啶虫脒是一种新型的烟碱类杀虫剂, 近年来广泛用于烟草等作物的蚜虫防治, 其残效时间长。测定烟叶样品中啶虫脒时, 常受基质干扰[1,2], 为了降低基质干扰, 待分析样品经过复杂的前处理[3], 同一样品测定结果也有差异[4], 因此对啶虫脒的残留分析方法中不确定度的研究不但是实验室质量体系建立的重要部分, 而且为了提供更公正、更准确的检测数据, 很有现实意义。
1.1.1 试剂
乙腈 (Fluka试剂) , 无水硫酸镁, 氯化钠, 柠檬酸钠, 柠檬酸氢二钠, PSA (购于安捷伦公司) ;烟叶样品。
1.1.2 标样啶虫脒, 丙草丹 (内标) 标准品, 纯度均大于98%。
1.1.3 仪器Agilent 1260/API 4000+超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用仪:配ESI源 (美国安捷伦公司) , 色谱柱 (RP-C18 55mm×2mm×3m) , 天平 (Metler-Toledo, 感量为0.00001, 瑞士) , 容量瓶 (天津玻璃仪器厂) , 移液器 (法国吉尔森) , 固相萃取仪 (法国吉尔森) , 离心机 (D-37520, 德国生产) ;超纯水发生器 (美国Millipore公司) 。
称取约2g样品, 精确至0.01g, 于50m L具盖离心管中, 加入10m L水, 振荡至样品被水充分浸润后静置10min。移取10m L乙腈及适量丙草丹内标溶液至离心管中, 并置于漩涡混合振荡仪上以4000 r/min速度振荡1min。在离心管中分别加入4g无水硫酸镁, 1g氯化钠, 1g柠檬酸钠和0.5g柠檬酸氢二钠, 立即于漩涡混合振荡仪上以4000r/min速度振荡2min, 以防止无水硫酸镁遇水反应造成局部过热并结块, 然后以4000r/min离心10min。移取1m L样品提取液上清液于1.5m L离心管中, 加入150mg无水硫酸镁和25mg N-丙基乙二胺键合固相吸附剂, 于漩涡混合振荡仪上以2000r/min速度振荡2 min, 以4000r/min离心2min, 收集上清液备用。吸取200u L上清液, 用乙腈稀释至约1 m L, 经0.22um有机相滤膜过滤后得试样萃取液, 待检测分析。
色谱柱:C-18液相色谱分析柱 (柱长100 mm, 内径2.1 mm, 固定相粒径5 um) ;柱温:25℃;进样量:10u L;流动相组成、流速及梯度变化, 见表1。扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测;电喷雾电压:5500 V;雾化气压力:0.414 MPa;离子源温度:550℃;啶虫脒及丙草丹的质谱条件如表2。
提取空白基质, 得到基质标准曲线, 见表3。
精密度与准确度, 配制并测定基质加标20ng/g啶虫脒标样, 做了平行实验及人员比对。重现性采用国际通用的Horwitz方程对实验结果进行分析、评定。
RSD:相对标准偏差;PRSD:估计标准偏差;C为质量百分比浓度 (C=20ng/g=20×10-9)
S:标准曲线的标准残差, b1:斜率, p:样品的测定次数, n:标准曲线的浓度点个数, c0:标准曲线计算的样品浓度, cˉ:制作标准曲线的算术平均浓度, cj:校正曲线单点的浓度, j=1, 2, 3, …, n。
平行实验引起的不确定度 (U2) 及人员比对引起的不确定度 (U3) 。
s1:同一分析人员不同日期分析结果的标准偏差;n:测定次数。
s2:不同分析者同一天分析样品的标准偏差;n:测定次数。
与准确度相关的不确定度是在空白基质中加标回收得到的, 加标浓度是20ng/g。
s1 (η) :同一分析人员在不同日期分析样品得到啶虫脒回收率的标准偏差;n是测定次数。
s2 (η) :不同分析人员同一天内分析样品得到的啶虫脒回收率的标准偏差;n:测定次数。
合成标准不确定度为:
U=U1+U2+U3+U4+U5=0.021+0.009+0.011+0.021+0.022=0.084=8.4%
测定烟叶样品中的啶虫脒, 整体归结为三类, 与标准曲线相关的不确定度, 与精密度相关的不确定度, 与准确度相关的不确定度分别为:0.021、0.020、0.043, 即当覆盖因子k=2, 置信度为95%, 扩展不确定度<16.8%。
摘要：采用超高效液相色谱-串联质谱 (UPLC-MS/MS) 法, 以烟草种植中常用的农药啶虫脒为例, 通过对测定烟叶中啶虫脒不确定度的来源进行分析和量化, 当k=2置信度95%时, 得到烟叶样品中啶虫脒测定结果的扩展不确定度小于16.8%。此方法对测定烟叶中其他农残检测结果的准确定性有很好的参考价值。
关键词：HPLC-MS/MS,烟叶样品,啶虫脒,不确定度
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