检测车间管理制度
为了保证检测车间流水线生产的正常、有序，产、质量的提高，特制定以下管理条例，希车间全体员工共同遵守，严格执行：
1.员工必须按时上下班，不得迟到早退；提前10分钟到岗，整理工位，清扫卫生。迟到1分钟罚1元，30分钟以上按旷工处理，每人一次100元。
2.上班不得东张西望，随意走动，谈天说笑；不讨论与工作无关的话题，不随意离岗.窜岗.睡岗，违者一次罚10元。
3.上班时必须穿工作服.工作鞋，佩带静电环和上岗证，且要穿戴整齐，违反者一次罚款10元。
4.流水线及存放区一切原.辅材料，半成品.成品.不良品.工装夹具.周转箱（车）等必须定点放置整齐，若有违者每发现一次扣责任人10元。
5.测试/QC/维修人员报表记录与上报应准确.清晰.及时，下班上交线长，由线长统一上报，如报表不正确或弄虚作假者罚款20元。
6.工艺文件必须随时检查，若发现工艺文件夹放不端正.遗失.破损，扣罚当事人5元/次，若发现不按工艺文件操作者或无工艺文件操作者，扣罚当事人20元/次，工艺文件用完后必须及时放回原处，以防遗失。
7.每个员工必须做到质量从我开始，任何工位在作业时，对在制品必须轻拿轻放.摆放整齐，不得随意丢.仍，否则每发现一次罚当事人5元。
8.车间的现场环境必须打扫干净，每天的值日工作落实到个人，以便监督.检查，下班后关闭电源.窗户，忘记一次罚扫一星期。
9.每个员工对于有疑问的电路板必须进行隔离或询问相关人员予以确定，对于私下决定引起质量问题者，根据情节轻重罚50-100元。
10.每个员工必须十分熟悉自己检测电路板的要求及检测步骤，对过程提问答不出者罚10元/次。必须意识到标帖的重要性和可追溯性，认真填写合格标帖，对测试合格的电路板贴合格标帖，发现一次未帖罚10元。
11.请假必须写请假条及线长同意，主任审批后方可有效，未经批准而不上班者作旷工处理，旷工一天者罚款100元,旷工三天者予以除名。
11-1 请假半天以内由线长批准，半天以上先经线长审核，再报车间主任审批；若车间主任不在，车间副主任审批。违者按旷工处理。
11-2 一条线一天之内不准有两人请假，违者每次罚线长20元。
12.对检测工装进行保养.检修，在测试过程中用坏的测试架应及时送测架房维修，若发现坏不送去修理者10元/次。
13.包装用品对放在指定位置，要做到叠放整齐，明确已包装产品和未包装产品并予以标识，严格区分不同产品，若发现混装.多装.少装一次罚20元/人。
14.明确区分已刷漆产品和待刷漆产品，如有混淆，每次10元/人，下班时要做好标识。
15.若成品检验抽检出来的不合格品中，有包装人员引起的，如：没有刷漆.混装.少装.多装等现象，一次罚20元，情节严重者罚50元。
16.下班时必须把椅子.测试用品摆放整齐，关闭所以设备及照明电源，否则按情节严重扣罚当时人5-50元/次。注：生产现场如有违反现场管理制度者，线长未及时处理，被车间主任或公司领导发现，线长与违纪者同等扣罚。平时工作不遵守纪律者，如发生质量事故，加倍处罚。
17.员工如需辞职或离职，要提前一个月以书面形式通知车间，否则按自动离职处理。
18.上班期间要服从上级交待的一切任务，如有违反罚款100-200元，严重者除名,且不结算当月工资。
19.各员工在下班时必须整理好自己的工位，把电源线拔下放到测试架上，椅子摆放整齐，若有违反者罚10元。
1 病原特性
布鲁菌属于兼性胞内寄生的革兰阴性球杆菌或短杆菌, 不形成芽孢和荚膜, 偶尔有类似荚膜样结构, 不运动, 但带有与鞭毛合成相关的基因[1], 是在严格厌氧条件下不生长的需氧菌。目前, 已经确认布鲁菌有10个种, 其中对陆生动物具有致病性的有6个种20个生物型, 即羊种布鲁菌 (又称马耳他布鲁菌, B.meltensis) 、牛种布鲁菌 (又称流产布鲁菌, B.abortus) 、猪种布鲁菌 (B.suis) 、绵羊附睾种布鲁菌 (B.ovis) 、犬种布鲁菌 (B.canis) 和沙林鼠种布鲁菌 (B.neotomae) ;对海洋动物具有致病性的有2个种, 即鳍脚目种布鲁菌 (B.pinnipedialis) 和鲸鱼种布鲁菌 (B.ceti) ;此外, 近年又有2个新的布鲁菌种被发现和鉴定, 分别是田鼠种布鲁菌 (B.microti) 和小云雀种布鲁菌 (B.inopinata) 。布鲁菌菌株的命名主要依据其优先感染的宿主动物。
2 布鲁菌病的临床特征
家畜感染布鲁菌后, 妊娠母畜最常出现的症状是流产、产死胎或弱胎、早产, 通常在怀孕后2~3个月内出现胎儿死亡或子宫炎症。哺乳期母畜感染后, 产奶量会显著下降。公畜感染后出现睾丸炎、附睾炎、生育能力下降等症状。某些职业的从业者, 如饲养员、兽医、屠宰工、肉制品包装工人、皮毛收购人及兽医实验室工作人员等都是感染布鲁菌病的高危人群。国外的一些报道认为, 人类布鲁菌病主要是由人食用布鲁菌污染的奶和奶制品引起[2];然而国内的人布鲁菌病则主要是通过接触感染动物或是污染动物产品而引起, 尤其是接触患病动物的分泌物、排泄物、流产物等。此外, 人与人之间的布鲁菌病传播是极其罕见的, 虽有报道认为, 哺乳期内的母亲可以感染婴儿, 也可以通过性传播[3,4], 但这些说法还存在争议。
3 检测诊断方法
3.1 细菌学方法
3.1.1 分离培养鉴定
新鲜病料可用胰蛋白胨琼脂平板或血液琼脂斜面、肝汤琼脂斜面等培养基培养。若为陈旧病料或污染病料, 可用选择性培养基 (如加有放线菌酮、杆菌肽、多黏菌素和色素的琼脂平板) 培养。将细菌置含5%~10%CO2的环境中于37℃培养7~10 d, 然后进行菌落特征检查。如果病料被污染或含菌量极少时, 可将病料用生理盐水稀释5~10倍, 健康豚鼠腹腔内注射0.1~0.3 m L/只, 或接种于豚鼠股内侧皮下, 接种后4~8周扑杀豚鼠, 取肝脏、脾脏分离培养布鲁菌。对该菌进行革兰染色、菌落形态、生长特性、尿酶活性、氧化酶活性及抗布鲁菌光滑型或粗糙型因子血清的凝集测试等。
虽然细菌培养的方法具有高特异性, 但还存在一些缺点, 如细菌生长缓慢、培养周期长、敏感性低、检测结果有较大误差等。因此, 细菌培养在畜间布鲁菌病的检测中逐渐被淘汰, 已不被用于兽医临床的快速检测。
3.1.2 显微镜观察
布鲁菌是一种革兰阴性细菌, 可以抵抗弱酸性处理, 并在复染之后显示为红色。通常采集家畜流产胎衣、绒毛膜水肿液、肝脏、脾脏、淋巴结、胎儿等组织制成抹片, 用柯兹罗夫斯基染色法染色, 镜下观察布鲁菌为红色球杆状小杆菌, 而其他菌呈绿色或蓝色。由于该方法可以在第一时间分析流产材料, 因此在生产实践中依然经常使用。但由于某些致流产性病原 (如流产衣原体、贝氏立克次氏体等) 也能被染成红色, 因而该方法缺乏特异性。
3.2 血清学方法
3.2.1 缓冲平板凝集试验 (BPAT)
此试验因检测速度较快成为20世纪初畜间布鲁菌病检疫和人群中流行病学快速初筛的一种简易检测方法。所用抗原为高浓度菌液, 置于高浓度盐水中, 以结晶紫和孔雀绿染料染色菌体而成, 较试管凝集试验 (SAT) 敏感, 且特异性较高, 但也可出现非特异性凝集。
3.2.2 琥红平板凝集试验 (RBPT)
又称板式孟加拉红试验, 该方法在国际贸易中是牛、羊、猪种布鲁菌病的指定试验。由标准血清标化p H值为3.6~3.9的高浓度菌液, 以琥红染料 (四氯四碘荧光素钠盐) 染色菌体, 主要特点是该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的Ig M类抗体的凝集活性, 检查出的抗体是Ig G类, 因此提高了该方法的特异性。RBPT方法具有较高的特异性和敏感性, 结果可靠, 简便易行, 成本低廉, 主要用于畜间布鲁菌病的初筛, 尤其适用于畜间布鲁菌病大面积监测检疫及流行病学调查, 但不能鉴别人工免疫和自然感染。由于RBPT的特异性相对于SAT和补体结合试验 (CFT) 低, 且易受环境温度和凝集时间的影响, 不易准确判定结果, 故对RB-PT的阳性者还必须经SAT或CFT检测为阳性时才能最终判定为阳性。
3.2.3 SAT
该方法是我国畜间布鲁菌病诊断的法定正式试验, 因其检测Ig M的敏感性较高, 可作为布鲁菌病的早期诊断, 同时也可用于畜间布鲁菌菌苗免疫后血清抗体的检测。其操作简便, 结果判定容易, 具有较高诊断价值, 但单独使用时特异性较差, 不能区分人工免疫和自然感染。由于部分感染动物的抗体效价达不到诊断水平, 也易造成误诊和漏诊。此外, SAT方法的敏感性和特异性相对较差, 且相对费时, 不适合现场采用, 在发达国家已基本停止使用。
3.2.4 CFT
该方法是牛、羊及绵羊种布鲁菌病国际贸易指定试验, 是世界动物卫生组织 (OIE) 认证的布鲁菌病的确诊性试验。该方法的原理是补体能与任何抗原抗体复合物结合, 但不能同单独的抗原或抗体结合。CFT检测的是能够激活补体反应的免疫球蛋白, 对牛来说为Ig M和Ig G。该方法被认为是目前血清学试验中最为准确的技术之一, 并得到了广泛应用, 但CFT需大量不同试剂及各种各样的对照品, 试验步骤繁多、条件复杂苛刻, 结论也具有主观性, 且不能鉴别人工免疫和自然感染, 不宜向基层推广及进行现场检测。此外, 由于猪的补体会干扰豚鼠补体, 导致试验的敏感性降低38%~40%, 因而CFT不适合猪种布鲁菌病的检测。
3.2.5 全乳环状试验 (MRT)
MRT主要用于筛查泌乳动物布鲁菌病, 是以染色的布鲁菌全菌作为诊断抗原, 用其检测混合奶样, 当存在布鲁菌抗体时, 红色的抗原抗体复合物转移到乳脂层, 形成有色乳脂环。该试验具有操作简便、快速、易行的特点, 适于现场应用, 结果可靠, 准确性高, 还可以克服采血造成的不利。该方法不仅适用于个体乳样的检测, 也适用于混合乳样的检测。但在进行大畜群布鲁菌病监测时可靠性较差, 并且对羊种布鲁菌敏感性较低。对免疫不到4个月动物的乳样、初乳、接近干奶期的乳汁、奶牛发情盛期及因患乳房炎而产生的乳样进行检测时, 都有可能发生假阻性反应。OIE规定MRT仅用于奶牛乳样检测。
3.2.6 半胱氨酸凝集法
半胱氨酸含有硫氢基 (HS-) 成分, 能使大分子Ig M抗体双硫键遭到破坏而失去凝集活性, 但不能使小分子Ig G抗体分解, 故应用半胱氨酸处理后的血清反应主要为Ig G抗体活性, 与CFT所得抗体活性一致。该试验简便、易于操作、定性准确, 可在现场进行, 故可代替CFT诊断奶牛布鲁菌病, 且可鉴别畜间布鲁菌病的人工免疫和自然感染。
3.2.7 酶联免疫吸附试验 (ELISA)
ELISA是一种新型的快速检测技术, 常用的方法有:1) 间接法。多用于检测抗体, 本质是抗球蛋白试验, 但不能分辨出接种牛种布鲁菌S19或羊种Rev1疫苗与自然感染产生的抗体。因此, 更多情况是将间接ELISA作为普查检测方法而不是免疫家畜的检测方法。此外, 可通过间接ELISA检测乳液诊断奶牛布鲁菌病, 乳液和血清的敏感性相近且乳液的特异性比血清高, 在检测奶牛布鲁菌病时可以用乳液代替血清, 排除采血带来的不便, 可大大提高检测效率。2) 双抗体夹心法。多用于检测大分子抗原。王显军等[5]建立了检测畜间布鲁菌抗体的常规双抗原夹心酶联免疫吸附试验, 检测了多种正常动物血清、感染布鲁菌的多种动物血清抗体, 其阳性率及抗体平均效价均优于常规血清学试验, 说明该试验具有良好的特异性及敏感性。3) 竞争法。多用于检测小分子抗原, 可鉴别布鲁菌病的自然感染和人工免疫, 其主要原理是疫苗免疫产生的低亲和力抗体是由免疫消除引起的, 而在持续抗原自然感染过程中, 抗体的亲和力是不断升高的, 这样竞争性抗体就能有选择性地抑制结合疫苗所产生的抗体, 而不是野毒株所产生的抗体。4) 斑点-ELISA (Dot-ELISA) 。曹三杰等[6]应用Dot-PPA-ELISA检测猪布鲁菌病抗体, 并以SAT作为对照, 结果表明, Dot-PPA-ELISA的灵敏性比SAT高, 二者阳性符合率高, 且前者操作简便, 试剂用量少, 无需特殊试验条件, 结果易于判断, 反应膜片可长期保存, 其敏感性比SAT要高10~100倍。
许多学者相继应用特异、敏感的ELISA对畜间布鲁菌抗体进行检测, 并与SAT、RBPT、PAT、CFT这4种方法比较, 结果表明, ELISA检测结果的阳性、阴性符合率均较高 (90%以上) , 说明ELISA具有高的敏感性和特异性, 建议将此方法作为一种标准检测法加以推广。
3.2.8 胶体金免疫层析检测技术 (GICA)
GICA是以胶体金作为示踪标记物, 被应用于抗原抗体反应中的一种新型免疫标记技术。用该技术检测组织切片中的菌体抗原, 敏感性高于ELISA和PCR, 最小检出量可达200 cfu/m L。J.W.Kim等[7]以犬种布鲁菌的抽提物作为检测抗原建立了检测犬血清布鲁菌病抗体的GICA, 结果表明, GICA与常规凝集试验和细菌学检测具有相同的敏感性和特异性。朱明东等[8]建立了诊断牛布鲁菌病的GICA, 结果表明, 该方法敏感性和特异性均在90%以上。该方法具有试剂敏感、特异, 血清用量少, 操作简便、快速等特点, 适合于布鲁菌病的诊断、流行病学调查及现场检测。
3.3 分子生物学检测方法
PCR技术是一项体外酶促扩增DNA技术, 具有特异性和敏感性高, 操作简便、快速、高效等特点, 已被广泛用于畜禽传染病、遗传病诊断及生物工程等方面。目前, 已有多种基于PCR的畜间布鲁菌病检测方法, 其中最有效的是通过检测布鲁菌属的特异性序列, 该技术最初发明时需要进行细菌分离, 可用于直接检测临床样品。通过对布鲁菌常规检测法与PCR法进行比较发现, PCR法的种、型鉴定结果与样品培养物生化试验鉴定结果一致。PCR法大大缩短了鉴定布鲁菌的诊断时间, 能高效、准确鉴定出布鲁菌, 并能对其种、型进行区分。王素华等[9]以布鲁菌外膜蛋白Omp31的基因序列为研究对象, 选取特异性好的基因片段, 建立了检测牛布鲁菌PCR检测法, 结果最低能检测0.9 pg/μL的布鲁菌DNA。尽管PCR方法诊断布鲁菌病快速、敏感, 但目前还没有一个明确的实验室检测诊断标准。
3.4 其他方法
3.4.1 变态反应检测
该方法主要检测由布鲁菌引起的特异性细胞免疫反应。临床上可用由粗糙型布鲁菌提取的布鲁菌水解素 (0.2 m L) 注射到羊尾根皱襞或猪耳根部皮内, 于24, 48小时各观察1次, 若注射部位发红、肿胀即判为阳性反应。该方法对慢性病例的检出率较高, 并且注射水解素后无抗体产生, 不影响以后的血清学检测。此方法不能区分疫苗免疫与自然感染, 但在区分真正的布鲁菌动物与血清学假阳性动物上有较高的效率。较高的特异性与较低的敏感性决定该方法更适用于整群检测, 而不适用于个体检测。皮肤检测被OIE规定为可选用的方法。
3.4.2 免疫组化法
F.Ilhan等[10]应用免疫组化法检测了羊种布鲁菌抗原在流产胎儿组织中的存在与分布情况, 结果发现, 在110份流产胎儿样本中, 布鲁菌抗原主要位于肺巨噬细胞、中性粒细胞及肝枯否氏细胞的细胞膜上。说明免疫组化法可用于羊种布鲁菌引起的绵羊流产甲醛固定样本的检测, 并且该方法特异性强、敏感性高, 还可以在组织和细胞中进行抗原定位, 对病理学研究具有重要意义。
4 展望
布鲁菌病是人畜共患传染病, 近年来我国布鲁菌病疫情抬头趋势明显, 不仅造成畜牧养殖业的巨大经济损失, 而且时刻威胁着人类健康。在实践中, 通常需要根据检测目的来拟定诊断策略, 往往需要几种方法互相配合, 才能取得较为科学、合理的检测结果。选择诊断方法的原则是:选用简便、敏感性高的方法进行初筛, 防止漏检, 随后再以特异性高的方法进行确诊, 以剔除假阳性。作者认为, 可首先采用RBPT筛选, 再用SAT确诊, 或者用i ELISA筛选、c ELISA确诊, 这样既方便、快捷, 又确保检测方法敏感、特异和稳定。
摘要：近年来, 布鲁菌病疫情在畜间呈逐年上升的趋势, 不仅严重影响畜牧业的生产发展, 还威胁着人类健康, 已成为世界性公共卫生问题。文章简述了目前中国畜间布鲁菌病的主要实验室诊断方法及国内外诊断技术方面所取得的新进展, 并对其优点、缺点进行分析, 为快速、精确地检测和诊断布鲁菌病提供技术支持。
关键词：家畜,布鲁菌病,检测,诊断,研究进展
参考文献
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[9]王素华, 王忠才, 杜爱芳.牛布氏杆菌PCR检测方法的建立[J].中国畜牧兽医, 2012 (4) :79-82.
关键词：大肠菌 检测 不同方法
中图分类号：TS202 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）12-0038-02
大肠菌群名字中与“菌”有关，而实际上它并非以细菌学而得名，而是卫生细菌领域的用语，并非是某一属性的细菌，而是代指某些有相同特性的组群。大肠菌群通常包含大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌与阴沟肠杆菌等，广泛分布于温血动物的粪便等自然界中，人畜粪便给外界环境带来的污染是大肠杆菌长久滋生的关键原因。大肠菌群是评价水质、食品卫生质量的主要因素之一。[1]
1 大肠菌群检测的两种常用方法[2]
1.1 多管发酵法
多管发酵法所根据的原理是总大肠菌群所应具备的比如革兰氏阴性无芽胞杆菌在特定温度时间内可发酵乳糖伴随酸气的生成，并有典型菌落生成于选择性培养基等生物特性。水环境中的多管发酵法主要分为生活饮用水的检测和水源水的检测，前者主要分为三个过程。
（1）初发酵试验。使用无菌操作的方式将100ml原水样分别加入到两个伴有三倍浓缩乳糖蛋白胨的培养液的且已经灭菌处理的50ml的大试管或者烧瓶中；用无菌操作的方式分别向十支伴有三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的且已经灭菌处理的5ml内附倒管的试管中加入10ml原水样，在混合之后在37℃恒温箱内恒温放置24小时。
（2）平板分离。在第一步完成之后，会有酸气生成，将有酸或酸气的发酵管分别接于品红亚硫酸钠或者伊红美蓝培养基，然后再放置18至24小时于之前的恒温箱中。在品红亚硫酸钠培养基选择紫红色且伴有金属光泽或深红色基本不带金属光泽或淡红色中心色泽较深的菌落，在伊红美蓝培养基上选择深紫黑色伴金属光泽或紫黑色基本不伴金属光泽或淡紫红色中心色泽较深的菌落，选择其中一部分菌落进行涂片、革兰氏染色镜检。
（3）复发酵试验。以上经涂片镜检的菌落若是革兰氏阴性无芽胞杆菌，就选择该菌落的其他部分继续接种在内附倒管的普通浓度的乳糖蛋白胨培养液，每管能够接种同一出发酵管的最典型菌落的1至3个，之后放置在上述恒温箱中24小时，大肠菌群存在在产生酸或气的试管中。
水源水检验的过程为：其一，稀释水样以1：10的比例。其二，分别加入10ml水样于五个装有三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的5ml试管中；分别加入1ml水样于五个含10ml乳糖蛋白胨培养液的试管；分别加入1：10稀释水样于五个内附倒管的含10ml乳糖蛋白胨培养液的试管中。之后的过程同生活饮用水的检测。
1.2 滤膜法
滤膜是一种0.45至0.65微米孔径的微孔薄膜，滤膜法所根据的原理是滤膜对水样的过滤作用，能将水中的细菌保留在滤膜上。对滤膜贴进行选择培养，即可计算出水样中大肠菌群的含量。滤膜法大致分为下列过程：首先，对滤膜进行灭菌处理。其次，过滤水样。通过无菌镊子夹取灭菌滤膜的边缘位置，以粗糙面向上地方式将其贴于灭菌处理过的滤床，根据水样含菌数量将水样注入到固定好的滤器中，通常为30ml左右，然后加盖、打开阀门、在-0.5*1013.25hPa条件抽滤。之后，进行5秒钟左右的抽气，关闭阀门，取下滤器，以上述方式通过灭菌镊子将滤膜移至品红亚硫酸钠培养基，使滤膜无气泡地紧贴于培养基，放于37℃恒温箱中22至24小时。然后，观察结果，选择紫红色伴有金属光泽或深红色基本不带金属光泽或淡红色中心色泽较深的菌落进行革兰氏染色镜检。将检验为革兰氏染色阴性无芽胞杆菌接种在乳糖蛋白胨培养液或半固体培养基中，在37℃条件下，24小时产生酸或者气则说明总大肠菌为阳性。每升水中的大肠菌数一共为滤膜生长的大肠菌落的三倍。
2 两种检测方法的对比研究[3]
上述两种方法各有所长，主要从可行性、准确度和适用范围三方面进行对比分析：
（1）可行性。多管发酵法所根据的原理是总大肠菌群所应具备的比如革兰氏阴性无芽胞杆菌在特定温度时间内可发酵乳糖伴随酸气的生成，并有典型菌落生成于选择性培养基等生物特性。滤膜是一种0.45至0.65微米孔径的微孔薄膜，滤膜法所根据的原理是滤膜对水样的过滤作用，能将水中的细菌保留在滤膜上。两种方法均为可行的。
（2）准确度。通过对检测数据的分析可知，与发酵法相比滤膜法具有更为准确的结果。上述方法最初所具有的水质依据是基本一致的，而后影响准确度的因素主要是试验过程中的误差，多管发酵法的误差约为60%左右，而滤膜法的误差在20%之内。结合理论与实践我们发现，多管发酵法的准确度与试验次数有关，试验次数越多，误差会相应变小。
（3）适用范围的对比。多管发酵法与滤膜法比较，具有更广泛的适用范围，无论是对底泥、饮用水、水源水甚至浑浊水质都是可行的。而滤膜法因滤膜有一定的限制性，为避免滤膜被污质堵住造成的不便，更适用于杂质量少的水样，且操作更为便利。总体来说，多管发酵法更为常用，且测试准确度较好；滤膜法适宜低浊度水样或较大水样，在原水样量不足的时候可适度增加无菌水稀释至体积较大后测定。
3 结语
多管发酵法与滤膜法均为国际标准的大肠菌群检测方法，通过对应用原理、可行度、准确度与适用范围等检测结果进行对比分析，发现两种试验方法各自的优缺点。在操作的简易程度与试验结果的准确度方面，滤膜法具有更高的优势，能通过提升清洁度高的水样滤过量而提高测验的准确度。然而因滤膜法所使用的滤膜的局限性，滤膜法并不适合对过于浑浊水样的检测，而多管发酵法具有更广泛的使用范围。城镇排水中污水较多，因而应使用多管发酵法进行检测和智力，以为人们提供更好的生活环境。
参考文献
[1]孙超.水体中大肠杆菌的检测分析新方法研究[D].东北大学，2010（12）.
[2]陈艺.水环境中大肠菌群检测方法的对比研究[J].环境保护与循环经济，2008（02）：26-28.
一、谈话间的日常管理和维护由专人负责，应当保持谈话间的设施完善和卫生状况良好。
二、谈话间内禁止吸烟，以及注意谈话间内的消防安全。
三、使用谈话间的，应当经由纪委分管领导批准。
四、谈话应当严格遵守法律法规和有关规定，文明询问，严禁刑讯逼供。
五、谈话期间必须严格遵守“二人办案”制度，保证二名办案人员在场，杜绝单人询问现象。
六、谈话期间，办案单位领导必须进行巡查，发现违反规定的，应当中止询问工作，并立即进行整改。
七、《谈话笔录》当场制作后，应当交给被谈话人核对或者向其宣读并签字捺印指纹。
一、目的：一车间车间管理制度
为了规范管理一车间员工及管理人员的工作行为,维持良好的生产秩序,建立团结、高效的生产团队，树立良好的团队精神和企业形象，特制定本制度。
二、适用范围：
本制度适用于一车间所有管理人员及一线员工。
三、权责：
车间主管—负责对本制度的拟定、修改及监督执行。
部门经理—对本制度有修改、审核权，并监督执行。
车间组长—负责对本制度进行培训，并贯彻执行，可根据实际情况，对本制度某些条款有修改建议权。
四、细则：
4.1考勤管理
4.1.1每天早上全体员工必须提前10分钟到车间参加早会，由车间组长主持，如有特殊情况由生产主管主持。早会主要安排当日工作计划及需要注意的重点事项，并提高员工工作热情，所有员工必须准时参加，否则按迟到处理。
4.1.2迟到早退的，30分钟以内的每分钟1元钱罚款，30分钟以上按旷工半天计算，所有旷工按公司制度，扣三倍底薪。
4.1.3 生产一线员工请假必须提前一个工作日详细填写《请假
单》。8小时以内由生产组长同意，生产主管批准。8小时以上三天以内主管同意，生产经理批准后方可离厂。三天以上须经主管副总经理批准后方可离厂，特殊情况请示总经理意见，否则按旷工处理。员工每月请假不得超过两次，特殊情况必须以书面形式申请批准。
4.1.4上班时间内未经车间组长批准不得擅自离岗，若有事需要离岗，需在车间组长处领取离岗证后方可离岗（离岗证由组长统一管理发放），一次离岗时不得超过15分钟，每天离岗不得超过三次，否则按消极怠工处理。
4.1.5上班时间，员工若需外出，需开《放行条》组长级以上管理人员批准方可离开厂区，否则按旷工处理。
4.1.6如生产需要安排加班，所有人员必须加班，如未按时到岗者按旷工（4.1.2）处理。
4.1.7安排值班人员无故不到岗且无请假说明者，按旷工（4.1.3）处理。
4.1.8所有员工应积极参与公司组织的各项活动，如未按时参加按旷工（4.1.3）处理。
4.1.9禁止代打卡,违者按行政部规定予以处罚。
4.2 作业纪律管理
4.2.1上班时间内必须服从直接上司的安排，如有不服从安排或未按时完成任务者，视其情节给予30--50元的罚款，顶撞上司处罚100元，情节严重者处罚200元交人事行政部处理。
4.2.2上班时间内与其它同事有争吵、嘻笑、打闹，辱骂他人等与工作无关者给予罚款50元，情节严重者罚款200元并交人事行政部
处理。
4.2.3各位员工如果认为上司对工作安排不当，必须先服从，事后可以依书面或口头形式向车间组长、主管、部门经理或人事行政部讲明自己意见。如果在车间内争辩造成不良影响，情节严重者罚款100元。
4.2.4上班时间应维持良好的工作秩序，不得串岗、擅自换岗、聊天、打瞌睡，不得做与工作无关的事情，违者罚抄本制度1次，情节严重将进行罚款50元每次。
4.2.5所有员工在车间内不得拨打或接听电话、发短信等做与工作无关的事，带手机进入车间的员工必须将手机设置为无声振动，特殊情况要请示管理人员同意后，可到车间外面（如洗手间或饮水区等），违者罚款10元每次，管理人员因工作需要除外，若有聊天或与工作无关话题将处以30元每次的罚款。
4.2.6工作过程中，如有表现散漫、消极怠工者每次罚款100元，连续两次以上者罚款200元并将人退回人事行政部。
4.3车间品质管理
4.3.1新进员工必须在半个月内熟记并理解自己的岗位职责和操作方法，严格按照《作业指导书》、《岗位说明书》及作业规范进行生产作业。如有违规现象，每次给予20元内处罚，如造成严重品质问题，将按照《公司全面质量管理规定》相关项目处罚。
4.3.2生产前必须按要求做好首件三检，并认真填写首件检验记录表。如果未依照要求做首检而擅自生产者，将依据《公司全面质量管理规定》第6.1条所规定项目予以处罚，当月累积两次者追加处罚
200元，并予以辞退处理，如因首检问题造成损失过大，将作无薪开除处理。
4.3.3在未按照《作业指导书》作业的情况下，人为造成产品报废，按情节严重性，处以20-100元左右分罚款，特别严重者，为公司造成超过500元以上直接经济损失，处以补偿损失金额罚款并做辞退处理。
4.3.4故意损毁公司财物，藏匿不良品或半成品，处以100元以上500元以下罚款，并警告一次，情节严重的，予以辞退，并根据具体情况，移交司法机关处理。
4.3.5生产过程中，必须按时巡检，各工位根据实际情况制定合理的巡检频率。并记录巡检数据，若发现未按要求及时巡检、或记录虚假巡检数据、巡检时未发现明显异常情况，将严格按照《公司全面质量管理规定》6.2所规定项目予以罚款。
4.3.6各工序在接收半成品-制造产品-转出产品过程中，必须遵循“三不”原则，即不接收不良品、不制造不良品、不流转不良品。下道工序有检查上道工序流转出产品质量的义务，并保证本工序制造的产品为良品，产品转交时有保证产品质量合格的责任。具体要求及违反处罚规定按照《公司全面质量管理规定》6.3-6.4所规定项目执行。
4.3.7其他各工位详细品质管控要求按照《公司全面质量管理规定》上6.5.1-6.5.3所规定项目执行。
4.4车间“5S”管理
4.4.1各员工应对“5S”责任区域负责，清扫频率及标准按照《岗
位说明书》上所规定之严格执行，检查时若发现不达标，当月头两次给予口头警告，两次以上者，处以每次罚款10元。
4.4.2各员工应对所安排需要保养的设备按工程部要求保养的频率，按时保养，并将保养结果记录在<设备保养点检记录表>上。未按要求及频率保养，一经查实，当月头两次给予口头警告，两次以上者，处以每次罚款10元。
4.4.3各员工应保证所辖“5S”区域的整洁度，要求工具、量具应摆在规定的区域，不可压住斑马线甚至超出斑马线。并且要按区域标识对应摆放。未按要求执行，一经查实，当月头两次给予口头警告，两次以上者，处以每次罚款10元。
4.4.4车间员工需注意公共区域卫生，例如卫生间、走廊，在公共卫生区域不允许乱扔垃圾或者使用过的劳保用品。废弃物品也应该丢弃在相应区域内。
4.4.5遇车间放假或者停产下班，必须将对应管理区域内的水、门、窗、空调、电、气、除湿机等关闭。若未按要求执行，负责人每次罚款20元，监督人每次罚款10元。
4.4.6车间员工不得私自将非本公司人员带入车间，违者责任人处罚50元。
4.4.7全体员工进入厂区上班必须按公司要求穿工衣、佩戴厂牌。不可穿奇装异服，不可整奇怪发型等，一经发现，可拒绝其进入车间上班。
4.4.8故意损坏公司财物者，主要指硬件设备，例如门、窗、其他机器设备等，根据所造成的损失处以20-100元罚款。情节严重者将赔
偿所有损失并做辞退处理。
4.5其他管理要求
此管理要求主要包括出入厂规定，员工宿舍管理制度，员工离职手续办理规定，员工作息时间规定等。以上所有规定均按人事行政部要求执行。
4.6奖励制度
4.6.1在月终时，对全体员工的工作表现给予综合评估，对表现优秀者，给予优秀员工的奖励。本车间优秀员工人数为2-4人，奖励金额为50-100元。
4.6.2本月如有其他突出贡献者，根据其贡献程度给予100-200元奖励，具体人数视当月实际情况而定。
4.6.3鼓励员工提出合理化建议，在综合评估其效果后，按其贡献大小进行奖励50-500元。
4.6.4 根据车间品质状况，每月提报0-2人为车间品质标兵，奖励200元。
4.6.5 累积被评6次及以上优秀员工（可加上其他奖励次数）并且未有罚款，请假未超过10天者，提名为生产部优秀员工，按公司规定予以奖励。
本制度如有任何疑问可向车间主管或生产部经理咨询，生产部保留对本制度的解释权。
一、目的1.确保组装车间现场人员和作业符合要求，实现优质、高效、低耗、安全、生产。
2.适用范围：适用于组装车间所有管理人员、技术员、作业员。
二、职责
1、生产部负责制定本管理规定，责成组装车间全体人员严格贯彻执行本规定；
2、生产部每周进行一次生产现场管理的监督检查、定期考核。
三、内容
本管理制度包括：工作程序、工作纪律、请假流程、5S、安全、物料管理、品质管理、教育训练管理制度等几方面。1.工作程序
1.1 严格按照生产计划所下达的《生产排程》合理安排各项生产任务事宜。
1.2 每日生产经理在17：30前，依生产计划排程安排好次日的生产任务，并下达到各生产班组长和物料员手中，如有变动及时沟通。
1.3 物料员在当日下班前须将次日所需物料领回车间，如有异常及时回报车间经理。
1.4 生产班组长收到次日生产计划后，必须在当日下班前对所需物料进行核对，并做好生产排线、设备调整及人员等各产前准备方面工作。
1.5 生产订单完单后，及时入库并督促各部门进行相应的系统确认。
1.6 积极配合各部门的工作需求。2.工作纪律
2.1遵守作业时间，员工每天上班必须提前10分钟到达车间开早会，上下班不准迟到、早退、旷工。迟到早退异常由当班负责人记录，连续三次或一月内累计四次按旷工一天处理；旷工一天扣除三日工资，连续三次或三月内累计四次旷工者辞退。2.2上班时应着装整洁，依厂规正确穿戴工衣、工帽、工鞋及劳保防护用品。
2.3工作时间严禁谈笑、打瞌睡、吃零食等。2.4车间范围内，严禁乱丢果皮、纸屑等杂物。
2.5工作时间严禁看书、玩手机等与工作无关的事。
2.6严禁在车间内吵闹、打架斗殴。
2.7严禁在车间及卫生间吸烟。
2.8严格服从主管工作调动安排，有异议遵从“先服从，后申诉”之原则。2.9严格按照作业指导书及工艺要求进行操作，严禁私自更改作业程序及内容。2.10爱护车间财产，节约生产物料，产线产生的报废物料放入红色袋子中，不可随意处理，爱惜车间生产工具、设备。
2.11装配工自检出来的不合格零部件必须放入不合格品袋子内（红色），不可以乱扔，下班后统一收回。
2.12各拉线的班组长每天提前15分钟到达车间，准备物料、工具并安排当日生产任务，组织员工开早会及开线准备工作。
2.13管理人员应以身作则，带头严格遵守公司的其他各项管理制度。
3.请假流程
3.1请假须以书面形式提前申请，经班组长同意并签字后由车间生产主管签批。
3.2如特殊事情必须亲自处理,应在12H前用书面的形式请假,经主管与相关领导签字后,才属请假生效,不可代请假或事后请假(如生病无法亲自请假,事后必须交医生证明方可),否则按旷工处理。
3.3员工请假核准权限：（1）一天以内由班长批准；(2)三天以内由车间主管批准；(3)超过三天必须由生产部经理批准后经副总审批。4.5S管理
4.1 严格按照5S管理要求执行，保持工作环境整洁、明亮、有序。4.2现场整理：把要与不要的人、事、物分开。对于生产现场不需要的杂物、脏物坚决从生产现场清除掉。对于长期不使用的物品打包封存。4.3 现场整顿
A.有物必有位：生产现场物品各有其位，分区存放，位置明确；
有位必分类：生产现场物品按照工艺和检验状态，逐一分类； 分类必标识：状态标识齐全、醒目、美观、规范。
B.工件定置：根据生产流程，确定零部件存放区域，分类摆放整齐，零部件绝对不能掉在地上，不能越区、不能混放、不能占用通道。下班后所有工具物料回归原位，不可在车间随意摆放。
C.工位器具定置：确定工位器具存放位置和物流要求。
D.工具箱定置：工具箱内各种物品要摆放整齐。
E.各项产品装配过程中所需原材料、人员、工装设备、监控测量装置等，都必须妥善安排，避免停工待料
4.4 现场清扫与清洁：车间场地必须保持清洁整齐，每天下班前必须清理场地，打扫卫生；工作台面及货架除随时清扫、保持清洁整齐，附近不得有杂物及灰尘。
4.5 每日下班前要将各班组所管辖区域的地面、桌面、物料架、窗台等清理干净，组长要进行确认。
4.6 每周进行一次大扫除。
5.安全
5.1 发现隐患要及时解决，做好记录，不能解决的要上报领导，同时采取控制措施，发生事故要立即组织抢救，保护现场，及时报告。遇到生产中的异常情况，应及时处理，危险紧急情况，先处理后报告，严禁违章指挥。
5.2 消防器材管理明确到人每月点检一次，如发现异常要及时报人资部维修。5.3 消防器材前不准堆放任何物品，消防通道不得堵塞。5.4 下班时必须做到切断电源、水源和火源。
6.物料管理
6.1 所有物料领用必须有系统机打票据作为凭证。
6.2 物料员领取物料要如实核对检查，不可出现多领和少领的情况。
6.3 进入车间物料所有物料必须做到各就其位，分区存放，位置明确，数量准确，摆放整齐，标签明确。
6.4 产线出现的不合格物料要用不良品标识隔离并当日处理,不准私自处理。6.5 进入车间物料必须要先在周转仓内脱包，禁止用周转纸箱装物料进入车间。7.品质管理
7.1 组装车间作为公司成品出货的窗口,担任着保质保量完成生产任务的责任,每一名员工都应具备各项素质要求，7.2 产线员工必须按照工艺要求认真作业,不可以随意更改作业流程。
7.3 生产线各个岗位作业员，必须做到每个产品做好和检查好，不可从本工位流入不合格品到下一道工序，自觉提高自检工作。8.教育训练管理制度
8.1 车间定期组织员工参加相关的教育训练和培训。
8.2 所有员工在参加教育训练课程时要准时到会，手机调整为震动或关机状态。
8.3 车间员工培训内容为：新员工入职相关知识、化学品规范作业、生产安全作业、生产品质教育、厂纪厂规等。
此制度从2015年9月15日起执行！
关键词：级间分离,爆炸螺栓,碰撞检测
目前,世界各国都在致力于先进运载火箭的发展,提出了许多火箭的发展模式,以提高运载火箭的发射有效载荷的性价比。为了提高运载火箭运载能力,一般采用多级串联、并联或者串并联相结合的方式。不管何种方式,多级运载火箭在上一子级燃烧完后,都需要及时抛掉,减轻无用的结构质量。
多级火箭相邻子级之间进行的分离,称为“级间分离”。级间分离是多级火箭设计的重要分系统,有级间热分离和级间冷分离两种方法。火箭热分离是指上面级发动机点火,当其推力值达到一定值时,连接解锁装置解锁,上面级依靠发动机推力加速,下面级在上面级燃气流的压力作用下减速,从而使两级分开。在级间热分离过程中,作用在导弹上的力和力矩变化、爆炸螺栓未成功爆炸等扰动因素的影响,从而产生了对导弹继续飞行级的干扰,或在其分离过程中导弹上、下两级之间之间发生碰撞而造成不良后果。以此,有必要对导弹级间热分离过程的动态特性进行研究。
本文以两级串联火箭为研究对象。当火箭飞行到一定高度,一级助推级发动机工作结束,进行级间分离,在分离过程中,研究爆炸螺栓正常爆炸和未正常爆炸对二级火箭飞行带来的不同影响。在此基础上,对爆炸螺栓的安装位置分布进行了分析。并在研究常用碰撞检测的优缺点后,总结出来连续检测最可能碰撞点方法。
1 运载火箭分离过程建模
1.1 火箭分离过程描述
以某运载火箭为研究对象,其分离过程分为三个阶段:
第一阶段:当运载火箭一级火箭燃料用完时,发出分离指令,爆炸螺栓解锁爆炸。同时二级火箭发动机点火。
第二阶段:在二级发动机的作用下,使一级、二级迅速分离。同时检测一级、二级是否发生碰撞。
第三阶段:到一级、二级相对位移超过一级箭体直径的6倍,分离运动结束。
1.2 基本假设
1)多级火箭上下两级分离发生在高空区,可忽略大气的作用;
2)运载火箭轴对称,各种干扰和偏差在各方向上出现概率相同、大小相等;
3)忽略地球自转运动和火箭弹性运动,将火箭本体及上下两级分离体视为刚体;
4)忽略级间燃气在排泄过程中对下面级的气动影响;
5)分离解锁瞬间完成,不计分离不同步的干扰;
6)运载火箭上、下两级分离过程中,忽略上、下两级发动机推进剂燃烧而引起两级分离体质心、质量和转动惯量的变化。
1.3 分离坐标系
OX1Y1Z1为分离后下面一级的弹体坐标系,OX1与下级纵轴重合,OY1垂直于OX1轴,原点O为1级的质心。OX2Y2Z2为分离后上面一级的弹体坐标。
1.4 分离运动方程
1.4.1 作用于一子级的力和力矩
作用于一子级上的非质量力有一子级发动机的后效推力F1、二级发动机对一子级的反推力F2、故障情况下爆炸螺栓的冲量力F3。
式(1)中,F1=i=∑n1Xi,n为一二级之间爆炸的螺栓个数;F2=-e F21,式中,F21为二级火箭的推力,e为二级火箭对一子级的反推系数,由X/D的差值求得,X为一二级之间的距离,D为一子级上底直径。
1.4.2 作用于二子级上的力和力矩
作用于二子级上的非质量力有二级发动的推力F21,故障情况下的爆炸螺栓的冲量力F3。
1.4.3 运动分析
分离时,各级所受力和力矩不同,导致其运动也不同。
1)两分离体各自运动[2]
取发射坐标系OXgYgZg作为质心动力学方程的参考系坐标系。
动力学方程:
运动学方程:
姿态动力学方程:
姿态运动学方程:
2)相对运动分析[3]
在两分离体各自质心运动和姿态运动的基础上,可以分析其相对运动。
相对速度:
相对距离:
相对角速度:
相对姿态角:
取发射坐标系OXgYgZg为参考坐标系,一级到二级弹体坐标系的转换矩阵为:
式(10)中,Cg1为一级到发射坐标系的转换矩阵,C2g为发射坐标系到二级弹体坐标系的转换矩阵。具体可见文献[1]。
通过上式,可求出相对姿态角:
3)碰撞检测分析[4]
对于串联式的级间分离,碰撞问题主要考虑的是二级喷管与级间段发生碰撞的可能性。
现考虑碰撞检测的方法有危险截面特征点判断[1]和特定时间点碰撞检测[2]。
危险截面特征点判断方法判定了两特定点是否发生碰撞,但两分离体相对姿态发生变化,其危险截面也随着改变。因此其危险截面特征点并不是两固定的点。
特定时间点碰撞检测方法是在反推火箭点火结束时,计算两分离体轴向相对距离。此方法对分离过程不是连续的判断,如在反推火箭点火结束前发生碰撞则无法检测。
根据以上碰撞检测方法的优缺点,总结出以下方法。此方法能连续找出各个时刻的危险点,并判断是否发生碰撞。
如图1所示,一级轴线与二级主喷管底面的交点为点A,二级主喷管中心点为点B,点B在一级轴线的投影为点C,R2为主喷管的等效半径,R1为级间筒段内径,L为主喷管的等效长度。
碰撞边界为:
2 仿真与结果
本文基于VPM建立了级间分离系统模型如图1所示。
虚拟样机设计环境仿真框架软件(VPM)是西北工业大学航天学院开发研制、针对航空、航天飞行器应用对象的动力学虚拟样机系统。VPM软件的任务是为复杂的动力学系统的虚拟样机系统设计提供一个图形建模和仿真环境支持平台,作用是建立虚拟样机的仿真模型并完成仿真计算,其主要功能包括样机建模、样机的仿真和调试、数据管理三部分。
Motion模型是根据当前值和力与力矩解算运动参数值,结果传入relative模型中,进一步解算一级与二级的相对运动。Relative和motion模型同时把数据传入Collision Detect模型,判断碰撞或者安全。如果安全,继续飞行,如果碰撞,仿真结束。本文研究串联热分离的方案,一级和二级采用爆炸螺栓相连,在80 km高度分离,速度5 000 m/s,爆炸螺栓爆炸冲量作用时间为100 ms。分离后二级在发动机作用下爬升入轨。其分离过程在级间分离系统虚拟样机下进行仿真,其仿真结果如图3所示。
图3表明,爆炸螺栓是否正常爆炸,对飞行器的分离过程有较大的影响。如有爆炸螺栓未正常爆炸,飞行器级间分离运动到安全距离的时间也会增长,对二级的速度也有较大的影响,同时有能量的耗损。
图4表明,有一个爆炸螺栓为爆炸,靠二级对一级的拉力将爆炸螺栓拉断,当一二级的碰撞距离为0时,说明一二级发生了碰撞。在爆炸螺栓正常爆炸的情况下,一、二级之间的距离到达安全距离后停止仿真。
图5表示,当一个爆炸螺栓未爆炸时,对一、二级的相对姿态影响很大。姿态角的变化,容易引起一、二级发生碰撞。
连接一二级的14个爆炸螺栓其中一个未爆炸情况下对主级的影响是否有区别,有如下研究。
爆炸螺栓的分布如图6。
表1为各个爆炸螺栓未爆炸,一二级发生碰撞的时间。
由表1可知:从Z轴向Y轴的分离时间是越来越长,即爆炸螺栓越靠近Z轴就越容易发生碰撞。所以越靠近Y轴爆炸螺栓的密度可以适当大一些,越靠近Z轴爆炸螺栓分布密度要小一些。
3 结束语
本文进行飞行器级间分离六自由度仿真分析,提出了用于飞行器级间分离的仿真框架。通过应用刚体相对姿态运动学分析方法,提出了新的相对运动检测方法,建立了一二级相对运动模型。并分析了不同位置爆炸螺栓未完全爆炸对主级的影响,得到爆炸螺栓分布密度趋势。
参考文献
[1]孙平,刘昆.小型固体运载器一、二级分离动力学与仿真研究.国防科技大学学报,2010;32(2):27—32
[2]曾铁.某型号级间分离技术研究与应用.成都:电子科技大学,2009
[3]张耀磊,唐硕.基于虚拟样机的级间分离系统仿真.计算机仿真,2006;23(12):43—45
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