摘要：目的 探讨在结直肠癌中MMRP(错配修复蛋白)的表达与临床病理学意义。方法 以回顾性分析法对2019年1月-2020年10月广东省兴宁市人民医院就医的60例结直肠癌患者病理资料进行分析，借助免疫组化疗法对MMRP进行检测，分析MSI(微卫星不稳定)表达情况以及与结直肠癌在临床上的病理关系。结果 经分析后发现，MSI表达与患者的年龄、机体肿瘤直径、分期及淋巴结转移有关，χ2=6.9512、7.6254、4.1153、6.6667(P<0.05);MSI与患者性别、浸润深度及是否远处转移无关，χ2=1.1157、3.0565、0.3727(P>0.05)。结论 MSI表达与结直肠癌疾病临床病理特征间有着密切关联，通过对MMRP进行检测，可在早期确诊疾病，明确疾病类型，为临床制定有效治疗方法提供依据的同时，还能够起到提升患者生存率与改善其生存质量的作用，适宜深入推广与应用。
关键词：结直肠癌;错配修复蛋白;临床病理学;MSI;
0 引言
结直肠癌属于临床常见的一种恶性肿瘤，具有较高发病率及病死率，随着人们饮食、生活习惯的改变以及人口老龄化加剧等因素，导致该疾病发病率与病死率呈增高趋势[1,2]。在早期时，该疾病主要临床表现为患者排便发生改变，如大便时出血等，难以引起患者重视，随着病情逐渐发展，患者容易出现黏液血便、下腹疼痛等问题，一旦患者未得到有效、合理治疗，则会危及到患者生命安全。现阶段中，临床认为结直肠癌的形成途径有两种，即MSI(微卫星不稳定)与CIN(染色体不稳定)，其中CIN途径占比率较高，主要是因MCC、APC、p53及DCC等抑癌基因及RAS等部分癌基因突然发生变化，受多因素共同发生作用前提下，在不同的阶段诱发所致;而MSI是由于MMR基因缺陷所造成的[3,4]。鉴于此，本研究以我院60例结直肠癌患者为例，目的是为了分析MSI的表达情况以及其与临床病理之间关系，现展开具体分析与汇总。
1 资料与方法
1.1 一般资料
以回顾性分析法对2019年1月-2020年10月广东省兴宁市人民医院就医的60例结直肠癌患者病理资料进行分析，其中男33例，女27例，年龄22～79岁，平均(52.7±6.5)岁。本研究入组对象均满足WHO结肠癌组织病理学分类诊断标准，均为原发性结直肠癌，所有切片由我院2位副高职称以上的病理医师进行复诊，患者及其家属经临床医师详细讲解本研究内容后，同意参加研究，并签署相关同意书，术前未接受过放疗、化疗及免疫治疗者。排除复发性结直肠癌者、家族性腺瘤性息肉病者。
1.2 方法
以中性甲醛液(浓度为4%)对标本实施固定处理及脱水剂石蜡包埋处理，经持续予以切片处理后，使用苏木精-伊红染色和免疫组织化学Envision法进行染色，之后对石蜡切片实施脱蜡处理与水花处理，并使用p H值达7.4的PSB实施浸泡处理与冲洗处理;以H2O2(浓度0.3%)的封闭内源性过氧化物酶，使用PSB浸洗后，加入一抗物质(PMS2、MLH1、MSH6、MSH2)，于室温下实施抚孵育，并将生物素标记二抗及过氧化物酶溶液于室温下实施孵育处理，利用DAB进行显色，借助苏木素进行复染，最后予以常规脱水处理、透明处理与封片处理。对于胫骨检测的每张切片，需以正常结肠黏膜上皮(或浸润淋巴细胞)作为阳性对照，并使用PBS来替代一抗，将其作为阴性对照。
1.3 指标观察及判定标准
统计MSI具体表达情况与患者基础资料、临床病理的关系。由于MMRP中的MSH2、MSH6、MLH1及PMS2位置都在细胞核，故而以半定量积分法来测定。(1)阳性细胞百分比为0分，表示无阳性细胞;为1分，则≤10%;为2分，则在11%～50%;为3分，则在51%～80%;为4分，则>80%;(2)染色强度：分为4个阶段，其中0分代表无色;1分代表浅黄色;2分代表棕黄色;3分代表棕褐色。所得积分进行相乘处理后，若得分显示为0分，则表示蛋白呈缺失状态;若得分显示1分，则表示蛋白呈低表达状态;若得分>2分，则表示蛋白呈阳性，其中蛋白缺失与蛋白低表达均当作阴性。将在MMRP中表达若缺失1种及1种以上的设为MSI组。
1.4 数据处理
本文数据以SPSS 23.0分析，分别以%与t值代表计数资料与计量资料，以χ2与()进行检验，P<0.05显示存在统计学意义。
2 结果
2.1 分析MSI表达情况与结直肠癌患者基础资料的关系
由表1可知，MSI与患者的年龄有关(P<0.05)，与患者性别无关(P<0.05)。
2.2 分析MSI表达情况与结直肠癌患者临床病理关系
由表2可知，MSI与患者肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);与患者浸润深度、远处转移无关(P>0.05)。
3 讨论
结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，好发于中老年群体当中，其发生与遗传、环境等因素有密切关联，具有较高病死率与发病率[4]。在疾病早期时，患者无显著临床症状存在，随着疾病加重，可累及四周组织，促使患者发生肠梗阻等症状，临床表现为隐痛、腹胀、呕吐等，严重影响到患者机体健康与生命。在临床上主要采取根治性手术方式，通过将患者病灶切除，并结合放疗、化疗等辅助治疗方式来控制患者病情。故而，尽早诊断予以诊断治疗，可有效改善其症状，减少病死风险的同时，还能够起到改旱患者预后的作用[5,6]。虽然大多数早期结直肠癌患者可得到5年的生存率，然而若患者属于转移性直肠癌，那么其5年生存率较低，可见在结直肠癌患者出现死亡的原因中，主要原因是转移，故而深入研究结直肠癌疾病的发病机制，有利于临床对该疾病及早进行诊断、治疗及预防。
结直肠癌疾病的发生，是涉及到多个基因改变与多步骤累及的一个过程，在结直肠癌的发生中，基因不稳定起着重要意义，其中MMR功能障碍则是其发生的一项重要机制。近年来，基于临床深入研究MMR基因多态性发现，其能够造成相应DNA修复蛋白数量与活性发生改变，故而对于肿瘤敏感性较高;有研究显示遗传性非息肉病性结直肠癌是因为DNA中MMR基因胚系突变，而造成DNA错配修复系统功能发生缺陷，导致微卫星DNA复制错误累积，从而形成肿瘤。DNA错配修复系统是由一系列特异性修复DNA碱基错配酶组成，主要功能是对DNA复制期间所出现的错配情况进行修复，如单碱基错配与2个以上插入/缺失错配，继而确保遗传物质稳定性与完整性，防止其出现突变。而碱基-碱基发生错配，主要对非重复DNA序列造成影响，最终造成单碱基错配，以DNA复制错误为主要表现。一旦形成插入-缺失环，会对DNA重复序列造成影响，导致短序列插入或者缺失，也可表现出微卫星插入或者缺失，以微卫星不稳定为主。在结直肠癌检测中，可将MMR功能缺陷作为一种初筛方法，与此同时也可通过筛选出的MMR功能缺陷用于选择疾病化疗方案与判断预后效果。
MSI指的是相较于正常组织，脑瘤中某个微卫星DNA因重复单位缺失或者插入而导致微卫星长度发生改变，有新微卫星DNA等位基因现象存在[7,8]。MMRP属于一种核酶，参与修复增殖细胞DNA复制产生的错配碱基，若其出现缺失现象，则将造成DNA错配发生聚集，进而产生MSI。而MMRP和细胞生长、凋亡及基因突变等有关，在DNA的合成中，若出现保真度丢失，将会对结直肠癌疾病发生与发展造成影响。当MMR系统参与到DNA修复过程中时，所参与的分子与酶较多，其中主要参与者有MSH2及MLH1，通常情况下，他们会与同源性的MMR蛋白构成一个二聚体来发挥作用，而MLH1和PMS2、MSH6及MSH2则分别形成了功能性的二聚体复合物[9,10]。在二聚体中，MLH1与MSH2是其主导蛋白，而PMS2与MSH6则是其配对蛋白，若前者发生突变，则有可能造成二聚体蛋白出现降解现象，进而使得主导蛋白及配对蛋白的表达缺失。若MLH1蛋白表达存在缺失，那么则伴随着PMS2蛋白表达缺失，同样的若MSH2蛋白表达缺失，也会导致MSH6表达缺失，由此可见MLH1与MSH2表达切缺失互相排斥，二者只能存在一种蛋白表达缺失[11,12]。本研究通过分析在结直肠癌疾病中MSI表达与疾病临床病理间的关系，结果发现男性患者与女性患者MSI表达阳性与阴性率差异较大(P<0.05);而年龄>50岁与≤50岁患者MRI表达阳性、阴性率差异较小(P>0.05)，可见MSI与患者的年龄有关，与患者性别无关;且MSI与患者肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);与患者浸润深度、远处转移无关(P>0.05)，可见MSI蛋白表达情况与疾病病例特征有关，有利于临床对遗传性结直肠癌疾病进行筛选。
综上所述，MSI蛋白表达和结直肠癌疾病临床病理特征有密切关联，通过对MMRP进行检查，可深入了解疾病特点，进而帮助临床早期确诊，从而制定出相应治疗方法，提高患者生存率。
参考文献
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