微生物检验临床标本采集与技术研究
【摘要】目的：对微生物检测中标本取样操作及其技术展开评估探究。方法：选择2015年5月2日-2016年5月27日本院284例接受微生物医疗取样检验病例，其分布于外科、内科、妇产科等各科室，集中评估病例微生物检测标本的取样操作情况，并探究有关技术的运用规范情况。结果：284例中97例标本不合格，不合格率为33.3%。痰标本不合格率36.7%、尿检验标本不合格率20.0%、血检验标本不合格率12.5% 、分泌物检验不合格率8.3%。微生物标本取样、送检流程中出现的普遍性问题涉及：护士未清楚交代取样注意事项，患者未按要求取样，患者无痰或不能自主咳痰，血液样本没有依照三步消毒法实施处理等。结论：医务检测人员需科学规范病例标本的管理工作，认真完成血样本三步消毒法有关处理及微生物样本质控工作，使检验结果可靠度得以提升。
【关键词】临床检验;微生物;标本;取样;技术
临床中微生物的检测操作流程中所涉及的步骤繁杂，加之，微生物检测关乎到病原学方面的检验程序，因此，检验工作者相当注重相应操作的规范程度。总的来讲，微生物检测程序涵盖了样本采取、处理、封存、运送等各环节，且每一个环节都不容忽视[1]。本文选择2015年5月2日-2016年5月27日本院284例接受微生物医疗取样检验病例，其分布于外科、内科、妇产科等各科室，集中评估以上病例微生物检测标本的取样操作情况，进而探讨有关技术的运用规范情况，现将研究成果呈现如下：
1.对象及方法
1.1调研对象
选择2015年5月2日-2016年5月27日本院284例微生物医疗取样检验标本资料，其分布于外科、内科、妇产科等各科室，采集样本含有痰标本256份，血培养5份，尿培养8份，大便2份，积液1份，分泌物12份。以上样本病例所患疾病以感染性慢性病居多。
1.2方法
检验人员依据规定对培养标本进行检查，对采集时间、标本外观、检测分析、复查等进行分析，并将不合格标本找出。依据项目、不合格原因进行统计，然后分析生物检验不合格标本。
1.3评定标准
评定中采用临床疗效指标应包括用药前后改变情况、非微生物学检查结果、治疗结束后体征和症状。由于各种疾病具有不同特点，所以治疗后化验室检查、体征、病状恢复正常时间也存在差别，所以在确定各疾病随访时间点时充分考虑疾病特点。
1.4统计学数据研究
运用SPSS21.0版统计软件对本次所有相关的调研数据予以整合处理，当中，(±s)表示计量数据，(n/%)表示计数资料;运用2检验组间计数资料的对比，计量资料比较通过t检验，组间数据对比差异显著时表示为P<0.05。
2.结果
2.1检验标本不合格类型构成情况
284例中97例标本不合格，不合格率为33.3%。256份痰标本中94例不合格，痰标本不合格率36.7%;5例尿培养中1例不合格，尿检验标本不合格率20.0%;8例血培养中1例不合格，血检验标本不合格率12.5% ;12例分泌物标本中1例不合格，分泌物检验不合格率8.3%。大便标本和积液标本均合格。
2.2检验标本不合格原因构成
痰标本不合格原因包括标本污染、非标准痰、送检不及时、采集时间错误，256例痰标本中205例(80.3%)标本污染、14例(5.4%)非标准痰、28例(10.6%)送检不及时、9例(3.7%)采集时间错误。5尿培养中5例(100.0%)标本污染。8例血培养中1例(100%)标本污染且未及时送达。12例分泌物标本中1例(8%)标本污染。
3.讨论
采集合格样本能够保证患者检验标本结果的真实性和准确性，实际中减少产生不合格标本的重要方法就是加强护士采样指导和及时送检。依据本研究统计数据，284例中97例标本不合格，不合格率为33.3%。256份痰标本中94例不合格，痰标本不合格率36.7%;5例尿培养中1例不合格，尿检验标本不合格率20.0%;8例血培养中1例不合格，血检验标本不合格率12.5% ;12例分泌物标本中1例不合格，分泌物检验不合格率8.3%。可知微生物不合格标本率最高的是痰标本，接下来分别是尿标本、血检验标本、分泌物标本。痰标本中205例(80.3%)标本污染、14例(5.4%)非标准痰、28例(10.6%)送检不及时、9例(3.7%)采集时间错误。实际中判断痰标本是否合格主要是依据标本质量，标本质量主要取决于上皮细胞与白细胞的比例，细菌的量，细菌生长种类多少等。实际造成痰液不合格的原因主要是标本受到污染，而痰标本污染的主要原因则是护士未清楚交代取样注意事项，患者未按要求取样，患者无痰或不能自主咳痰等[2]。尿标本、分泌物标本不合格原因均是标本污染，血检验标本不合格原因则是标本污染和未及时送达。产生尿标本、分泌物标本污染主要原因是患者外阴清洗、容器无菌清洗存在问题，血检验不合格主要原因则是未依照三步法进行样本消毒处理[3]。
综上所述，医护人员需科学规范病例标本的管理工作，具体操作中应做到：(1)患者取样指导。医护人员应先对患者是否符合采样要求、需采取何种方式采样进行确认，在此基础上正确指导患者进行正确采样，并告知患者送样时间和相关注意事项[4]。(2)科学规范病例标本的管理工作。由于检测微生物工作所涉及的人员比较多，包括医师、医护人员以及带教实习者等，为显效规范这些人员在样本取样、分离处理、封存保管等每个环节中的实际操作，务必强调每种样本的规范采集与运送方法，规避没有掌控好样本存储方法等因素问题[5]。(3)认真完成血样本三步消毒法的有关处理。每一个步骤都依照标准指南中的要求实施，同时罗列出详尽的流程步骤，以免漏掉部分操作[6]。(4)健全微生物样本质控机制。积极构建微生物样本质控体制，对所有检验上岗人员开展入岗前实训，以规范化的流程标准对其进行要求，并且强化样本采集、处理、送运等全过程中的无菌意识，谨防样本被污染，干扰检验所得结果的正确性[7]。临床检验中应采取有效措施提升微生物检验数据及信息的正确度，为就诊检测病人的医疗工作带来便利，使医师依据微生物类别、耐药状况等开具相应的治疗药物[8]。
参考文献：
[1] 徐月林，李晓莉，杨仁洪，等.临床微生物实验室药敏纸片片间均匀性差异的实时监测和药敏质控试验频率的动态调整[J].中国抗生素杂志，2016，41(6)： 478-480.
[2] 江勇，杨丽娜，刘原君，等.沙眼衣原体临床株对利福平的体外敏感性及rpoB基因耐药突变检测[J].中华皮肤科杂志，2015，48(10)：733-735.
[3] 王云峰.自动化临床微生物实验室建设与感染性疾病临床实验室诊断的现状与展望[J].中华检验医学杂志，2013，36(7)：592-594.
[4] 王远芳，康梅.急诊科感染患者微生物标本送检及临床分离菌分布和耐药分析[J].中华急诊医学杂志，2016，25(4)：429-432.
[5] 曹艳，黄一灵，徐艳玲，等.MALDI-TOF MS技术在临床微生物检验领域的应用进展分析[J].临床与病理杂志，2015，35(1)：123-127.
[6] 黄军垣，郑利平.加强住院患者临床微生物检验对控制医院感染的影响观察[J].四川医学，2013，34(4)： 563-564.
[7] 孙院红，罗冲，青小鹤，等.观察临床微生物檢验与检测应用在控制医院感染中的效果[J].临床医药文献电子杂志，2015，2(23)：4787-4788.
[8] 刘微.针对不同临床标本微生物检验的阳性率进行对照的探索和研究[J].大家健康(中旬版)，2014，8(7)：20-20.
作者：李凤祥
随着我国医疗器械的不断发展，血液的检测技术得到了长足的进步。先进的检测设备以及检测方法极大程度的提高了临床血液标本检测的质量与效率。为我国临床医学的研究以及治疗提供了重要的保障。但是血液标本检测质量的控制不仅仅在于检测分析过程、以及检测分析后处理，监测分析前的质量控制至关重要。据统计，临床血液标本检测质量不合格的原因中有80%可以归结为检测所用的血液标本质量不过关。而血液标本的正确采集与否严重影响着血液标本质量。近年来，血液标本逐渐成为常见的临床检验生物液体。在进行临床血液采集工作中首先要杜绝人为失误的影响，提高专业素质，杜绝出现血液标本的错采、漏采、采血量不足、血液标本储存不当等现象。所以为了避免出现以上血液标本采集问题出现，影响检测质量，造成误诊、医疗纠纷等不良后果。本文重点研究了临床血液标本的正确采集及对检测质量的影响。意在促进我院血液标本采集工作的规范，为血液标本检测的准确可靠提供坚实的基础。
1 研究材料与研究方法
1.1 研究材料。入组标准。本研究随机选取了2011年1月至2011年4月之间在我院接受血液采集的案例共31668例。其中每个血液标本均是有专业的护士进行采集，并且所有的血液标本均送往临床检验中心检验。
1.2 研究方法。本研究对31668例血液标本按照标准的检验操作进行血样的检测，在检测之前先从血液标本的外观、采集时间、储存等方面进行筛选，将不合格的血液标本进行确定并且进行详细的原因分析与登记，在通过血样检测分析结果、血液检测复查等各种途径确定漏选的不合格血液标本，最终确定血液标本采集对血液检测的影响因素，以及研究出正确的血液采集方法。
1.3 测评指标。本研究对31668例血液标本在血液采集过程中的外观、采集时间、储存等指标进行观察与比较，并且对血样检测结果的正确性进行分析。
1.4 统计学方法。本研究主要采用SPSS14.0统计软件进行数据录入以及统计学分析。
2 统计结果
对31668例血液标本在血液采集过程中的外观、采集时间、储存、血样检测结果的正确性分析等指标进行统计。不合格的标本一共有894例，占总数的2.82%。并且对血液标本采集对血液检测的影响因素进行分类，大致结果为采集血液标本过程中操作不规范562例，占总数的62.7%。其中包括：操作不熟练所导致的标本溶血386例、血液稀释或凝固125例、动脉血抽为静脉血51例。抗凝剂选用不当332例，占37.3%。
3 结果讨论
通过统计结果可以看出临床血液标本的采集对检测质量的影响非常严重。采集血液标本过程中操作不规范可以占到血样分析前误差的62.7%。由此可见，血液标本的采集工作对于整个的血样分析的质量控制至关重要，但是这一环节往往被护理人员忽视。由血液标本采集对血液检测的影响因素分类可以发现许多非病理性因素是血液标本采集过程中的重要影响因素。比如：采集时间、采集部位、患者准备、采集操作等。所以在进行血液标本采集工作当中应当尽量避免出现类似的因素干扰。正确的血液标本采集方式如下：①采集时间。人体的血液中很多物质是随着时间而呈周期性变化的。比如早晨的白细胞记数相比于午后的普遍低一些，而血液中的钙在中午时候偏低。由此可见尽量要控制好血液标本的采集时间，在同一时间进行标本的采集，从而减少由于时间不同所引起的血样检测结果的波动，相对理想的血样采集时间应当为早晨的7点至8点;②采集部位：通常情况下生物检验所用的血液标本的取血部位为肘静脉，与此同时压脉带的压迫时间尽量控制在合理的范围内。在用血量较少的检测情况下，采集部位一般为手指取血，成年人应当取左手无名指，新生儿应当取拇指或足跟部。并且尽量避免从输液的同侧肢体进行血样的采集;③防止溶血。护理人员在进行血液标本采集过程中要注意注射器以及盛血容器的干燥、清洁。尽量避免在血液采集过程中穿刺损伤组织过多的现象，从而控制红细胞破裂所造成的溶血现象。对于抗凝剂的选用要合理的按照不同的检测项目进行科学的选取。柠檬酸三钠主要运用在对凝血功能检测以及红细胞沉淀等方面的检测工作;④在进行多项目检测工作过程中，应当按照以下的顺序进行采血：血液标本培养管—无添加剂管—血标本凝血管—添加剂管;⑤血液标本检送。血液标本在采集后应当及时送至检测，避免由于血液标本放置过久导致血清或者血浆与血细胞过多接触，从而影响检测结果的准确性;⑥患者的准备。在血液标本的采集过程中，患者的准备也是重要影響因素之一，首先应当保持空腹状态进行血液标本的采集。采血前应当保持空腹12个小时以上，并且在采集前一天内不能食用过多的高脂、高胆固醇类食物。其次尽量保持患者的情绪稳定，避免过量运动。这样才能够保证血液标本的准确性与科学性。
参考文献
[1] 丛玉隆.临床实验室分析前质量管理及对策[J].中华医学检验杂志,2004(08)
[2] 谭晓玉,庞保军.检验标本的正确采集与处理[J].实用医技杂志,2003(08)
[3] 王超强,毛维荣,季广厚.标本质量对检验结果的影响[J].实用医技杂志,2004(05)
[4] 李素珍,林福禧,沈波.人体改变对32项生化指标影响的研究[J].中华医学检验杂志,2003(02)
作者：代瑞红
一、静脉血标本的采集
1.操作者先洗手或用手消毒剂喷雾后揉搓待干;2.根据受检者检验项目选择真空采血 管;3.在穿刺点上方约6cm处系紧压脉带，嘱受检者紧握拳头，使静脉充盈显露，进行皮肤消毒;4.取下双向采血针头无菌帽，以左手拇指固定静脉穿刺部位下端，右手拇指和食指持采血针柄，使针头与皮肤呈30°角沿静脉走向快速刺入皮肤，然后呈5°角向前刺破静脉壁，进入静脉腔。见回血后，将针头顺势深入少许即可;5.将采血针的另一端刺入所需的真空采血管盖中央的胶塞中，血液自动流入试管。如需多管血样，将松开压脉带，嘱受检者松拳，用消毒干棉球压住穿此处，快速拔出针头，嘱受检者按压局部数分钟;6.取下采血针放入利器盒，将所采血样分别贴上相应的条码，抗凝血需立即颠倒混匀，及时送检。
二、动脉血气标本的采集
1.受检者取坐位或卧位，休息5min，应正常呼吸，避免憋气及过度通气，以免影响检 查结果;2.选择动脉血管后，常规皮肤消毒，用动脉采血针(内有肝素)垂直刺入血管，针管自动吸入0.5ml后，用消毒干棉球压住穿刺处快速拔出针头。局部按压5min以上，防止血肿形成;3.拔出后立即将针头用橡皮封闭，隔绝空气。随即挫动注射器，使血液与肝素充分混匀，立即送检。送检过程中要防止针头橡皮脱落，造成空气直接进入注射器。如有不慎脱落，必须如实向检验人员说明情况，并告知临床医生，以免影响检验结果和临床诊断。如确因不能及时送检，可将标本短时间内保存于4℃冰箱中。
三、生化检验标本的采集
注意病人生理因素对检验结果的影响，如年龄、性别、体型、情绪、运动、体位改变等。研究表明，CH、ALP、UA等项目易受年龄的影响，性激素的测定男女差别巨大。受情绪影响较大的项目有GLU、GH、CA、Cor、PRL等。另外，血清中CH、ALB、ALT、ALP、AST、TG、AMY及血清Ca等项目受体位改变因素影响较大。还应注意饮食对测定结果的影响，包括病人是否真正空腹及不进流食。空腹一般控制在12—16h最佳，过长或过短对某些测定结果可产生影响，如GLU、BUN、CR、ALB、UA、TG、电解质、肝功能等。个别项目需病人控制饮食，如血脂测定前最好连续素食3天，以防产生假性结果。注意药物对测定结果的影响，目前以证明至少有100多种药物对多项生化检验结果有影响，如利胆剂可使血清CH升高;肝素使血清CH降低，APTT显著升高，大剂量的维生素C对氧化酶法测定血清GLU有负干扰，CH、TG的Trinder反应产生负干扰，咖啡因造成血GLU、CH增高，冠心平导致血清中TG和LDH增高，大剂量青霉素可使血清CK、ALT、CR升高而BIL降低等。尽可能在标本采集前2d停服药物，却因治疗需要无法停药者，应在检验申请单上注明用药种类和剂量，以备参考。
此外，对采样时间要求严格的检验项目，应详细告诉病人真确记录时间，何时采取标本等事宜，如24h尿蛋白和电解质测定，糖耐量试验等。对于如激素易受生理因素影响的项目，需多次测定时，最好选择每天的同一时间采样，以便减少昼夜变化的影响，便于比较和分析。
四、葡萄糖耐量试验标本的采集
OGTT检查前三天停用胰岛素、肾上腺皮质激素等药物，可正常饮食(每天碳水化合物量一般控制在250—300g)。试验前一天晚上餐后不再进食(空腹8—124h)。标本采集后应立即送检，切忌不同时间点的多份标本采集后一起送检。
五、血液流变学标本的采集
采集前三天停用具有溶栓抗凝作用和降脂的药物，女性避开月经期。采集前空腹12h以上，前一天晚上低脂饮食，患者处于静息状态。避免在输液过程中采血，禁止在输液手臂同侧采集血液，抽血时病人取坐位肘部静脉采血。采血后立即送检并检测，最好在4h内完成，存放于4℃冰箱可延长至12h.血样不宜在0℃以下存放，以免RBC发生破裂。
六、疟原虫标本的采集
间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至十余小时采血为宜，恶性疟患者应在发作开始时采血。怀疑疟疾的患者一次检查阴性应多次复查，必要时骨髓涂片检查疟原虫。采集的静脉血标本应尽快送检，标本应及时制成学膜片。血膜片可于室温中保存，尽早检查。
七、微丝幼标本的采集
以晚上22时至次日凌晨2时病人从睡眠中醒来后，立即采血为宜。如夜间采血确有困难的病人可采用诱出法，即在白天口服海群生2~6mg/kg体重，15~30min后采集血液。采用试管浓集法：取含有0.4ml枸橼酸钠的真空试管(黑色盖子)，采集静脉血2ml注入试管，轻轻颠倒混匀6~8次，防止标本凝固。标本采集后应尽快送检，并及时制成血膜片尽快检查。检验后的剩余血液可以放在冰箱保存3d
八、乳酸测定标本的采集
检测前三天，待检者不要做剧烈运动，抽取标本前禁食12h.。在患者处于安静状态后2h采集标本，并嘱患者不可用力握拳。
九、血药浓度监测标本的采集
对于治疗药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。欲了解药物的长期效应，通常在药物的第5个半衰期(药物的稳定期)采血;欲了解药物的峰值效应，通常在用药1~2h采集(地高辛和毛地黄毒苷为6~8h)。
十、激素检测标本的采集
许多激素在一天24h内的分泌量不同的。如可的松在血液中的峰值为早晨4~6时，GH、LH和FSH均以阵发性方式释放。在测定此类激素时，有必要采集连续时间间隔的数份血标本，以其中间值为测定值;而血清中肾素活性在体位由卧位变为站位时，将出现明显增高。ACTH分泌峰值期在6~10时，低值期在0~4时，波动幅度为150%~200%。妇科激素采血前建议静坐30min，标本采集前需要停止类固醇药、甲状腺素、ACTH、雌激素或性腺激素的治疗，否则会影响检测结果。抽血检查时患者和医生应准确把握月经周期，以便解释检验结果。
十一、尿液分析表本的采集
患者留取标本前24h禁止服用维生素C等药物，勿食深色素食物。禁服磺胺类药物，禁止加甲醛等防腐剂。嘱患者清洁尿道口及周围皮肤，防止粪便、清洁剂、粉剂、油类及有色物质等污染尿液。最好留取晨尿或“二次晨尿”(清晨排空膀胱，空腹收集2h的尿液)，也可随时留取中段尿，尿量不少于10ml。尿标本2h内送检，避免强光照射。
十二、尿三杯试验标本的采集
取尿杯3个，标明
1、
2、3。于清晨第一次排尿时，分为三段排于3个尿杯中，每杯不少于5ml。第一杯留取最前段部分尿液，第二杯留取中段尿液，第三杯尽量留取最后段部分尿液。注意尿液要一次性排出，中间不可间断，留尿后立即送检。
十三、尿红细胞位相标本的采集
留取标本前病人按常规尿检准备。留取早晨第一次尿的中段尿(晨尿)10ml于洁净容器中(必要时清洗外阴)，2~8℃冷藏保存。早上8时到检验科时，留取新鲜的中段尿10ml于洁净容器里(必要时清洗外阴)，两次留取的尿液一并及时送检。注意留尿前不要喝大量的水(B超以后的尿不能用)且保证尿样不受污染(女性以避开行经期)。
十四、24h尿蛋白定量标本的采集
留取标本前病人按常规尿检准备。准备一洁净、无污染的干燥盛尿大容器，从检验科领取5ml甲苯作为防腐剂。具体步骤：1.在收集标本的第一天(如早晨7时)，病人排空膀胱中的的尿液，弃去不要。此后，连续收集24h的全部尿液排入大容器中。留取第一次尿液时把5ml甲苯一并倒入;2.在结束收集标本的第二天(如早晨7时)，病人排空膀胱中的尿液，收集于盛尿容器里;3.准确测量并记录总尿量;4.充分混匀全部尿液，取出约5ml于常规尿管中，贴上标识，送检验科检测，其余尿液弃去不要。注意24h留尿完毕后，须将全部标本充分混匀，准确记录尿量，再取出约10ml检测标本。
十五、大便常规标本的采集
必须使用洁净、干燥、无吸水性的的容器，禁止用棉拭子、纸巾、纸盒等留取或存放。尽量选取含有粘液、脓血等病变成分的粪便，外观无异常的粪便必须从表面、深处和粪端多处获取标本。检查绕虫卵时，需用软黏透明纸拭子，在清晨排便前自肛门周围拭取标本，也可用棉拭子拭取，但必去立即送检。检查痢疾阿米巴滋养体，应于排便后迅速送检，立即检查。冬季采取保温措施。
十六、精液常规标本的采集
检查前禁欲(性生活、手淫及遗精)3~7d，已明确精子形成低下时，应禁欲7d后再收集标本。排精次数与禁欲时间可能对检查结果产生一定的影响，有报道禁欲时间过长，精液量虽然增多，但精子活力有所下降。留取标本前排净尿液，必要时清洗外阴部。用手淫或其他的方法，将一次射出的全部精液收入洁净、干燥的加盖容器内，有报道分布射精收集的各段精液分析中，最前段精液中精子的密度最高，以后各段渐依次减少，故精液采集时应收集全部标本。勿使用可能被酸碱污染或对精子产生影响的容器，乳胶或避孕套内含有抑制精子活力的滑石粉，应禁止使用。标本送检时需正确注明采样时间，30min内保温送检。精液常规检查如果出现一次异常结果，应隔1周后再复查，连续检查2次至数次，间隔应大于7d不能仅凭一次检查结果作出判断。
十七、常见临床微生物标本的采集
微生物检验工作的成败除了实验室的能力和效率外，很大程度上要看标本采集和送检环节的质量。由于标本的采集和处理不当，可能造成检验结果的假阳性和假阴性。因此微生物标本的采集应遵循如下原则：1.尽量在抗菌药物使用前采集标本。采集标本前应至少停药3d.如病人不能停药，应在下次抗生素使用前采集。2.标本采集时，应严格执行无菌操作，减少或避免机体正常菌群及其他杂菌的污染。3.标本采集后应立即送至微生物实验室，放置时间过长会影响检验结果。如不能立即送检，一般应放2~8℃冷藏的条件下保存(血液培养采集后若不能及时送检，可于室温保存)。某些菌种(淋病奈瑟均、脑膜炎奈瑟菌、嗜血杆菌、肺炎链球菌等)。不仅要及时送检，而且再送检的过程中要注意保温。4.盛标本的容器必须经灭菌处理(到微生物实验室领取)，但不得使用消毒剂和酸类剂处理，以免残留物影响细菌的生长。送检时，标本切勿污染容器的瓶口和外壁，防止污染和传播。5.送检标本应注明标本来源和检验目的，以正确选用相应的培养基和适宜的培养环境。 1. 血液及骨髓标本的采集：
采血的部位多为肘中静脉，疑为亚急性细菌性心内膜炎时，以肘动脉和股动脉采血：为宜。切忌在静脉点滴抗菌药物的静脉处采血。采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注入血培养瓶前，应更换针头或过火消毒。血培养瓶不用时放常温即可，不必放在冷藏室。
采血次数及间隔时间：急性发热性疾病(如脑膜炎、细菌性肺炎等)需尽快进行抗菌治疗。急性骨髓炎、化脓性关节炎等需要紧急手术的患者，立即从两臂分别采取2份标本。对感染性心内膜炎的患者再24h内采血3次，每次间隔不少于30min，必要时次日再作血培养2次。对发热原因不明者两次抽血间隔为60min，必要时于24~48h后再抽血2次。国外资料统计，1次血培养菌血症的检出率为80%，2次可达90%，3次可达99%.每次采血量成人5~10ml，婴幽儿为1~2ml。培养基：血液为10：1，以稀释血液中的抗生素、抗体、补体、溶菌酶等杀菌物质。有人主张对于长期接受抗菌药物治疗的病人，培养基：血液应大于20：1.骨髓一般采集1~2ml 血标本的采集和培养各环节必须严格无菌操作，以免发生标本的污染。同时，不可将血培养中出现的不常见细菌或一些皮肤表面的正常细菌随意的判断为污染菌。因为对一些大量使用抗生素、免疫制剂以及机体免疫力降低的病人，条件致病菌或非致病菌均可引起菌血症、败血症。两次血培养结果为同一种细菌，患者2~3周后血中抗体效价明显升高，应该作为菌血症的病原菌处理。
厌氧菌培养应作为血培养检查的常规方法，特别是疑为厌氧菌感染者。同时还必须注意L型细菌的培养。 2. 脑脊液标本的采集：
对患者进行腰椎穿刺，采集脑脊液3~5ml，盛于无菌试管和血培养瓶中送检。脑脊液标本尽量在抗生素治疗前采集，穿刺过程中应严格无菌操作，防止污染。由于脑膜炎奈瑟氏菌离体后容易自溶，流感嗜血杆菌及肺炎链球菌容易死亡，故标本采集后应立即送检微生物实验室。脑膜炎奈瑟氏菌等许多细菌对外界抵抗力比较弱，应注意保暖、防止干燥和日光直射。为防止采集的标本浑浊，最好进行“床边接种”，否则影响培养的阳性率。为了提高细菌的培养的阳性率，可在接种血平板、巧克力平板的同时，接种血液增菌培养基。 3. 尿液标本的采集：
中段尿采集法是临床最常见的采集方法，以晨尿为宜。女性病人在采样前应先用肥皂水或0.1%的高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口：男性病人翻转包皮，用肥皂水清洗尿道口。对留置导尿者，可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用针管的细针头斜穿入管壁采集尿液：或拔去闭式引流的集尿袋，弃去导尿管前端的尿液，留无污染的膀胱内尿液数毫升送检。切忌直接从集尿袋的下端关口留取标本。
确定菌尿是来自肾脏，可通过尿管采集肾盂尿。充分冲洗膀胱，以最后一次冲洗尿作为对照，然后将导尿管插入输尿管，做好左右标记，收集3次尿液。如果尿管细菌数比对照尿细菌数多或第三次尿比第一次多，则该细菌可能来自肾脏：相反，第一次尿菌数多余第三次尿菌数，则可能来自膀胱。 尿厌氧菌培养或儿童婴幼儿的中段尿留取困难，必要时可经耻骨上穿刺收集无污染的膀胱内尿液。厌氧菌的培养尚需在取得尿液后，针头插于橡皮塞上立即送检。
尿液标本采集和培养最大的问题是杂菌污染，所以应严格无菌操作。耐心细致的向病人说明如何留取中段尿。室温下，尿标本耽搁稍久可致尿内的细菌明显增高，影响病原菌和污染菌的区分。不能立即送检者，可暂时放4℃冰箱保存，但不能超过8h。此外，应在用药前或停药3d后采集尿液，因为治疗所用药物多数均通过尿液排泄。尿液标本不得加入防腐剂和消毒剂，否则影响细菌的培养结果。 4. 下呼吸道标本的采集：
合格痰标本的采集是取得正确检验结果的关键。临床微生物工作人员应耐心指导患者如何采集标本，要求采集肺深部的痰液(不是唾液)，一般以晨痰最好。清水反复漱口后用力咳嗽，从呼吸道深部用力咳出新鲜的痰液于无菌容器内送检(尽可能的减少口腔正常菌群的污染)。痰量少者，可用4℃10%NaCL溶液雾化吸入导痰。
支气管扩张症或支气管有相通的巨大空洞的患者，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰液;对咳嗽乏力和昏迷病人，可用吸痰管经鼻腔或口腔抵达气管内吸引痰液;用纤维支气管可直接在病灶部位采集高浓度的感染病原菌，但应避免咽喉部正常菌群的污染;双侧肺部感染伴人工气道(如气管切开或气管插管)的患者，可用吸痰管经人工气道插至叶支气管水平吸引痰液;对重症、难治、有免疫缺陷或因厌氧菌引起的医院内肺部感染，必要时可采用环甲膜穿刺经气管吸引(TTA)、经胸壁穿刺肺吸引(LA)经纤维支气管或人工气道作防污染双套管毛刷(PSB)或防污染支气管肺泡灌洗(PBAL)，采集无口咽部菌群污染的痰液，进行精确的感染病原学诊断。
痰液标本不能及时送检者，可暂置4℃冰箱存放。如室温下耽搁数小时，使定植于口咽部的正常菌群过度生长，肺炎链球菌、嗜血杆菌等苛氧菌的检出率将明显下降。 5. 咽拭子及鼻咽拭子标本的采集：
咽部是呼吸和食物的通道，晨起采集最好。医生采集标本时应戴口罩和手套，以防传染。病人先用清水漱口，由检查者将舌向外拉，使悬雍垂尽可能向外牵引，将咽拭子越过舌根，到咽喉壁或悬雍垂的后侧反复涂抹数次，避免接触口腔和舌黏膜，尽可能减少污染。检查脑膜炎奈瑟氏菌或白喉棒状杆菌时，如咽部有明显发红或有伪膜存在，应在局部涂抹取材后，小心地将棉拭子立即放入无菌管中。对局部无病变或带菌者检查，应于咽部或扁桃体上用棉拭子涂抹。采集扁桃体部位的标本时，应以小窝为宜;高度疑似白喉时，应在咽喉部深层组织中采集标本，而表面渗出液多为类白喉棒状杆菌和葡萄球菌。标本的采集虽然在时间上无严格控制，但最好在抗生素治疗前采集。采集前数小时不得用消毒药水漱口或涂抹病灶居部。标本采集后应立即送检。因为苛氧菌(如肺炎链球菌、嗜血杆菌、卡他布兰汗菌)离开人体后容易死亡。
6. 化脓及创伤感染标本的采集：
对采集标本的部位，应用无菌生理盐水洗净病灶表面的污染菌，对皮肤粘膜充分消毒。采集标本前，病灶部位应避免使用抗菌药物和消毒剂。如果局部伤口已用磺胺类药物和抗生素治疗，则应在培养基内加入相应的物质(如青霉素酶、对氨基苯甲酸等)，以提高细菌培养的阳性率;创面出血敷用药物2h以内，烧伤在12h内，不应采集标本，此时细菌培养阳性率较低。
开放性脓肿及脓性分泌物的采集：首先用无菌生理盐水擦洗病灶表面。用无菌棉拭子采取脓液及病灶深部的分泌物，置培养基送检。如为瘘管，应在无菌条件下采取组织碎片于无菌试管中送检。
闭锁性脓肿的采集：对病灶周围的皮肤及黏膜表面先用2.5%~3.0%的碘酊消毒，再用75%的酒精脱碘，用无菌注射器穿刺抽取内容物立即送检。疑为厌氧菌感染时，取材后立即排空注射器内空气，同时将针头插入橡皮塞中立即送检。
大面积烧伤创面分泌物的采集：由于创面的部位不同，细菌的种类也不同，应用无菌棉拭子采集多部位的分泌物，分别送检。有时也可将浸有脓液的最内层敷料放入无菌平皿内送检，或放入无菌肉汤中送检。
对怀疑放线菌感染的标本，常用无菌棉拭子挤压瘘管，选取流出脓液中“硫磺样颗粒”，盛于无菌试管中送检;或将无菌纱布条塞入瘘管中，次日取出送检。
标本采集后应立即送检，否则应放冰箱保存，以防杂菌污染。另外采集标本时应注意观察分泌物的形状、颜色及有无恶臭味等，作为培养和鉴定提供依据。 7. 粪便标本的采集：
大多采用自然排便采集法，即排便后，挑取有脓血、黏液、糊状、米泔样等性状异常部分的粪便，盛入无菌广口瓶中送检。不能立即送检者应放入Cary-Blair运送培养基中保存。对不易取得粪便或排便困难的患者或婴幼儿，可采用直肠拭子采集法。将拭子前端用无菌甘油水湿润，，插入肛门4~5cm处(幼儿2~3cm)，轻轻旋转擦取直肠表面的黏液后退出，置培养基中送检。腹泻病人应尽量在急性期用药前采集(3d以内)。以提高细菌培养阳性率。怀疑厌氧菌感染(主要是艰难芽孢梭菌)时，最好排便后立即培养。尽管粪便标本中有很多杂菌，但采集时也应放入无菌瓶中送检，以免影响致病菌的分离及误诊。在不得已时可将粪便至于无菌容器内4℃保存，但不能超过24h.不能采用冷冻-20~-80℃保存，会使活菌数量显著减少。
8. 胆汁的采集：
无菌操作，有专职医师用导管做十二指肠引流，采取的胆汁分为A、B、C三部分。A液来自总胆管，橙黄或金黄色;B液来自胆囊，黄绿色;C夜来自肝胆管，柠檬色。因引流是导管通过口腔，易污染口腔中的正常菌，一般认为B液适宜做细菌培养。行胆囊造影术，可同时采集胆汁，即胆囊穿刺法。另外，在进行胆囊及胆管手术时，可由总胆管、胆囊直接穿刺采集胆汁。这两种操作方法不易污染，适宜作细菌培养。采集标本后立即送检，否则应放入4℃冰箱保存。由于胆汁细菌培养阳性率较低，在接种血平板及其他平板的同时应接中肉汤培养基增菌，待肉汤浑浊后再转种相应的平板，以提高培养阳性率。
9. 穿刺液标本的采集：
穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等，由临床医师行穿刺术抽取。标本的抽取，在病人用药前或停药1~2天后行无菌操作，防止污染。胸腹水可抽取5~10ml，心包液、关节液、等抽取1~5ml，放入无菌瓶或肉汤曾均培养基中，混匀后立即送检。不能立即送检的可暂时置于4℃冰箱保存。怀疑厌氧菌感染时，抽取后立即排空注射器内空气，针头插入橡皮塞中立即送检或床边接种。
10. 生殖道标本的采集：
生殖器官是开放性器官，采集标本过程中应严格无菌操作，减少杂均污染，根据不同的感染类型及病变特征采集不同的标本。采集尿道标本时，应用无菌生理盐水局部冲洗，以无菌拭子插入尿道口1~2cm停留10s，轻轻旋转拭子后退出;对外阴部糜烂、溃疡者，生理盐水冲洗后用无菌拭子擦去病灶边缘的分泌物;阴道及尿道口的分泌物需在窥阴镜下，用无菌长棉拭子采集，子宫内分泌物用无菌导管抽取，导管外套一层保护膜，插入子宫过后再穿刺该膜，负压吸引，可减少阴道菌群的污染，女性盆腔脓肿时，在阴道局部消毒，由直肠子宫凹陷处进针抽取。前列腺液的采集皮肤消毒后，有临床医师行前列腺按摩采集。怀疑淋病奈瑟氏菌感染时，由于其抵抗力差且有自溶性，标本采集后应立即送检，或床边接种，以提高细菌培养阳性率。阴道内有许多正常菌群，采集宫颈标本时，应尽可能不触及阴道壁。生殖道厌氧菌感染也多见，采集标本时应避免与氧气接触，应作床边接种或置厌氧运送培养基中送检。
十八。其他特殊项目的标本采集
肿瘤标志物组合，避免产生大量气泡和用力振荡试管而造成标本溶血。若检测PSA，采血前48h内不得作前列腺按摩、前列腺指诊、穿刺、灌肠、直肠指诊、直肠内超声和膀胱镜检查等，否则会使测定结果偏高;检测β-HCG时，若使用激素类药物，应在送检单上注明，怀孕或流产后检测HCG时最好也要注明;甲状腺功能检测抽血时宜用酒精消毒(不可用碘酒或碘伏);微量元素标本才几千患者应出入静息状态，避免剧烈运动和情绪激动。
标本的输送、验收与拒收 一.送检
送检人员受到样本后，须在各病区护士站LIS系统中将接受到的标本进行条码确定。标本送到检验科后，在检验科LIS系统中，检验人员将送检到的标本条码接受。正常作息时间内的急诊标本，由护工送至各专业组，并进行验收登记;夜间值班时的急诊标本，由护工将标本送至急诊检验室，由值班人员进行核对、接收、登记和处理，对不合格标本与临床联系后拒收和回退。标本收集人员必需清点标本个数是否与送检单相符，并安全送到检验科。送检过程中要注意环境对标本的影响。有时应避光(如阳光直射下血中胆红素会分解)，样本有温度要求，应确保样本置于适合的容器内。要保证标本运送途中的安全，防止过度震荡，标本被污染，唯一表示的条码丢失和混淆，标本对环境的污染，水分蒸发等。对于疑有高致病性病原体标本，应按《病原微生物实验室管理条例》的相关要求运送。同时，由于血细胞的代谢、气体交换及物质转移等因素，标本放置时间过久，易使血细胞内外多种成分发生变化，导致分析结果发生误差。因此标本采集后应及时送检，有些检测项目的标本(如血气分析)应立即送检。晨起批量标本采集，各临床科室应充分考虑采样与送检之间的间隔时间，一般要求在上午上班前送达相应实验室。 二.验收
标本送至实验室后有专人验收，验收基本程序：1.唯一性标识是否正确无误;2.申请检验项目与标本是否相符;3.标本容器是否正确，有无破损;4.检验标本的外观和标本量，包括有无溶血，血清有无乳糜状、抗凝血中有无凝块，，以及细菌培养的标本有无污染的可能;5.检查标本采集时间到接收时间的间隔;6.特殊标本需要送收双方签收。 三.拒收
遇到下列情况检验科可以拒收标本：1. 唯一性标识错误、不清、涂改、脱落和丢失，标本标识码与申请单或采样清单不一致;2.用错标本容器(如用错真空采集管)或容器破损难以补救;3.人为因素的严重溶血、脂血标本;4.抗凝血中有凝块，抗凝血未加抗凝血剂或血液与抗凝剂比例不正确(如血沉、抗凝因子测定等);5.标本量严重不足;6.不应接触空气而接触了空气(如血气分析)，细菌培养的标本被污染;7.采集标本离送检间隔时间过长。
正确标本采集应注意的问题
选择最佳采样时间，采集具有代表性的标本。
容器洁净度或无菌程度符合检验要求。注意抗凝剂、防腐剂的正确应用，防止污染。如细菌培养的容器绝对不能有防腐剂，微量元素测定对容器结晶要求远高于其他检测，24h或12h尿中某些成分分析需加防腐剂等。
静脉采血时扎止血带时间应尽可能短(一般不超过1min)，抽血速度不宜过快，以免产生大量泡沫，造成标本溶血。防止过失性的采血(如采错部位、用错真空管等)，防止边输液边采血，禁止在输液同侧采血。含抗凝剂的真空试管采血后须及时混匀标本(轻轻点到混匀切忌用力振荡试管)，防止凝块和凝固。
需要毛细血管末梢采血时，由检验人员采集。皮肤消毒后，一定要待酒精分发干燥后采血，否则血液四处扩散而不成滴。采血时应选取无炎症、水肿、冻疮等部位，烧伤患者选择皮肤完好处采集，除特殊情况外，不要采集耳垂血。穿刺深度一般为2.0~2.5mm为宜，切忌用力挤压或离伤口较近处挤压，否则会使大量组织液渗出稀释血液，同时易激活凝血系统使血液凝固。
标本严重脂血和黄疸问题：严重脂血可干扰某些光谱反应。如影响肝功能、血脂等项目测定;黄疸产生光谱干扰苦味酸法测定Cr，造成Cr检测结果偏低。
不同试验项目在使用抗凝剂时，注意与样本的比例：如血GLU测定一般加入氟化钠—草酸钠混合抗凝剂，防止糖酵解;肾功和电解质等常使用肝素抗凝;病理性腹水、胸水和脑脊液应加入肝素，防止蛋白质凝固;24h尿PRO等生化测定则应加入甲苯等防腐剂，抑制微生物生长繁殖。凝血功能血样试管中的抗凝剂与采样量有严格的比例要求(1：9)，差别过大显著影响检验结果。
溶血问题：避免标本溶血是保证标本质量的重要环节。采血时的一些不良习惯和劣质采血器具均易造成溶血，如采血时定位会进针不准，针尖在静脉中反复探测。均会造成血肿和溶血;混匀含添加剂的试管时用力过猛，或运输时动作过大;从已有血肿的静脉采血;采血时有空气进入或产生泡沫等。相对于添加剂而言，采血量不足等也会导致溶血。溶血标本可使多个项目的检验结果出现大的误差，血液中某些物质在红细胞内的浓度比血浆高许多倍。轻微溶血即可造成对检验结果的较大影响，如血清钾、镁、心肌酶等。实验时发现显性溶血标本后，应区分是病理性溶血(血管内溶血)，还是技术性溶血(由于操作技术或采血容器造成的体外溶血)，签发报告时注明。实验时还应特别注意排除非显性溶血对检验结果造成的影响。
正确的采取、处理与运送细菌培养的标本是临床细菌检验成功的关键。标本采取与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础;而标本采取与处理不符合要求，则细菌培养的结果毫无意义。如标本采取或处理失当，造成污染，甚至使检验结果给临床以误导，延误对患者的正确治疗造成严重后果。因此，著名的临床微生物检验专著Manual of Clinical Microbiology的主编Patrick R Murray在书中提出“正确的微生物学检验始自正确的标本采取。临床医师、护师及检验技师都必须通晓其要领。” 如今，全面的检验保证系统更加重视分析前与分析后的因素对检验质量的影响，微生物检验分析前质量控制的重要内容之一，即是对标本采取与处理的质量保证。
为推行检验方法的标准化，我国借鉴国外部分经验已成立中国临床实验室标准化委员会(CCCLS)，临床实验室的认证工作开始准备。微生物检验的标准化首先应从标本采取与处理的规范化开始。
一、血液细菌培养标本的采集和处理 临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者，需做血液细菌培养以明确病原。及时、准确地从患者血液中分离出病原菌，才能正确实施有效的抗菌治疗，从而有助于治愈率的提高和医疗费用的降低。
1、采血时机：在患者发热期间越早越好，最好在抗菌治疗前，以正在发冷发热前半个小时为宜。
2、采血次数及间隔：在急性发热性疾病如脑膜炎、细菌性肺炎，需马上做抗菌治疗：或急性骨髓炎、化脓性关节炎等要紧急手术的患者，应立即从两臂分别取2份标本。对感染性心内膜炎患者，在24h内取血3次，每次间隔不少于30min;必要时次日再做血培养两次。对发热原因不明者两次抽血间隔60min;必要时于24~48h后再抽血2次。因为1次血培养不足以说明问题，且会遗漏阳性结果。国外有人统计1次血培养可检出菌血症的80%，2次检出90%，3次检出99%。国内统计17家医院1次血培养阳性率10.8%，18家医院2次以上血培养阳性率14.8%。
3、采血部位：多次采血应在不同部位的血管穿刺以排除皮肤菌群污染的可能。要避免从血管插管内取血，因插管常被污染其结果不能反映真实情况。在不同部位取血，2次分离出同样菌种才能确定病原菌的有力证据。
4、采血量：成人菌血症或败血症的血液中含菌量较少，平均1~3ml血液中仅有1个细菌。所以采血量一定要足够。成人一般为10ml，新生儿与婴幼儿为1~2ml。有人引述多篇文章指出：对成人每增加1ml血量平均能提高阳性率3.2%。
5、培养基选择：培养基的质量对血液细菌培养阳性率的高低有非常重要的作用。市售培养基良莠不齐，选购时要慎之又慎注意质量，以知名大厂家生产为益。国内报告应用不同培养基的两组血培养结果，1组阳性率为9.7%，另1组为16.1%，可见培养基影响之大。抗凝剂现多用聚茴香脑磺酸钠(sodium polyanethol sulfonate SPS)浓度为0.025%~0.05%。因兼有抗凝、抗补体、抗吞噬几拮抗某些抗生素的作用，故较其他抗凝剂为优。
6、培养条件：尽管病原菌仍以需氧菌和兼性厌氧菌为主，但亦有少部分为真菌、厌氧菌或L型菌感染。特别是真菌感染有增加趋势可占病原菌10%以上。所以必要时应选取响应培养基在不同环境下培养。
7、盲传的必要：肉眼和仪器都不能确保在瓶外观察到所有的阳性菌生长，国内外的经验都证明这一点。因此在培养终结时盲目传代1次，以防漏检。
8、无菌操作：无论采取何种方法，在血液培养的全过程，从皮肤消毒、标本采取、运行、分离移种等，皆应十分注意无菌操作。用头皮针为新生儿和婴幼儿取血时，应换针头再将血注入培养瓶中。
二、下呼吸道分泌物(痰培养)的标本采取与质量要求
下呼吸道分泌物(痰)的细菌学检查对病原学诊断起着重要作用，但目前亦存在着严重的问题——标本的质量问题，因此，往往造成作出的病原菌诊断和实际引起感染的病原菌脱节，以致造成抗菌药物的应用不合理甚至耐药菌的出现和流行。痰标本的细菌学检查应注意如下几个问题。
1、标本的采取：自然咳痰：要求患者清晨留取，留取标本前应用水漱口3次，之后用力咳出。咳痰较困难者可用雾化蒸气吸入以利痰液咳出。幼儿可用手指轻扣胸骨柄上方以诱发咳痰。
2、气管穿刺法：仅用于昏迷患者，由临床医师进行。
3、纤维支气管镜抽吸：通常用于在患者行纤维支气管镜检查时顺便抽取。
4、胃液抽取法：多用于可疑患有肺结核的患者在有可能将痰液咽下的情况时采用。
5、标本的运送：标本采集后应立即送检，应争取在20min内送达检验科微生物室。
6、标本的贮存：微生物实验室收到标本后，应立即进行标本的质量检查及培养接种，如不能立即进行检查则应暂时放于普通冰箱(4℃)，冰箱中存放的标本应在24小时内进行检查。
7、标本的质量检查：(1)制成涂片行革兰染色;(2)于显微镜低倍镜下检查(10x10)，观察WBC及扁平上皮细胞存在情况，表1作为参考：表1 痰标本显微镜检查的分类
分类
细胞数/低倍镜视野
(级)
白细胞
扁平上皮细胞
<25
<25
>25
<10
>25
10-25
>25
>25
10-25
>25
<10
>25
*分类中1~3类不做培养，要求重新留取标本：
4、5类为合格标本：6类为气管穿刺液，如未见到白细胞，而扁平上皮细胞>10/低倍镜视野，亦应重新留取标本。
8、特殊要求则作特殊处理，如做抗酸染色查找抗酸菌等。
9、分离培养：痰标本最好接种3种培养基，即血琼脂培养基、巧克力琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基(中国蓝培养基)。
10、显微镜检查的初步报告:在用显微镜检查标本质量的同时，对合格的标本(可进行分离培养的标本)，往往可以作出初步的病原学参考诊断，如革兰阳性菌、革兰阴性菌、球菌或杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌等。
三、尿液细菌培养标本的采集和保存
尿液的细菌培养检查对于膀胱和肾脏感染的及早发现和病原学诊断很有价值。对于尿道、前列腺以及内、外生殖器炎症的诊断也有一定价值。
1、标本收集：需在应用抗菌药物之前或停用抗菌药5d之后留取尿液标本：尿液 在膀胱内应停留6~8h以上，使细菌有足够的时间繁殖。(1)清洁排尿法：女患者以手指将阴唇分开，用肥皂水或碘伏清洗外阴，然后以清水冲洗尿道口周围，擦干并排出前段尿液后，用无菌容器接取中段尿;男患者应翻转包皮冲洗，用2%红汞或1：1000新洁尔灭消毒尿道口;婴儿消毒其阴部后，将无菌小瓶直接对准尿道口以橡皮膏贴于皮肤上，待排尿后立即送检。(2)膀胱穿刺法：为避免尿道正常菌群的污染，收集尿液最好的方法是膀胱穿刺。尤其做厌氧菌检查时必须采用膀胱穿刺法。穿刺时膀胱应充盈，皮肤严格消毒后用装有19或20号针头的注射器在耻骨联合距脐1/3处穿刺。膀胱穿刺的适应症有：[1]有尿道感染的临床症状，但中段尿培养细菌数很低，而又难以确定感染源者。[2]婴幼儿、新生儿不能用导管者。[3]怀疑有厌氧菌感染时。(3)肾盂尿采集法：若取左右两侧肾盂尿，应请泌尿科医生采取，左右侧的标本要标记明确，以免出现错误。(4)用封闭式引流装置的留置导尿患者留取尿液标本培养时，用适当的消毒剂严格消毒引流管和导尿管连接处的管壁，用装有21号针头的注射器穿刺导尿管壁吸取尿液。不可打开导尿管和引流管连接处收集标本，培养用的尿液标本也不能从引流袋中留取。(5)膀胱镜检查、输尿管插管或逆行肾盂造影时，收集的尿液可用来做细菌培养。(6)做病毒学检测时用容器收集清洁的标本即可，不需特殊方法收集。标本中加入抗生素可抑制细菌的过度生长，且标本需冷藏。 检测衣原体时，尿液标本不能代替尿(阴)道分泌物。
巨细胞病毒(MC)的检测，需多次检测标本，因其释放常是周期性的。
结核分枝杆菌的检查，应留取24h尿，无症状的血尿可能是肾结核病，应用清洁排泄法收集连续3份晨尿标本。
淋病奈瑟氏菌培养留取清晨第一次尿，盛于无菌容器内立即送检。
尿道结石标本可作其内部及表面培养，内部培养出的细菌与表面存在者可能不同。
2、标本的运送和保存：用无菌带螺帽的容器盛标本，标本应在1h内送检。超过2h者应重送，否则易致假阳性结果。
标本送达实验室后，若不能立即接种，可将标本置于冰箱(4~8℃)保存，但不得超过6h。
四、粪便标本微生物学检查的质量要求
关于腹泻患者粪便中肠道病原微生物的检测，根据世界卫生组织(WHO)腹泻病纲要和我国卫生部临床检验中心有关操作规程要求，粪便标本应取材得当，并严格按细菌分离培养操作规程进行各种病原微生物的鉴定。
1、标本采集：粪便标本应在发病早期并且尽量在用抗生素治疗前采集，直接用棉拭子，也可用直肠拭子，取双份粪便标本，1份置Cary-Bliar运送培养基中，另1份置灭菌小瓶中送检。
2、显微镜检查：粪便直接涂片革兰染色，可作为艰难梭菌、弧菌、弯曲菌、葡萄球菌、白色念珠菌等初步筛查，盐水滴片用作肠道寄生虫检查。
3、标本保存和运送：标本置Cary-Bliar运送培养基中，记录姓名、日期、标本号、放置冰壶中及时送检，一般可保存24h。
4、接种：收到标本应立即接种选择性培养基。
5、轮状病毒检测：可直接用ELISA法检测粪便标本中轮状病毒(RV)抗原，或从粪便中提取RV-RNA做聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，根据轮状病毒特有RNA基因片段大小及其排列特点，判断结果。
五、生殖道标本的采集
1、男性标本：(1)如疑为急性淋病耐瑟菌或其他化脓性细菌感染应在清洗龟头部后，以碘伏或其他非粘膜刺激性消毒剂消毒后，挤出分泌物立即以无菌棉拭子采取，立即送检，或以专用的细拭子插入尿道口1~2cm，旋转采取。(2)如疑为前列腺炎、精囊炎的慢性淋病耐瑟菌感染应由医师按摩前列腺，以无菌手续自尿道口采取前列腺液送检。
2、女性标本：(1)成年妇女自宫颈采取标本，应在扩阴器的支持下，选取有炎症或分泌物部位，先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物，再用另一拭子取分泌物送检。如做厌氧或真菌培养应另外采取标本。(2)如未成年幼女疑患性病传播疾病时，不应使用扩阴器，以一无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检。
六、胸腹水、脑脊液标本的采集
1、均由医师以无菌手续穿刺取得，必须应用带盖的无菌容器，立即送检。
2、此类标本在接种前应离心1500r/min15min或做增菌培养。
3、应接种血琼脂及巧克力琼脂温育于CO2环境中，结核分枝杆菌的培养应接种专用培养基。
临床检验样本拒收的准则
1.盛样本的容器和/检验申请单上信息缺失或不符 1.1 样本容器上无标识或标识不清; 1.2 样本容器上标签与检验申请单不符;
1.3 临床检验申请单上未写患者姓名、检测项目和检测材料中任何一项; 1.4 检验申请单上送检项目本科未开展和/或属科研项目但未事先联系确认。
2.样本不合要求
2.1 未使用合适的抗凝剂或样本类型不当; 2.2 送检样本容器破损、有渗漏或选择不当; 2.3 样本采集后保存不当;
2.4 患者准备状态不恰当，影响实验结果，如未空腹查血脂。
3.发生以下情况原则上拒收样本
中度以上溶血;中度以上脂血;抗凝血中有凝块;量太少等。
但因情况特殊、取材困难或感染疾病的咨询等，本科将会应客房要求进行检测，并在报告单上注明样本状态供临床参考。
样本拒收后处理：在我科拒收的样本，应及时重新采集，否则将和检验申请单一起退回。
临床检验分析前要求
一、临床检验单要求 1.病人信息：
申请者必需清楚写病人的姓名、性别、年龄或其它有效识别身份的信息; 2.病人的病历信息
申请者必须清楚填写病人所在临床科室名称、病历号、床号、临床诊断、临床样本类型、样本采集日期和时间、申请者姓名、申请检验日期; 3.请的检验项目：
申请者必须清楚填写检验项目名称，项目名称应规范、准确，特别是申请组合项目时，一定要与本科<检测目录>的组合内容一致，否则需填写组合项目的具体单项;
二、标本采集前患者准备须知 1.患者状态
原则上患者应在平静、休息状态下采集样本，特别是血液样本。 激动、兴奋或恐惧时，可使血红蛋白、白细胞等增高; 剧烈运动、能量消耗、体液丢失、呼吸剧烈可以造成体内多项指标变化，如谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶等一过性升高，还可引起血钾、钠、钙、白蛋白、血糖等的变化。
2.患者饮食对检验结果的影响
2.1 进食后一定时间内可使血液中许多成份发生变化。因人们饮食的多样性，生理状况差异也大，而且大多数项目的参考范围是以空腹血液测定值为基础的。故建议，原则上要求早晨空腹采血(空腹12小时左右)，对进食有特殊要求的项目除外。
一顿标准餐：可使甘油三酯增高40%以上，血糖增高15%以上，进食高蛋白食物可使尿素氮、尿酸等增高，高碳水化合物食物可使血糖增高; 高脂肪食物：可使甘油三酯大幅增高，并使血液出现乳糜现象影响许多检验结果; 进食咖啡：淀粉酶、促甲状腺激素、碱性磷酸酶增高。
2.2 长期素食者低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白，胆固醇、甘油三酯会降低。 2.3 禁食过久对检验结果的影响
补体C
3、白蛋白、转铁蛋白、血糖、钾、钙、镁等浓度下降; 血胆红素、酮体、脂肪酸、甘油三酯、尿酸盐增高;
禁食刚开始时，血生长激素可升高15倍，3～4天后基本恢复正常。 2.4 咖啡因对检验结果的影响：咖啡、可乐、茶都含有咖啡因
咖啡因可使血糖微量上升，甘油三酯和皮质醇升高，胆固醇降低。 2.5 酒精对检验结果的影响：
饮酒后会使血糖立即上升和造成高甘油三酯血症;
中度酒精量可使血清肌酸肌酶、和谷草转氨酶、谷丙转氨酶升高。 2.6 抽烟对检验结果的影响
香烟中尼古丁会使血液中肾上腺素、尿中儿茶本酚胺及其代谢产物VMA升高; 生长激素对香烟特别敏感，抽烟后30分钟内浓度可升高10多倍;
吸烟者癌胚抗原、β脂蛋白、胆固醇、甘油三酯、红细胞、血红蛋白、白细胞高于不吸烟者，高密度脂蛋白低于不吸烟者。
3.药物对检验结果的影响
3.1 药理作用对检验结果的影响：
甲状腺药物：使血糖升高、胆固醇降低; 咖啡因：使血糖和胆固醇增高;
维生素C：使总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白降低;
口服避孕药：使甲状腺结合球蛋白、纤维酶原、转铁蛋白、血清铁和甘油三酯升高、白蛋白和血清锌降低;
某些药物能够造成肝、肾功能损害，引起相关指标的变化。 3.2 对检验项目的测定方法产生影响：
对于用比色法检测的项目，某些药物的物理特性比如颜色会影响比色; 药物参与检测时的化学反应，如有还原性的药物对于利用氧化还原法测定项目会有影响;某些药物可以抑制酶的活性，对于测定酶活性的项目会使结果降低。
4.标本本身对检验结果的影响
4.1 标本溶血：溶血可能是有某些疾病引起，但主要是在采血过程中或样本处置不当引起。
光学干扰，比色时若用到胆红素的吸收光谱区会产生分析误差;
红细胞内的某些物质与血清或血浆中的含量相差悬殊，如钾、镁、磷、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、血清铁等; 胆红素中的蛋白质使血清总蛋白和白蛋白升高。 注一：中度或重度溶血必须重新采集标本 注二：标本溶血的常见原因： 止血带施压时间太长; 穿刺部位皮肤有酒精残留;
针头、针筒或血液容器内有污染或水气; 使用的针头孔径太小;
针筒内的血液由针头排到容器中; 抽血时太快或用力太大;
血液与抗凝剂混合时剧烈振荡; 血液没有完全凝固就离心; 4.2 脂血标本：
脂血造成的浑浊会在比色测定时引起光线散射，导致吸光值假性增高; 脂血会造成电解质检测错误; 抽血前食入富含脂肪的食物;
空腹患者有脂血现象，属于病理因素：甘油三酯过高血浆或血清呈浑浊状;胆固醇含量高，血清或血浆外观没有变化;有乳糜微粒会在血清液面浮上一层奶油状物质。
三、样本采集
1.标本采集前准备
1.1 根据项目要求或医生的交待嘱咐病人作好采集标本前的准备工作，并告知相关注意事项;
1.2 了解各种项目的采集要求，并作好充分的准备;
1.3 按规定选用合适的容器并在明显位置注明标识(如条形码、病人姓名、送检科室、住院号等资料);
1.4 标本采集前应严格查对检验申请单信息和容器上内容是否一致。有些标本采集后应在申请单上标注采集时间、体位等;
1.5 采集抗凝血标本时，应选择合适的抗凝剂，不要随意更换成其他抗凝剂。抗凝剂与血液的量必须准确。抽血后立即轻轻颠倒混匀，避免血液凝固;
1.6 严格掌握采集标本电动机，如避免在输液臂的同侧采血，有的项目测定应注意其分泌的节律性和周期性变化;
1.7 要求病人自己留取的标本应该详细交待留取方法和注意事项。
2.标本采集方法
2.1 准备试管：取合适数量和规格的真空采血管备用;
2.2 选择静脉：患者取坐位，前臂水平伸直置于桌面枕垫上。暴露穿刺部位，选择容易固定，明显可见的肘部静脉;
2.3 扎止血带：在采血部位上端扎止血带，并嘱患者反复握拳头，使静脉充盈暴露，便于穿刺; 2.4 消毒：先用复合碘消毒棉签自静脉穿刺处从内向外，顺时针方向消毒皮肤; 2.5 穿刺：取下一次性针头无菌帽，以左手拇指固定静脉穿刺部位端，右手拇指和中指握针头沿静脉使针头与皮肤成30度角斜行快速入皮肤，然后以5度角向前突破静脉壁进入静脉腔。见回血后，将针头顺势插入少许，以防止采血针头滑出，但不可用力探刺，以免造成血肿;
2.6 抽血：将针头另一端插入真空采血管，至所需血量后，立即去掉止血带，用消毒棉签压住针孔，请患者松拳，迅速拔出针头。嘱患者继续按压针孔数分钟以防出血;
2.7 混匀：如果用的是抗凝管，则轻轻颠倒混匀，切忌振荡试管。
3.尿液标本的采集
尿液标本种类的选择和收集取决于临床医师的送检目的、病人的状况和试验的要求。理想情况下，为了达到筛查、检出分析物和有意义有形成份的目的，应收集浓缩尿液。尿液标本的种类如下：
3.1 晨尿：清晨起床后，在未进早餐和做其它运动前排泄的尿液，又称为首次晨尿。住院病人最适宜收集此类标本，但在采集前一天应提供收集容器和书面收集说明，如外阴、生殖器清洁方法，留中段清洁尿等。若采集后2小时不能进行分析的，可采取适当的防腐措施。晨尿常用于筛查、直立性蛋白尿检查和细胞学研究。
3.2 随机尿：即随时排泄，无需患者做任何准备的尿液，适用于常规及急诊筛查，但是，患者如摄入大量液体和剧烈运动后将直接影响尿液成分，从而不能准确反映患者疾病状况。
3.3 计时尿：收集一段时间内的尿液标本。准确的计时和规范的说明是确保计时尿结果可靠的重要前提，根据检测项目的不同，添加适当的防腐剂。24小时尿标本收集方法如下：
告知病人标本收集的具体步骤，尽可能提供书面说明; 在开始收集标本的第一天(如晨8:00)，病人排空膀胱中的尿液，弃去该部分尿液。将此后连续24小时的尿液收集于盛尿容器内;
在结束收集标本的第二天(如晨8:00)，病人排空膀胱中的尿液，收集于盛尿容器内;
送到实验室前，充分混匀全部标本，准确测量并记录尿总量; 取出一定量尿液用于实验，弃去剩余尿液。 3.4 尿液标本收集相关注意事项：
应留取新鲜尿，以清晨第一次尿为宜。急诊病人可随时留取。收集计时尿液标本时应告知病人时间段的起点和终点;
使用清洁有盖容器(一次性容器为佳)，透明且不与尿液发生反应的惰性材料制成。容器不可重复使用。运送容器具有安全稳妥的密封装置，其密封装置易于操作和开启;
尿液标本应避免经血、白带、精液、粪便等混入。此外，还应注意避免烟灰、糖纸等异物混入;
标本留取后，应及时送检，以免细菌繁殖、细胞溶解等;
尿胆红素和尿胆原等化学物质可因光分解或氧化而减弱。标本送检时应避光。 3.5 尿液防腐与保存：标本收集2小时内无法进行尿液分析，或尿液中所要分析的成分不稳定，标本可加入特定的化学防腐剂，常用尿液防腐方法。 ①冷藏 不干扰常规筛查，放在4℃冰箱可保存6小时，在24小时内可抑制细菌生长。
主要检测：电解质、肌酐、葡萄糖、总蛋白、白蛋白、重金属、药物筛查、促卵泡激素、雌三醇等。
②甲醛 具有还原性，不适合尿糖等化学成份检查。
主要检测：管型、细胞检查，用法：每100mL尿加入400g/L的甲醛0.5mL。 ③甲苯
主要检测：尿糖、尿蛋白的防腐，用法：每100mL尿加入甲苯0.5mL。
④硼酸 保护蛋白质和有形成份，在24小时内可抑制细菌生长。有尿酸盐沉淀。干扰常规筛查的PH。
主要检测：蛋白质(白蛋白、氨基酸等)、尿酸、5-羟吲哚乙酸、羟脯氨酸、皮质醇、雌激素、类固醇等检查。 用法：每L尿中约加10g。
⑤盐酸 不能用于常规筛查，破坏有形成份，沉淀溶质，杀菌。
主要检测：钙、磷酸盐、δ-氨基乙酰丙酸、草酸盐、尿17酮类固醇、儿茶酚胺等。
用法：每L尿中加10mL浓盐酸。
⑥氟化钠 能防止糖酵解，不能用于常规筛查。 主要检测：尿葡萄糖。
⑦碳酸钠 保护卟啉和尿胆原，不能用于常规筛查。 主要检测：卟啉和尿胆原。
用法：24小时尿中加碳酸钠4g。
⑧麝香草酚 保护有形成份、干扰蛋白沉淀试验、抑制细菌和霉菌。 主要检测：有形成份。
用法：每100mL加入量<0.1g。 ⑨冰醋酸
主要检测：24小时尿醛固酮。
用法：每24小时尿加入约5～10mL。
4.痰液标本采集
4.1 痰液的一般检查应收集新鲜痰，病人起床后刷牙，漱口(用3%H2O2及清水3次)，用力咳出气管深处真正呼吸道分泌物，而勿混入唾液及鼻咽分泌物;
4.2 幼儿痰液收集困难时，可用消毒棉拭纸刺激喉部反射，用棉拭子采取标本; 4.3 痰液标本收集容器须加盖，痰液勿污染容器外(用不吸水容器盛留)。
5.粪便标本采集
5.1 收集粪便标本的方法因检查目的不同而有差别，一般检验留取指头大小 (约5g)新鲜粪便即可，放入干燥、清洁、无吸水性的有盖容器内送检。容器最好用内层涂脂的硬纸盒，便于检查后焚毁;
5.2 血吸虫毛蚴孵化则留新鲜粪便不少于3g。细菌检查的粪便标本应收集于灭菌封口的容器内，勿混入消毒剂及其他化学药品，并立即送检检查;
5.3 检查蛲虫卵需要用软粘透明纸拭子，在清晨排便前由肛门四周拭取标本，也可用棉拭子拭取，但均须立即镜检;
5.4 检查寄生虫及虫卵计数，可用清洁、无尿污染的便盆收集24小时粪便送检; 5.5 隐血试验，应嘱患者于收集标本前3天前起禁食动物性食物，连续检查3天，并取外表及内层粪便。收集标本后须迅速进行检测，以免因长时间放置使隐血反应的敏感度降低;
5.6粪胆原定量检查应收集3天的粪便，混合称量，从其中取出约20g送检。查胆汁成份的粪便不应在室温中长时间放置，以免阳性率减低; 5.7细菌检验用标本应全部用无菌操作收集。
收集容器须加盖，勿污染容器外(用不吸水容器盛留)，立即送检。
6.体液标本采集
6.1 脑脊液：标本收集后应立即送检，一般不超过1小时。收到标本后应立即检验，久置后可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查;葡萄糖含量降低;病原菌破坏或溶解。细胞计数应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA抗凝。 6.2 浆膜腔积液：穿刺取得的标本为防止细胞变性、出现凝块或细菌破坏溶解等，送检及检查必须及时;为防止凝固，最好加入EDTA抗凝，每0.1mL可抗凝6mL积液;PH测定应用肝素抗凝专用采样器。 6.3 滑膜液：应用消毒注射器，正常时滑膜液量甚少，病理时则可多达3～10mL，因检查项目不同、容器不同，故应事先准备有关标本容器，微生物培养应置于灭菌消毒试管，显微镜镜检应用肝素抗凝标本，每mL约用肝素钠25单位(不可采用肝素锂、草酸盐或EDTA干粉，以免人为形成晶体，干扰显微镜检查)，收集后立即送检。 6.4 精液标本：
①在3个月内检查2次至数次，2次之间间隔应>7天，但不超过3周; ②采样前至少禁欲3天，但不超过7天; ③采样后1小时内送检;
④用清洁干燥广口塑料或玻璃小瓶收集精液，不宜采用避孕套内的精液; ⑤应将射清清液全部送检; ⑥传送时温度应在20～40℃; ⑦和所有体液一样，精液也必须按照潜在生物危害物质处理，因为精液内可能含有肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒和疱疹病毒等。
7.微生物学检验标本
7.1 标本采集、运送这、验收和处理注意事项 ①标本采集：
A. 申请单必须清楚(姓名、性别、年龄、临床诊断、标本来源、采集时间、检查项目、抗生素应用情况等)，以便实验室合理选用培养基。 B. 尽量在抗生素应用前采集标本。 C. 标本采集应严格执行无菌操作。
D. 采集标本的容器必须经灭菌处理或使用一次性无菌专用容器。 ②标本运送
标本采集后尽快送微生物室。 ③标本验收
A. 实验室只能接收和处理合格标本。
B. 实验室对不合格标本退回时，须注明原因，并及时与临床联系。 7.2 微生物检验标本采集和处理 ⑴尿液标本采集和处理：通常留取晨起第一次心潮澎湃 液，及时送检，并保证2小时内接种，不能及时送检时，标本应置冰箱保存，并于8小时内送检。怀疑沙门氏菌感染时，应于发病2周左右采集标本;怀疑钩端螺旋体感染时，应于发病后2周左右采集标本。常用的标本采集方法如下：
A. 中段尿采集法：成年男性和女性分别用肥皂水清洗尿道口和外阴部，再用灭菌水冲洗尿道口，然后排尿弃去前段尿液，于带盖的无菌试管中留取中段尿液5～10mL。
B. 尿尿法：用导尿法取5～10mL尿液于无菌试管中，长期留置导尿管者应更换导尿管留尿;留置导尿时，用无菌消毒法消毒导尿管外部及导管口，用无菌注射器通过导尿管抽取尿液送检，不可采集尿液收集袋中的尿液送检。 C. 其它方法：膀胱穿刺或肾盂尿采集法须由临床医师采集。 ⑵粪便标本采集和处理：
A. 采集时间：腹泻患者处于急性期，尽量在用药前采集;怀疑伤寒患者在发病前两周以后采集;怀疑霍乱时应立即采集送检。
B. 采集方法：一般患者，取新鲜粪便的粘液、脓血或絮状物等有意义成份2～3g或1～3mL，盛无菌容器内送检;难以获得粪便或排便困难的患者和婴幼儿，可用直肠拭子采集，再插入灭菌试管中送检。 ⑶痰及下呼吸道标本采集和处理：
A. 自然咳痰法：晨痰为佳;先嗽口，清洁牙齿和口腔;再用力咳出呼吸道深部的痰;痰量不得少1mL;咳痰困难者可先做雾化处理。
B. 小儿取痰法：用弯压舌向后压舌，将拭子深入咽部，小儿因压舌板刺激引起咳嗽，喷出的肺或气管分泌物粘在拭子上送检。 C. 支气管镜、支气管穿刺、支气管肺泡灌洗等采集法：，由临床医师实施。 ⑷血液及骨髓培养标本：
A. 抗生素治疗前，严格无菌静脉采血3～5mL(儿童1～4mL);骨髓1～2mL。 B. 无菌注入专用培养瓶中送检。
C. 如已用抗生素不能停用时，可在48小时内分别于下次抗生素使用前，多次采集血液标本送检。
D. 疑为心内膜炎时，为提高阳性检出率，可酌情不同部位、不同时间多次采血送检。
⑸脑脊液培养标本：
A. 怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，最好在抗生素使用前采集。 B. 无菌腰穿采集脑脊液1～2mL，立即送检。 ⑹穿刺液培养标本：
A. 包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。
B. 在抗生素使用前采集或在停用抗生素2～3天后采集。 无菌穿刺采集，可在无菌容器中加入适量灭菌肝素。 ⑺胃液及胆汁培养：
A. 采集方法：抽取空腹胃液5 mL，置无菌管内送检;胆汁培养标本由十二指肠引流法、胆囊穿刺法或手术中留取胆汁5 mL，置无菌管内送检。 B. 标本采集后必须立即送检。 ⑻脓汁和病灶分泌物培养：
A. 标本采集前，先对病灶周围消毒，然后用无菌法采取脓汁或病灶分泌物和组织。 B. 标本采集后立即置无菌管内送检。 ⑼眼、耳、鼻、咽拭子分泌物培养标本： A. 用无菌拭子常规采集标本。
B. 标本采集过程中应注意避免被粘膜上正常菌群污染。 C. 标本采集后连同拭子一起置无菌管内送检。 ⑽泌尿生殖道培养标本：
A. 尿道分泌物：清洗尿道后采取尿道溢出的脓性分泌物，或用无菌拭子插入尿道2～4 mL处轻轻转动后取出，置无菌试管中立即送检。
B. 阴道、宫颈分泌物：通过阴道扩张器，用灭菌拭子采取阴道口或宫颈管1～2 mL处分泌物，置无菌试管中送检。
C. 前列腺液：清洗尿道、膀胱后用前列腺按摩法采集前列腺液于无菌试管中，立即送检。
D. 精液：受检者应5天以上未排精，清洗尿道后用手淫法或体外排精法，射精于无菌管中立即送检。
E. 溃疡分泌物：灭菌生理盐水清洗患处，用无菌拭子取其边缘或基底部的分泌物，置无菌试管中立即送检。 ⑾烧伤感染培养标本：
烧伤12小时后用无菌棉拭子采集标本：要注意从多个创面取样;烧伤严重感染时易发生败血症，创面取样的同时应采集血样做血培养。 ⑿真菌感染培养标本：
浅部真菌感染标本采集：皮癣者常规消毒皮肤，从皮损边缘刮取鳞屑，置无菌平皿中送检;皮肤溃疡则采集皮损周围脓汁或组织;毛发则采集其根部折断处，至少5～6根送检;指(趾)甲;消毒指(趾)甲并去掉其表面部分，取可疑病变部分，用刀片修成小薄片5～6片，置无菌容器中送检。 深部真菌感染标本采集：
血液：无菌采集血3～5 mL，注入血培养瓶中，立即送检;如不能立刻送检时血培养瓶应放室温，但不可超过8小时。
及脊液：采样量不少于3 mL，分别注入两支无菌试管中送检(一支做真菌培养和墨汁染色，另一支做普通培养)。
呼吸道及泌尿生殖道标本：采集方法同普通培养。 ⒀厌氧菌感染培养标本： 标本采集：严格执行无菌操作，避免标本污染和与空气接触;用注射器抽取胸水、腹水、心包液、关节液、胆汁、脑脊液或无菌手术抽取脓液;抽出液体标本后，要尽快排除注射器内的空气。
标本运送：标本采集后不得冰箱储存，必须尽快(半小时内)送检;标本运送可采用注射器(已驱氧)或含运送培养基的无氧小瓶以及厌氧罐。 ⒁特殊项目的标本采集要求 A. 糖耐量试验：
①病人准备：试验前3日，每日食物总糖含量不低于150g，维持正常活动，影响试验的药物(如：咖啡因、口服避孕药、水杨酸盐等)应在3日前停用，试验前病人应10～16小时不进食。
②标本采集：临床上常用方法是清晨抽空腹血后，口服75g无水葡萄糖，再于给糖后0.5、
1、1.5、2小时各采血1次，每次采集2mL，尽快分离血清。 B. 人乳头瘤病毒DNA(HPV-DNA)分型检测： ①病人准备：3天内不能做阴道冲洗或使用阴道内药物，24小时内不能有性生活，非月经期采样检测。 ②标本采集：放置阴道扩张器，用专用取样刷置于子宫颈口与粘膜交界处逆时针转三圈，停留10秒钟;
③将取样刷放于专用试管中，在切口处折断多余部分; ④拧紧盖子送检。尽量避免保存液在取样过程中溢出，否则样本量不够无法检测。 标本保存：4℃可保存3周，-20℃可保存半年。 C. 高血压项目：
①病人准备：β-阻断剂、血管扩张药、利尿剂及甾体激素、甘草等影响体内肾素水平，一般要在停药后3周测定。不适合停药的病人改服胍乙啶等的影响PRA较小的降压药。钠摄入量影响机体PRA水平，故病人测定PRA前3天应适当减少盐报入量，最好同时测定取血前24小时的尿钠含量，以供分析PRA结果时参考。
②标本采集：肘静脉取血5mL，迅速注入放在水浴冷却的酶抑制剂的专用抗凝管中，摇匀，即刻现放回冰水浴中冷却，待离心时取出。1000rpm离心5分钟(最好4℃离心)分离血浆。此操作应在15分钟内完成。(外送时，取2mL血浆送检)。 ③标本保存：低温冰箱保存(-20℃以下)，可保存2个月。 ④注意事项：卧位血是指病人早晨醒来未下床活动前采集的血标本：立位血是指病人早晨下床活动3小时后采集的血标本。
标本未及时分离血浆、反复冻融、溶血、保存不当、使用过期抗凝剂均可影响结果。
四、标本送出前的处理和保存
1.标本的交接检查：本科工作人员与送检者当场交接样本，履行交接程序。不合格的样本当场拒收，对有疑义的样本，与临床协商后处理。 样本上条码与检验申请单上条码是否一致 样本是否溶血 抗凝血有无凝块
检验申请单填写是否完整 血液样本有无脂血 样本量是否符合要求
样本使用容器是否正确(是否抗凝、所用抗凝剂种类，特殊项目是否使用专用容器或采集管)。 2.样本离心
绝大多数血液中成份在不分离血细胞的情况下能够在24小时内保持稳定，但外送检验项目必须分离血清或血浆后送检。 溶血对一些项目影响很大，发生中度以上溶血的下列项目不能检验：钾、钠、氯、钙、镁、磷、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、胰岛素、C肽、肌酸激酶、神经元特异性烯醇化酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、叶酸、血常规等。
注：因许多成份在红细胞和血清/血浆间浓度有差异，有的差异很大，样本在运输、储存过程中，血细胞代谢、微生物降解等会影响标本质量，另如标本在运输过程中处理不慎(颠簸等)易引起溶血。
3.样本保存：不能及时送检的样本，一般情况下应放冰箱冷藏，但部分项目要室温保存。. 4.样本密封：为保护样本不挥发、污染、溢出和生物安全考虑，盛样本的容器应密封，所有样本都应按照生物安全的要求谨慎处理。
建议：对于要外送检验的项目，将血液样本分离血清/血浆后送检(需要用全血检测的项目除外)。
一、血液细菌培养标本的采集和处理 临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者，需做血液细菌培养以明确病原。及时、准确地从患者血液中分离出病原菌，才能正确实施有效的抗菌治疗，从而有助于治愈率的提高和医疗费用的降低。
1、采血时机：在患者发热期间越早越好，最好在抗菌治疗前，以正在发冷发热前半个小时为宜。
2、采血次数及间隔：在急性发热性疾病如脑膜炎、细菌性肺炎，需马上做抗菌治疗：或急性骨髓炎、化脓性关节炎等要紧急手术的患者，应立即从两臂分别取2份标本。对感染性心内膜炎患者，在24h内取血3次，每次间隔不少于30min;必要时次日再做血培养两次。对发热原因不明者两次抽血间隔60min;必要时于24~48h后再抽血2次。因为1次血培养不足以说明问题，且会遗漏阳性结果。国外有人统计1次血培养可检出菌血症的80%，2次检出90%，3次检出99%。国内统计17家医院1次血培养阳性率10.8%，18家医院2次以上血培养阳性率14.8%。
3、采血部位：多次采血应在不同部位的血管穿刺以排除皮肤菌群污染的可能。要避免从血管插管内取血，因插管常被污染其结果不能反映真实情况。在不同部位取血，2次分离出同样菌种才能确定病原菌的有力证据。
4、采血量：成人菌血症或败血症的血液中含菌量较少，平均1~3ml血液中仅有1个细菌。所以采血量一定要足够。成人一般为10ml，新生儿与婴幼儿为1~2ml。有人引述多篇文章指出：对成人每增加1ml血量平均能提高阳性率3.2%。
5、培养基选择：培养基的质量对血液细菌培养阳性率的高低有非常重要的作用。市售培养基良莠不齐，选购时要慎之又慎注意质量，以知名大厂家生产为益。国内报告应用不同培养基的两组血培养结果，1组阳性率为9.7%，另1组为16.1%，可见培养基影响之大。抗凝剂现多用聚茴香脑磺酸钠(sodium polyanethol sulfonate SPS)浓度为0.025%~0.05%。因兼有抗凝、抗补体、抗吞噬几拮抗某些抗生素的作用，故较其他抗凝剂为优。
6、培养条件：尽管病原菌仍以需氧菌和兼性厌氧菌为主，但亦有少部分为真菌、厌氧菌或L型菌感染。特别是真菌感染有增加趋势可占病原菌10%以上。所以必要时应选取响应培养基在不同环境下培养。
7、盲传的必要：肉眼和仪器都不能确保在瓶外观察到所有的阳性菌生长，国内外的经验都证明这一点。因此在培养终结时盲目传代1次，以防漏检。
8、无菌操作：无论采取何种方法，在血液培养的全过程，从皮肤消毒、标本采取、运行、分离移种等，皆应十分注意无菌操作。用头皮针为新生儿和婴幼儿取血时，应换针头再将血注入培养瓶中。
二、下呼吸道分泌物(痰培养)的标本采取与质量要求
下呼吸道分泌物(痰)的细菌学检查对病原学诊断起着重要作用，但目前亦存在着严重的问题——标本的质量问题，因此，往往造成作出的病原菌诊断和实际引起感染的病原菌脱节，以致造成抗菌药物的应用不合理甚至耐药菌的出现和流行。痰标本的细菌学检查应注意如下几个问题。
1、标本的采取：自然咳痰：要求患者清晨留取，留取标本前应用水漱口3次，之后用力咳出。咳痰较困难者可用雾化蒸气吸入以利痰液咳出。幼儿可用手指轻扣胸骨柄上方以诱发咳痰。
2、气管穿刺法：仅用于昏迷患者，由临床医师进行。
3、纤维支气管镜抽吸：通常用于在患者行纤维支气管镜检查时顺便抽取。
4、胃液抽取法：多用于可疑患有肺结核的患者在有可能将痰液咽下的情况时采用。
5、标本的运送：标本采集后应立即送检，应争取在20min内送达检验科微生物室。
6、标本的贮存：微生物实验室收到标本后，应立即进行标本的质量检查及培养接种，如不能立即进行检查则应暂时放于普通冰箱(4℃)，冰箱中存放的标本应在24小时内进行检查。
7、标本的质量检查：(1)制成涂片行革兰染色;(2)于显微镜低倍镜下检查(10x10)，观察WBC及扁平上皮细胞存在情况，表1作为参考：
表1 痰标本显微镜检查的分类
分类
细胞数/低倍镜视野
(级)
白细胞
扁平上皮细胞
<25
<25
>25
<10
>25
10-25
>25
>25
10-25
>25
<10
>25
*分类中1~3类不做培养，要求重新留取标本：
4、5类为合格标本：6类为气管穿刺液，如未见到白细胞，而扁平上皮细胞>10/低倍镜视野，亦应重新留取标本。
8、特殊要求则作特殊处理，如做抗酸染色查找抗酸菌等。
9、分离培养：痰标本最好接种3种培养基，即血琼脂培养基、巧克力琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基(中国蓝培养基)。
10、显微镜检查的初步报告:在用显微镜检查标本质量的同时，对合格的标本(可进行分离培养的标本)，往往可以作出初步的病原学参考诊断，如革兰阳性菌、革兰阴性菌、球菌或杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌等。
三、尿液细菌培养标本的采集和保存
尿液的细菌培养检查对于膀胱和肾脏感染的及早发现和病原学诊断很有价值。对于尿道、前列腺以及内、外生殖器炎症的诊断也有一定价值。
1、标本收集：需在应用抗菌药物之前或停用抗菌药5d之后留取尿液标本：尿液 在膀胱内应停留6~8h以上，使细菌有足够的时间繁殖。(1)清洁排尿法：女患者以手指将阴唇分开，用肥皂水或碘伏清洗外阴，然后以清水冲洗尿道口周围，擦干并排出前段尿液后，用无菌容器接取中段尿;男患者应翻转包皮冲洗，用2%红汞或1：1000新洁尔灭消毒尿道口;婴儿消毒其阴部后，将无菌小瓶直接对准尿道口以橡皮膏贴于皮肤上，待排尿后立即送检。(2)膀胱穿刺法：为避免尿道正常菌群的污染，收集尿液最好的方法是膀胱穿刺。尤其做厌氧菌检查时必须采用膀胱穿刺法。穿刺时膀胱应充盈，皮肤严格消毒后用装有19或20号针头的注射器在耻骨联合距脐1/3处穿刺。膀胱穿刺的适应症有：[1]有尿道感染的临床症状，但中段尿培养细菌数很低，而又难以确定感染源者。[2]婴幼儿、新生儿不能用导管者。[3]怀疑有厌氧菌感染时。(3)肾盂尿采集法：若取左右两侧肾盂尿，应请泌尿科医生采取，左右侧的标本要标记明确，以免出现错误。(4)用封闭式引流装置的留置导尿患者留取尿液标本培养时，用适当的消毒剂严格消毒引流管和导尿管连接处的管壁，用装有21号针头的注射器穿刺导尿管壁吸取尿液。不可打开导尿管和引流管连接处收集标本，培养用的尿液标本也不能从引流袋中留取。(5)膀胱镜检查、输尿管插管或逆行肾盂造影时，收集的尿液可用来做细菌培养。(6)做病毒学检测时用容器收集清洁的标本即可，不需特殊方法收集。标本中加入抗生素可抑制细菌的过度生长，且标本需冷藏。 检测衣原体时，尿液标本不能代替尿(阴)道分泌物。
巨细胞病毒(MC)的检测，需多次检测标本，因其释放常是周期性的。
结核分枝杆菌的检查，应留取24h尿，无症状的血尿可能是肾结核病，应用清洁排泄法收集连续3份晨尿标本。
淋病奈瑟氏菌培养留取清晨第一次尿，盛于无菌容器内立即送检。
尿道结石标本可作其内部及表面培养，内部培养出的细菌与表面存在者可能不同。
2、标本的运送和保存：用无菌带螺帽的容器盛标本，标本应在1h内送检。超过2h者应重送，否则易致假阳性结果。
标本送达实验室后，若不能立即接种，可将标本置于冰箱(4~8℃)保存，但不得超过6h。
四、粪便标本微生物学检查的质量要求
关于腹泻患者粪便中肠道病原微生物的检测，根据世界卫生组织(WHO)腹泻病纲要和我国卫生部临床检验中心有关操作规程要求，粪便标本应取材得当，并严格按细菌分离培养操作规程进行各种病原微生物的鉴定。
1、标本采集：粪便标本应在发病早期并且尽量在用抗生素治疗前采集，直接用棉拭子，也可用直肠拭子，取双份粪便标本，1份置Cary-Bliar运送培养基中，另1份置灭菌小瓶中送检。
2、显微镜检查：粪便直接涂片革兰染色，可作为艰难梭菌、弧菌、弯曲菌、葡萄球菌、白色念珠菌等初步筛查，盐水滴片用作肠道寄生虫检查。
3、标本保存和运送：标本置Cary-Bliar运送培养基中，记录姓名、日期、标本号、放置冰壶中及时送检，一般可保存24h。
4、接种：收到标本应立即接种选择性培养基。
5、轮状病毒检测：可直接用ELISA法检测粪便标本中轮状病毒(RV)抗原，或从粪便中提取RV-RNA做聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，根据轮状病毒特有RNA基因片段大小及其排列特点，判断结果。
五、生殖道标本的采集
1、男性标本：(1)如疑为急性淋病耐瑟菌或其他化脓性细菌感染应在清洗龟头部后，以碘伏或其他非粘膜刺激性消毒剂消毒后，挤出分泌物立即以无菌棉拭子采取，立即送检，或以专用的细拭子插入尿道口1~2cm，旋转采取。(2)如疑为前列腺炎、精囊炎的慢性淋病耐瑟菌感染应由医师按摩前列腺，以无菌手续自尿道口采取前列腺液送检。
2、女性标本：(1)成年妇女自宫颈采取标本，应在扩阴器的支持下，选取有炎症或分泌物部位，先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物，再用另一拭子取分泌物送检。如做厌氧或真菌培养应另外采取标本。(2)如未成年幼女疑患性病传播疾病时，不应使用扩阴器，以一无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检。
六、胸腹水、脑脊液标本的采集
1、均由医师以无菌手续穿刺取得，必须应用带盖的无菌容器，立即送检。
2、此类标本在接种前应离心1500r/min15min或做增菌培养。
3、应接种血琼脂及巧克力琼脂温育于CO2环境中，结核分枝杆菌的培养应接种专用培养基。
在实际工作中，同一份标本可做不同的检测项目，而同一检测项目也可适用于不同的检测标本，临床实验室常规检测标本的整个采集过程直接对检测结果的准确性与可靠性产生影响，正确的标本采集方法可以提高检出结果的阳性率，确保检测结果的准确率。反之，错误的采集方法所得标本的检测结果将受到很大的质疑，既延误临床的诊断治疗，又可能危及患者健康甚至生命。因此，我们必须了解和掌握临床检验标本采集的一些常识，配合临床实验室做好分析前的质量控制，认真仔细地控制检验标本采集的每一个环节，正确的做好检验标本的采集工作。 临床检验常见的检测标本是来自患者的血液、尿液、粪便，也有脑脊液、胸水、腹水及各种穿刺液和分泌物。还有一些特殊的标本如唾液、泪液、指甲、毛发等。
不同的检验项目标本采集的时间是不相同的，第一要选择最具“代表性”的时间：血液标本原则上晨起空腹时采集标本原因有下; ① 尽可能减少昼夜节律带来的影响。②患者处于平静状态，减少患者由于运动带来的影响，并减少饮食的影响;③参考区间通常是根据正常人空腹血标本测定值而确定的，易于与参考范围作比较;第二要选择最有价值的时间，如急性心肌梗死cTNT或cTNI的测定在发病后4-6小时采集样本较好;病毒性感染抗体检查，在急性期及恢复期，采取双份血清检查对诊断意义较大。 第三要选择检出阳性率最高的时间：如细菌培养应尽可能在抗生素使用前采集标本;尿常规检查应采集晨起第一次尿;尿早孕35天后送检阳性率达高峰。大便标本应取黏液、血液部分;痰液标本应为深咳所得，防止唾液混入;末梢血采集时防止组织液混入;输液的患者输液完毕后至少1h后方可采取血液标本送检。因此，取样前需考虑各方面因素，切勿随意取样。
血液标本的采集
1.采集时间：体内有些检验项目的血浓度具有周期性变化，应注意以下几点：①采血尽可能在上午9点前进行，其他时间的急诊检查，应在评价检验结果时注意节律因素的影响。②采血前患者应禁食12小时，这是因为清晨空腹血中各种化学成分比较稳定，不受食物中的各种成分吸收入血的影响。再则，清晨患者还未使用任何药物，防止了药物对检验结果的干扰。对血脂类的检验，要强调患者近3天内禁食高脂食物，不得饮汤，易致结果偏高。③采血前须告知患者不要进行剧烈运动。④采血尽量安排在其他检查和治疗前进行。⑤做药物监测时，要根据药物浓度峰值和稳定期采血。⑥检验申请单上应注明采血时间。
2.体位;标本采集一般以坐、卧姿势为主。人的体位改变可引起血中许多指标发生变化例如从仰卧到直立时，由于有效滤过压上升，水及小分子物质从血管内转移到组织间隙，血浆容量可减少12%，因浓缩的缘故，使血中细胞与大分子物质相对升高5%，受这种体位影响的指标有：红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白、红细胞容积、谷草转氨酶、碱性磷酸梅、总蛋白、白蛋白、免疫球蛋白、载脂蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白、胆固醇等。此外，某些激素水平如醛固酮、肾上腺素、去甲肾上腺素和血管紧张素等，直立位高于平卧位。
3.采血部位：临床检验的血液标本，根据检验目的、项目的不同，可采集毛细血管血、静脉血或动脉血。不同部位的血液标本中某些检测成分有差异，甚至可对检测结果产生严重影响。
①毛细血管采血：毛细血管采血主要用于用血量较少(不超过200ul)的检验项目，如血细胞计数，血细胞形态学检查，血液寄生虫检验以及一些快速微量的临床化学检测(干化学检测)如手指血糖、糖化血红蛋白快检等，具有方便快捷的特点，但应注意避免用力挤压，以以防组织液干扰。实际上毛细血管采血(即所谓的末梢血)，所含成分应为动脉血、静脉血、毛细血管血、组织间液和细胞液的混合体。尽管其化学成分及血气分析与静脉血比较无显著性差异，但血常规检验结果二者却存在明显差异。
如手指血的白细胞计数明显升高(+8%)，而血小板则明显降低(-9%)，且手指血检测的重复性、准确性均差。所以，绝大多数专家建议，血常规检验特别是应用血细胞分析仪时，应使用静脉血取代手指血标本，这样既可以提高检测的可靠性，又可以在很大程度上避免交叉感染、医源性感染，减轻患者痛苦，减少堵孔等血细胞分析仪故障。
②静脉采血，临床检验绝大部分血标本来自静脉血，采血部位通常是双臂的前臂窝处的头静脉，贵要静脉或肘正中静脉之一，选择原则是“择优录取”。即保证穿刺的顺利，对重症患者或因肥胖而血管不明显者，可以从手背或脚踝处的即保证穿刺的顺利。对重症患者或因肥胖而血管不明显者，可从手背或脚踝处的静脉采集，某些特殊情况如橡皮肿、硬皮病，则只有行静脉切开。此外，静脉采血应注意部位选择(见前述)及消毒剂的选择，如碘酒的使用将干扰T
3、T4的检测。
③动脉采血：动脉采血标本主要用于血气分析、乳酸测定等，常用含有干燥肝素钠的注射器或用肝素溶液充满注射器死角和针头进行动脉穿刺。应注意：过多的肝素可使PH值和PCO2降低;及相关计算参数错误，注射器内不能有气泡，因可改变PO2R 结果。动脉血管血测定血气分析时一定要加以注明。动脉化毛细血管采血主要用于婴幼儿或儿童的血气分析，其方法是用不超过42℃的湿毛巾湿热采血部位皮肤，使血管扩张血流加速，血液增加而达到动脉化，再进行毛细血管采血。
4.压脉带影响：采集标本时动作宜迅速。静脉采血时，压脉带压迫时间过长可便多种血液成分发生改变，如压迫40秒，总蛋白增加4%、AST增加16%，压迫200秒，这些物质可上升25%。压迫超过3分时，因静脉扩张、淤血，水分转入组织间隙，血液浓缩，可便白蛋白、血清铁、血清钙、ALP、AST、胆固醇等升高5%-10%，血清钾上升更明显。同时，由于氧消耗增加，无氧酵解加强，乳酸会升高，PH值降低。因此在采血时应尽量缩短压脉带的压迫时间，最好能在1分钟内采完。采血过程中，看见回血，马上解开压脉带。勿让患者做反复做攥拳运动。当需要重复采血时，建议采用另一只手臂。
5.输液的影响：为保证血液标本的质量，应尽可能避免在输液过程中采血。因为输液不仅使血液被稀释，而且输入液体的成分会严重干扰测试结果，最常见的干扰项目是葡萄糖和电解质。当患者输液时，从患者输液针管内抽血或同侧输液肢体抽血，造成检验项目结果错误。故有时实验室遇到钾含量高达10mmol/L以上的标本以及血糖异常偏高的检测结果时，须与临床反馈咨询。检验结果与临床体征明显不相符合时，此种情况较易发现，经重新采集后结果差异很大。但是如果影响稍小的标本，则不易发现，而易给临床造成误诊误治，一般情况下，输入碳水化合物、氨基酸、蛋白质或电解质的患者，应在输液结束1h后采血，而输入脂肪乳剂的患者应在输入8h后采血。
一、 血液检验标本采集方法
血液标本分为全血、血浆、血清等。全血标本主要用于临床血液学检查，例如血细胞计数和分类、形态学检查等;血浆标本适合内分泌激素、血栓和止血检测血清标本多适合于临床化学和免疫学的检测。
按照血标本采集部位的不同，分为静脉血、动脉血和毛细血管血三种。绝大多数检查采用静脉血，少数检查如血气分析、乳酸和丙酮酸测定等需要采集动脉血，毛细血管血主要用于各种微量法检查或大规模普查。
静脉血是最常用的实验室检查标本，真空采血法是最好的静脉血采集技术。基本原理是将双向针的一端在持针器的帮助下刺入静脉，有回血后将另一端插入真空试管内，血液在负压作用下自动流入试管内。由于在完全封闭状态下采血，避免了血液外溢引起的污染，并有利于标本的转运和保存。标准真空采血管采用国际通用的头盖和标签颜色显示采血管内添加剂种类和检测用途，可根据需要选择相应的盛血试管。
(一) 静脉血采集方法、注意事项和采集样品所用材料的安全处置：
1、 止血带或压脉器：采集静脉血时，止血带压迫静脉时间不宜过长，以不超过40秒为宜，否则易引起淤血、静脉扩张，并影响某些指标的检查结果，如乳酸升高、PH值降低、钾、钙、肌酸激酶升高等。
2、 采血时间与部位：大多数化验检查要求清晨、空腹、采集静脉血应尽可能避免在输液同时取血，输液不仅使血液稀释，而且对实验室检查结果发生严重干扰，特别是血糖和电解质。
3、 避免溶血、杂质污染：采血器具必须无菌、干燥、洁净 ，避免特别用力抽吸和推注、避免化学污染和细菌污染引起的溶血。因为红细胞的某些成分与血清(浆)不同，样本溶血可使红细胞某些成分释放，影响实验室检查结果。
4、 血样的采集：血样要求在每一天的同一时间采集，理想的时间是早晨7：00到8：00,尤其是监测为目的时，更要保证标本采集时间的统一。最后一次食物和液体摄入应在前一下下午6：00至7：00(急诊检验例外)。血样采集应在不服药期间，如在早晨服药前。血样采集时，患者庆仰卧位，采血点应有同一静脉区，通常为手臂静脉。
5、 标本采集后须立即送检，放置过久影响检验结果。当取血不顺利时，切忌在同一处反复穿刺，易导致标本溶血或有小凝块，影响检测结果。
6、 采集血培养标本时应先注射厌氧瓶，尽量减少接触空气时间。
7、 微量元素测定采集标本的注射器和容器不能含游离金属。
8、 采集样品所用材料的安全处置：使用后的采血针、注射器针头等锐器物应当直接放入不能刺穿的利器盒内或毁型器内进行安全处置，禁止对使用后的一次性针头复帽，禁止用手直接接触使用过的针头、刀片等锐器物;注射器针筒、棉签等其他医疗废物放入黄色医疗废物袋中，医疗废物和生活垃圾分类收集存放。消毒毁形后的医疗废物必须交给指定的医疗废物处理厂，不得擅自废弃。
(二) 临床化学/免疫检验标本
临床化学/免疫检验多用非抗凝血标本，最好使用真空负压采血管。 标本采集主要注意事项有：
1、 化学项目大多数需要空腹采静脉血，多个单项化学检测项目组合检验时一般可采1管血。
2、 采血量视检查项目多少不同而异，通常为4.0—5.0ml;
3、 多个组合检测项目同时采血时应按下列顺序采血： 血培养——无添加剂管
凝血管——有添加剂管
有添加剂管的顺序为：枸橼酸盐管
肝素管
EDTA管
草酸盐/氟化钠管
4、 不论是抗凝血还是非抗凝血，为了缩短血清或血浆与血细胞的接触时间，血液标本收集后，须尽可能早地将血清或血浆从全血中分离出来，避免由此而影响检验结果的准确性。从血液标本采集开始，必须在2h内将全血处理为血清或血浆。 (1) 血清(非抗凝血)：采血后标本于22—25℃(室温)15—30min后可自行(自发)完全凝固，禁用木棍和玻棒等剥离凝块;冷藏标本凝集较慢，加促凝剂者凝集加快。
(2) 血浆(抗凝血)：应采用抗凝管采血，采血后立即颠倒混合5—10次，采血后数分钟内可离心分离血浆。
(3) 冷藏标本：用于稳定血液中温度依赖性成分(抑制细胞代谢)的检测项目，标本于2--8℃冷藏(标本采集后立即置于冰箱中，冷藏必须充分);标本需冷藏的测定项目有：儿茶酚胺、胃泌素、甲旁素、PH/血气、NH
3、乳酸、丙酮酸等。全血标本一般不冷藏，血钾测定标本冷藏不得大于2h.全血标本切忌冷冻。
(4) 代谢抑制剂和防腐剂的应用：用于抑制细胞代谢。血标本中加入氟化钠后，血细胞未分离情况下血标本中Glu,22--25℃稳定24h,2--8℃;氟化钠不适用于新生儿及儿童的Glu测定(因儿童PVC高，细胞糖酵解难以控制);氟化钠——麝香草酚混合剂不适合酶学检测(因氟化钠——麝香草酚混合剂抑制酶活性);甲醛草酸钾抗凝保存剂不适用于血糖测定。
(三) 红细胞沉降率(血沉，ESR)检测标本
静脉采集枸橼酸钠(109mmol/L,即32.06g/L)抗凝血(枸橼酸钠抗凝管采血)，黑帽管。采血注意事项：
1、 单独采1管血，准备采血至2ml刻度线(抗凝剂：全血=1：4);
2、 采血后立即上下颠倒混合5——10次;
3、 采血后应尽快送检(必须2h内检测)。
(四) 血常规(全血细胞分析)检验标本
一般用EDTA1.5——2.2mg/ml抗凝(EDTA抗凝采血管——紫帽管)。 采血注意事项：
1、 采血后立即上下颠倒混匀，5——10次，不可用力震荡。
2、 应按抗凝管该度采血至2ml,可不用空腹。
3、 采血后应尽快送检(需显微镜观察形态的标本采血后应及时推片固定，因为超过2小时WBC形态会发生改变);
4、 血型与血常规可采1管血。
(五)75克葡萄糖耐量试验(OGTT)/胰岛素释放试验/C-肽释放试验
1、病人准备：试验前3日，每日进食碳水化合物量不低于250——300克，且维持正常活动，影响试验的药物(如：咖啡因、口服避孕药、水杨酸盐等)应在3日前停用，试验前病人应10—16小时进食。
2、标本采集：临床上常用方法是清晨抽空腹血后，口服75克葡萄糖，再于给糖后0.5、
1、
2、3小时各采血2ml/1次(共5次)。
3、标本保存：采血后1小时内分离血清并及时冷藏送检或采用血糖专用抗凝管采血，于2--8℃保存。
4、注意事项：胰岛素测定受溶血影响较大，采血时应避免溶血。
(六)高血压系列检验标本
1、高血压三项(肾素、血管紧张素Ⅰ、Ⅱ)
(1)病人准备：-阻断剂、血管扩张剂、利尿剂及甾体激素、甘草等影响体内肾素水平，一般要在停药后2周测定肾素活性(PRA)，利血平等代谢慢的药物应在停药3周测定。不宜停药的病人改服胍乙啶等影响PRA较小的降压药。钠摄入量影响机体PAR水平，故病人测定PRA前3天应适当减少食盐摄入量，最好同时测定取血前24小时尿钠含量，以供分析PRA结果时参考。
(2)标本采集：静脉取血4—5ml,拔除针头后缓慢注入到专用抗凝管中，盖好管塞后上下颠倒5次，混匀后2500转/分，离心5—10分钟，分离血浆，将血浆装入专用血浆管后低温送检。如不能立即送检，需尽快冰冻保存(—15℃)。溶血标本不能检测。
(3)标本类型、标本量：专用抗凝管采血，分离血浆，取2ml送检。 (4)标本保存：低温冰箱保存(—15℃以下)，可保存2个月。
(5)注意事项：申请单上应注明抽血时的体位(卧位：病人在早上6—8时起床前，取静脉血;立位：病人起床后活动3小时，取静脉血。) 和饮食情况(普食饮食、低钠饮食);标本未及时分离血浆、反复冻融、溶血、保存不当、使用过期抗凝管等均可使结果受到影响。
2、醛固酮
(1)病人准备：留样前应停服利尿剂至少3周，停服抗高血压药物1周;
(2)标本采集：血浆醛固酮测定应采用肝素抗凝，采集后立即分离血浆，置—20℃保存待测;尿液标本则留取24小时尿量，用10—15ml浓盐酸防腐。
(3)申请单上注明：抽血时的体位(卧位、立位)和饮食情况(普食饮食、低钠饮食);尿液标本要准确记录24小时的尿量。
(七)皮质醇标本采集及注意事项
正常人皮质醇的分泌存在昼夜节律，一般为早上8点或下午4点采血，送检时请务必在申请单上注明采血时间。
(八)流式细胞术检测项目的标本采集及注意事项
1、淋巴细胞亚群系列
标本要求：EDTA或肝素抗凝全血2ml(推荐EDTA抗凝)
注意事项：该系列项目在不同年龄段的细胞数参考值不尽相同，所以送检时请务必在申请单上注明病人年龄。
2、白血病免疫分型
标本要求：肝素抗凝骨髓或全血2ml。
注意事项：请使用白血病免疫分型专用申请单。
3、人类白细胞抗原B27检测(HLA—B27)/阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)检测。 标本要求：EDTA或肝素抗凝全血2ml。
备注：保证新鲜标本，流式细胞术检测项目需要24小时内送检。
(九)微量元素检测标本采集要求
1、采血人员应戴乳胶或聚乙烯手套，若手涂粉，需用静脉采血皮肤清洁法处理手套后进行操作。
2、橡皮塞对锌有污染，故普通采血管不可使用，请使用本中心提供的专用管。
3、采集方法：采集静脉血0.5—1.0ml，采集后马上轻轻颠倒混匀，粘上条形码，装入自封袋送检。
4、如不能及时送检，应放置2—8℃冰箱保存。
5、标本凝固或含凝块，不能检测。
(十)遗传学检测标本采集要求
1、标本采集：外周血标本可使用中心配送的肝素抗凝管(遗传专用)和采血针进行采集，采集后立即将试管轻轻颠倒混匀，以名凝血;脐带血标本、骨髓标本可以在穿刺成功后，打开中心配送的肝素抗凝管盖，将脐带血或骨髓注入采集管中，立即将试管轻轻颠倒混匀，以免凝血，请注意无菌操作，不要污染管盖。请避免使用注射器采集标本后直接注入采集管的方式进行标本采集，以免引起溶血;请勿使用EDTA等抗凝管采集标本。
2、标本量：外周血、脐带血、骨髓各4ml。
3、标本送检：合格标本须于采血后当天送至遗传实验室，标本有溶血、凝血现象，也视为不合格标本。骨髓标本应尽快送至实验室。
4、标本保存：标本采集后置于18—25℃保存，不可冷冻，不可放置于高温环境中。
5、申请单填写：请完整填写申请单，尤其是标本采集时间、性别、病史、临床诊断等。
(十一)基因检测标本采集要求
1、 所有用于基因诊断的标本必须用无菌试管或容器留取，严禁使用肝素抗凝管，采集标本时注意无菌操作。
2、 为避免污染，送检基因诊断标本项目需单人单项目单管。
3、 采集方法：
(1)血液标本：抽取病人静脉血，置无菌试管中室温自然凝固或2000转/分离心，取分离出的EDTA抗凝血浆/血清送检。
(2)女性分泌物标本：①分泌物标本采样应在非月经期进行;采样前3天内不使用阴道内药物，不冲洗阴道;24小时内不应有性行为;②采集时先用棉签将宫颈口或尿道口过多的分泌物轻轻擦去，更换棉拭子，将棉拭子伸入宫颈，通过上皮交界处，旋转3—5周，以保证取得较多的柱状上皮标本，对于怀疑HPV感染的患者，尽量采集病变部位标本，可提高HPV的检出率。将取样后的棉拭子放入配套的软管中，旋紧管盖;
(3)男性分泌物标本：先清洁尿道口，将棉拭子伸入男性尿道1cm，旋转3—5次获得标本，将取样后的棉拭子放入配套的软管中，旋紧管盖。
(4)疱疹液或疣体标本：对于生殖器或肛周有疣状体增生，怀疑为尖锐湿疣者，宜直接采集疣体组织置于标本管中送检。
备注：疣体标本进，需要在申请单上的标本类型栏处写上“疣体”。
4、 标本保存：检测靶核酸为DNA的标本，可在2—8℃下保存3天;检测靶核酸为RNA的标本，应保存在—20℃下。
(十二)骨髓检查的要求和注意事项
1、 涂片要求：二张血片，六张骨髓片，怀疑白血病则需八张骨髓片。骨髓血片注明“B”，骨髓片注明“M”，以示区别。
2、 申请单注意事项：
(1) 病例摘要：应填写全面，尤其是肝、脾、淋巴结、出血状况等与血液病相关的症状以及药物的应用等均应填写清楚。
(2) 化验结果：血常规结果一定不能缺，如果可能，MCV、MCH、MCHC、及分类也一并填上。 (3) 采取骨髓部位也应填上，如果采取骨髓时不须，应重抽，以免耽误病人。 (4) 写上主治医生联系方式，如科室电话、手机号等(以便与临床密切联系)。
二、 尿液常规检验标本采集
(一) 尿标本种类
按检查目的，常可采用下列标本：
1、 晨尿：最好，安静状态下留取清晨第一次尿，该标本为浓缩尿。其细胞和管型等形态完整，适合做各种有形成分的检查和尿蛋白，尿糖等项目的测定。
2、 随机尿：较常用，适用于门诊和急诊病人常规检验，结果易受多种因素影响。
3、 空腹或餐后尿：适用于糖尿病、尿胆原、尿蛋白等的检查。
4、 24小时尿：用于尿液成分定量检查分析：
(1)24小时尿采集方法：留尿当日早晨8时排空尿液，之后每次排尿均收集于一大容器内，至次日早晨8时最后一次尿液共24小时之间的所有尿液全部收集于洁净容器内。在收集期内每次尿液标本均应放冰箱(2—8℃)或阴凉处保存，全部收集完毕测量并记录24小时总尿量，混匀后取20—30ml置于有盖容器内送检即可。
(2)24小时尿可用于检测Cr、BUN、K、Na、CL、Ca、P、UPR、UAER等。
5、特殊实验尿(如3h、8h、12h等计时尿和餐后尿等)，则应按医嘱要求进行留尿，并注明用药时间，便于分析比对。
6、清洁尿(中段尿、导管尿、膀胱穿刺尿)：用于病原微生物学培养、鉴定和药敏。
(二)尿液标本收集容器要求
1、 清洁、干燥、有盖、便于标记和转送、一次性使用，有较大开口便于收集。
2、 避免阴道分泌物、精液、粪便等污染，还应注意避免烟灰、纸屑等异物混入。
3、 无干扰化学物质(如表面活性剂、消毒剂)混入，不可使用未经洗涤的装药物或试剂的器皿收集标本。
4、 能收集足够尿液，最好大于50ml,如收集定时尿，容器应足够大，并加盖，必要时加防腐剂。
5、 如需培养应在无菌条件下，用无菌容器收集中段尿。
(二) 尿液采集方法
尿液常规检查标本应按以下原则进行采集：
1、 尿液检验最好留取新鲜标本及时检查，否则尿液生长细菌，使其中的化学成分发生变化。新鲜晨尿最佳，以清晨第一次尿为宜，较浓缩，条件恒定，便于对比。门、急诊患者亦可随机留取。在留取24小时或12小时尿液时，尿液标本最好至冰箱保存，也可根据检测目的加入防腐剂(本室未要求使用防腐剂)。
2、 尿标本的采集方法多采用自然排尿法，需要注意避免阴道分泌物，精液、粪便等污染;对自然排尿困难或需细菌培养者，可在无菌操作下用导尿法或膀胱穿刺法采集。
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