沙棘资源开发利用探究论文提纲

论文题目：沙棘中功效成分液相色谱-高分辨质谱精准检测鉴定技术研究

摘要：沙棘Hippophae thamnoides L.,胡颓子科沙棘属植物,含有丰富的营养物质和功效成分,具有健脾消食,止咳祛痰,活血散瘀等功效。对于沙棘中功效成分的研究,文献中已有报导,发现的功效成分包括多糖类、黄酮类、维生素类、脂类以及三萜类和甾醇类等。传统检测技术只能依据功效成分对照品对沙棘进行检测,对于没有对照品的功效成分,则无法识别。由于对照品价格昂贵,每个实验室的种类有限,所以目前刘于沙棘中功效成分的研究还不够全面。本研究通过充分利用现代色谱及高分辨质谱技术,发展了一种快速、准确、高通量检测鉴定技术,对沙棘样品果、叶、茎中的功效成分进行了全面鉴定,并开发了一种五环三萜类及结构类似物的非靶标分析方法,成功用于沙棘样品中未知五环三萜的检测确证中。该方法为今后充分开发利用沙棘资源提供了基础数据,也为沙棘相关产品的质量控制和药效物质基础研究奠定了基础。全文共分五章,简述如下:第一章介绍了沙棘的产地,药理作用及其功效成分,其中三萜类作为主要功效成分之一,介绍了其定义及分类,并对“三萜家族”中重要的五环三萜类功效成分的检测技术进展进行了总结。第二章为了了解沙棘果茎叶功效成分的整体差异,本研究应用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱联用技术（UPLC-Q-Exactive）结合中药成分高分辨质谱数据库（OTCML）,对沙棘果茎叶的化学成分进行了快速鉴定与比较分析。色谱柱为Hypersil GOLD aQ 色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.9 μ m）,流动相为0.1%甲酸乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）梯度洗脱,流速为0.3mL/min,高分辨质谱采用电喷雾离子源（ESI）正、负离子同时扫描模式。结果共鉴定出沙棘中102个功效成分,包括苷类18个,黄酮类21个,萜类18个,苯丙素类13个,生物碱类6个,挥发成分14个,多酚12个;其中有17个化合物是在沙棘中首次发现,对沙棘果茎叶比较表明这些功效成分在不同部位分布有明显差异。第三章建立了同时测定沙棘中25种五环三萜类化合物的超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱联用（UPLC-Q-Exactive）的分析方法。沙棘样品经优化提取,过滤膜后经Acquity UPLC Hss T3色谱柱（2.1×50mm,1.8 μm）分离,对流动相组成、缓冲液pH值、以及质谱各种参数进行了优化和探讨。结果表明25种五环三萜类化合物在各自的线性范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9912,检出限0.3-1.5 ng/ml,定量限1.0-5.0 ng/ml。回收率80.04-104.08%,相对标准偏差3.01-9.35%（n=6）。本方法已成功应用于不同产地沙棘样品的五环三萜类化合物同时测定及定量分析。第四章开发了一种快速简单的检测方法来精准检测鉴定五环三萜及结构类似物,主要包括羽扇豆烷型、齐墩果烷型和熊果烷型。本方法基于超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱联用技术,运用多重中性丢失碎片扫描结合结构碎片标志物鉴定的方法,以沙棘果样品为检测对象。具体包括以下3大步骤:一、利用已知25种五环三萜类标准品在正负离子模式下的二级质谱信息,推导出的此类结构的质谱裂解规律;二、统计分析得到此类结构在质谱中特有的8个中性丢失碎片和21个结构碎片标志物;三、通过多重中性丢失碎片扫描在沙棘果样品中发现了 15种新的五环三萜类化合物,然后通过结构碎片标志物信息来表征新化合物的结构。该方法能有效地用于其他中草药或食品中五环三萜类化合物的检测鉴别。第五章对药食同源产品质量控制和功效成分全面检测鉴定当前亟待解决的问题及未来非靶标检测研究方向进行了展望。

关键词：超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱;多重中性丢失碎片扫描;非靶标检测;裂解规律;沙棘;五环三萜;中药成分高分辨质谱数据库

学科专业：临床中药学

摘要

ABSTRACT

符号说明

第一章 文章综述

1.1 中药沙棘及其功效成分概述

1.2 五环三萜类功效成分检测技术进展

1.2.1 PT的色谱分离方法

1.2.2 PT的波谱检测技术

1.3 展望

参考文献

第二章 沙棘果茎叶中功效成分差异的快速全面检测分析

前言

2.1 仪器与材料

2.2 实验方法

2.2.1 对照品溶液制备

2.2.2 供试品制备

2.2.3 色谱条件

2.2.4 质谱条件

2.3 结果与分析

2.3.1 样品提取条件的优化

2.3.2 样品OTCML谱库检索条件的优化

2.3.3 样品中功效成分的鉴定

2.3.4 沙棘果茎叶的功效成分差异分析

2.4 小结

第三章 超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱检测沙棘中的五环三萜化合物

前言

3.1 材料与方法

3.1.1 化学品和试剂

3.1.2 标准品的配制

3.1.3 样品收集和处理

3.1.4 液相条件参数

3.1.5 质谱条件参数

3.1.6 方法验证

3.2 五环三萜类标准品的定性和定量分析方法的建立

3.2.1 分离条件和液相色谱参数的优化

3.2.2 质谱参数的优化

3.2.3 同分异构体的鉴别

3.2.4 检测方法的验证

3.2.5 实际样品分析

3.3 小结

第四章 沙棘中未知五环三萜类的非靶标筛查鉴定研究(MNLSR)

前言

4.1 材料与方法

4.1.1 标准品的配制

4.1.2 样品收集和处理

4.1.3 液相条件

4.1.4 质谱条件

4.2 中性丢失碎片扫描和结构碎片标志物鉴定的非靶标方法建立

4.2.1 五环三萜类化合物的裂解规律

4.2.2 中性丢失碎片的统计分析

4.2.3 FULL MS/AIF/NL dd-MS~2扫描模式的建立

4.2.4 结构碎片标志物的统计分析

4.2.5 应用于实际样品

4.3 小结

第五章 结语与展望

参考文献

致谢