论文题目：辣椒炭疽病菌快速检测技术研发及其协同增效药剂筛选
摘要：辣椒炭疽病是辣椒生产中主要的真菌性病害之一,严重影响辣椒的产量和质量。本研究鉴定了贵州省辣椒炭疽病菌的种类,建立了基于LAMP技术快速检测方法,研制出基于显色反应的快速选药试剂盒,筛选出高效新型的协同增效组合,旨在为防治辣椒炭疽病的科学用药提供参考。主要研究结果如下:1.分离鉴定了贵州省辣椒炭疽病菌的种类,并建立了基于LAMP快速检测试剂盒。采用组织分离法分离鉴定了从贵阳和遵义采集的病样,并通过柯赫氏法则、菌落形态及r DNA-ITS序列分析确定其为辣椒炭疽病菌,分别为尖孢炭疽菌（Colletotrichum acutatum）、鸡冠花炭疽菌（Colletotrichum scovillei）和疑似新种的（Colletotrichum sp.）。基于LAMP技术,以辣椒炭疽病菌内转录间隔区ITS序列为靶基因,设计4条LAMP引物,通过对引物比例,反应时间,反应体系等条件的优化。辣椒炭疽病菌检测试剂盒特异性试验结果显示,LAMP体系在最佳反应温度65℃条件下扩增60 min,辣椒炭疽病菌在指示剂钙黄绿素和羟基萘酚蓝的作用下,分别呈现绿色和蓝色,反应结果为阳性;而其它8株供试菌株和空白对照分别呈现橙黄色和紫色,均为阴性反应,无扩增条带出现,表明该LAMP检测引物特异性强,为辣椒炭疽病菌的检测提供一种高效便捷、特异性好、可视化的检测方法。2.研制出辣椒炭疽病菌的快速选药试剂盒。根据辣椒病原菌对药剂敏感性呈正态分布的原理,建立贵州省辣椒炭疽病菌对咪鲜胺和甲基硫菌灵的敏感基线,分别为（0.0710±0.0133）mg/L和（0.7641±0.1508）mg/L。以敏感基线为基准,应用溴甲酚紫作为指示剂,研制出辣椒炭疽病菌的快速选药试剂盒,分别由2%的溴甲酚紫溶液0.088 mg/L或0.175 mg/L或0.35 mg/L咪鲜胺及PDA培养基组成的试剂盒和由2%的溴甲酚紫溶液0.45 mg/L或0.9 mg/L或1.8 mg/L甲基硫菌灵及PDA培养基组成的试剂盒。结果显示:田间病原菌在0.35 mg/L咪鲜胺的试剂盒上显示黄色表明已经产生抗性,在0.088 mg/L咪鲜胺的试剂盒上显示橙红色则表明比较敏感;在1.8 mg/L甲基硫菌灵的试剂盒上显示黄色表明已经产生抗性,在0.45 mg/L甲基硫菌灵的试剂盒上显示橙红色则表明比较敏感。3.筛选出防控辣椒炭疽病菌的协同增效组合。采用菌丝生长速率法研究了17种常用杀菌剂对辣椒炭疽病菌的敏感性及其协同作用。结果表明:17种杀菌剂对辣椒炭疽病菌均有一定的抑制作用,其中咪鲜胺、双苯菌胺、唑胺菌酯和戊唑醇的敏感性相对较高,其EC50值分别为0.06 mg/L、0.49 mg/L、0.51 mg/L和0.68 mg/L;其次为丁香菌酯与吡唑醚菌酯,其EC50值分别为1.34 mg/L与1.38mg/L;而肟菌酯、唑菌酯、啶氧菌酯的敏感性相对较低,其EC50值分别12.01mg/L、13.42 mg/L和14.24 mg/L。协同作用显示:戊唑醇与吡唑醚菌酯以有效成分比1:1时,增效作用明显,其SR值为2.0611,EC50值为0.37 mg/L;而啶氧菌酯与咪鲜胺以有效成分比1:3时协同增效显著,其SR值为1.7234,EC50值为0.05mg/L。
关键词：辣椒炭疽病菌;快速检测;快速选药;协同增效
学科专业：植物保护
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 辣椒炭疽病菌的发生与危害
1.2 辣椒炭疽病菌的种类
1.3 辣椒炭疽病的防治现状
1.3.1 农业防治
1.3.2 化学防治
1.3.3 生物防治
1.4 LAMP检测技术在农业病虫害中的应用
1.5 论文研究目的、意义及设计思路
1.5.1 研究目的
1.5.2 研究意义
1.5.3 研究思路
第二章 辣椒炭疽病菌的分离鉴定及快速检测技术
2.1 材料与方法
2.1.1 供试材料
2.1.2 辣椒炭疽病菌的分离与鉴定
2.1.3 辣椒炭疽病菌LAMP检测方法的建立
2.2 结果与分析
2.2.1 病原菌的形态学鉴定分析
2.2.2 病原菌的的致病性分析
2.2.3 病原菌的分子生物学鉴定分析
2.2.4 LAMP技术针对辣椒炭疽病菌检测结果分析
2.3 结论与讨论
第三章 辣椒炭疽病菌快速选药技术
3.1 材料与方法
3.1.1 供试材料
3.1.2 辣椒炭疽病菌对甲基硫菌灵和咪鲜胺的敏感性测定
3.1.3 建立辣椒炭疽病菌的快速选药技术
3.1.4 应用溴甲酚紫检测辣椒炭疽病菌的敏感性
3.2 结果与分析
3.2.1 辣椒炭疽病菌对甲基硫菌灵的敏感性分析
3.2.2 辣椒炭疽病菌对甲基硫菌灵的敏感性表现
3.2.3 辣椒炭疽病菌对甲基硫菌灵快速选药技术分析
3.2.4 辣椒炭疽病菌对咪鲜胺的灵敏感性分析
3.2.5 辣椒炭疽病菌对咪鲜胺敏感表现
3.2.6 辣椒炭疽病菌对咪鲜胺快速选药技术分析
3.2.7 试剂盒的组成
3.2.8 试剂盒对辣椒炭疽病菌防治效果的显色反应
3.3 结论与讨论
第四章 辣椒炭疽病菌协同增效药剂筛选
4.1 材料与方法
4.1.1 辣椒炭疽病菌对常用杀菌剂的敏感性测定
4.1.2 辣椒炭疽病菌协同增效组合测定
4.2 结果与分析
4.2.1 辣椒炭疽病菌对常用杀菌剂的敏感性分析
4.2.2 辣椒炭疽病菌协同增效作用
4.3 结论与讨论
第五章 研究结果与展望
5.1 主要研究成果
5.2 论文研究创新点
5.3 研究不足及展望
致谢
参考文献
