试剂性能验证报告

试剂性能验证报告（精选2篇）

试剂性能验证报告 篇1

验证试剂名称： 验证时间：

验证实验室负责人: 本方案根据ISO15189要求制定，适用于酶联试剂项目的性能验证，本方案从特异性、敏感性、测定下限、重复性（包括CUT－OFF值的重复性）、符合率5个方面对各个试验项目进行评价。实验准备：

1、质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和阳性。

2、样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必须保证一致性。

一、特异性

1、特定病原体以外感染性疾病患者的样本。

2、含有干扰性物质的样本：类风湿因子（RF）阳性、含异嗜性抗体、溶血、脂血、高胆红素样本。

结果判断：非特定病原体感染患者样本均应为阴性。含一定浓度干扰物质的样本检测应为阴性。

二、敏感性

20份不同强度阳性标本在同一批检测，20次检测全部为可测出的阳性结果，我们认可该试剂灵敏度在可接受范围内。

三、检测下限

处于测定下限浓度（如临界点浓度+20%）的样本，重复检测20次，应至少有18次以上为阳性反应。

四、重复性

1、批内精密性

高、中、低三个浓度的样本，在一批检测内，重复检测20次（孔），计算所得S/CO值的均值和SD，计算批内CV%。

判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。ELISA的批内变异CV%应≤15%。

2、批间精密性

高、中、低三个浓度的样本，在10天以上时间内单次（孔或管）重复进行20批检测，计算所得S/CO值的均值和SD，计算批间CV%。

判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。ELISA的批内变异CV%应≤15%。

3、cutoff值验证

将阳性样本进行一系列稀释，然后将他们进行重复检测以确定能够获得50%阳性和50%阴性结果的那个稀释度。这一稀释度的分析物浓度即为临界点。

五、符合率

试剂性能验证报告 篇2

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器:OLYMPUSAU2700全自动生化分析仪,GC-911型γ放射免疫计数器。

1.1.2 试剂:

安徽大千生物有限公司生产的CG测定试剂(Lot:096614),配套定标液(Lot:063815)浓度分别为0mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L,质控品(Lot:063915)浓度分别为(4.2±0.9)mg/L、(14.7±3)mg/L;CG放射免疫分析试剂购置于北京北方生物技术研究所。

1.1.3 正确度验证品:

由厂家提供的用放射免疫法方法赋值的2个水平正确度验证物(Lot:063715),浓度分别为5mg/L、15mg/L。

1.1.4 干扰试验:

收集高、低CG浓度两份混合血清(约48.33mg/L和1.38mg/L)用于干扰试验,应无黄疸、溶血、脂血。国际试药株式会社出品的干扰物(Lot:ZS5001):总胆红素392mg/dl,Hb4850mg/dl,甘油三酯(TG)2850mg/dl。

1.1.5 比对血清:选取2015年4月我院门诊患者血清标本60份,CG浓度位于0.3~50mg/L之间。

1.2 方法

1.2.1 正确度验证:

通过测定厂家提供的正确度验证物的偏倚来评价该试剂正确度。将其按说明书复融,连续重复测定3次,分别计算均值与给定赋值的百分偏倚(Bias%)。

1.2.2 精密度评价:

参照美国临床和实验室标准协会(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI)EP15-A文件[7]所提供方案,测定高、低2个水平质控品,每天测4次,每次间隔>2h,连续测5d,计算该试剂各水平的重复及中间精密度(CV),并与厂商声明的不精密度进行比较。

1.2.3 定量检测下限(Limitofquantitation,LoQ)评价:

参考CLSIEP17-A文件[8]提供的方案,选择一低水平健康人标本(CG浓度为2.40mg/L),用生理盐水做梯度稀释,将接近厂家声明的检测限的各浓度水平的稀释标本分别测定20次,以基于生物学变异的10%的允许总误差设定各稀释水平的结果控制限,随着浓度逐渐降低,当首次某一水平的5个测定值不在控时,其浓度即为CG的LoQ。

1.2.4 线性范围评价:

收集本院门诊患者高、低CG浓度(RIA法测定)两份血清标本,将低浓度(L,1.09mg/L)与高浓度(H,56.86mg/L)血清标本按比例配制成5个系列浓度样本(1∶0、3∶1、1∶1、1∶3、0∶1),各个浓度梯度样本重复检测3次,计算均值。其预期浓度按公式X=(CL×VL+CH×VH)/(VL+VH)计算。按照CLSIEP6-A[9]文件检查数据和离群值,判断重复性,之后进行多项式回归分析。

1.2.5 比对试验:

将60份患者血清标本分别用2种方法进行测定。参考CLSIEP9-A2文件[10]提供的方案,以RIA测定结果为X,以均相免疫法测定结果为Y,绘制散点图,显示回归方程Y=bX+a。并计算医学决定水平(Xc=2.7mg/L)时的预期偏差(Bc),其公式为:Bc=a+(b-1)Xc,预期偏差Bc的95%可信区间公式为:以基于生物学变异的最佳的允许总误差(<10%)作为允许偏差。

1.2.6 干扰试验:

参考CLSIEP7-A文件[11]提供的方案并进行调整后,将国际试药株式会社胆红素、Hb、乳糜浊度干扰物按要求进行配制,分别加入到高低浓度CG的两份混合血清中(干扰物加入量小于总体积的10%),制成含特定量干扰物的血清。用该试剂测定每个浓度混合血清各2次,求均值,计算添加干扰物后与干扰物为0时的偏差,以±10%为标准判断是否存在干扰。

1.3 统计学分析

应用Microsoft Excel 2003及SPSS16.0软件进行统计学分析。采用K-S正态分布检验来检查数据正态性,以P>0.05表示数据呈正态分布,正态分布资料以(±s)表示。相关性分析采用Pearson相关分析,P<0.05表示相关具有统计学意义。线性回归采用简单线性回归分析,P<0.05表示回归具有统计学意义。

2 结果

2.1 正确度验证

厂家提供的正确度验证物的测定均值分别为4.83mg/L、15.2mg/L(见表1),其与标示值的平均百分偏倚分别为-3.4%、1.33%,均小于允许偏差范围15%。

2.2 精密度验证

测定低值质控、高值质控的重复CV分别为4.3%、3.4%,中间CV分别为5.3%、4.8%(见表2)。该试剂的实测不精密度远小于厂商声明的不精密度(8%),可满足临床应用。

2.3 定量检测下限(LoQ)评价

表3可看出CG浓度在0.30mg/L时检测的变异系数为9.52%,接近10%,符合检测限要求,所以CG的LoQ为0.30mg/L,低于试剂说明书提供的定量下限0.5mg/L。

注:*CV%≥10%。

2.4 线性评价试验

CG的预期值与实测值无明显离群值,最佳拟合方程为一次多项式。该试剂预期值与实测值拟合相关方程为Y=0.956 5X+1.537 2,b为0.956 5,a与0无显著差异(P>0.05),R2为0.992 3,>0.975,说明线性良好。5个浓度梯度标本的平均偏差为3.7%,以基于生物学变异的偏倚(<10%)为评判标准,CG在0.30~56.86mg/L范围内呈线性,与制造商声称的线性范围(0~50.0mg/L)相比,该试剂具有较宽的线性范围,结果见图1。

2.5 方法学比对试验

将两种方法的测定结果进行简单线性相关分析,结果呈良好的线性关系,以基于生物学变异的最佳的允许总误差为标准(<10%),在医学决定水平(2.7mg/L)时的预期偏差(及预期偏差95%的可信区间)为-0.07(-0.49~0.35)mg/L,结果的偏差评估合格,且两种试剂间有良好的一致性,结果见图2。

2.6干扰试验测定不同浓度干扰物的混合血清。以小于TE±10%为判断标准,试验浓度内的3种干扰物(胆红素≤39.2mg/dl,血红蛋白≤194mg/dl及甘油三酯≤285mg/dl)对CG测定无干扰。见表4。

注:a偏差≥±10%。

3 讨论

甘胆酸参与机体内许多生理、病理过程,其可以有效鉴别慢性活动性肝炎和慢性迁延性肝炎[4],协助临床判断肝硬化程度和预后,是评价肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标之一,其诊断价值优于现有常规肝功能实验,在临床上起到决定性作用。甘胆酸含量测定亦是诊断孕产妇ICP最敏感最特异的唯一指标,并可进行动态跟踪[12,13]。

目前测定甘胆酸血清含量的方法主要有放射免疫分析法(RIA)、酶标记免疫分析法(ELISA)、胶乳免疫比浊法、高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GLC)等[13],这些方法中有些不适合应用于临床检验[14]。此外,市场上缺乏灵敏度高、特异性强的CG检测试剂,尤其是质量好的自动化检测试剂,而均相免疫法可实现全自动生化仪上对CG的高通量、快速化检测,开始得到越来越多的关注。

均相免疫法CG检测试剂适用于自动生化分析仪,操作快速简便,更适用于临床,但是其方法的准确性及结果的一致性尚有待验证。本室在AU2700自动生化分析仪上,参考CLSI文件进行部分调整后对该候选方法的正确度、精密度、线性范围、检出限等重要指标进行了分析评价。以基于生物学变异分量为质量目标,将我室评估的方法性能参数与质量目标进行比较,以确保试验结果可接受的医学实用性。结果显示,均相免疫法CG试剂的精密度良好,达到基于生物学变异的精密度质量规范(<10%),也低于试剂标注的近似浓度的CV(<8%)。此外,其具有更宽的线性范围,检出限接近试剂说明书提供的定量下限,满足临床检查需求。

临床检验结果正确性、可比性,是医疗卫生工作的需要和临床实验室的工作目标。本研究正确度试验中该试剂测定的正确度较为理想。此外,该方法与与放放射射免免疫疫法法试试剂剂对对比比结结果果显显示示,,两两种种方方法法间间呈呈现现良好的线性关系。本研究通过添加胆红素、Hb及甘油三酯干扰物分别评估了黄疸、溶血和脂血3种临床异常标本对CG检测的干扰情况。试验发现该试剂抗黄疸、溶血和脂血干扰能力较强。然而CG检测仍可能受到肉眼无法识别的其他因素的干扰。

总之,甘胆酸均相免疫法试剂,具有灵敏度高、正确度好、重复性佳、抗干扰能力强、线性范围宽等特点,与放射免疫分析法的检测结果有高度相关性。且其与放射免疫分析法和胶乳免疫比浊法相比,具有相当的反应灵敏度,同时克服了同位素的放射性污染和胶乳颗粒污染比色杯的弊端,是适合在生化分析仪上进行自动分析的理想生化试剂。

摘要：目的:对应用于全自动生化分析仪的均相免疫法甘胆酸(Cholylglycine,CG)试剂进行分析性能验证。方法:实验性能验证。采用制造商提供的主校准品、质控品及我院门诊患者血清标本,参考美国临床和实验室标准协会(CLSI)EP15-A、EP17-A、EP6-A、EP7-P方案,于生化分析仪对该项目的正确度、精密度、定量检测下限(LoQ)、线性范围、干扰因素进行验证,同时与放射免疫法(RIA)CG试剂进行比较。结果:正确度验证显示测定值与标示值偏倚分别为-3.4%、1.33%。自动生化分析仪的LoQ为0.30mg/L;线性范围为0.30~56.86mg/L(R2=0.992 3);重复精密度为4.3%、3.4%;中间精密度为5.3%、4.8%,均小于厂家声明的不精密度。3种干扰物在试验浓度内(胆红素≤39.2mg/dl,血红蛋白≤194mg/dl及甘油三酯≤285mg/dl)的偏差分别为7.2%、5.9%、-8.51%。该方法与放射免疫法比较回归方程为Y=0.964 3X+0.025 3,R2=0.996 6,两种方法偏倚小于总允许误差。结论:均相免疫法测定CG,重复性好,线性范围宽,抗干扰能力强,与放射免疫分析法甘胆酸试剂具有高度相关性,适合在生化分析仪上进行自动分析,可满足临床测试要求。