论文题目:3种秋海棠属药用植物活性部位凝血作用及质量评价研究
摘要:目的:本文从药理药效、化学成分及质量标准等方面对3种秋海棠属药用植物(秋海棠、中华秋海棠、掌裂叶秋海棠)根茎的活性部位进行凝血机理和物质基础研究,并制订了水八角、红白二丸质量标准,为其安全有效的使用和后续研究提供科学依据。方法:1.采用全血法和血浆复钙法对3种秋海棠属药用植物根茎进行体外凝血药效活性部位筛选。2.采用小鼠体内给药方式,玻片法测定凝血时间,断尾法测定出血时间。3.采用大鼠体内给药方式,测定正常给药大鼠其血液凝集参数(APTT、PT、TT、FIB)和血小板聚集率;测定急性血瘀模型组大鼠血液凝集参数(APTT、PT、TT、FIB)血液流变学参数以及血细胞参数。4.采用UPLC-QTOF-MS/MS法研究3种秋海棠属药用植物根茎正丁醇部位和乙酸乙酯部位化学成分,获取各物质峰的质谱裂解信息并推导结构,分析化合物结构类型;采用UPLC-UV法建立3者指纹图谱,找到各自的共有峰,计算相似度。5.依据《中国药典》2015年版通则项下“药品质量标准分析方法验证指导原则”,研究了来源于3种秋海棠属药用植物的2种药材的性状、鉴别、检查和含量测定等项目的质控指标。结果:1.全血法和血浆覆盖法结果显示,3种秋海棠属药用植物与空白对照相比正丁醇部位凝血时间延长;乙酸乙酯部位凝血时间缩短。2.玻片法结果显示,中华秋海棠根茎的乙酸乙酯部位凝血时间缩短;断尾法结果显示,中华秋海棠根茎的正丁醇部位出血时间延长,而乙醇部位无活性。3.正常大鼠给药结果显示,中华秋海棠根茎的乙酸乙酯部位APTT明显缩短(P<0.01),PT、TT、FIB均无明显变化,血小板聚集率明显增加(P<0.01);血瘀模型大鼠给药结果显示,中华秋海棠正丁醇部位APTT明显延长(P<0.01),TT显著延长(P<0.05),PT和FIB无明显变化,全血中切粘度增加,其余参数无明显变化。4.通过UPLC-QTOF-MS/MS对3种秋海棠属药用植物根茎活性部位的成分进行分析,秋海棠归属14个色谱峰,中华秋海棠归属15个色谱峰,掌裂叶秋海棠归属13个色谱峰,包括2个有机酸,13个黄酮及黄酮苷类化合物,5个三萜及皂苷类化合物。5.制订水八角(植物来源掌裂叶秋海棠)质量评价指标,性状及显微特征,薄层色谱鉴别项,检查项水分≤12.0%、总灰分≤12.0%、酸不溶性灰分≤2.0%、浸出物≥10.0%,芦丁含量≥0.07%;制订红白二丸(植物来源中华秋海棠及秋海棠)质量评价指标,性状及显微特征,特征图谱鉴别项,检查项水分≤13.0%、总灰分≤7.0%、酸不溶性灰分≤1.5%、浸出物≥10.0%;结论:本文研究了3种秋海棠属药用植物根茎活性部位的凝血药效,其中正丁醇部位能够延长APTT、PT作用于内源性凝血途径发挥抗凝血药效;乙酸乙酯部位通过促进血小板聚集发挥促凝血药效;初步分析了活性部位的物质基础,秋海棠和中华秋海棠根茎主要有酚酸类、黄酮类和萜类化学成分,掌裂叶秋海棠根茎仅有酚酸类和黄酮类化学成分。并从安全性、有效性、可控性等方面制订了2种药材质量标准。本研究成果将为来源于3种秋海棠属药用植物的2种药材的安全有效使用和进一步研究提供科学依据。
关键词:秋海棠属;凝血药效;化学成分;质量标准
学科专业:中药学
摘要
Abstract
英文缩略词表
前言
第一章 3种秋海棠属药用植物体外凝血药效筛选
1 实验材料
1.1 仪器与试剂
1.2 实验动物
1.3 实验样品
2 实验方法
2.1 秋海棠属药用植物根茎不同提取物的制备
2.2 试样的制备
2.3 实验步骤
3 实验结果
3.1 秋海棠组实验结果
3.2 中华秋海棠组实验结果
3.3 掌裂叶秋海棠组实验结果
4 讨论与小结
4.1 DMSO溶剂浓度的确定
4.2 CaCl_2溶液浓度考察
第二章 中华秋海棠活性部位小鼠凝血功能研究
1 实验材料
1.1 仪器与试剂
1.2 实验动物
1.3 实验样品
2 实验方法
2.1 实验分组
2.2 给药剂量
2.3 实验步骤
3 实验结果
4 讨论与小结
第三章 中华秋海棠活性部位大鼠体内凝血机理初探
1 中华秋海棠乙酸乙酯部位对正常大鼠凝血功能的影响
1.1 实验材料
1.2 实验方法
1.3 实验结果
2 中华秋海棠正丁醇部位对寒凝血瘀模型大鼠凝血功能的影响
2.1 实验材料
2.2 实验步骤
2.3 实验结果
3 讨论与小结
3.1 不同活性部位对正常大鼠的影响
3.2 不同活性部位对血瘀模型大鼠的影响
第四章 3 种秋海棠属药用植物活性部位物质基础分析
1 正丁醇部位化学成分研究
1.1 实验材料
1.2 实验方法
1.3 实验结果
2 乙酸乙酯部位化学成分研究
2.1 实验材料
2.2 实验方法
2.3 实验结果
3 讨论与小结
3.1 不同流动相的考察
3.2 不同波长的考察
3.3 正丁醇部位共有峰的分析
3.4 乙酸乙酯部位共有峰的分析
第五章 水八角及红白二丸质量评价研究
1 实验材料
1.1 仪器设备
1.2 试剂试药
1.3 实验样品
2 方法与结果
2.1 性状
2.2 显微鉴别
2.3 薄层鉴别
2.4 水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物的测定
2.5 重金属测定
2.6 HPLC法测定芦丁含量
2.7 特征图谱及HPLC鉴别
3 讨论与小结
3.1 采收时间的考察
3.2 HPLC各项条件的选择
3.3 前处理方法的考察
结论与展望
文献综述 秋海棠属植物化学成分及药理作用研究进展
1 化学成分研究
2 药理作用研究
2.1 抗菌作用
2.2 抗炎作用
2.3 镇痛以及凝血作用
2.4 改善微循环作用
2.5 降血糖
2.6 降血脂
2.7 抗病毒
2.8 抗氧化作用
3 小结
参考文献
致谢
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