据测定, 金针菇含有18种氨基酸, 尤其含赖氨酸和精氨酸, 其含量高于一般菇类。金针菇的生产有两种方法:一是固体培养, 二是通过深层发酵生产。前者生产周期长, 受条件的影响大, 不易大规模工业化生产;而后者弥补了上述不足, 而且可以通过发酵过程的优化控制来定向生产生物活性物质, 使生产工艺更趋合理, 因此, 深层发酵法是当今金针菇研究和开发的趋势和热点[1]。研究表明, 用于金针菇深层发酵生产最适宜的发酵培养基的组成为:50%玉米粉、3.0%鼓皮、0.1%KH2P O4, 0.0 5%M g S O4·7H20, 10μg/100ml VBi, 50μg/l00m LVB2。适宜的摇瓶发酵条件为:培养温度20℃~25℃、培养基起始p H6.0~7.0, 摇瓶装量500m L, 装100m L~160m L、种子培养时间3天~4天、接种量10%~15%、摇瓶转速120rpm~200rpm, 添加消泡油不少于0.1%为宜[2]。
目前, 提取粗多糖的方法有水提醇析法、盐析法、超滤法、酶法、复合酶解法、色谱法等, 但是, 基本提取方法大都采用水提醇析法的模式, 酶法提取的效果最好, 但成本较高[3]。
金针菇多糖提取的一般工艺流程如下:新鲜金针菇→干燥→机械粉碎→浸提→离心→滤渣复提→并上清液浓缩→醇析→离心分离→收集沉淀→干燥多糖粗品[4]。
日本学者从20世纪60年代开始就热衷于对金针菇中抗肿瘤物质的研究。1963年, 日本学者K·Nakashi和Y·Watanake报道, 他们从金针菇中提取到一种叫朴菇素的物质。它是一种分子量为23000的碱性蛋白质, 含氮量16.6%, 且含18种氨基酸。1982年, 日本学者T·Lkeknwa报道, 从金针菇深层培养菌丝体中提取到一种叫POF的蛋白质, 其分子量为600030000, 不含糖, 口服或注射POF蛋白均能提高小鼠免疫功能, 抑制小鼠肉瘤S-180的生长。T·Lkeknwa等在1985年从金针菇深层培养菌丝体中提取出一种叫原朴菇素的物质, 它的分子量为13000左右, 含90%以上的蛋白质和少于10%的碳水化合物。目前为止, 人们已经从金针菇子实体中提取到抗肿瘤多糖EA3, EA5, EA6, E A7和Flammu lin;从菌丝体中又提取到Proflamin和POF等活性成分, 己知EA3为葡聚糖, EA5和EA7是杂多糖。在金针菇抗癌多糖中既含糖又含蛋白质的成分己知有EA6, Flammulin和Proflamin三种, 其中EA6为蛋白多糖, 含多糖70%, 蛋白质<30%;而Flammulin和Proflamin均为糖蛋白, 以蛋白质为主, 含多糖量小于10%。但两者略有差异, 前者提取自子实体, 后者从菌丝体获得。前者蛋白质呈碱性, 分子量23KD。后者蛋白质呈酸性, 分子量73KD, 另外, 两者的抑瘤活性亦不相同, Flammulin对S-180肉瘤、艾氏腹水癌和吉田肉瘤活性较高, 而Proflamin能延长患有荷B-16黑色素瘤或腺瘤755或Gardner淋巴瘤的小鼠的存活时间。国内学者曹培让等报道, 他们从金针菇子实体中提取出一种命名为PA3DE的多糖, PA3DE由3种单糖组成, 即由D-葡萄糖、D-岩藻糖, D-甘露糖组成, 它对肉瘤S-180的抑制率为52.2%。曹培让等又从金针菇子实体中提取出PA5DE多糖, 并测定出它的分子量为47.1万。分析表明, PA5DE含有D-葡萄糖、D-甘露糖、D-岩藻糖, 并推测它可能具有分支结构, 含有p-型糖昔键, 存在p (1→3) 和p (1→6) 型糖昔键连接, 并有抑制肿瘤S-180的活性。
FVP是以葡聚糖为主, 由数个多糖组分构成的混合多糖[5], 其空间结构决定其生物活性。研究证明, FVP对肝脏损伤有保护作用, 对小鼠肿瘤S180, Heps和H22, L615及Lewi肺癌均有明显的抑制作用[6], 是抗肿瘤、抗白血病有效物质, 其主要作用机制是干扰肿瘤细胞的有丝分裂, 抑制肿瘤组织的非特异性酷酶活性, 增加机体的体液免疫功能。特别是FVP对化疗药物环磷酸胺具有一定的增效减毒作用[7]。
从已查阅的文献资料看, 虽然对金针菇多糖的研究己经有了很大进展, 但是, 这些研究基本局限在其组成、结构及生物活性的相关研究上, 关于金针菇多糖提取工艺的研究也鲜见报道, 一般都采用热水提取法, 且研究不够系统和深入。本论文通过对金针菇多糖的提取方法的研究, 针对提取金针菇多糖的温度、时间和物料比值等条件优化的系统研究。设计这三种条件的单因子和正交实验, 以期为金针菇多糖的工业化大生产提供基础数据。
摘要：金针菇多糖是一种从金针菇中提取出的物质, 具有抗癌活性和增强免疫等功能。本文介绍了金针菇多糖的分离纯化、生理活性等方面的工作。
关键词：金针菇多糖,分离纯化,研究进展
[1] 李平作, 孙希雯.金针菇多糖及氨基酸发酵饮品的生产工艺[J].冷饮与速冻食品工业.1998, 3:1.
[2] 宋士良, 杨瑞长, 陀永.金针菇FV8812菌株深层发酵工艺的研究[J].食品与发酵工业.1992, 6:8.
[3] http://www.mushroom.org.c n/html/products/makeproduct/2007322171-1.htm
[4] 袁龙刚, 何云, 刘林丽.现代提取分离技术在食药用菌多糖分离纯化中的应用[J].生物技术通报, 2006, 5:76～79.
[5] Qin X M, Yu J, Ning E C, et al.Primary studies on polysaccharide com-positions from Flammulina velutipes[J].Acts Edulis Fangi, 2005, 12 (2) :27～31.
[6] Wu X Z, Gao X D.The fiver-pro-tective and anti-tumor effects of ex-tract from Flammalina veluripes in mice[J]China J Bio-chem Pharm, 2002, 23 (4) :176～178.
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