲出以后, 对色谱柱进行反方向洗脱, 从而使多环芳烃量窄的谱带洗脱,
因此必须确定反方向洗脱时间。在选定的色谱条件下首先测定二苯并噻吩和9-甲基蒽的保留时间, 然后用下列公式计算反冲时间。
计算公式:B=tA+0.4 (tB-tA)
其中:tA=以秒为单位的二苯并噻吩峰的保留时间;
tB=以秒为单位的9-甲基蒽的保留时间;
计算反冲时间。
2.6 标准曲线的绘制
(1) 依据表2配制标准溶液。用于绘制邻二甲苯、1-甲基萘和菲的标准曲线。
(2) 待基线稳定后, 依次对A、B、C、D标准溶液进行测定, 根据浓度和峰面积, 绘制邻二甲苯、1-甲基萘和菲的测定数据及标准曲线, 分别见图2~4。
图2~4中三条曲线的相关系数均大于0.999, 具有良好的线性相关性。
2.7 重复性考查
本次实验中, 选取了5个不同组份的柴油, 对其进行了测定并进行了重复性考查, 测定结果见表3。
通过表3的数据分析, 可以看到5个不同组份的柴油测定结果有较好的重复性。
2.8 样品再现性的考察
用以上5个不同组份的柴油, 进行了再现性试验, 试验结果略。
通过样品再现性考察的数据, 可以看到在不同实验室测定数据, 具有较好的再现性。
3 结论
利用高效液相色谱仪能够快速准确地测定柴油中芳烃含量, 指导柴油的生产, 保证柴油的质量。
摘要：随着对柴油质量的要求愈来愈高, 对柴油中的稠环芳烃含量作出了严格的要求。使用液相色谱仪, 能够测量出柴油中的各种芳烃含量, 保证柴油质量。
目的建立一种同时快速测定大鼠纹状体中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)、牛磺酸(Tau)5种氨基酸类神经递质的.高效液相色谱法.方法采用Kromasil C18(4.6×250 mm,5 μm)为色谱柱,丹酰氯为柱前衍生试剂,以曲唑酮为内标,以0.1 mol/L醋酸钠缓冲液∶甲醇=58∶ 42、14 mmol/L庚烷磺酸钠为流动相等度洗脱.结果在1～200 mg/L范围内,各组分线性关系良好(r=0.999).各氨基酸的平均回收率为79.1%～92.9%.结论本方法简便、快速、准确, 可用于临床大样本测定和研究神经及精神疾病氨基酸类神经递质的改变.
作 者：黄晓 康学军 肖静 杨鹏 李涛 HUANG Xiao KANG Xuejun XIAO Jing YANG Peng LI Tao 作者单位：黄晓,肖静,HUANG Xiao,XIAO Jing(东南大学公共卫生学院,江苏,南京,210009)
康学军,KANG Xuejun(东南大学学习科学研究中心,江苏,南京,210009)
杨鹏,李涛,YANG Peng,LI Tao(东南大学神经生物学研究所,江苏,南京,210009)
研究了高效液相色谱法测定鱼腥草和甜茶中的糖.样品中的`糖提取液用Waters Sep-pak-C18固相萃取小柱预分离,以Waters carbohydrate高效糖柱为固定相,乙腈-水(体积比70:30)为流动相分离,ELSD 蒸发光散射检测器检测,实现了8种水溶性单糖和二糖的同时测定.
作 者：闫建荣 杨亚玲 刘谋盛 YAN Jian-rong YANG Ya-ling LIU Mou-sheng 作者单位：闫建荣,YAN Jian-rong(云南国防工业职业技术学院,云南,昆明,650224)
杨亚玲,刘谋盛,YANG Ya-ling,LIU Mou-sheng(昆明理工大学,生命科学与技术学院,云南,昆明,650224)
随着科学技术的进步,液相色谱用户对液相色谱技术的要求也不断提高,他们需要“更快地得到更好的结果”。因此,超高效液相色谱(Ultra Performance LC)概念的提出也就十分自然;简单的说:UPLC(超高效液相色谱)是用HPLC(高效液相色谱)的极限作为自己的起点,把分离科学推向一个新领域。
超高效液相色谱应用范围广泛,主要应用类型为高沸点中分子,高分子有机化合物,离子性无机化合物,热不稳定具有生物活性的生物分子。
三聚氰胺(分子式C3N6H6)是一种重要的氮杂环有机化工原料,具有肾毒性。三聚氰胺分子中含有大量氮元素,而普通的凯氏定氮法测定乳粉及食品中的蛋白质含量时无法区分氮元素来源于蛋白分子还是三聚氰胺的氮杂环,因而一些厂商为了降低成本而添加这种化工原料,以提高产品中蛋白质含量检测值。因此,才衍生了乳制品中三聚氰胺的检测方法。三聚氰胺是一种有机化合物,因此采用超高效液相色谱法检测。
检验依据
参照GB/T 22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》第一法
检验原理
样品用三氯乙酸溶液和乙腈提取,经阳离子交换固相萃取柱净化后,用超高效液相色谱仪测定,外标法定量。
相关仪器及试剂
1. 仪器和设备
超高效液相色谱仪:美国沃特世Waters Acquity UPLC
检测器:光电二极管阵列(PDA),此检测器属于固定波长紫外检测器
色谱条件:色谱柱Acquity UPLC BEH HILIC 1.7μm柱温35℃
流动相:乙腈-乙酸铵溶液(0.02 mol/L),体积比为97:3
流速:0.5 m L/min
进样量:2μL
进样器为自动进样器,波长:210 nm。
电子天平:精确度为0.0 001 g,上海精密仪器仪表有限公司
离心机:高速冷冻离心机,最高转速16 000 r/min
真空过滤装置:300 m L
具塞塑料离心管:50 m L
超声波清洗器:KQ3200DE型,昆山市超声波仪器有限公司
固相萃取装置:天津奥特赛恩斯仪器有限公司
氮气吹干仪:天津奥特赛恩斯仪器有限公司
真空泵:天津奥特赛恩斯仪器有限公司
漩涡混合器:江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司
超纯水机:重庆摩尔水处理设备有限公司
2.试剂与材料
甲醇:色谱纯
乙腈:色谱纯
乙酸铵:分析纯
氨水:含量为25%~28%
三氯乙酸:分析纯
三聚氰胺标准品:CAS108-78-01,纯度大于99.0%,来源于中国计量科学研究院
阳离子交换固相萃取柱:混合型阳离子交换固相萃取柱,基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物,60 mg,3 m L
氮气:纯度≥99.999%
微孔滤膜:0.2μm,有机相、无机相。定性滤纸。
实验用水为超纯水,阻值在18 MΩ以上。
3.试剂的配制
(1)标准溶液的配制(表1)
三聚氰胺标准储备溶液(浓度为1 mg/m L):准确称取100 mg(精确至0.1 mg)三聚氰胺标准品于100 m L容量瓶中,用甲醇水溶液溶解并定容至刻度,混匀,即配制成浓度为1 mg/m L的三聚氰胺标准储备溶液,于4℃避光保存。
三聚氰胺标准工作液:分别吸取三聚氰胺标准储备溶液(1 mg/m L)0 m L、1.0 m L、2.0 m L、3.0 m L、4.0 m L、5.0 m L,放入50 m L容量瓶中,用流动相定容至刻度,相当于浓度为0μg/m L、20μg/m L、40μg/m L、60μg/m L、80μg/m L、100μg/m L的三聚氰胺标准工作液,标准工作液经0.2μm有机相滤膜过滤。
(2)流动相的配制
乙腈:色谱纯。
乙酸铵溶液(0.02 mol/L):称取1.54 g乙酸铵,加水定容至1 000 m L,溶解,经0.2μm水系滤膜过滤(现用现配)。
(3)其它试剂的配制
氨化甲醇溶液(5%):准确量取5 m L氨水和95 m L甲醇,混匀后备用。
三氯乙酸溶液(1%):准确称取10 g三氯乙酸于1 L容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,混匀后备用。
甲醇水溶液:准确量取50 m L甲醇和50 m L水,混匀后备用。
阳离子交换固相萃取柱:使用前依次用3 m L甲醇、5 m L水活化。
样品的处理
称取样品2 g(精确至0.01 g)于50 m L具塞塑料离心管中,加入15 m L三氯乙酸溶液和5 m L乙腈,用超声波提取10 min,再振荡提取10 min后,以10 000 r/min转速、温度5℃、离心10 min,离心沉淀后,取上清液经三氯乙酸溶液湿润的滤纸过滤后,用三氯乙酸溶液定容至25 m L,移取5 m L滤液,加入5 m L超纯水混匀后,转移至固相萃取柱中,依次用3 m L超纯水和3 m L甲醇洗涤,抽至近干后,用6 m L氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1 m L/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干,残留物用1 m L流动相定容,漩涡混合1 min,经0.2μm有机相滤膜过滤,供UPLC测定。
空白实验
除了不称取样品外,均按照样品的处理方式进行前处理。
仪器测定
1.标准曲线的绘制
将浓度为0μg/m L、20μg/m L、40μg/m L、60μg/m L、80μg/m L、100μg/m L的三聚氰胺标准工作液在选定的色谱条件下浓度由低到高进行检测分析,以峰面积A对浓度C绘制标准工作曲线。峰面积与浓度呈良好的线性关系,线性相关系数r=0.999 743,具体数值见表2。
2. 样品检测
依次将处理好的空白、样品在与三聚氰胺标准工作液同样的色谱条件下进行检测分析,即可得出空白、样品的浓度值,然后进行结果计算。
3. 结果计算
计算公式:
X——样品中三聚氰胺的含量,单位是毫克每千克(mg/kg)
C——进样中的三聚氰胺的浓度,单位是微克每毫升(μg/m L)
C0——空白实验三聚氰胺的浓度,单位是微克每毫升(μg/m L)
m——样品的质量,单位是克(g)
V1——样品的定容体积,单位是毫升(m L)
V2——取样体积,单位是毫升(m L)
V3——稀释定容体积,单位是毫升(m L)
检测结果与结论
经计算,检测结果为54.91 mg/kg,在全省实验室能力验证的允差范围内。结论是阳泉市质量技术监督检验测试所已具备乳制品中三聚氰胺的检测能力。
注意事项
1.流动相使用前要经过脱气和过滤处理。
2.使用前后都要清洗柱子,以防柱压升高。
3. 三聚氰胺标准工作液配制的准确度直接影响标准工作曲线的线性关系,从而影响样品的检测结果。
4. 实验用水为超纯水,阻值在18 MΩ以上。
5. 三聚氰胺标准储备溶液要求4℃避光保存,以保证标液的稳定性。
6. 所有三聚氰胺标准工作液和样品进仪器前都要经过0.2μm有机相微孔滤膜过滤。
7. 色谱柱Acquity UPLC BEH HILIC 1.7μm在不工作时,要用100%甲醇注满。
8. 整个固相萃取过程流速不超过1 m L/min。
9. 三聚氰胺标准工作液要用流动相定容,并用0.2μm有机相微孔滤膜过滤。
10. 乙酸铵溶液要现用现配。
摘要：超高效液相色谱仪分析是20世纪60年代中期提出并发展起来的新型光谱分析技术,它具有超强分离能力、超高分离速度、超高灵敏度、选择性高、简单方便的方法转换等优点。
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