轮虫个体小 (40~260μm) 、游泳速度慢、营养丰富, 因此是海水养殖育苗阶段非常重要的饵料, 目前尚无其他活饵可以替代[1]。因此, 其营养成分是否全面及均衡会直接影响仔稚鱼能否生长及存活。而轮虫体内高不饱和脂肪酸 (Highly unsaturated fatty acids, HUFAs) 的含量是轮虫营养是否均衡的重要标志。海水鱼需要HUFAs作为必需脂肪酸来满足其正常生长和发育, 但常规条件下培养的轮虫其脂肪酸含量, 特别是EPA、DHA含量偏低, 远远不能满足水产动物幼体正常生长、发育的需要[2]。所以在生产中轮虫在投喂仔鱼前首先要进行强化, 使其营养更均衡、丰富。而轮虫的脂肪酸含量和组成受其食物和强化时间的影响很大[3]。本文研究了小球藻、裂壶藻粉、轮虫强化剂 (主要成分为乳化油脂) 这三种饵料强化轮虫, 设置了6个强化时间梯度, 以期找到强化饵料和强化时间的理想结合, 为轮虫的营养强化提供理论依据。
实验用的褶皱臂尾轮虫 (Brechionusplicatilis) 为土池培育。小球藻在长5 m宽3 m的水泥池中培养。3种强化剂分别为小球藻、裂壶藻粉、油脂。
共设计3个实验组, 分别为小球藻强化组, 裂壶藻粉强化组, 轮虫强化剂强化组;每组3个重复, 共有0、4、8、12、16 h和20 h 6个时间梯度。轮虫强化在50 L的桶中进行, 强化剂的添加量以满足轮虫的最大食量为宜, 并且强化剂的颗粒直径要尽量小, 以便轮虫有效进食及方便取样, 强化过程中盐度保持在30, 光照持续充足。分别在第0、4、8、12、16 h和20 h采样, 每次取样时将样品置于10倍显微镜下观察其摄食、活力等情况, 然后将样品装入用紫外线照射消毒好的EP管, 置于-20℃冰箱保存, 待测 (取样时要将样品上多余的强化剂用水冲掉) 。
采用土池培养轮虫, 实验前将其捞出, 由于混有枝角类及桡足类等, 首先用100目的网将杂质及较大的枝角类及桡足类等过滤出来, 然后用250目的细网将可能还混有的枝角类、桡足类过滤出来, 将获得的轮虫在100 L的大桶中暂养2 h后, 滤出轮虫, 分到各实验组, 密度为300 Ind/m L, 桶的容积为50 L, 进行营养强化。裂壶藻粉强化组、轮虫强化剂强化组、小球藻强化组分别用实验A组、实验B组、实验C组代替。强化前对三组分别取一个样做空白对照组 (0 h取样为各组对照组, 组间互为对照) 。强化过程中保持持续不断的强化。在整个实验过程中持续增氧, 少量换水。取样为每隔4 h取样一次。
轮虫强化成活率通过计数强化前后单位水体中活体轮虫的数量获得。每个样品平行测定3次。先将样品脱水保存好, 然后研磨成粉末保存。脂肪酸测定采用气象色谱仪法。
用三种不同强化剂强化轮虫对对轮虫的密度有比较明显的影响, 裂壶藻粉强化后0、4、8、12、16 h和20 h的密度分别为300、351、422、470、590 Ind/m L和596 Ind/m L, 强化达到16 h时轮虫密度基本达到最大, 并保持稳定;轮虫强化剂强化后0、4、8、12、16 h和20 h的密度分别为302、330、401、430、470 Ind/m L和500 Ind/m L, 强化达到16 h时轮虫密度基本达到最大, 但当继续进行强化时轮虫的密度反而会呈下降趋势;三个实验组比较后可知小球藻强化后轮虫的密度最高, 强化后0、4、8、12、16 h和20 h的密度分别为302、383、476、580、697 Ind/m L和701 Ind/m L, 强化达到16h时轮虫密度基本达到最大, 并保持稳定。 (表1, 图1)
用三种不同强化剂强化轮虫对对轮虫的怀卵率有比较明显的影响, 裂壶藻粉强化后0、4、8、12、16h和20 h的怀卵率分别为11.3%、21.2%、48.2%、55.4%、51.7%和43.6%, 强化达到12 h怀卵的轮中占比最大, 达到55.4%;油脂强化后0、4、8、12、16h和20 h的怀卵率分别为11.3%、16.9%、24.8%、37.0%、36.2%和30.1%, 强化达到12h时轮虫怀卵率最高, 为37.0%。12 h持续强化, 怀卵率逐渐下降;小球藻强化后0、4、8、12、16 h和20 h的怀卵率分别为11.3%、38.2%、43.5%、51.2%、74.7%和65.6%, 强化达到16 h时轮虫怀卵率达到最大。 (表3, 图2) 。
三种不同的强化剂对轮虫强化后, 测量其脂肪酸的组成, 发现油脂强化组强化后的轮虫体内EPA, DHA的含量较其他两个强化组高, 小球藻次之, 裂壶藻粉最差。具体情况如表4及图3—图6所示。
轮虫的成活率和怀卵率受饵料和外部环境的影响。用小球藻、裂壶藻粉、轮虫强化剂强化轮虫时, 轮虫的平均寿命显著缩短[4], 而密度和怀卵率明显升高。小球藻强化组轮虫的强化后密度和怀卵率最高, 分别达到701 Ind/m L和65.61%, 这与小球藻含有蛋白、脂肪、维生素等多种轮虫生长必需的营养物质有关。而另外两种强化剂裂壶藻粉, 及轮虫强化剂强化密度和怀卵率显著低于小球藻强化组, 说明以非活饵为主的裂壶藻粉和油脂为主的乳化油脂强化组, 营养成分不足以支撑褶皱臂尾轮虫的正常生长存活。乳化油脂强化组密度和怀卵率明显低于其他两组, 推测与以下两方面因素有关。一是氧化脂肪对轮虫的毒害作用。油脂型强化剂中DHA、EPA等高不饱和脂肪酸含量较高, 且处于游离状态, 这些高不饱和脂肪酸在充分曝气和较高温度下易发生自然氧化, 而氧化脂肪对养殖生物是有毒的, 会降低轮虫体质[5,6]。二是过高的乳化脂滴密度增加了水体的黏滞性。当水的黏滞性升高, 会降低轮虫的繁殖、运动、消化能力[7]。
强化轮虫的饵料来源对轮虫体内DHA和EPA的含量影响很大。有相关研究报告指出, 不经过强化或用酵母培养轮虫的体内缺乏DHA[8,9]。小球藻富含EPA、PUFA、DHA, 这为用其强化轮虫提供条件[10]。小球藻强化轮虫体内EPA、HUFA含量显著高于强化前, 而DHA含量与强化前没有显著差异, 说明单纯的小球藻对实验用轮虫的DHA组成的强化效果不明显。张利民等[11]研究也表明仅靠微藻强化轮虫效果不佳, 应采用乳化油和微藻联合强化, 效果会更好。各乳化油脂型强化剂组轮虫体内HUFA含量显著高于对照组和小球藻强化组, 尤其是EPA、DHA含量提高幅度最大, 这与各强化剂中高含量的EPA、DHA等HUFA水平有关。大量研究发现利用强化剂对轮虫进行营养强化, 轮虫体内HUFA组成与饵料中HUFA组成具有正相关性[12,13,14]。
摘要：本实验采用油脂、裂壶藻粉、小球藻对褶皱臂尾轮虫进行营养强化, 强化20 h后, 轮虫的密度小球藻强化组效果最好, 强化初始密度均为300 Ind/m L, 小球藻、裂壶藻粉、油脂强化组的轮虫密度分别为701 Ind/m L、596 Ind/m L、500 Ind/m L;轮虫的怀卵率亦是小球藻强化组效果最好, 小球藻、裂壶藻粉、油脂各强化组的轮虫怀卵率分别为65.5%、43.6%、30.1%。三种不同的强化剂对轮虫强化后, 测量其脂肪酸的组成, 结果表明, 油脂强化组轮虫体内的EPA、DHA及其所占脂肪酸比重都较高, 小球藻次之, 裂壶藻粉最差。
关键词：轮虫,营养强化,DHA,EPA
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