杨梅生物学论文提纲

论文题目：人绒癌裸鼠原位移植瘤模型、转移瘤模型的构建及二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响

摘要：绒毛膜癌（Choriocarcinoma,GC）简称绒癌,是一种继发于葡萄胎或非葡萄胎妊娠的恶性滋养细胞肿瘤（Gestational trophoblastic tumor,GTT）,具有快速生长、高侵袭和高转移潜能的特点。血行转移是绒癌的主要转移方式,其转移部位以肺脏最为多见,转移率高达80%。目前化疗方案对大多数绒癌有着较为显著的治疗效果,但化疗耐药性的产生以及较高的毒副作用为绒癌的治疗带来了极大的困难。二氢杨梅素（Dihydromyricelin,DMY）,又称蛇葡萄素,是一种提取自藤茶植物中的黄酮类活性成分。多项研究证实,二氢杨梅素具有护肝、降压降脂、抗脂质过氧化、抗炎抑菌等药理学特性,尤其有望作为一种新型低毒高效抗肿瘤药物,在抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移等关键进程中发挥重要作用。课题组前期研究证实,二氢杨梅素在体内外抑制绒癌生长,并在体外抑制绒癌细胞的侵袭转移。但二氢杨梅素在体内是否影响绒癌的转移,尚无文献报道。本研究成功建立人绒癌JAR细胞裸鼠原位移植瘤模型和转移瘤模型,弥补了皮下移植瘤转移潜能较差的不足,并保留了原发肿瘤的侵袭和转移特性,是研究人体肿瘤转移进展的较为理想的体内模型,为进一步探索绒癌的病理生理学特性奠定了基础。在构建人绒癌裸鼠转移瘤模型和前期体外实验研究的基础上,本研究进一步探讨了二氢杨梅素对绒癌肺转移瘤生长的影响及其可能的分子机制。实验结果发现,二氢杨梅素能够显著抑制绒癌肺转移瘤的形成,可能通过影响PI3K/Akt信号通路发挥调控作用,为绒癌肺转移的药物治疗提供了实验和理论依据。第一部分人绒癌裸鼠原位移植瘤模型的建立目的:构建人绒癌JAR细胞裸鼠原位移植瘤模型,探讨其生物学特性。方法:1.在5只裸鼠皮下注射人绒癌JAR细胞,构建皮下移植瘤模型。2.取出皮下肿瘤组织并通过手术方式植入10只雌性裸鼠子宫内,建立人绒癌裸鼠原位移植瘤模型。3.进行生存期和解剖学观察,绘制裸鼠体重变化和生存曲线。4.HE染色鉴定皮下移植瘤、原位移植瘤和腹膜转移瘤组织病理学特征。5.免疫组织化学染色检测β-HCG在绒癌组织中的表达。结果:1.绒癌原位移植瘤模型生存期和解剖学观察原位移植术后第10天开始,成瘤裸鼠出现身体消瘦和体重下降等症状,腹部逐渐膨隆并出现恶病质,总生存期26~82d,明显低于未成瘤裸鼠58~82d（P=0.009）。解剖发现,7只裸鼠子宫内形成肿块,原位移植成功率70%,其中2只裸鼠可同时观察到子宫原位移植瘤和腹膜转移瘤。2.HE染色光镜下病理形态学检查绒癌原位移植瘤、腹膜转移瘤、皮下移植瘤光镜下均呈现为人绒毛膜癌病理结构。肿瘤组织由大量增生的滋养细胞构成,胞浆丰富,核大深染、染色质粗,核异型性明显,可见核分裂像,肿瘤细胞周围见片状出血。3.β-HCG在绒癌组织中的表达免疫组化结果显示,β-HCG在子宫原位移植瘤、腹膜移植瘤、皮下移植瘤组织中均呈阳性表达,主要表达于细胞质中。结论:成功构建人绒癌JAR细胞裸鼠原位移植瘤模型,保留了原发肿瘤的病理特征,为绒癌疾病进展研究提供了较好的动物模型。第二部分人绒癌裸鼠转移瘤模型的建立目的:构建人绒癌JAR细胞裸鼠转移瘤模型,研究其生物学特性。方法:1.通过尾静脉注射人绒癌JAR细胞,建立人绒癌裸鼠转移瘤模型。2.进行生存期和解剖学观察,绘制转移瘤裸鼠生存曲线。3.HE染色鉴定肺转移瘤组织病理学特征。4.免疫组化检测β-HCG在肺转移瘤组织中的表达。结果:1.绒癌转移瘤模型生存期和解剖学观察观察发现,尾静脉注射JAR细胞4周后成瘤裸鼠出现恶病质症状,生存期27~51d,平均生存期38.26±6.75d,明显低于未成瘤裸鼠64~82d（平均73.00±12.73d,P=0.018）。解剖发现,绒癌肺转移灶呈浸润性生长,部分转移灶融合成肿瘤结节。2.绒癌肺转移瘤组织病理学特征HE染色镜检结果显示,绒癌肺转移瘤与原位移植瘤一致,均呈现为人绒毛膜癌病理组织结构。3.绒癌肺转移瘤组织中β-HCG的表达免疫组化表明,β-HCG在绒癌肺转移瘤组织中呈阳性表达,主要表达于细胞质中。结论:成功构建人绒癌JAR细胞裸鼠转移瘤模型,保留了人绒癌原有的生物学特性,可能为绒癌晚期肺转移进展研究提供实验基础。第三部分二氢杨梅素对人绒癌裸鼠转移瘤生长的影响目的:在成功构建人绒癌JAR细胞裸鼠转移瘤模型的基础上,探讨二氢杨梅素对绒癌转移瘤生长的影响及相关分子机制。方法:1.通过尾静脉注射人绒癌JAR细胞,建立人绒癌裸鼠转移瘤模型。2.将25只人绒癌转移瘤裸鼠分为五组:阴性对照组（生理盐水）、DMY（50mg/kg）组、DMY（100mg/kg）组、DMY（150mg/kg）组、阳性对照组（甲氨蝶呤）,给药30天。3.进行生存期和解剖学观察,记录裸鼠体重。4.荧光实时定量PCR检测各实验组肺转移瘤组织中PI3K和Aktm RNA的表达。5.蛋白印迹法检测各实验组肺转移瘤组织中PI3K和Akt蛋白的表达。6.免疫组化检测各实验组肺转移瘤组织中PI3K和Akt蛋白的表达。结果:1.二氢杨梅素对绒癌转移瘤裸鼠体重的影响裸鼠体重变化曲线表明,二氢杨梅素给药后裸鼠体重下降明显减缓,且具有药物浓度依赖性（P＜0.05）。2.二氢杨梅素对绒癌裸鼠肺转移瘤生长的影响实验结果发现,二氢杨梅素能够显著抑制绒癌裸鼠肺转移瘤的形成与生长,且二氢杨梅素给药浓度越高,形成肺转移瘤数目越少（P＜0.05）。3.二氢杨梅素对绒癌裸鼠肺转移瘤组织中PI3K、Akt表达水平的影响荧光实时定量PCR、蛋白印迹、免疫组化实验结果表明,二氢杨梅素明显抑制PI3K和Akt在绒癌肺转移瘤组织中的表达,且具有浓度依赖性（P＜0.05）。结论:二氢杨梅素能够显著抑制绒癌裸鼠转移瘤的生长,可能与影响PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：人绒毛膜癌;裸鼠;二氢杨梅素;人绒毛膜促性腺激素;磷酯酰肌醇-3激酶;蛋白激酶B

学科专业：病理学与病理生理学

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引言

第一部分 人绒癌裸鼠原位移植瘤模型的建立

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

小结

参考文献

第二部分 人绒癌裸鼠转移瘤模型的建立

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

小结

参考文献

第三部分 二氢杨梅素对人绒癌裸鼠转移瘤生长的影响

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

小结

参考文献

结论

综述

参考文献

致谢