称取三七粗粉, 用95%的乙醇润湿1 h后装柱, 浸泡40 h, 用12倍量的95%乙醇以1~2 mL/min的速度渗漉, 收集渗漉液至三七总皂苷完全漉出 (用liberman反应检查) , 渗漉液经氧化铝脱色, 滤过, 回收乙醇并浓缩至300 mL (0.33 g生药/mL) 稠膏状, 得三七总皂苷粗品, 备用。
大孔树脂的前处理及树脂柱的制作新书脂中含有杂质, 会影响药品的安全性。因此要进行, 用95%的乙醇处理后再经5%的HCl、5%Na OH反复处理, 用蒸馏水洗至p H中性, 挥去溶剂后保存备用。
将处理好的大孔树脂用甲醇湿法装柱 (R15×H100 mm, ) 干重 (3.71±0.02 g) , 继而用甲醇洗脱, 不时检测流出的甲醇与水混合不成白色混浊时即可, 然后以大量的蒸馏水冲洗至无醇味后备用。
注:F0.05 (2, 2) =19, F0.01 (2, 2) =99.0
注:根据上述提取、分离纯化工艺参数的确定并通过三批验证试验提取率均为93.1%以上, 因此, 可认为已基本提尽。而且, 三七总皂苷的含量在97%以上, 说明本提取, 分离纯化工艺是完全可行的。
根据上述结果确定的吸附容量和洗脱溶媒, 吸取上述三七总皂苷粗品25 mL 3份上柱, 蒸馏水用量分别为100 mL、150 mL、200 mL, 然后用70%乙醇200 mL洗脱, 依次洗脱, 分段收集, 洗脱液水浴蒸干, 减压浓缩, 真空干燥, 称量总固物重量测定三七总皂苷含量。
结果, 3种洗脱条件所得总固物无明显差异, 总皂苷含量在95%以上, 故确定蒸馏水用量为100 mL。前100 mL70%乙醇洗脱率均在90%以上, 由此确定解吸洗脱溶媒70%乙醇用量为100 mL。
根据上述确定结果的工艺参数, 分别吸取85%、80%、75%柱总吸附量的三七总皂苷粗品上样, 根据表1洗脱流速、吸附流速对三七总皂苷洗脱, 以上样量、吸附流速、洗脱流速为因素, 采用正交实验法, 每个因素采用3个水平进行实验, 考虑因素及水平见表1, 用L9 (34) 安排试验表2。
从表2的结果可以看出, 各因素对洗脱条件的影响程度依次为A>C>B, 而从表3方差分析A (P<0.01) 、C (P<0.01) 、B (P<0.01) 三项因素均有极显著性差异。
因此各因素最佳水平组合选择为A2B1C1, 即上样量为80%柱总吸附量;吸附流速为20%上样量;洗脱流速为上样量10%而确定最佳洗脱条件。
称取50 g三七粗粉各三份, 用95%的乙醇润湿1 h后装柱, 浸泡40 h, 用12倍量的95%乙醇以1~2 mL/min的速度渗漉, 收集渗漉液。脱色, 水沉脱脂。
将提取液浓缩至140 mL, 过滤。将浓缩液移入处理好的D101大孔树脂柱, 按上述确定分离纯化工艺参数, 先用600 mL蒸馏水洗涤 (流速0.5 mL·min-1) , 弃水提液, 继以70%乙醇400 mL洗脱, 收集洗脱液于水浴上挥干, 得三七总皂苷。试验结果见表4。
摘要：目的:研究大孔吸附树脂分离纯化三七总皂苷的工艺, 为三七总皂苷的工业化生产提供实验依据。方法:采用D101型大孔吸附树脂对三七总皂苷进行吸附纯化, 设计正交试验进行工艺优选。以总皂苷收率、纯度为考察指标综合评价。结论:根据实验结果, 即上样量为80%柱总吸附量;吸附流速为20%上样量;洗脱流速为上样量10%而确定最佳洗脱分离纯化条件。
关键词：三七总皂苷,工艺研究
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