地中海贫血筛查流程

地中海贫血筛查流程

地中海贫血筛查流程 篇1

地贫产前初筛：

凡未做过地贫筛查的孕妇应建议其进行地贫筛查。地贫的初步筛查应推广使用血液红细胞指数(MCV,MCH)等适宜技术。对红细胞指数下降的，应书面建议进一步做地贫产前筛查，并按规定转诊。

地贫产前筛查：

对产前检查和血液红细胞指数初筛发现的地贫可疑孕妇，应采用血红蛋白（Hb）电泳技术作进一步筛查，对检测结果为HbA2降低或临界值的，则再作血清铁测定。临床医生根据检测结果，进行地贫、异常Hb和缺铁性贫血的鉴别诊断，并提供地贫相关的产前咨询及必要的转诊服务。

产前筛查后高风险对象的处理原则：

1.对产前筛查结果为高风险的孕妇，产前咨询医生应及时给予遗传咨询指导；是否实施产前诊断，应严格遵循知情选择原则。

2.医疗保健机构不得擅自为产前筛查结果为高风险的孕妇作终止妊娠的处理。

地中海贫血筛查流程 篇2

1资料与方法

1.1 一般资料

2011年1月1日-2012年12月15日在南宁市妇幼保健院门诊孕检及住院孕妇, 年龄20～45岁, 中位年龄29岁。

1.2 方法

采集外周静脉血作血常规和Hb电泳, 地中海贫血筛查阳性判读标准:血常规中MCV<82fl, MCH<27pg, HbA2<3.5, HbF正常, 出现HbH、CS、QS带, 疑为ɑ地中海贫血;MCV<82fl, MCH<27pg, HbA2>3.5, 和 (或) HbF增高, 疑为β地中海贫血; MCV<82fl, MCH<27pg, 3.5≤HbA2≤4.0, 和 (或) HbF增高, 拟为ɑ+β地中海贫血 (复合型地中海贫血) 。

2结果

2525例孕妇地中海贫血筛查, 筛查阳性455例, 筛查阳性率18.02%。其中, 筛出α地中海贫血255例, 筛查阳性率10.10%;β地中海贫血192例, 筛查阳性率7.60%;复合型地中海贫血8例, 筛查阳性率0.32%。

3讨论

地中海贫血是由于血红蛋白中的珠蛋白合成减少造成红细胞变小、颜色变淡的单基因遗传性溶血性贫血[1], 到目前为止尚无根治措施。重型地中海贫血患者常用输血治疗, 但长期输血会引起铁离子过量积累, 导致心力衰竭而死亡, 孕妇地中海贫血筛查的目的是严防重型地中海贫血胎儿活产, 以免给家庭与社会带来沉重负但。广西壮族自治区是地中海贫血高发区, 本调查表明, 孕妇地中海贫血筛查阳性率18.02%, 广西孕妇地中海贫血筛查状况各有特点, 根据李氏天[2]报道, 大新县954例孕妇中筛查, 阳性67例, 筛查阳性率为7.02%。根据邓国生等[3]报道, 玉林市1 634例孕妇产前地中海贫血筛查, 筛查阳性359例, 筛查阳性率21.97%, 其中α地中海贫血筛查阳性率12.48% (204/1840) , β地中海贫血筛查阳性率9.48% (159/1840) , 筛查出异常血红蛋白病3例。根据吴惠珍等[4] 报道, 百色地区孕妇地中海贫血筛查阳性率为18.15% (334/1840) , 其中, α地中海贫血发生率为11.41% (210/1840) , β地中海贫血发生率6.74% (124/1840) 。根据李荣敏等[5]报道, 河池市孕妇地中海贫血筛查阳性率为11.8% (139/1176) 。

地中海贫血的筛查方法有多种, 根据陆洪波等[6] 报道, 单独用血红蛋白电泳筛查敏感度72.88%、特异度75.00%、准确度73.79%, 漏筛率达25.00%, 对β地贫、HbH病诊断率较高, 并能对其他异常血红蛋白病作出诊断;血球分析的MCV、MCH筛查敏感度93.54%、特异度86.47%、准确度90.86%, 漏筛率13.53%;血球分析+血红蛋白电泳筛查敏感度93.50%、特异度100%和准确度95.15%, 漏筛率为0, 红细胞脆性+血球分析筛查地贫敏感度91.79%、特异度93.08%、准确度94.27%, 但不能对其他异常血红蛋白病作出诊断。根据邓国生等[7] 报道, 应用SH2020全自动琼脂糖凝胶电泳仪Hb电泳进行地中海贫血筛查, α地中海贫血筛查阳性者260例接受基因检查, 确诊195例, 符合率为75.00%;β地中海贫血筛查阳性者有170例接受β地中海贫血基因检查, 确诊141例, 符合率为82.94%, 认为应用SH2020全自动琼脂糖凝胶电泳仪Hb电泳进行地中海贫血筛查简便易行, 检出率较高。

地中海贫血预防从婚前、孕前开始, 从简单的筛查开始, 到复杂的夫妇基因诊断, 产前胎儿诊断。专业医师根据检测结果提出医学建议, 根据地中海贫血的遗传规律, 夫妇同时携带相同类型地贫基因时, 胎儿患重型地中海贫血的风险更高。从婚前医学检查入手尽可能避免同型地中海贫血基因携带者结婚生育[8], 对难分难解的同型地中海贫血基因携带者要结婚者, 最好不生育子女, 若有生育子女需求者, 要常规进行胎儿地中海贫血基因诊断, 为医师提出医学建议提供有力依据, 也可选择无地贫基因的健康坯胎进行移植, 从而避免选择性终止妊娠给孕妇和家庭造成的身心损害。

参考文献

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地中海贫血筛查流程 篇3

【关键词】地中海贫血;红细胞参数;基因诊断;筛查

【中图分类号】R556 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3015（2011）02-0061-02

地中海贫血（Thalassemia，简称地贫）是一种常染色体不完全显性遗传性疾病,广东省是地贫高发病率地区,为降低地贫发生率, 特别是重型地贫的患病率, 应积极开展地贫基因携带者的人群筛查[1]。地贫的检验方法很多， 目前，国内外用聚合酶链反应（PCR）检测α、β 地贫基因的方法进行地贫的诊断，是目前诊断地贫的金标准。大多数地贫基因携带者都不会知道自己带有这种遗传基因， 降低地贫发生率的惟一方法只有通过婚检和产检中的地贫筛查，防止重型地贫的出现[2]。本研究通过检测血红蛋白（HB）、平均红细胞体积(MCV) 、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、红细胞体积变异系数（RDW）等红细胞参数，并将筛查结果与地贫基因诊断结果作对照,以探讨其在筛查地贫中的价值。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 受检对象：婚检和孕检人员共360例,年龄19-36岁,其中男148 例, 女212例，同时做血常规和地贫基因检测，以地贫基因检测阴性为对照组，以地贫基因检测阳性为地贫组。

1.2 检测方法

1.2.1 血细胞分析：取EDTA2K抗凝静脉血 2 m l, 于2 h 内采用CD-3700 全自动血细胞计数仪检测血常规,包括红细胞计数、血红蛋白浓度、MCV、MCH、MCHC、RDW等红细胞参数。

并以地贫组MCV均值加一个标准差、MHC均值加一个标准差、RDW均值减一个标准差作为地贫诊断的红细胞参数阳性指标，与基因诊断进行比较。

1.2.2 地贫基因分析 用GAP_PCR检测常见α地贫基因缺失(-a3.7,-a4.2,——SEA), 采用PCR反向点杂交法(RDB)检测常见17种β地贫基因突变点。

1.3 结果统计：Microsoft Excel 2003 相关软件。

2 结果

2.1 地贫基因检测结果见表1。

2.2 各组别红细胞参数结果见表2。

2.3 对红细胞参数分组以小于地贫组的 MCV（x+s） 、MCH（x+s）和 大于RDW（x－s）为筛查阳性，对两种方法作比较，结果见表3。

3 讨论

地贫是一组常染色体不完全显性遗传性慢性溶血性疾病,是因为珠蛋白基因缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链中的一种合成减少或不能合成,引起血红蛋白的组成成份发生改变而导致的溶血性疾病。广东省是地贫高发病率地区,有文献报道, 广东地区携带地贫α基因率约为7.3%,β基因率约为1.83%-336%[1]。通过对婚检和产检人员中的地贫基因检测，可以降低地贫发生率和防止重型地贫的出现外，还可以根据基因的分型结果为轻度地贫患者治疗提供依据。本研究结果1表明：209例地贫基因携带者（男83例，女121例）以α地贫基因缺失为主（136/204），α地贫基因分型中以-α3.7/αα、——SEA/αα为主，分别为27/204 、96/204。对常见17种β地贫基因突变点检测结果看，共检出 -28位点突变、CD17位点突变、CD41-42位点突变、CD43位点突变、βE位点突变、IVS-II-654位点突变、CD71-72位点突变等7个基因突变点。由于婚检和孕检人员以本地常住人员为主，各种基因型比例构成分析，男、女组别大致相同，本研究结果反映出本地地中海基因携带人群中以——SEA/αα为主，带有——SEA/αα地贫基因患者常能引起轻度地中海贫血。临床上成年地贫患者均为轻型,夫妻双方均为轻型地贫携带者,则有可能怀上重型地贫儿,因此避免重型地贫儿的继续妊娠和出生十分重要[3]。

本研究结果2表明：地贫组的MCV 、MCH、RDW-CV等参数与对照组比较均有显著性差异（P<001），与相关文献[2,3]研究结果一致。血常规检测是婚检和孕检的常规项目，一次检测可以得到HB 、MCV 、MCH、RDW-CV等多项指标，同时婚检和孕检人员大多数为没有明显贫血的临床症状，即使有轻度的地贫症状，在日常生活中也不容易发现。首先确定HB是否在正常参考范围，如果HB下降，MCV 下降、MCH下降、RDW-CV增加，小细细胞低色素贫血，常见有地贫和缺铁性贫血，对缺铁性贫血患者经治疗后，HB 、MCV 、MCH、RDW-CV等多项指标会有变化，而地贫患者的红细胞参数变化不大。对贫血治疗无效的患者有必要进行地贫基因的检测。其次，婚检和孕检人员大多数HB在正常参考范围内，如有MCV 下降、MCH下降、RDW-CV增加情况，应做地贫基因检测。

本研究结果3表明：以 MCV 小于76.2 fl（71.7+4.5） 、MCH 小于24.7 pg（22.7+2.0）和 RDW大于13.7%（16.5－2.8）为地贫诊断的红细胞参数阳性标准与基因诊断作比较,两者无显著差异(P>0.05)。对照基因诊断结果,MCV、MCH RDW-CV诊断的灵敏性为930%,特异性为97.2%,造成假阳性的主要原因是其他小细胞低色素性贫血,如:缺铁性贫血、某些慢性内科疾患等,临床上应加以鉴别，同时由于基因表型不同，对红细胞生成影响不同，出现假阴性结果。由于不同的检测系统对HB 、MCV、MCH、RDW-CV值有一定的变异系数，对不同的检测系统以小于地贫组的 MCV（x+s） 、MCH（x+s）和 大于RDW（x－s）为筛查阳性的红细胞参数筛查方法对地中海贫血筛查具有良好的灵敏度和特异性。

本研究表明对婚检和孕检人员检测的红细胞 HB 、MCV 、MCH、RDW-CV等多项参数进行分析，以MCV 小于76.2 fl（71.7+4.5） 、MCH 小于24.7 pg（22.7+2.0）和 RDW大于13.7%（16.5－2.8）为地贫阳性筛查条件，是一种经济有效的地贫筛查方法。对地贫筛查阳性的人员进行地贫基因检测可以尽可能地减少地贫的漏诊，减少出生缺陷，提高出生人口的质量。

参考文献

[1] 沈亦逵. 广东省地中海贫血的研究现状与展望[J]广东医学, 1998, (04).

[2] 蔡建财,熊桂荣,张云珍,韩定英,谢辉艳. 应用MCV筛查地中海贫血在产前检查中的价值[J]中国初级卫生保健, 2009, (05):607-608

地中海贫血的原因 篇4

2、树立战胜疾病的信心，积极配合医生治疗，定时到医院复查。

3、增加营养不仅仅指多进食荤性补血食物。如果缺乏维生素C、叶绿素等物质，同样会影响铁质的吸收，故有色的新鲜蔬菜和水果不可缺少，这也是常见的地中海贫血的护理要点。

地中海贫血怎么办呢 篇5

③生化检查：血红蛋白电泳出现HbH带。④遗传：家系中可有HbH病患者。⑤有条件应做a/β肽链合成速率比及基因分析。

(2)β地中海贫血(不含其因缺失δβ珠蛋白生成障碍地中海贫血及HbH遗传性持存症)：①临床：同HbH。②血液学：同HbH。③生化检查：HbA2>3.5%，HbF>20%。③遗传：纯合体者父母均为β地中海贫血杂合子;杂合体者父母之一为β地中海贫血杂合子。⑤同HbH。

什么是地中海贫血

地中海贫血是一组遗传性溶血性贫血。其共同特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成。导致血红蛋白的组成成分改变，本组疾病的临床症状轻重不一，多表现为慢性进行性溶血性贫血。

地中海贫血的预防

1、地中海贫血患者应多吃高蛋白食物。因为，光补充铁元素也是不够的，还要使铁被人体充分吸收利用才能起到补血的效果，而高蛋白食物就能够帮助人体对铁的吸收，同时这类食物也是合成血红蛋白必需的物质，这类食物有如蛋类、乳类、鱼类、瘦肉类、虾及豆类等。

地中海贫血筛查流程 篇6

一、实施时间：2012年10月1日开始

二、补助对象：

（一）地贫产前诊断补助对象必须同时符合下列条件：

1、夫妇双方或一方为梅州市户籍。

2、夫妇双方经广东省地中海贫血诊断中心梅州分中心进行地贫基因诊断为同型α或β地贫基因，其胎儿进行了地贫产前诊断。3、2012年10月1日以后在我省产前诊断机构接受了地贫产前诊断。

（二）重度地贫胎儿终止妊娠补助对象必须同时符合下列条件：

1、夫妇双方或一方为梅州市户籍；

2、夫妇双方经广东省地中海贫血诊断中心梅州分中心进行地贫基因诊断为同型α或β地贫基因，其胎儿在我省产前诊断机构确诊为重症地贫。

3、经夫妇双方知情同意，2013年6月1日后接受人工终止妊娠服务的孕妇。

三、补助对象需提供的材料：

1、夫妇双方身份证、户口本、结婚证原件及复印件。

2、广东省地中海贫血诊断中心梅州分中心出具的夫妇双方地贫基因检测报告、省内产前诊断机构出具的胎儿基因检测报告、产前诊断病历以及收费票据、费用清单的原件和复印件。

3、如非孕妇本人领取补助，需提交委托书、代领人的身份证原件和复印件。

4、疾病证明、住院病历复印件、住院费用发票及住院费用清单的原件及复印件。（重度地贫胎儿终止妊娠需提供）

梅州市地中海贫血基因免费补助政策

一、实施时间：2014年1月1日开始

二、免费对象：

1、夫妇双方或一方为梅州市户籍；

2、已领取结婚证和计划生育服务证；

3、夫妇双方或一方已参加本市城乡居民医疗保险或职工生育保险；

4、在定点医疗机构产检时，孕妇地贫筛查（血常规、红细胞脆性、血红蛋白电泳基中一项）阳性。

三、申请免费检测对象需提供的材料：

1、男妇双方身份证复印；

2、孕妇地贫筛查阳性结果报告单；

3、结婚证复印件；

4、计划生育服务证复印件。

四、申请流程：

孕妇产检地贫筛查结果为阳性→产检医生告知孕妇免费检测对象及需提供的材料并开具孕妇夫妻双方地贫基因检测申请单→备齐夫妻双方免费检测需提供材料，到住院大楼8楼保健部提交材料并审核（星期

六、星期天正常上班）→符合免费检测条件者到门诊5楼遗传代谢病防治中心抽血检测，不符合免费检测条件者先交费后检测。

说明：

地中海贫血筛查流程 篇7

1 资料与方法

1.1 对象

2011年10月~2013年9月, 在广西壮族自治区妇产医院、妇幼保健院门诊就诊及住院的患儿30270例, 男13535例, 年龄2月~6.9岁, 女16735例, 年龄2月~5.8岁。另有因地贫等进行产前诊断的孕妇2368例, 年龄18~45岁, 孕18~36周。

1.2 方法

1.2.1 血红蛋白分析

抽取静脉血2m L于枸橼酸钠抗凝管或在B超引导下经腹行脐带穿刺术取脐静脉血2~3m L分别置于EDTA-K2和枸橼酸钠抗凝的2个试管。采用美国伯乐公司VARIANT高效液相色谱分析仪及配套试剂进行检测, Hb A2>3.5%或Hb F>4.0%为β-地贫表型阳性, 出现Hb H、Hb CS及Hb Bart's等为α地贫表型阳性, Hb A2>10%疑为Hb E病。

1.2.2 地贫基因分析

采用Gap-PCR扩增结合琼脂糖凝胶电泳进行α-地贫缺失型:--SEA、-α3.7及-α4.2检测, 罕见α-地贫泰国缺失型:--Thai采用Gap-PCR结合琼脂糖凝胶电泳检测, 引物由上海捷瑞公司合成, 序列为F:CAC GAG TAA AAC ATC AAG TAC CCA CCC, R:TGG ATC TGC ACC TCT GGG TAG GTT CTG TAC C, 扩增条件为:95℃预变性10min后进行35个循环扩增, 每个循环包括98℃变性45s, 62℃退火90s, 72℃延伸3min, 循环结束后72℃延伸5min;采用单管多重PCR结合反向点杂交技术检测3种α-地贫突变型:αCSα、αWSα及αQSα和17种中国人常见β-地贫基因突变, 试剂盒购于深圳亚能生物公司, 按试剂盒说明书进行操作、质量控制及结果判断。

1.3 统计学方法

数据采用±s表示, SPSS17.0软件处理, ROC曲线确定Hb A2、Hb Bart's截断值。

2 结果

2.1 筛查情况

32638例标本中检出异常血红蛋白4028例, 检出率为12.34%。其中30270例外周血中检出地贫和血红蛋白病表型3412例, 检出率为11.27%, 包括β-地贫2980例 (9.85%) 、α-地贫214例 (0.70%) 和血红蛋白病218例 (0.72%) 。2368例脐血中检出Hb Bart's 616例, 检出率为26.01%。

2.2 β-地贫基因诊断

2859例外周血进行了β-地贫基因检测, 检出β-地贫2515例。其中β-地贫重型8例、中间型34例, 其Hb A2水平表现为降低、正常或升高, 但β-地贫合并Hb E时Hb A2水平明显增加, Hb F水平在不同年龄个体间差异较大, 见表1。2515例中轻型β-地贫2473例, 主要基因型依次为CD41-42 (41.57%) 、CD17 (29.96%) 、-28 (7.36%) 、IVS-Ⅱ-654 (6.96%) 、CD 26 (5.54%) 、CD 71-72 (4.25%) 和IVS-I-1 (3.07%) , 占98.71%, 少见类型为-29、CD43、CD27-28、CD14-15和IVS-I-5, 占1.29%;其表现为Hb A2水平升高为主 (3.1%~31.6%) , 伴或不伴Hb F升高, 以Hb A2>3.8为临界值筛查的灵敏度和特异性为96.84%和98.73%。

2.3 α-地贫基因诊断

216例外周血标本均确诊为α-地贫, 其中38例αCSα/αα, 3例αCSα/αCSα, 其Hb CS含量为 (0.7±0.3) %和 (2.3±0.7) %;Hb H病173例, 主要基因型为--sea/-α3.7 (41.52%) 、--sea/-α4.2 (29.82%) 、--sea/αCSα (25.73%) , 占97.07%, 其余为--sea/αQSα、--Thai/-α3.7和--Thai/αCSα, 占2.93%, 其Hb A2含量明显降低为1.7±0.8%;2例有Hb H峰标本, 基因型为-α3.7/-α3.7和--sea/αα。603例脐血中确诊α-地贫432例, 见表2, 高效液相色谱分析筛查α-地贫的灵敏度和特异性为90.66%和97.13%, 以Hb Bart's>58.1%和>20.8%筛查重型和中间型α-地贫的灵敏度为100%和91.74%, 特异性为100%和89.65%。

3 讨论

流行病学调查[1,4]显示本地区β-地贫的发生率较高, 中间型和重型患儿在贫血患儿中占的比例很高。本研究采用高效液相色技术对30270例人群外周血进行血红蛋白分析, 检出β-地贫表型2980例, 检出率为9.85%。经基因分析确诊β-地贫2515例, 基因型以CD41-42、CD17、-28、IVS-Ⅱ-654、CD26、CD71-72和IVS-I-1最为常见, 占98.71%, 与余永雄等[5]报道的97.3%相近。其中检出中间型和重型β-地贫42例, 这表明在育龄人群中加强β-地贫产前筛查与诊断是非常必要的;其Hb特点为Hb F明显升高, 含量为9.3%~98.6%, Hb A2含量可降低、正常或升高。有96.84%轻型β-地贫者 (包括Hb E病) 表现为Hb A2升高, 含量为3.1%~31.6%, 结果显示高效液相色技术可有效的筛出β-地贫和Hb E病等。

α-珠蛋基因缺失或突变可导致珠蛋白肽链合成减少或合成Hb CS等异常血红蛋白, 非α-链可形成Hb Bart's和Hb H, 通过Hb分析可有效地检出该类血红蛋白异常疾病。本研究对2368例脐血采用高效液相色技术进行Hb分析, 其中603例经基因分析确诊α-地贫432例, 其筛查灵敏度和特异性为90.66%和97.13%。以Hb Bart’s>58.1%筛查重型α-地贫具有较高的价值, 其灵敏度和特异性均为100%;而筛查其他类型的α-地贫存在漏诊或误诊, 尤其是这些类型α-地贫的分类必须依靠基因分析。高效液相色技术筛查Hb H病和Hb CS的特异性为100%, 而其检出率却明显低于琼脂糖或毛细管电泳[6], 且不能检出Hb-WS H病, 与Yin等[7]报道一致, 这表明该方法对Hb H病和Hb CS的筛查存在较大的漏诊。值得注意的是本研究中2例外周血中检出Hb H峰, 而常规α-地贫基因检测为-α3.7/-α3.7和αCS/αCSα, 最后诊断为泰国缺失型Hb H病;1例脐带血Hb Bart's含量为32.6%, 而基因分析为--sea/αα, 不排除其他类型罕见Hb H病。

综上, 本地区地贫的发生率较高, 采用高效液相色技术能有效地检出脐血中所有中间型、重型α-地贫和外周血中绝大多数β-地贫, 而对其他类型的α-地贫存在漏诊或误诊。因此, 临床应根据各项检测结果结合临床表现进行综合分析。

摘要：目的:评价高效液相色谱分析在地中海贫血筛查与诊断中的价值。方法:采用高效液相色谱分析技术对32638例标本进行血红蛋白分析, 3678例标本进行了α-或β-地中海贫血基因检测, ROC曲线分析HbA2和HbBarts的筛查截断值。结果 :32638例标本中检出地中海贫血和血红蛋病共4028例 (12.34%) 。经基因确诊β-地中海贫血重型8例、中间型34例和轻型2473例, 以CD41-42、CD17、-28、IVS-Ⅱ-654、CD26、CD71-72和IVS-I-1及其复合最为常见, 占98.73%。高效液相色谱技术筛查HbH病和HbCS的准确性为100%, 以HbA2>3.8筛查轻型β-地中海贫血的灵敏度和特异性为96.84%和98.71%, 以Hb Bart’s>58.1%筛查重型α-地中海贫血的灵敏度和特异性均为100%。结论:本地区地中海贫血发生率较高, 高效液相色谱技术能有效筛出β-地中海贫血和重型α-地中海贫血, 筛查HbH病和HbCS的准确性较好。

关键词：高效液相色谱,地中海贫血,筛查

参考文献

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地中海贫血筛查流程 篇8

1 材料与方法

1.1 标本来源和分组方法

1.1.1 收集四川大学附属第二医院1996年至2007年收治,按《血液病诊断疗效标准》[3]确诊的轻型β地贫患者38例,其中男18例、女20例,年龄1~47岁;重型β地贫患者35例,其中男22例、女13例,年龄6个月~12岁。贫血对照组35例,男16例、女22例,年龄2个月~34岁。全部为排除地贫后的其他类型的轻型贫血患者,其中正细胞性贫血28例,小细胞低色素性贫血5例,单纯小细胞性贫血5例。根据研究表明,年龄因素(新生儿除外)对MCV、RBC、RDW、MCH测定结果无明显影响[4],各组间性别构成无明显差异(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 标本采集:

患者取半坐卧位,在0.5min内采集静脉血4m L于紫头真空采血管(EDTA-K2抗凝、BD公司)中,缓慢颠倒混匀10次后于1h内完成全血细胞计数,5h内完成血红蛋白电泳。

1.2.2 全血细胞计数:

使用SYSMEX XE-2100全自动血细胞分析仪(日本)完成检测。每半年使用SYSMEX配套校准品(SCS-1000)校准仪器,校准验证通过;,每半年参加卫生部室间质量评价,成绩合格;每日早晨和下午测定病人结果前,均采用配套高、低浓度质控血清(SYSMEX E-CHECK)进行室内质控,质控在控后进行标本测定。

1.2.3 血红蛋白电泳:

将紫头真空采血管标本2379×g离心10min,去除血浆,用10倍生理盐水洗涤红细胞3次,取10u L剩余红血球加入130u L溶血素,震荡混匀10s,室温放置5min后即为血红蛋白电泳上样标本。使用Sebia HYDRASYS LC全自动电泳仪(法国)经标本点样、电泳、孵育、染色、脱色和烘干等过程获得电泳胶片;使用Sebia光密度扫描仪对电泳胶片进行扫描定量;每批样本均同时使用Sebia配套质控品进行电泳,质控在控后,记录所有样本结果。

1.2.4 所有资料均编码后建立数据库,采用SPSS12.

0软件作单因素方差分析和ROC曲线,计算曲线下面积,并对曲线下面积大于0.7的指标探讨出其最佳临界值。

2 结果

2.1 重型、轻型β地贫组与贫血对照组的部分红细胞参数结果见表1。

重型β地贫组的M C V、R B C、M C H、H b较贫血对照组有显著降低(P<0.001),RDW、MCHC较贫血对照组显著升高(P<0.001);轻型β地贫组的RBC、Hb较贫血对照组显著升高(P<0.001),MCV、MCH较贫血对照组显著降低(P<0.001),其中以MCV的降低最为显著,MCHC、RDW较贫血对照组无显著性差异(P>0.05);各指标在轻型、重型β地贫组之间两两比较,均具有显著性差异(P<0.001)。

2.2 MCV、MCH、RBC对轻型β地中海贫血的筛查价值

在筛查轻型β地贫时,只有M C V、M C H、R B C三指标的R O C曲线下面积A U C R O C>0.7,故只分析了该三指标的最佳临界值。MCV的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.985,最佳临界值为74.25 fl,该临界值的敏感度和特异度分别为97.4%和92.1%;MCH的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.983,最佳临界值为23.8pg,该临界值的敏感度和特异度分别为94.7%和94.7%;RBC的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.976,最佳临界值为4.215×1012/L,该临界值的敏感度和特异度分别为94.7%和89.5%(图1-A)。

2.3 M C V、M C H、R B C、R D W对重型β地贫的诊断价值

在诊断重型β地贫时,只有M C V、M C H、R B C、R D W四指标ROC曲线下面积AUCROC>0.7,故只分析了该四指标的最佳临界值。MCV的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.905,最佳临界值为81f L,该临界值的敏感度和特异度分别为91.4%和81.6%;MCH的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.714,最佳临界值为26.65pg,该临界值的敏感度和特异度分别为74.3%和68.4%;RBC的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.916,最佳临界值为3.465×1012/L,该临界值的敏感度和特异度分别为91.4%和81.6%;RDW的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.94,最佳临界值为20.55,该临界值的敏感度和特异度分别为94.3%和81.6%(图1-B)。

3 讨论

由本研究结果可以看出,不同临床类型的β地贫患者均呈现不同的血液学特征。重型β地贫患者除表现出重型贫血常见的RBC和Hb极低外,还具有MCV、MCH轻度低于正常,RDW显著增加的血液学特征,该特征对于诊断重型β地贫患者可起一定参考和辅助作用;MCV、MCH的变化特征可能与重度贫血大量病态红细胞极度破坏,血液主要由新生红细胞组成有关;而RDW的变化可能为重型患者通过输血输入一部分非已细胞和造血的混乱所致。轻型地贫患者表现出RBC较健康对照人群明显为高,但Hb却没有达到相应的水平,出现RBC与Hb变化趋势分离的现象,可能是MCV小每个红细胞的Hb含量较少,同时相对贫血刺激机体合成大量的红细胞以代偿所致。因此我们在研究β地贫病人的红细胞参数时,不应笼统的将各种类型的病人合并研究。否则,其将会在一定程度上影响研究结果的准确性。这也是目前关于该类研究的常见误区之一。本研究根据重型β地贫病人和轻型β地贫病人各自的红细胞参数变化趋势不同而对其分组研究,以求研究结果的准确可靠。

注:A图表示MCV、MCH、RBC筛查轻型β地贫患者的ROC曲线,B图表示MCV、MCH、RDW、RBC诊断重型β地贫患者的ROC曲线,sensitivity表示敏感度,1-specificity表示1-特异度

评价诊断性实验常用的有效指标包括灵敏度Se和特异度Sp[5]。ROC曲线(受试者工作曲线)分析的本质是动态分析、比较不同诊断试验在多个诊断界值条件下,对应的灵敏度和特异度差。其曲线下的面积反映了诊断或筛查价值的大小,同时可根据曲线拐点,选取最合适的临界值,使试验的灵敏度和特异度达到最优。本研究结果显示:R B C、M C V、及M C H三项指标均对轻型β地贫具有较高的筛查价值,其中以MCV对轻型β地贫患者的筛查价值最大,其可作为轻型β地贫的首选筛查指标;MCH的筛查价值相对次之,RBC相对最低。而对于重型β地贫患者,四指标独特的血液学特征具有提示或辅助诊断的作用,但仍需结合血红蛋白电泳等其他实验才能对重型β地贫患者确诊;其辅助诊断价值由大到小依次为以R D W>R B C>M C V>MCH。当病人MCV<74.25fl临床医生应充分考虑病人是否患有轻型β地贫,如同时具有MCH<23.8pg或RBC>4.215×1012则其可能性将会大大增加,医生应引起足够的重视。同样,当患者MCV<81fl同时RDW>20.55%情况时则应充分高度考虑病人患有重型β地贫的可能,应进行下一步的检查以明确诊断。

综上所述,红细胞参数对轻型β地贫的筛查价值最为突出,但其独特的血液学特征对重型β地贫患者也具有一定的辅助诊断价值。红细胞参数测定因其具有高效价廉、简单易行等特点故可广泛的应用于人群进行筛查,发挥其高效的筛查功能,达到减少β地贫患儿产生的目的。

摘要：目的对轻型、重型两类β地中海贫血患者的血常规红细胞参数进行分析,以进一步揭示和探讨红细胞参数在β地贫筛查和诊断中的临床意义。方法分别分析38例轻型β地中海贫血、35例重型β地中海贫血患者红细胞参数的变化趋势和分布特点,并通过ROC曲线讨论各参数对两类β地贫患者的诊断、筛查价值及最佳临界值。结果在筛查轻型β地中海贫血时,MCV、MCH、RBC三指标的ROC曲线下面积分别为0.985、0.983、0.976,其最佳筛查临界值分别为74.25fl、23.8pg、4.215×1012/L;在诊断重型β地贫时,MCV、MCH、RBC、RDW四指标的ROC曲线下面积分别为0.905、0.714、0.916、0.940,其最佳筛查临界值分别为81fl、26.65、3.465×1012/L、20.55%。结论红细胞参数对轻型β地贫的筛查价值最为突出,但其独特的血液学特征对重型β地贫患者也具有一定的辅助诊断价值;血常规中红细胞参数以MCV最为有筛查、诊断价值,RBC、RDW、MCH也有部分参考价值。

关键词：地中海贫血,红细胞参数,ROC曲线

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地中海贫血筛查流程 篇9

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年1月~2012年6月在南宁市第二人民医院生殖医疗中心就诊,并接受地贫筛查诊断的育龄人群5738例,其中,男2498例,女3240例,年龄23~48岁。对筛查异常者进行地贫基因检测。所有受检对象用EDTA-K2真空抗凝管采集静脉血2 m L。

1.2 仪器与试剂

美国BIO-RAD公司生产的VARIANTⅡ全自动血红蛋白分析仪及配套试剂;美国应用生物系统公司提供的ABI9700核酸扩增仪;珠海黑马医学仪器公司的GSG-2000核酸凝胶图像分析系统;广州达安基因公司提供的α、β地中海贫血基因诊断试剂盒;深圳亚能公司提供的α地中海贫血点突变试剂盒。

1.3 方法

样本采集后用VARIANTⅡ全自动血红蛋白分析仪进行地贫筛查;将筛查结果异常的样本,采用多重聚合酶链反应(PCR)和反向斑点杂交法(RDB)进行地贫基因检测,检测6种常见的α地贫(--SEA、-α3.7、-α4.2缺失及CS、QS、WS点突变)和14种常见β地贫(-29M、-28M、17M、βEM、41-42M、43M、71-72M、654M、31M、IVSI-5M、IVSI-1M、27-28M、14-15M、Int M)。

1.4 判断标准

Hb A2降低和(或)出现快速区带初诊为α地贫,Hb A2和Hb F一项或两项增高初诊为β地贫;Hb A2和Hb F正常参考范围为2.5%~3.5%和<1.5%;以上任意一项或多项异常则判断为地贫筛查异常。

2 结果

2.1 血红蛋白分析筛查结果

5738例受检者中,共筛查出830例异常,筛查检出率为14.46%(830/5738)。按诊断标准,筛查拟诊α地贫480例,占57.83%(480/830),筛查检出率为8.37%(480/5738)。拟诊β地贫316例,占38.07%(316/830),筛查检出率为5.51%(316/5738)。拟诊β复合α地贫11例,占1.33%(11/830),筛查检出率为0.19%(11/5738)。此外,检出异常区带Hb H13例,Hb E 8例,Hb Q 2例,分别占1.57%、0.96%和0.24%。830例地中海贫血筛查异常分布特点见表1。

2.2 地贫基因检测结果

830例筛查异常者经地贫基因分析,确诊743例,确诊率为89.52%(743/830)。基因诊断为α地贫的有413例,占55.59%(413/743),符合率为86.04%(413/480);诊断为β地贫313例,占42.13%(313/743),符合率为99.05%(313/316),有4例诊断为β复合α地贫;诊断为β复合α地贫17例,占2.29%(17/743),在初诊的11例中有10例相符合,符合率为90.91%(10/11),1例基因诊断为β地贫;在13例出现Hb H区带病例中基因诊断均为中间型α地贫;8例出现Hb E区带经基因诊断5例为βEM/N地贫,3例为β复合α地贫;2例出现Hb Q区带基因检测均为-α4.2/αα。743例地贫基因型分布特点见表2。

3 讨论

地中海贫血是属于珠蛋白基因缺失或突变所造成的遗传性疾病,按其受累基因分为α地贫和β地贫。地贫的筛查常用血红蛋白电泳、红细胞指数、红细胞脆性试验等方法,虽操作要求低,成本低廉,但又因其敏感性和特异性较低,人为影响因素较大,存在较多的漏诊和误诊现象。临床上对地贫的诊断和鉴别主要依靠血红蛋白分析,但最后的确诊和类型判断常需要采用基因诊断[3]。本次研究用的全自动血红蛋白分析仪应用HPLC对人血红蛋白Hb A2及Hb F进行自动化定量的测定,可将地贫初步分类为α地贫和β地贫,同时还可检测出Hb S、Hb E、Hb Q、Hb J等异常血红蛋白,是一个介于筛查与确诊的试验;HPLC法与碱性电泳法相比,具有快速高效、自动化程序高、准确性和重复性良好等优点[4]。

本次研究,以基因分析作为参考方法,采用HPLC技术的全自动血红蛋白分析仪对5738例育龄人群进行地贫筛查,共筛查出830例异常,筛查检出率为14.46%,与卢秋维[5]报道的14.27%相近。其中,α地贫筛查检出率为8.37%,经地贫基因诊断符合率为86.04%,以轻型--SEA/αα地贫为主,其次为静止型-α3.7/αα地贫。对13例筛查出现Hb H区带的样本进行基因检测,结果均为中间型α地贫(-α3.7/--SEA 8例,-α4.2/--SEA2例,αCSα/--SEA 2例,αWSα/--SEA 1例)。研究结果表明,HPLC法检测血红蛋白对中间型α地贫有较高的符合率,而对轻型和静止型α地贫有较高漏诊率;由于临床上α地贫常表现为Hb A2含量偏低或正常[6],因此,通过Hb A2结果降低对α地贫筛查起一定提示作用[7]。而HPLC法检测血红蛋白对β地贫是介于筛查与诊断之间的一个比较理想的方法,已被国际地贫协会推存为β地贫的常规筛查方法[8]。本次研究,β地贫筛查检出率为5.51%,经地贫基因诊断符合率为99.05%,筛查结果与基因诊断有良好的符合性。由于β地贫复合α地贫时,多表现为β地贫的特征[9],本次研究,有4例基因诊断为β复合α地贫其筛查初诊为β地贫;在8例筛查出Hb E区带病例中,有3例诊断为β复合α地贫(βEM/N复合-α3.7/αα2例,βEM/N复合--SEA/αα1例),因此,对筛查出的β地贫在做基因诊断时应同时进行α地贫基因检测,以避免漏诊。

本次研究结果表明,应用HPLC法的全自动血红蛋白分析仪对β地贫的诊断有良好的符合性,对α地贫有一定的提示作用,在没有条件进行地贫基因检测的地区,该方法结合临床资料、常规检查,可用于地贫的筛查诊断。

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