良好的微生物实验室操作规范（精选12篇）
简介
在微生物实验室中，良好的实验室操作规范是基于很多原则，包括以下活动：无菌技术、培养基的控制、菌种的制备、仪器设备的管理、细致的记录和数据的评估、人员的培训。众所周知，微生物测定数据的可变性、可靠性和重现性是基于公认方法的使用和坚持良好的实验室操作规范。
微生物菌种的维护
生物样本是最灵敏(delicate)的,因为他们生存能力和特性是依赖于适当的处理和贮存。菌种的处理和贮存的标准是使用者的实验室制定的，采用减少污染的机会和减少生长特性变更。小心一致的处理贮存用菌种是微生物测试结果一致性的重要因素。按药典方法方法使用的菌种应该取自国家菌种保藏中心。可以包括冷冻的、冻干的、斜面培养的或是马上使用的形式。在质量控制测试使用前应进行菌种纯度的确定和菌种的鉴别。马上使用的菌种要求确定纯度、鉴别、接种体大小。鉴定的确认，对通常用的实验室菌种，理想的是进行基因水平的分析（如：使用合适的经过验证的探针进行DNA指纹,RNA基因排序,PCR光电导继电器）
菌种的制备和复壮应该参照供应商的说明书或采用己验证批准的方法。种子批技术被推荐用于贮备用菌种的保存。
从国家菌种保藏中心得到的初始菌种在合适的培养基被复壮、培养。部分的贮备菌种（第一次接种或是传代）是悬浮在抗冷冻培养基中，分装至小瓶中，在零下30°或更低的温度下冷冻，直到使用。如果冷冻在零下70°，或是冻干形式，菌种可以持续的保存。这些冷冻的贮存菌种可以每月或每周接种用作工作菌种。一旦打开，制备了工作悬浮液，不能再冷冻。不能用的部分应该丢弃，以减少繁殖能力损失带来的风险和贮存污染带来的风险。
工作用菌种的接种量应该记录，以防止过量接种增加表型变种。一代的定义是从具有繁殖能力的菌种接种微生物到一新鲜制备的具有促微生物生长能力
和培养基中。任何形式的接种都被当做是一次转移传代。
实验室仪器的维护
多数的仪器（培养箱、水浴、灭菌锅）必须遵从标准验证程序包括安装确认、操作确认和性能确认。另外还要求有定期的校验（通常每年一次）。新的设备，实验室关键的，应该根据QCU 批准的方案进行确认。
用于微生物实验室仪器（如：pH计和分光光度计）应按规定的进度表进行定期的校验和测试，以保证其性能。校验的频率和性能的确认是基于仪器的型号的不同和能产生实验室数据的设备的重要程度的不同。
实验室的布局和操作 实验室的布局和设计应考虑良好的微生物操作和安全。本质是最大程度的减少微生物菌种的交叉污染，微生物样本的处理环境也是重要，因为环境也能引起也污染的可能。
一般情况下，实验室应分成洁净区、无菌区和阳性室。如果可能，处理和培养灭菌产品的周围的环境区域应与阳性区完全分离。但是要将阳性和洁净区完全分开是不可能的，那么有必要采取隔离和无菌操作来减少可能的意外污染。这些隔离包括：防护衣、清洁、消毒程序和仅用于洁净无菌的生物安全柜。对于活的菌种引起的溢出和灾祸的程序应放在现场，所有相关技术人员进行上述方法的培训。
部分样品会出现微生物的生长，要求进一步分析来确定污染源。当发现有菌生长，样品应从洁净区立即转入阳性区。接种，着色、菌种鉴定或其它的调查操作应在实验室的阳性室操作。如果可能，发现有菌落生长的样品在实验室的洁净区是不能被打开的。小心隔离污染的样品和原料将减少假阳性结果。
正在进行取样操作活动的人员不能进入阳性室或在阳性室操作处理除非特别小心，包括穿防护服和手套，退出后仔细清净手。理想状态，受权人员进行样品取样操作时，特别是无菌过程的，不能在阳性操作室附近工作。同样，所有微生物样品都应采用无菌取样技术，包括非无菌样品的取样。如果可能，在规定的完全无菌的条件的取样区域进行操作。
要重点考虑的是样品的污染，它能导致假阳性的出现，除非在过程中特别注意无菌操作。取样间应设计好，这要原料和辅料的取样就可以在受控条件下进行，包括无菌衣和无菌取样设备。对于公用系统的取样，如水系统，在完全无菌的条件下是不太可能的；然而，当样品未采用无菌技术取样时应有记录，其可靠性不可避免的下降。
环境监测的取样方法要求对取样的设备（负载或未负载）进行最小化的无菌处理。如果可能，在对取样环境进行取样时，取样的设备应同时配备培养基。
实验室中所有的测试，对关键的测试操作，如：最终剂型的无菌测试，散装产品，生物产品用菌种培养，或是生物产品用细胞培养都应在受控的条件下进行，隔离技术也是可以采用的，无菌的微生物测试。己在显示，隔离技术比人为的洁净区域具有更低的环境污染水平，因此，更能减少假阳性结果的产生。隔离系统的验证是重要的，既能保证环境的完整又能防止假阴性结果的产生，假阴性的结果是由化学消毒物质带入。
实验室记录的维护
合适的数据记录和研究对成功的微生物实验室是重要的。最重要的原则是按照SOP规定操作，SOP应是书面化的，并能反映测试的实际操作是如何进行的，实验室笔记本应能提供所有详细的记录，并保证记录的完整。实验室书写至少应包括以下内容：
日期；
测试物料
微生物测试人员名称
操作程序记录测试偏差 参数的记管理员，的号码 的结果
录（使用的设备，使用微生物菌种，培养基的批号）第二个复核人签名
每一台关键仪器的使用都应在台帐上记录，所有都应根据SOP的要求记录在校正进度表和维护记录上。日志和其它记录形式对实验室记录本起到支持和帮助。设备的温度（水浴，培养箱，灭菌锅）应有记录并可以追踪。
己签发的SOP及其版本应有清楚的记录。数据的改变应用单钱划去并签上日期和缩写。初始的数据不应抹去或复盖。
测试结果应包括初始记数，允许复核者根据最终结果重新计算。数据的分析方法在SOP中应详细描述。
所有的实验室记录应存档避免遗失，现场中应有正式的记录保存和查阅程序。
检验结果的解释
微生物试验结果难以解释，因为下列原因：
微生物是普遍存在于自然界中的，又存在于通常的环境污染，由人类支配的很多类型的特殊的有机物。
实验室分析人员在样品分析和操作中可能引入微生物污染。微生物可能不是均匀的分布在样品和环境中。微生物的分析结果存在相当大的可变性。
因此，从预期结果中获得的微小的不同是没有多大意义的。
因为微生物分析的这些特性，实验分析应非常小心以避免外来的污染，正如本章前面讨论的。同样重要的，从主要微生物观察考虑，结果必须要解释。不仅包括假定污染的种类，而且包括药物成分、辅料或测试环境中存在的有机物。另外，其微生物的生长特性也应该考虑。
当出现的结果与药典正文或其它建立的质量标准不一致时，就应该进行调查。没有满足标准要求的微生物污染，通常有两个明显的原因：可能是实验室的错误或是实验环境产生无效的结果，也可能是产品有一定污染或其它形式的污染使得超出规定的标准或限度。另外一种情况，实验室操作，在多数情况下，应立即通报。
应该对围绕结果的所有情况进行全面的评估。所有实验条件和因应充分考虑，包括数据的漂移，与建立的限度和标准比较。重要的是根据结果的可变性知道观察的统计意义。
实验室环境，对现场取样的保护装置，测试条件下物料的历史数据，物料的种类，特别注意物料中微生物的存活和繁殖在调查中应被考虑。另外，与实验员进行讨论，分析中的实际操作可以得到有价值的信息。来决定结果的可靠性和决定采取和措施。如果可以确定得到不一致结果的明确原因，那么应该采取纠正措施，并记录问题所在。跟踪正式批准和执行的纠正措施，并进行仔细的检查。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器为Sysmex XT-1800iv全自动血液分析仪(仪器编号70440);试剂、质控品、校准品为Sysmex公司生产,CELL PACK(批号G5168),STROMATOL-YSER-FB(批号R5021),STROMATOLYSER-4DL(批号R5034),SULFOLYSER(批号A5008),STROMATOL-YSER-4DS(A5022),质控品Level2(批号6050811),Sysmex SCS-1000(批号60600525),高、中、低三个水平的EDTA-K2抗凝血。
1.2 方法
1.2.1 批内精密度
取高、中、低三个水平的新鲜EDTA-K2抗凝血,连续重复测定10次,计算CV、SD。
1.2.2 携带污染率
取高浓度新鲜EDTA-K2抗凝血混匀测定3次,其测定值为H1、H2、H3;取低浓度新鲜EDTA-K2抗凝血测定3次,测定值为L1、L2、L3。通过公式携带污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%计算携带污染率。
1.2.3 线性
取1份高值新鲜EDTA-K2抗凝血(H),分别按5∶5、4∶5、3∶5、2∶5、1∶5的比例进行稀释,每个浓度重复3次测定,计算平均值。将实际测定值与理论值相比较,通过方程y=ax+b验证线性范围。
2 结果
2.1 批内精密度
批内精密度是衡量仪器性能的重要指标,通过对高、中、低3个水平的新鲜EDTA-K2抗凝血连续重复测定,计算CV、SD值均在判定标准内,见表1~3。
注:WBC:白细胞;RBC:红细胞;HGB:血红蛋白;HCT:血细胞比容;MCV:平均红细胞压积;PLT:血小板
2.2 携带污染率
携带污染率是直接衡量上一个样品对下一个样品测定结果影响大小的指标。各项目的携带污染率均<1.0%,符合行业通用标准,见表4。
2.3 线性实验
RBC、WBC、HGB、HGB、PLT 5项参数的线性相关系数r>0.99,a值在(1.00±0.05)范围内,表明该仪器在一定稀释范围内具有良好的线性相关性。见表5。
注:WBC:白细胞;RBC:红细胞;HGB:血红蛋白;HCT:血细胞比容;MCV:平均红细胞压积;PLT:血小板
注:WBC:白细胞;RBC:红细胞;HGB:血红蛋白;HCT:血细胞比容;MCV:平均红细胞压积;PLT:血小板
注:WBC:白细胞;RBC:红细胞;HGB:血红蛋白;HCT:血细胞比容;PLT:血小板
注:WBC:白细胞;RBC:红细胞;HGB:血红蛋白;HCT:血细胞比容;PLT:血小板
3 讨论
GLP实验室是药物非临床研究安全性评价的一个必然趋势,也是世界经济发展一体化的要求[8,9]。相对于非GLP的药理毒理等实验所得出的结果更具有严密性和可靠性[10,11]。纳入GLP的实验,从项目负责人制订实验方案,到机构负责人的审批,经质量保障部的检查,到方案完整实施,及质量保障部在实验中的监督以及最后实验报告总结等,都是十分的周密和详细的[12,13],并且所涉及的每一个程序都要有相应的标准操作规程做为依据与指导[14],整个实验排除了许多因素的干扰,所以能够给新药研发提供完整、原始的数据[15],给临床研究提供更为有价值的资料[1]。
3Q验证中PQ验证频率为每年一次[16]。仪器有下列情况之一则需要重新验证:仪器的放置地点改变、仪器的检测方法改变、仪器进行重大维修[17]。GLP体系下仪器的性能验证需在部门负责人的监督下由有经验的工作人员完成[18]:第一,制订验证方案;第二,对仪器参数进行设置,对检测项目进行校准,对仪器精密度、线性、携带污染率、准确性等进行性能验证;第三,验证报告由检测人员签名确认后连同原始数据以书面形式归档,3Q验证过程需要质量保障部门人员的监督[19,20]。
关键词：食品安全现代化法 良好操作规范 HACCP
2013年1月，美国FDA发布了美国食品安全现代化法颁布以来的第批配套法规草案，其中一项法规草案《良好操作规范以及危害分析和基于风险的预防控制措施》将对现行良好操作规范法规进行修订和升级。新的法规草案在2个基本方面修订了现行Part 110法规：首先，根据FSMA第103节（a），FDA应出台有关危害分析和基于风险的预防控制措施的法规的要求，117法规将会增加新的条款来满足FSMA的规定。其次，将会更新、修订或澄清现行110法规中的某些要求。117法规将在修订良好操作规范和融合HACCP理论的基础上，对美国国内和输美食品生产企业良好操作规范和食品安全体系做出修订和升级。
1 美国21 CFR PART 117法规特点
《良好操作规范以及危害分析和基于风险的预防控制措施》（21 CFRPART 117）法规基于最先进的国际上认可的HACCP原则。该法规适用于生产、加工、包装或储存食品的美国国内和海外企业。
美国21 CFR PART 117法规主要特点：（1）依据FSMA要求对需要进行注册的食品企业（特殊情况除外）的危害分析和基于风险的预防控制措施做出新规定：（2）将原有的PART 110法规进行了内容的更新和明确，使之更加现代化，将使GMP符合修订后的《联邦食品、药品和化妆品法》（FD&C）的要求。
21 CFR PART 117法规还进一步解释说明了“农场”的定义，从而进步明确了针对农场的豁免条款的适用性。通过上述调整和变化，原有的PART110法规的内容得到了增补和更新，并将编号改为PART 117，旨在建立一个食品安全体系，使现代化的、基于科学的和基于风险的预防控制措施贯穿于食品加工过程。
2 PART 117法规S110法规变化比较
2.1 法规组织架构方面
21 CFR PART 117法规草案包括总则、现行良好操作规范、危害分析和基于风险的预防控制措施、对特殊企业和仅从事预包装食品存储的企业的特殊要求、可能导致FDA撤销豁免的情况和程序、必须建立和保持的记录的要求和预留等7个章节。PART 117法规草案和现行PART 110法规在架构方面的变化如表1所示。
从组织架构上看，117法规将包括现行的110法规，将良好操作规范作为其中的一部分（B部分）。GMP是制定和实施HACCP计划的基础，如果企业没有达到GMP的要求，那么HACCP计划将无法有效控制关键点。117法规将GMP和HACCP结合在起，先讲GMP要求，再讲HACCP要求，形成对生产加工、包装或储存食品企业的强制性要求，实际上也是将HACCP的理念贯穿于食品加工体系的方方面面。
2.2 PART 117法规中良好操作规范部分的变化
PART 117法规的GMP部分有4个重点修订内容，一是将澄清GMP中避免交叉污染的条款，指出要避免食品交叉污染以及过敏原的交叉接触：二是将更新和升级110法规的语言；三是删除某些含有建议的条款，如特殊温度的要求等；四是修订防止食品和食品接触表面污染的条款，指出也要避免食品包装材料的污染。
另外，FDA正在就其他修订征求意见，一是是否应对企业员工和管理人员进行强制培训，包括是否需要要求培训记录，二是117法规中某些条款是否应该为强制性要求而不仅是推荐性要求，例如按必要的频率清洗非食品接触表面以保护食品和食品接触表面免受污染的条款，是否应为强制性要求。一般来说，对于豁免实施HACCP的企业以及特殊要求的企业，117法规中GMP部分的条款依然有效。
其中有几个活动对象方面重要的变化：
（1）术语企业（Facility）：FD&c法第418节（。）（2）中指出，“企业”的定义意味着“一个国内或者国外企业需要按照FD&C法第415节要求进行注册”，117法规中“企业”的定义将遵从AFD&C的要求。根据117法规的目的，§117.3中“企业”的定义将比常见的意思或者目前§1.227（b）（2）中定义的意思更窄，它仅指那些需要根据FD&C法第415节（及第1不B分H部分）要求完成注册的企业。
（2）食品包装材料：目前110法规中大部分要求预防食品和食品接触表面污染的条款，实际上也应该包括预防食品包装材料的污染。因为食品包装材料与食品直接接触，如果它们被污染，可能会导致食品的污染。FDA将修订目前110法规中对预防食品和食品接触表面污染的条款，使其同样也适用于预防食品包装材料的污染。
（3）增加交叉接触的内容：117法规中将出现一个新的术语“交叉接触”，§117.3中将其定义为食品过敏原无意问进入食品中去。将过敏原无意的引入食品中的行为被称为“污染”或“交叉污染”，而且这种术语目前仍然在广泛使用。在最近科学文献中，考虑到过敏原是食品的正常组成部分，而不是本身就是种污染物，文献中用“交叉接触”这个术语表示过敏性蛋白从一种含有食品蛋白的食品中无意的转移到另种食品中去。鉴于科学文献从“污染”和“交叉污染”中区分出“交叉接触”的定义，FDA认为应该使用术语“交叉接触”来描述过敏原无意中进入食品中的行为，而不是过去的术语“污染”。FDA建议修改目前110法规的若干规定，并在117法规中明确提出交叉接触的概念。
（4）针对“食品”定义的一致性修订：目前§110.3中“食品”的定义与FD&C法第201节（f）所定义的一致，包含原材料和配料。FDA将在117法规中保留这个定义。但是目前§110.80（a）的标题和§110. 80中的若干条款都使用“原材料和其他配料”这个描述，与“食品”定义的“原材料和配料”不致，这样的描述容易引起歧义，误以为原材料是配料的一种，但实际上并非所有的原材料都是配料。为了保证食品定义的.致性，将对§110.80标题和目前第§110.80所有条款中凡是涉及到原材料和配料的地方，统一为“原材料和配料”这个描述。
2.3 HACCP应用范围的变化
110法规主要针对生产、加工、包装或储存食品的企业的良好操作规范做出具体要求，包括建筑物与设施、设备、生产加工过程控制、缺陷水平等，而117法规中企业除了要符合GMP要求外，还将新增HACCP的要求，实质上扩大了HACCP理念的强制性应用范围，突破了原先仅在水产品、果汁、低酸罐头等限定，延伸至需要向美国FDA需要进行注册的所有食品企业（特殊情况除外），从法规层面大大扩大了HACCP的应用范围。
3 PART 117法规表明美国食品安全监管理念的变化
Dr.Tiger
(修订说明：CNAS-CL09实施后，对微生物实验室的生物安全提高了要求，对实验室人员在配制培养基过程的生物安全、高压锅的生物指示剂还有菌种的传代次数均提出明确的要求，为适应新要求，对旧版的微生物实验室生物安全操作过程作了补充，同时修改和完善了一些小问题)
一、目的
制订本规则，保证实验室工作人员的健康安全、实验设备安全卫生以及防止对外界环境造成污染。
二、适用范围
适用于所有进入微生物实验室人员。实验室工作人员必需严格遵守安全操作规程。
三、安全操作规程： 1.员工安全操作规程
1.1 实验室入口处须贴上生物危险标志，注明危险因子、生物安全级别、负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求及离开实验室的程序。
1.2 禁止非工作人员进入实验室。参观实验室等特殊情况须经实验室负责人批准后方可进入，做好卫生防护，并在有关人员陪同下方可进入，同时注意做好环境维护及保密工作。
1.3 进行感染性实验时，禁止他人进入实验室，或必须经实验室负责人同意后方可进入。免疫耐受或正在使用免疫抑制剂的工作人员必须经实验室负责人同意方可在实验室工作。
1.4 接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手。1.5 禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物。1.6 尽量以移液器吸取液体，禁止口吸。
1.7 实验过程中，严格按有关操作规程操作，降低溅出和气溶胶的产生。
1.8 每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时用75%乙醇或巴氏消毒液消毒。
1.9 实验人员在配制培养基过程中，需尽量避免接触性或吸入性危害，特别是配制TTB和碘液等对人体有害的培养基或试剂时，要穿戴工作服、口罩和手套，并在通风橱中进行。
1.10工作人员应接受必要的免疫接种和检测(如乙型肝炎疫苗、卡介苗等)。工作人员要接受有关的潜在危险知识的培训，掌握预防暴露以及暴露后的处理程序。每年要接受一次最新的培训。人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案。
1.11禁止将无关动物带入实验室。2.无菌室安全操作规程
2.1无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面一次(拖布专用)，紫外线照射消毒30min以上，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然后紫外线消毒30min。操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。
2.2无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。
2.3无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，75％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。
2.4无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。2.5需要带入无菌室使用的器械、平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。
2.6工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用75% 乙醇等消毒剂再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。
2.7无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟，灭菌后通无菌风至少30min以上人员才能进入。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌30分钟。
2.8供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用75％的酒精棉球消毒外表面。
2.9每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。2.10吸取菌液时，必须用移液器吸取，切勿直接用口接触吸管。
2.11接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。2.12带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液或巴氏消毒液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。
2.13如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。
2.14凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。2.15无菌室应每月检查菌落数。在层流无菌风开启的状态下，取内径90mm的无菌营养琼脂平板5个，分别放置无菌室四周及中央位置，开盖暴露30分钟后，倒置于36℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落/平皿，10000级洁净室平均不得超过3个菌落/平皿。如超过限度，应用臭氧发生器等对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。3.压力蒸汽灭菌器的安全使用操作程序：
3.1堆放：将需灭菌的物品予以妥善包扎，各包之间留有空隙，依次堆放在灭菌桶的筛板上，以蒸汽穿透，提高灭菌效果。需灭菌物品外需黏上高压指示胶带以检验灭菌温度是否达到要求。
3.2 加水：在锅体内注入生活用水，水位一定要超过电热管2厘米以上（不宜过多）；连续使用时，每次操作前，必须补足上述水位，以免烧坏电热管和意外发生。
3.3 密封：在每次使用高压锅前，都必须认真检查高压锅的出气伐和安全阀，确保其状态完好，如有故障，在故障排除之前不得使用高压灭菌锅。把堆放好物品的灭菌桶放在锅体内，盖上锅盖并锁紧。
3.4 加热灭菌：将灭菌器接通与铭牌一致的电源，按下电源开关，接通电源，指示灯亮，表示电源已正常输入本器，按下开始按纽电热管开始加热工作；非全自动的高压灭菌锅要注意排空空气，确保灭菌时高压锅内是饱和水蒸气，高压灭菌锅内灭菌期间工作人员需监视高压锅指示面板上的压力、温度和时间等。
3.5 开盖：灭菌结束后，切勿立即将灭菌锅内的蒸汽排出，否则：由于液体物品的温度未能下降，而压力蒸汽突然释放，会使液体剧烈沸腾，造成溢出或容器爆裂。应待压力表指针归零位后，方可开启锅盖。
3.6 灭菌后无菌工器具及培养基应存放于无菌区域（如灭过菌后的无菌室或生物安全柜内），无菌物品需有明确标识。
3.7 每年至少2次用嗜热脂肪芽孢杆菌作为生物指示剂检查灭菌效果并记录，指示物需放在不一达到灭菌的部位（如堆放物品的居中位置）。4.生物安全柜操作规程
4.1确认玻璃窗处于关闭位置后，打开紫外灯，对安全柜内工作空间进行灭菌。灭菌结束后，关闭紫外灯。安全柜使用前后均需灭菌。
4.2抬起玻璃门至正常工作位置。打开外排风机。打开荧光灯及内置风机。检查回风格栅，使之不要被物品堵塞。在无任何阻碍状态下，让安全柜至少工作10分钟。
4.3用消毒液彻底清洗手及手臂。穿上工作褂，戴橡胶手套并套在袖口上，如有必要的话，戴防护眼镜和防护面罩。
4.4按实验程序放入实验材料，要将工作区域内的污染物质与洁净物质分开放置。尽量将所需要的物品在正式操作前全部放入安全柜，但不要过载，不要挡住前后风口。4.5尽量避免使用可干扰安全柜内气流流动的装置和程序。在操作期间，避免随便移动材料，避免操作者的手臂在前方开口处频繁移动，尽量减少气流干扰。
尽量不要使用明火，接种环之类用红外灭菌器灭菌。
4.6在操作过程中，如果有物质溢出或液体溅出，在将物品移出安全柜前，要对其表面进行消毒，为防止安全柜内有任何残留的污染物，在安全柜工作过程中，就要将安全柜内表面全部消毒。所有接触了污染材料的物体，在从安全柜中取出前，要进行表面消毒。所有开口容器，从安全柜中拿出前要盖好。
4.7全部工作结束后，用70%的乙醇或适当的中性消毒剂，擦拭安全柜内表面，让安全柜在无任何阻碍的情况下继续至少工作5分钟，以清除工作区域内浮沉污染。
4.8关闭照明灯和安全柜风机。关闭玻璃门，打开UV灯消毒。灭菌结束后，关闭UV灯。4.9定期抬起工作区域下面板，擦拭或冲洗工作面底下空间。
5.标准菌株安全操作规程
5.1标准菌株由专人保管。保管人负责建立标准菌株目录；目录至少应包编号、菌株号、菌种名称、来源、购买日期、购买数量、保存方法等。
5.2标准菌株应做好标识后，保存于专用冰箱中。
5.3标准菌株不能随意转借其它单位或个人，需要时，须经实验室负责人批准后方可提供。
5.4必须在生物安全柜中进行标准菌株实验，操作过程中，不要穿戴巳经污染的防护性手套触摸门柄、仪器或污染区以外区域，避免扩大污染范围。
5.5试验结束后，操作过程中所有可能与生物危险物接触或被污染的试验器械和物品，能够高压消毒的必须高压消毒，不能进行高压消毒的物品，应使用有效的消毒剂消毒处理。
5.6 标准菌株传代原则上不超过5代。
6.微生物培养物废弃物安全处理程序
6.1 尽可能使用塑料器材代替玻璃器材,防止利器损伤。非一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒。
6.2 禁止用手处理破碎的玻璃器具。装有污染针、利器及破碎玻璃的容器在丢弃之前必须应用次氯酸消毒液或其他有效药品进行消毒。
6.3 所有培养物、废弃物在运出实验室之前须经巴氏消毒液消毒处理或高压灭菌后,置于专门污物袋内，交由专业卫生处理公司处置。
6.4 实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒。
7、微生物实验室紧急事故处理办法
7.1刺伤、切割伤或擦伤。受伤人员应脱下防护服，清洗双手和受伤部位，使用适当的皮肤消毒剂进行消毒，必要时进行医学处理。同时记录受伤原因和相关的微生物，并保留完整适当的医疗记录。
7.2潜在感染性物质的食入。应脱下受害人的防护服，进行必要的医学处理。报告食入材料的鉴定和事故发生的细节，并保留完整适当的医疗记录。7.3潜在危害性气溶胶的释放（在生物安全柜以外）。所有人员必须立即撤离相关区域，暴露人员应接受医学咨询，同时立即通知实验室负责人和生物安全负责人。为了使气溶胶排出和使较大的粒子沉降，在一定时间内严禁人员入内，若实验室没有中央通风系统，应推迟进入实验室的时间，同时张贴“禁止进入”的标志。待气溶胶排出、较大的粒子沉降后，在生物安全负责人的指导下，清理人员穿戴适当的防护服和呼吸保护装备进行污染的清除。
7.4容器破碎及感染性物质的溢出。应立即用布或纸巾覆盖被感染性物质污染或受感染性物质溢洒的破碎物品，并倒上消毒剂。作用适当时间后，将覆盖物以及破碎物品清除，再用消毒剂擦拭污染区域。玻璃碎片应用镊子清理，已污染的布、纸巾和抹布等应放在盛放污染性废弃物的容器内。如果用簸箕清理破碎物，应对其进行高压灭菌或放在有效的消毒液内浸泡消毒。所有操作过程中要求戴手套。
若实验表格或其他打印或手写材料被污染，应将这些信息复制后，再将原件置于盛放污染性废弃物的容器内，按废弃物处理的方式进行处理。
7.5未装可封闭离心桶的离心机内盛有潜在感染性物质的离心管发生破裂。如果机器正在运行时发生破裂或怀疑发生破裂，应关闭机器电源，让机器密闭适当时间（如30min），使气溶胶沉积。如果机器停止后发现破裂，不开盖或立即将盖子盖上，并密闭（如30min）。同时应通知生物安全负责人。玻璃碎片应使用镊子，或用镊子夹着棉花进行清理。所有破碎的离心管、玻璃碎片、离心桶、十字轴和转子都应放入无腐蚀性的、已知对相关微生物具有杀灭活性的消毒剂内进行消毒。未破损的带盖离心管应放在另一个有消毒剂的容器中，消毒后回收。离心机内腔应用适当浓度的同种消毒剂多次擦拭，再用水冲洗后干燥。
清理时，应戴结实的手套（如厚橡胶手套），必要时在外面再戴适当的一次性手套。所使用的全部材料都应按感染性废弃物处理。
7.6在可封闭的离心桶（安全杯）内离心管发生破裂。所有的密封离心桶都应在生物安全柜内装卸。若怀疑在安全杯内发生破损，应松开安全杯盖子并将离心桶高压灭菌，也可采用化学消毒的方法进行处理。
7.7生物安全柜内生物危害溢出。等待至少5min，让安全柜充满气溶胶，清理时应穿戴实验服，安全眼镜和手套，且让安全柜继续工作。使用浸泡消毒剂的消毒纸巾吸附溢出物，进行消毒处理应保证一定的接触时间（至少20min）。并用同样的消毒纸巾擦拭安全柜内壁、工作台表面和柜内所有设备。按照正确的生物废弃物处理步骤处理被污染的物质，将可回收的被污染物品放入生物危害物回收袋或高压灭菌盘并且用报纸包起来，然后进行消毒或清理。用消毒剂对无法进行高压灭菌的物品进行至少20 min的消毒处理后再拿出安全柜。最后脱下个人防护服并放进污染物收集袋中进行高压灭菌处理。若所要清理的物品达到2级生物安全水平或者更高，应联系生物安全办公室负责人。
本书编写立足于加强实验室人员对实验室生物安全防护知识、规范化实验操作技能和相关法规的掌握，降低实验室生物安全风险，力求系统性和新颖性，突出实用性。本书共分五章，第一章为病原微生物实验室生物安全概论；第二章主要对病原微生物实验室生物安全设备以及操作进行了说明；第三章主要对病原微生物实验室有害化学试剂与放射性物质以及安全操作进行了阐述；第四章对病原微生物实验室生物安全风险评估及风险控制提出了要求；第四章主要从组织和管理、管理责任、个人责任、安全管理体系文件、文件控制、安全计划等23个要素提出生物安全实验室的管理要求；第五章主要对典型的食品病原微生物、动物病原微生物以及医学病原微生物编制了安全操作指南。最后附录汇编了我国目前重要的病原微生物实验室生物安全管理的法规和标准。
目录
第一章 病原微生物实验室生物安全概念
第二章 病原微生物实验室生物安全设备与操作
第三章 病原微生物实验室有害化学试剂与放射性物质安全操作
第四章 病原微生物实验室安全风险评估及风险控制
第五章 病原微生物实验室生物安全管理要求
第六章 病原微生物实验室安全操作批南
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一、此次试验器材已为你准备
好，你的任务是按步骤梳理一下别缺少了，点完要说声“器材齐备”。
二、当对光时发现看不见明亮视
野要依次看目镜，物镜，遮光器，反光镜是否有问题。
三、取口腔上皮时，牙签是在生
理盐水滴中滚涂充分；放洋葱表皮膜时，要一侧接触用解剖针慢慢放平，避免产生气泡；叶片不需要染色，其余三个染色时要牢记染色技巧不能吸不过来，也不能吸过头。
四、做小鱼实验时要先擦拭培养
皿（相当于载玻片），包鱼时要从小鱼的鳃盖开始一直包到仅漏尾鳍（也就是那个薄薄的剪刀尾是观察对象，其余运动部位要包好），观察时包好等十几秒待小鱼平静后再置入显微镜下。最后在现象描述中，你看到的是像小沙子在流动的是血液循环。
五、在做实验中用到的刀子、镊
子、针、玻片等用具用完后一定清洗干净，用过的纱布撕下的叶子，掰下的小块洋葱，用过的牙签、纸杯都要倒入废物桶，未用的放在原处。
六、在显微镜下的视野是可以移
动的，但必须是在找好物象不再动焦螺旋时才可以移动，注意慢移，别移错方向。
七、最后整理显微镜时先用擦镜
纸擦拭目镜、物镜，再将俩个物镜必须叉开，使镜筒降至最低；第三压片夹整齐；最后反光镜树立，擦拭镜身。
八、整理完后用抹布擦拭试验台桌面。
生物实验的几点提示
一、此次试验器材已为你准备
好，你的任务是按步骤梳理一下别缺少了，点完要说声“器材齐备”。
二、当对光时发现看不见明亮视
野要依次看目镜，物镜，遮光器，反光镜是否有问题。
三、取口腔上皮时，牙签是在生
理盐水滴中滚涂充分；放洋葱表皮膜时，要一侧接触用解剖针慢慢放平，避免产生气泡；叶片不需要染色，其余三个染色时要牢记染色技巧不能吸不过来，也不能吸过头。
四、做小鱼实验时要先擦拭培养
皿（相当于载玻片），包鱼时要从小鱼的鳃盖开始一直包到仅漏尾鳍（也就是那个薄薄的剪刀尾是观察对象，其余运动部位要包好），观察时包好等十几秒待小鱼平静后再置入显微镜下。最后在现象描述中，你看到的是像小沙子在流动的是血液循环。
五、在做实验中用到的刀子、镊
子、针、玻片等用具用完后一定清洗干净，用过的纱布撕下的叶子，掰下的小块洋葱，用过的牙签、纸杯都要倒入废物桶，未用的放在原处。
六、在显微镜下的视野是可以移
动的，但必须是在找好物象不再动焦螺旋时才可以移动，注意慢移，别移错方向。
七、最后整理显微镜时先用擦镜
纸擦拭目镜、物镜，再将俩个物镜必须叉开，使镜筒降至最低；第三压片夹整齐；最后反光镜树立，擦拭镜身。
八、整理完后用抹布擦拭试验台
桌面。
生物实验的几点提示
一、此次试验器材已为你准备
好，你的任务是按步骤梳理一下别缺少了，点完要说声“器材齐备”。
二、当对光时发现看不见明亮视
野要依次看目镜，物镜，遮光器，反光镜是否有问题。
三、取口腔上皮时，牙签是在生
理盐水滴中滚涂充分；放洋葱表皮膜时，要一侧接触用解剖针慢慢放平，避免产生气泡；叶片不需要染色，其余三个染色时要牢记染色技巧不能吸不过来，也不能吸过头。
四、做小鱼实验时要先擦拭培养
皿（相当于载玻片），包鱼时要从小鱼的鳃盖开始一直包到仅漏尾鳍（也就是那个薄薄的剪刀尾是观察对象，其余运动部位要包好），观察时包好等十几秒待小鱼平静后再置入显微镜下。最后在现象描述中，你看到的是像小沙子在流动的是血液循环。
五、在做实验中用到的刀子、镊
子、针、玻片等用具用完后一定清洗干净，用过的纱布撕下的叶子，掰下的小块洋葱，用过的牙签、纸杯都要倒入废物桶，未用的放在原处。
六、在显微镜下的视野是可以移
动的，但必须是在找好物象不再动焦螺旋时才可以移动，注意慢移，别移错方向。
七、最后整理显微镜时先用擦镜
纸擦拭目镜、物镜，再将俩个物镜必须叉开，使镜筒降至最低；第三压片夹整齐；最后反光镜树立，擦拭镜身。
八、整理完后用抹布擦拭试验台
桌面。
生物实验的几点提示
一、此次试验器材已为你准备
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二、当对光时发现看不见明亮视
野要依次看目镜，物镜，遮光器，反光镜是否有问题。
三、取口腔上皮时，牙签是在生
理盐水滴中滚涂充分；放洋葱表皮膜时，要一侧接触用解剖针慢慢放平，避免产生气泡；叶片不需要染色，其余三个染色时要牢记染色技巧不能吸不过来，也不能吸过头。
四、做小鱼实验时要先擦拭培养
皿（相当于载玻片），包鱼时要从小鱼的鳃盖开始一直包到仅漏尾鳍（也就是那个薄薄的剪刀尾是观察对象，其余运动部位要包好），观察时包好等十几秒待小鱼平静后再置入显微镜下。最后在现象描述中，你看到的是像小沙子在流动的是血液循环。
五、在做实验中用到的刀子、镊
子、针、玻片等用具用完后一定清洗干净，用过的纱布撕下的叶子，掰下的小块洋葱，用过的牙签、纸杯都要倒入废物桶，未用的放在原处。
六、在显微镜下的视野是可以移
动的，但必须是在找好物象不再动焦螺旋时才可以移动，注意慢移，别移错方向。
七、最后整理显微镜时先用擦镜
纸擦拭目镜、物镜，再将俩个物镜必须叉开，使镜筒降至最低；第三压片夹整齐；最后反光镜树立，擦拭镜身。
八、整理完后用抹布擦拭试验台
基础教育课程改革已在全国各地如火如荼地进行着, 生物学科亦然。我国基础教育改革的重要目的是由应试教育向素质教育转变。素质教育是以提高人的素质为目的教育, 是一种全面发展的教育, 涉及思想道德、文化科学、心理、身体健康、劳动技能等方面。因此, 在生物教学中, 应该特别注重对学生实验操作能力的培养。据调查发现, 现在城乡结合部初中生物实验操作普遍存在的问题是学生实验操作能力差, 科学文化知识与实验技能脱节, 矛盾十分突出, 现状令人担忧, 亟待解决。
二、调查对象
在本校选取七、八年级各二个班, 共四个班的学生作为调查对象。受调查学生共200人, (问卷回收率100%) 。此外, 被调查的四个班中每班随机抽取3名学生进行个别访谈。
三、调查方法
1. 问卷调查
自编的调查问卷共34题, 其中1—31题每个问题都有三个或四个供选择的答案, 相应的附有A、B、C、D可供选择的英文字母, 但只能选择一个答案。选择题共分四大类, 分别是兴趣、设施、重视、教师的配备。
2. 个别访谈
在问卷调查的基础上对各班随机抽取3名学生进行个别访谈。我们拟定了统一的提纲, 并作详细的访谈记录。《学生访谈记录》包括四个问题, 主要是对问卷调查中的某些问题作进一步的深入询问。
四、调查结果与现状分析
1. 学生对生物实验课的兴趣
(问题:你喜欢上生物实验课吗?)
从总体上看, 受调查的学生有72%是喜欢生物实验课的, 俗话说:兴趣是最好的老师。
(问题:课文中的学生实验, 你们都能动手操作了吗?)
从表中看, 情况并不乐观, 能自己操作实验的只占17.5%, 54%的学生只是偶尔能操作, 28.5%的学生从不能操作。大部分学生喜欢上生物实验课, 不明白做实验的目的, 不会操作, 更不会设计探究性实验, 导致该结果的原因是多方面的。
2. 学校硬件设施
(问题:你觉得学校的生物实验室的设施齐全吗?)
从表中可知, 学校的实验仪器明显不够齐全, 数量不足, 使很多实验无法开出, 有的虽然能开出, 但分组人数过多, 大多数学生只是观看而无法动手操作, 因此, 实验器材的不足, 是导致学生实验操作能力偏低的另一个原因。
3. 教师对生物实验课的重视
(问题:你的老师对生物实验重视吗?)
从调查中可知, 由于很多学校没有专职的生物实验员和独立的实验室, 并且生物科不是中考科目, 因此很多生物教师上实验课时只是讲讲而已, 不给学生具体操作, 演示实验也不做, 这样学生的实验操作能力哪能提高呢?
4. 教师的配备情况
(问题:在实验过程中, 你的老师操作方法科学规范吗?)
从表中反映出66%的老师操作不规范。从调查中可知, 部分任课老师不是生物专业老师, 缺乏独立实验操作和指导学生做实验的能力, 这是导致学生操作能力差的另一个原因。
五、对策
生物实验操作能力
实验技能技巧
一、考查题目 ： 探究烟草浸出液对水蚤心率的影响
二、实验的方法：探究法
三、提出的假设是：如果烟草浸出液加入到含水水蚤的水中，水蚤的心率加快了，说明烟草浸出液对水蚤生命活动有影响。如果烟草浸出液加入到含水水蚤的水中，水蚤的心率没有受到影响，说明烟草浸出液对水蚤生命活动没有影响。
四、实验过程
1、实验用的水蚤的数量是10只，分成两组，一组为______组，另一组为______ 组。
2、观察水蚤的心率的方法是______，来确定水蚤的心率。
3、为了避免实验的误差，我们可以采用______来确定。
五、实验的结论是__________________________。
2013-2014学年末八年级生物学科实验探究能力考查总结 为了更好的落实《全日制义务教育生物课程标准》，决定在2013-2014学年末，在八年级生物考试中加试学生实验探究能力考查。
一． 考查的题目：探究烟草浸出液对水蚤心率的影响
二． 主要考查的知识点有：
1、实验操作的规范性。
2、高浓度与低浓度烟草浸出液对水蚤心率的影响
三． 严格按照“镇安教研网”的《陕西省2008年毕业生实验操作考核
生物试题及评分标准》考查学生。分值：20分
四． 方式：考查时采取分组进行的方式，共62个学生，分成12组，每组5人，在课外进行。
五． 测试结果
经过综合评分，A等学生占96%，B等学生占2%，C等学生占2%。
六． 实验操作得分方面
可喜之处，大多数学校对生物不太重视，但考生实验操作的几个步骤完成的比较顺利，得分一般在7—10分，且满分较多。由于少数学生不重视；其考生得分一般在6分左右。
七．实验操作方面
（1）不注意实验操作步骤。有的考生把第二步和第三步搞颠倒了，导致很难得出实验效果。
(2)有些学生把结果写错的现象。在这个实验中，填写实验报告单，学生们都做的较认真。
本次考试中由于实验内容较简单，容易操作，因此绝大部分学生都能按要求完成实验，但仍存在一些问题，没有养成良好的实验习惯。在今后的学习当中多注重实验操作锻炼，对实验操作的要求绝不能放松。争取在下次考试中不再范类似失误，把成绩提高一个新台阶，为中考实验操作打下了基础。
熨斗九年一贯制学校
试题五 观察叶片下表皮的结构
学校：班级：姓名：
一、实验目的1、掌握显微镜的使用方法。
2、制作叶下表皮临时装片。
3、观察叶下表皮细胞、保卫细胞、气孔的形态结构特点。
4、掌握绘制生物镜像图的方法。
二、检查实验用品
1、实验用品：新鲜菠菜、蚕豆或芥蓝叶片，显微镜，载玻片，盖玻片，纱布，镊子，滴管，吸水纸，刀片(使用时请注意安全)，清水。
2、检查实验用品是否完备，举手向监考老师示意，经老师同意后开始实验。
三、实验步骤、结果
1、调试显微镜。
2、制作叶下表皮临时装片。
3、用低倍镜观察临时装片。
4、实验结果：绘制叶下表皮细胞、保卫细胞和气孔的镜像图并标出各结构名称。
关键词：初中生物教学；实验操作；培养；观察能力
在初中生物教学实验操作中培养学生的观察能力是新课标的要求，教师一定要在为学生讲解生物知识的过程中培养学生的观察能力。生物这门自然学科是以实验作为基础的，其中学生学习生物知识的必要技能就是观察能力，培养学生的观察能力也是提高学生思维能力、记忆能力、想象能力的基础，同时有利于开发学生的智力。
一、掌握实验的一些基本操作
学生在观察生物实验之前，一定要掌握有关的操作技术，了解有关的操作规程，以确保观察实验的顺利进行。比如，学生在操作显微镜的时候，一定要学会取出显微镜的动作（左托右握），放置的位置（桌偏左一些），看显微镜的过程中两只眼睛一起睁开，并注意调好镜头与对光。与此同时，学生还需学会显微镜有关设施的操作技巧，比如，制作装片与切片等。因此，在初中生物教学实验操作中，需要学生掌握一些基本的操作才可以顺利地完成实验，这就要求学生加强练习，学会有关的技术，否则，就达不到应有的实验效果。
二、指导学生由整体到局部进行观察
教师一定要指导学生从整体上观察实验，掌握事物变化发展的整个过程与每一个方面，只有这样，才可以让学生真正地认识事物。比如，在观察根尖与根毛结构的时候，指导学生首先观察根的形态，明确侧根、主根、须根系和直根系的特点，然后再使用显微镜与放大镜观察根尖的构造、根毛的位置，了解根毛区、伸长区、生长点与根冠的细胞构造。从局部进行观察也就是细微处的观察，这就需要学生在观察时抓住事物的本质特征，观察事物之间的细小差别，进而了解事物每一个侧面的特性。比如，教师在指导学生观察花和解剖花的时候，先要让学生观察桃花与水稻花，教师可以提问学生以下问题：为何在桃花绽放的时候会有很多蜜蜂来授粉呢？为何在水稻花绽放的时候却很少看见有蜜蜂来授粉呢？教师的提问为学生了解虫媒花和风媒花的不同特点提供了依据。紧接着教师指导学生解剖这两种不同类型的花，让学生认真观察桃花子房基部的突起，桃花的蜜腺，搞清楚花蜜是如何产生的。而学生在观察水稻花的时候却没有发现这种蜜腺，从而让学生明白了风媒花和虫媒花的不同特点，最终使学生搞清楚了这两种花的本质属性。
三、重复性的观察
为了确保观察结果的准确性，需要对实验进行重复性的观察，不然，就不能够确保实验结果的可靠性，教师一定要指导学生以科学和严肃的态度来观察实验。比如，在鼠妇生活在光的影响下的实验当中，鼠妇的数量需要至少为10只，数量过少是不够科学的，具有一定的偶然性。与此同时，还需要指导学生进行重复性的观察，得出实验数据的一个平均值，最后经过分析得出结论。
四、动态性的观察
初中生物实验是以生物作为观察对象的，而生物是不断生长的一个生命体，观察生物实验需要一个动态化的过程。因此，在初中生物教学实验过程中需要打破课时的制约，指导学生进行长期的观察，并要求学生做好记录，进而获得更加准确和科学的观察结果，更加有效地培养学生的观察能力。比如，对种子萌发实验的观察，教师需要指导学生进行长时间的观察，以获得一个理想的实验结果。
综上所述，在初中生物教学实验操作中培养学生的观察能力需要一个比较长的时间，教师一定要在初中生物教学中注重培养学生的观察能力，以取得理想的教学效果。
参考文献：
［1］吴学刚.在生物实验教学中培养学生的观察能力.新课程：教师版，2011（06）.
［2］邓桂秋.初中生物实验课培养学生观察能力浅析.读写算：教育教学研究，2010（02）.
《全日制义务教育生物课程标准 (实验稿) 》明确要求学生正确使用显微镜等生物学实验中常用的工具和仪器, 具备一定的实验操作能力, 初步具有生物学实验操作的基本技能, 一定的科学探究和实践能力。生物是一门实验性科学, 平时注重实验教学对培养学生学习生物兴趣、提高生物成绩是至关重要的, 因此作为一名生物教师, 除了具有渊博的学科知识之外, 还应掌握熟练的实验操作技能。
为了促进学校加强初中生物实验教学, 开足开齐初中生物实验, 让教学资源充分发挥效益, 提高教学质量, 培养学生的实践能力和创新精神, 在高淳县教育局领导支持下, 县教育研训中心和县技术装备办合作举办了初中生物实验技能培训和比赛, 准备选拔优秀初中生物教师及实验员参加省、市实验技能大赛。笔者有幸被聘任为本次实验技能培训指导教师, 并对培训过程中出现的一些现象进行了思考。
一、生物实验操作应科学规范
在培训中, 笔者详细介绍了实验操作的重点和难点, 在进行实验操作时一人一组, 每个实验都要求教师独立完成, 力求理论与实践相结合, 同时, 结合我校生物实验教学中的困惑与他们面对面进行了交流。培训中, 教师们听得很认真, 边听边记笔记, 非常好学。动手实验中, 虽然实验现象较明显, 但实际操作中出现了一些不规范的现象。如用滴管滴加碘液时, 有部分教师将滴管伸进了试管, 水浴加热时, 部分教师将温度计碰到烧杯壁或将温度计随便放在烧杯底, 等等。教师都受过高等教育, 应该掌握了基本的实验操作, 在理论上知道应该怎样操作, 但在实际操作时不经意间出现了一些不规范的操作。究其原因:一是平时实验做得少, 实验操作有些生疏;二是思想上对规范操作重视不够, 有随便、应付之嫌。教师的一言一行, 一举一动, 学生都喜欢模仿, 不规范的操作将会给学生带来不良影响, 因此, 生物教师一定要时时处处为学生做出榜样, 凡是教师要求学生做到的, 自己首先要做到, 教师在做演示实验时应科学规范。
二、生物实验需要教师注重创新
教师虽然开展了实验教学, 但由于部分实验因为种种原因出现现象不明显甚至实验不成功等结果, 教学中倍感困惑。笔者认为, 实验教学前一定要对实验进行深入细致地研究, 分析在实验中可能存在或发生的问题, 做好充分的准备, 有条不紊地引导学生实验, 出现意外现象影响正常实验教学时要冷静对待并同学生一起共同探究。如在“探究光对鼠妇生活的影响”时, 适值阴雨天, 光线较暗, 光线对鼠妇的影响很小, 学生普遍感到困惑, 笔者提示学生光线偏暗, 怎么办呢?当时我们是用装鞋子的纸盒来做实验的, 有学生想到把鞋盒举高了对着教室内的日光灯, 鼠妇纷纷爬向阴暗的角落, 现象非常明显。还有的学生想到可以用手电筒来增加亮度。这充分说明了学生在实验过程中会受到激发产生灵感和创新。
又如在“观察蚂蚁的运动器官和步伐”时, 课本指导是将蚂蚁放入纸盒中, 在纸盒的一端放置一些糖, 然后观察蚂蚁的步伐。实际操作中, 蚂蚁的爬行速度较快, 足细小, 学生难以观察到蚂蚁的步伐。笔者提示学生怎样才能使蚂蚁的步伐慢一些?引导学生讨论如何让蚂蚁的步伐慢下来, 他们很快联想到人在行走时因为路面、坡面、负重、风吹等情况行进速度会受到不同程度的影响。如何改进实验让蚂蚁的步伐慢下来, 经过学生的多次探究和师生交流, 我们总结了5种方法: (1) 先在玻璃板下垫上一张白纸, 将30%的蔗糖溶液均匀地涂在玻璃板上, 然后撒上薄薄的一层粉笔灰, 再将蚂蚁放上去, 用放大镜来观察。 (2) 将宽条的透明胶展平, 透明胶有粘性的一面朝上, 透明胶下垫上一张白纸, 撒上薄薄的一层粉笔灰, 再将蚂蚁放上去, 用放大镜观察。 (3) 将湿润的烧杯正放, 将蚂蚁放入烧杯底, 用放大镜观察在烧杯壁上爬行的蚂蚁的步伐。 (4) 将一些较大的米粒放入纸盒, 纸盒底事先垫上一张白纸, 用放大镜观察搬取米粒的蚂蚁的步伐。 (5) 将蚂蚁放在一张白纸上, 边用嘴均匀地吹气, 减缓蚂蚁的步伐, 边用放大镜来观察。在实验教学中, 教师要放手让学生动手实验, 在实践中发现问题、分析问题、解决问题, 体验科学探究的乐趣。实验的多变性又常常促生灵感的闪现, 教师要敏锐捕捉那些稍纵即逝的智慧火花, 准确把握“意外”带来的教育契机, 将使实验教学出现精彩的生成。实践也证明, 学生主动参与实验设计、操作过程, 获得具体的经验, 不仅有利于学生主动完成知识构建, 深刻理解和掌握所学内容, 而且能促进学生主体性 (自主性、主动性、创造性和社会性) 的发展。
三、生物实验教学需要重新审视
培训过程中, 从教师们的口中得知, 部分学校生物实验室虽然配备了实验员, 但不是生物专业实验员。这是一件非常糟糕的事情, 说明学校领导在人事安排上不谨慎。笔者认为, 非专业教师做生物实验员, 首先, 对实验器材没有感情, 不会深入了解和钻研器材的性能, 在生物实验方面无法和生物教师进行专业交流;其次, 无法做到专业地协助生物教师开展生物实验教学。另外, 很多学校实验器材不足, 甚至配备不全, 培训中有些仪器教师没有在他们学校见过。高淳县不同地区的学校在规模、环境、师资、资金以及体制方面都存在一定的差异, 教师应因地制宜, 积极发挥现有设备的作用, 提高生物教学质量。同时也应鼓励学生和教师一起充分利用身边廉价的器具和材料, 设计富有创造性的实验和实践活动。例如, 在“观察细胞中的叶绿体”时, 生物教科书建议用黑藻或绿色植物的叶片, 高淳县地形东高西低, 分为圩区、半山半圩、山区3大类, 我校处于半山半圩, 靠近固城湖, 取用固城湖中的黑藻比较方便, 观察黑藻细胞中的叶绿体非常明显。但对于山区的中学来说, 要想找到黑藻确实困难, 学校生物教师及时查找资料和动手实际操作, 寻找山区绿色植物中含叶绿体较多的植物。笔者建议他们首先寻找校园内的绿色植物的叶片, 如香樟、黄杨、桂花、银杏等植物的叶片, 发现细胞中的叶绿体不明显;其次走出校园寻找田野里的绿色植物, 青菜叶中的叶绿体较明显;另外经查找资料得知, 每平方毫米的蓖麻叶含有3×107~5×107个叶绿体。于是他们选用当地大片种植的蓖麻叶来观察, 同样观察到了非常明显的叶绿体。
四、利用生物实验操作考查促进实验教学
目前, 南京市初中物理和化学学科有实验操作考查, 但初中生物学科没有实验操作考查。培训过程中, 教师反映部分学校很少做实验, 很多实验只是“纸上谈兵”, 仍然能在南京市初中生物学业水平测试中取得不错的成绩, 由此直接导致部分教师和学生对实验不认真做甚至不做。笔者认为从笔试中很难考查实验教学质量, 生物教学应着眼于培养学生终身学习的愿望和能力, 体现义务教育阶段生物课程的普及性、基础性和发展性。南京市从2008年开始对全市初中毕业生进行物理和化学两门学科实验操作考查, 考查结果供招生学校参考。为切实
参考文献
[1]汪忠, 刘恩山.生物课程标准解读[M].北京:北京师范大学出版社, 2002
[2]汪忠.生物[M].江苏:江苏教育出版社, 2007
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