在山羊养殖中, 呼吸系统疾病为常见疾病, 未得到及时控制会给养殖者带来较大损失。在目前羊业健康发展方面, 该疾病已经成为阻碍羊业发展的重要疾病。所以在该疾病发生后, 还要尽快完成病原分析, 而并非是盲目用药。根据分析结果, 则能提出合理的综合防控措施, 进而使病情得到及时有效控制。因此, 还应加强山羊呼吸系统疾病病原研究, 以便为山羊养殖提供更多的保障。
某山羊养殖场发生了一场30多只羊发病、死亡的疾病, 患病羊出现了咳嗽喘气、发热、呼吸困难、流脓涕或浆液性鼻涕等呼吸系统疾病的症状, 少数患病羊出现了拉稀、呼吸衰竭等症状, 最终致死15只羊。从发病经过来看, 放牧人于15日发现三四只羊出现精神欠佳和体温升高的情况, 主要病症为流泪、流涕, 个别出现拉稀情况。2 d后发现病羊数量上升, 且1只已经死亡。使用恩诺沙星配合氟苯尼考进行治疗后, 并未取得效果, 最终发病羊数量上升至30只, 死亡15只。
为分析病死羊疾病病原, 需对病死羊的肺脏、直肠、肝脏以及粪便进行无菌采集, 并使用丝状支原体山羊亚种分离株、绵阳肺炎支原体作为实验材料。实验采用的试剂有兔血琼脂平板、PPLO肉汤、细菌基因组DNA提取试剂盒、TSA、TSB、微量生化反应管及药敏试纸等。
在研究病原时, 需完成死羊解剖, 观察和记录各脏器病变情况。在支原体检测上, 需完成肺脏组织采集和剪碎处理, 经过研磨、离心和过滤等环节后, 利用PPLO支原体培养液进行培养。在5~7 d后, 连传3代, 注意培养液是否发生了颜色变化, 取上清液完成支原体PCR特性检测[1]。为检测死羊是否感染流感病毒, 取肺脏进行匀浆、冻融、离心处理, 然后取上清液, 利用基因提取试剂盒进行病毒RNA提取, 通过反转录、PCR扩增后利用琼脂糖凝胶电泳检测。为检测死羊是否存在寄生虫, 取粪便进行寄生虫检查。为实现细菌分离鉴定, 将肝脏、肺脏进行触片处理, 经固定、染色后利用显微镜观察。通过无菌采集后, 利用TSA、兔血琼脂等平板对肝脏、肺脏进行接种培养。在24~48 h后观察细菌生长情况, 并取菌落鉴定。在实验检测、鉴定的过程中, 需采用Beckman公司生产的低温离心机, Life Tech公司生产的Pro Flex PCR System, 北京六一仪器厂生产的电泳仪, Thermo Forma公司生产的CO2培养箱等多种设备。
从病死羊的病理情况来看, 肉眼可见的多数脏器无明显病理变化, 但眼球出现了下陷、眼结膜潮红等现象, 且肺部两侧出现了血点或血斑, 肝脏出现肿胀, 胆囊萎缩, 小肠年末出血, 肠系膜淋巴结切面湿润。通过病理分析, 可确认病死羊患有呼吸系统疾病。
从支原体检测结果来看, 经过连传3代培养, 未发现培养液出现颜色变化。对肺脏上清液进行检测后发现, MO3、Mmc和Mccp均为阴性, 因此可以说明病死羊未感染该三种支原体。从流感病毒检测结果来看, 检测结果总体呈阴性, 因此可以认为病死羊为感染流感病毒。
从粪便检查情况来看, 先后使用沉淀法和漂浮法, 都未发现存在有吸虫卵和隐孢子虫卵囊, 但是发现了少数球虫和线虫的卵囊, 属于正常饲养情况。因此, 可以判断出病死羊的拉稀与感染寄生虫无关。
对各组织进行细菌鉴定时发现, 肺脏中存在革兰氏阴性杆菌, 数量较少, 未出现在肝脏中。经过分离后, 肝脏组织并未发现细菌, 肺脏则发现一种细菌, 分别形成红色和灰黄色两种菌落, 前一种均为大菌落, 后一种大小不等, 表面均光滑、湿润, 且为圆形隆起状态。经过24 h培养后, 菌落中间出现红色色素, 且开始变浑浊, 底部有絮状沉淀产生。经纯化分析可以发现, 两种菌落为不同革兰氏阴性杆菌株, 红色的为MS1, 灰黄色为MS2。对两个菌株进行鉴定发现, MS1由尿素、葡萄糖和蔗糖等构成, 拥有黏质沙雷氏菌的生化特性, MS2由多糖、发酵乳糖等构成, 拥有大肠杆菌生化特性。对两株细菌进行基因扩增, 可以得到1 400 bp目的片段。通过测序可以发现, MS1拥有与黏质沙雷氏菌相似的核苷酸序列, 同源性在99.4%~99.9%。MS2拥有与大肠杆菌相似的核苷酸序列, 同源性超出了99%。针对这两种细菌, 为研究能够有效杀死细菌的药物, 分别开展了药物敏感性试验。从结果来看, 采用新霉素、状观霉素、卡那霉素等药物可以获得更好的杀菌效果。根据试验结果, 对患病羊肌肉注射卡那霉素和地塞米松, 持续5~7 d。针对未患病羊, 注射卡那霉素进行预防, 持续3~5 d[2]。通过7 d的治疗, 未出现新患病羊, 之前患病的山羊病情得到了稳定控制。
通过分析可以发现, 山羊呼吸系统疾病, 可能是由支原体病毒、寄生虫、细菌等多种病原引起的。为确认真正的病原, 还要结合实际情况进行病理分析和检测鉴定, 以排除其他致病因素的干扰, 从而实现合理正确用药, 以加强疾病的治疗和预防。
摘要：针对山羊呼吸系统疾病的防控难题, 结合实例对山羊呼吸系统疾病病原展开了研究。通过研究发现, 支原体病毒、寄生虫和细菌都有可能引发该疾病, 所以还要确定引发疾病的真正病原, 然后结合实际情况正确用药, 以确保疾病的防治能够取得较好的效果。
关键词：山羊,呼吸系统疾病,病原
[1] 石海云, 辛英霞, 闫振富.羊肺丝虫病与羊鼻蝇的区别及防治[J].北方牧业, 2013 (13) :25.
[2] 李文良, 毛立, 程素平, 等.山羊源副流感病毒3型的分离与分子鉴定[J].畜牧兽医学报, 2015, 46 (2) :344-348.
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