对银杏果的记忆作文（精选11篇）
儿时的我忙着在我家后院的银杏树坛，一堆堆厚厚的黄叶下搜寻银杏果子，我们叫它白果。找着一个就用脚把它上面的果肉蹭去，露出里面白白的硬壳。只要果肉一破开，它的臭味就像汁液一样的流溢出来，在空中徐徐的淌着。事实上这种臭味并不刺鼻，反而带一种土地的香味，和一种成熟的味道。忽来一席凉风，竟有一种碧云天，黄叶地；秋色连波，波上寒烟翠 一派落叶纷飞的蝶恋美。
为了了解白果的功效，还特地上网查了些资料，看到一个有趣的`故事：在我国南方传统婚俗之中，母亲在送新嫁娘上花轿前，往往会塞给女儿几粒白果。只塞几粒并非因为小气，而是由于白果微毒，不宜多食。而为什么一定要是白果，除了百年好合的吉祥口彩之外，更因为白果有缩尿之效减少新娘在乘轿途中下轿解手的尴尬。可见白果的医学功效在中国古代传统中就得到了很好的体现，古人就已经能够了解白果的中药性情，合理运用到自己的平常生活中。
如果说烤白果尚属小吃，那么用白果制成的各种菜肴之中。在很多医书中都有关于银杏的记载，认为白果性平、味苦涩、有小毒。中国人摸索出了让它吃起来美味且安全的方法去壳、焯水、除芯诸如腐竹白果粥、白果炖鸡、无芯糖白果、白果粽子、白果腊八粥、白果莲子汤、鸡蛋白果豆腐、白果羹，都是在民间代代相传、风味各异的美食。加入白果烹调的菜肴，食用时味道特别醇厚，可以及时消除肉食中时的油腻感，起到调节胃口的作用。由此白果药食两用的功能便会被发挥的淋漓尽致。但是万万记住不能因为白果有益人的功效，特别是生食白果，一定要注意食量，慎之又慎，否则美好的食物会变成令人畏惧的灾物。
1.1 仪器与试药:
(1) 高效液相色谱仪。 (2) 微量注射器。 (3) 分析天平。 (4) 水浴锅, 分析漏斗蒸发器。 (5) 甲醇。 (6) 蒸馏水。 (7) C18色谱柱, (8) 银杏总黄酮醇苷, 萜类内酯对照品。 (9) 银杏叶。 (10) 甲醇-40%磷酸、五氧化二磷、醋酸乙酸等。11微孔滤膜 (0.45 mm) 有机组。
1.2 总黄铜醇进行含量测定
1.2.1 利用高效液色谱条件与系统适用性进行试验:
用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂, 以甲醇-0.4%磷酸溶液 (50∶50) 为流动组, 检测波长为360 nm。理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于2500、山奈素峰与异鼠李素峰的分离度应>1.5[1]。
对照品溶液的制备:分别精密称取五氧化二磷干燥的槲皮素, 山奈素, 异鼠李素对照品, 各加甲醇制成每1 m L含槲皮素0.03 mg、山奈素0.03 mg、异鼠李素0.02 mg的溶液作为对照品溶液。
供试品溶液的制备:取银杏叶20 g, 除去杂质精密称定, 研细取约相当于总黄酮醇苷19.2 mg的粉末, 精密称定, 精密加入甲醇20 m L称定重量超声处理20 min, 放冷。再称定重量, 用甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液10 m L, 置100 m L锥形瓶中, 加甲醇10 m L, 25%盐酸溶液5 m L, 摇匀, 置水浴中加热回流30 min, 迅速冷却至室温转移至50 m L量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 用微子 (滤膜0.45 mm) 滤过, 去滤液, 既得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 m L注入液相色谱仪, 测定。分别计算檞皮素, 山奈素, 和异鼠李素的含量, 测定出总黄酮醇苷的含量。
1.2.2 用高效液色谱仪再对萜类内酯含量进行测定。
高效液色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂以正丙醇-四氢呋喃-水 (1∶15∶84) 为流动相, 用蒸发光散射检测器检测, 理论塔板数按白果内酯峰计算应不低于2500, 白果内酯峰与银杏内酯C峰的分离度应>1.5。
对照品溶液的制备:分别精密称取白果内酯, 银杏内酯A银杏内酯B和银杏内酯C对照品适量加甲醇制成每1 m L含银杏内酯A 1 m L, 银杏内酯B 1 m L银杏内酯C 1 m L的混合溶液既得。
供试品溶液的制备:取银杏叶20 g, 除去杂质, 精密称定, 研细, 取相当于总黄酮醇苷的76.8 mg、萜内酯19.2 mg的粉末, 精密称定。精密加入甲醇50 m L称定重量, 超声处理20 min, 放冷再称重量, 用甲醇补足减失重量, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液20 m L回收甲醇残渣加水10 m L, 置水浴中温热使溶散加2%盐酸溶液2滴, 用乙酸乙酯振摇提取4次 (15、10、10、10 m L) 合并提取液, 用5%醋酸钠溶液20 m L洗涤, 分取醋酸钠液, 再用醋酸乙酯10 m L洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液, 用水洗涤2次, 每次20 m L, 合并水洗液, 用醋酸乙酯10 m L洗涤, 合并醋酸乙酯液, 回收醋酸乙酯至干, 残渣用丙酮溶解并转移至5 m L量瓶中, 加丙酮至刻度, 摇匀, 既得。
用测定法:分别精密吸取对照品溶液10、15μL, 供试品液10μL, 注入液相色谱仪, 测定, 用外标两点法对数方程分别计算白果内酯, 银杏内酯A银杏内脂B银杏内酯C的含量。既得。本品每片含萜类内酯以白果内酯 (CH15H18O8) , 银杏内酯A (C20H24O9) 银杏内酯B (C20H24O10) 银杏内酯C (C20H24O11) 的含量之和记。
2 银杏叶属性
2.1 银杏叶属纲:
银杏叶属银杏纲Ginkgopsida植物为落叶乔木, 枝条有长短枝之分。单叶, 扇形, 先端二裂, 叶脉二叉状分枝。花雌雄异株, 精子具多纤毛。种子核果状[2]。
2.2 银杏叶属科:
银杏叶属银杏科Ginkgoaceae:它的形态特征是落叶乔木, 营养性长枝顶生, 叶螺旋状排列, 稀疏, 有较长的叶柄:生殖性短枝侧生, 叶簇生。叶片扇形, 2裂。雄球花葇荑花序状, 雄蕊多数具短柄, 花药2室:雌球花具长柄, 柄端有两个杯状心皮, 又称珠托, 其上各生一直立胚珠, 长一个发育。种子核果状:外种皮肉质, 成熟时橙黄色:中种皮白色, 骨质:内种淡红色, 纸质。胚乳肉质。
3 性状鉴别
叶片多皱折或破碎, 完整呈扇形, 长4~8 cm, 宽5~10 cm, 上缘有不规则波状缺刻, 有的中央凹入, 基部楔形, 叶脉细密, 为多数二叉状平行脉;叶柄长2~7 cm。纸质, 易纵向撕裂。气微, 味微涩。以色黄绿、完整者为佳。分布:仅有一属一种和几个变种, 产于中国及日本。
4 化学成分
银杏叶的有效成分为黄酮类:其中有3种双黄酮: (1) 单黄酮类主要为槲皮素, 山奈酚和异鼠李素及它们形成的苷类物质。 (2) 双黄酮类化合物主要有银杏双黄酮、异银杏双黄酮、去甲银杏双黄酮、穗花衫黄酮、金松双黄酮及1-5甲氧基去甲银杏双黄酮等。 (3) 茶素类主要有儿茶素、表二茶素、没食子酸儿茶素和表没食子酸儿茶素等[3]。除此之外, 还有苦味质, 酸性化合物, 萜内酯主要有银杏内酯A、B、C、M、J和白果内酯等。
5 银杏叶的药理作用
(1) 对心血管系统的作用:从银杏叶中提取的黄酮醇对豚鼠离体心脏灌流能引起冠状血管扩张;注射给药对豚鼠后肢血管亦有扩张作用。叶的粗提物 (每毫升含总黄酮甙4.263 mg) 可对抗肾上腺素所致离体兔耳的血管收缩作用, 总甙的作用较弱;对麻醉兔肌肉注射临床用量的20~40倍, 对血压、呼吸均无影响。 (2) 对脑血管系统的影响:叶的提取制剂口服或静脉注射, 可使帕金森病患者的脑血流量增加, 改善脑的营养[4]。银杏叶制剂 (CBE) 能增加脑血流量, 对脑细胞缺血缺氧, 脑水肿有保护作用。 (3) 对血小板聚集, 血栓形成的影响:银杏内酯可浓度依赖性地仰制血小板活化因子 (PAF) 诱导的血小板聚集, 但对花生四烯酸及adp诱导的血小板聚集几无影响。 (4) 对呼吸系统的影响:槲皮素具有良好的祛痰作用, 能促进痰液分泌和气管纤毛运动β-谷甾醇有镇咳祛痰的作用。 (5) 镇痛:皮下注射银杏叶总黄酮可显著减少醋酸所致小鼠扭动次数, 皮下注射和侧脑室注射银杏叶总黄酮均可显著提高小鼠热板法祛痛。
6 银杏叶的临床运用
银杏叶可广泛用于帕金森病、脑血管病、冠心病、心绞痛、高胆固醇血症等症的治疗[5,6,7,8]。
7 总论
本实验通过银杏叶高效液色谱法, 所建立的基于高效液相色谱法进行化学分析同时, 测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷和萜类内酯的含量及鉴别应用, 具有快速、高效、简单、准确的特点, 该方法为提高银杏叶提取物及其制剂的质量控制水平, 准确全面地评价其内在品质提供了有力的技术数据。保证了疗效使临床用药更加安全有效。
摘要：目的 研究银杏叶片的有效化学成分, 探讨有效化学成分的含量测定及鉴用。方法 银杏叶利用高效液色谱法, 分别精密吸收对照溶液与供试品溶液各10 m L, 注入液相色谱仪进行含量测定, 分别计算总黄酮醇苷和萜类内酯含量, 对银杏叶进行鉴用。结果 经高效液色谱法进行化学分析, 分别测定黄酮类和萜内酯类化合物。黄酮类化合物根据其结构可分为3类:单黄酮类, 双黄酮类和儿茶素等。儿茶素主要有儿茶素, 表儿茶素, 没食子酸儿茶素, 萜类酯类主要有银杏内酯A、B、C、M、J和白果内酯等。银杏叶可以鉴别并具有多种药理作用。结论 通过高效液色谱法可对银杏叶中含有效治疗作用的成分含量进行化学分析测定。银杏叶可鉴别并广泛应用于临床。
关键词：银杏叶,色谱测定,鉴用
参考文献
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变老的过程中最让人忧虑的其中一个方面是健忘。我们可以容忍皱纹、松垮的皮肤和疼痛，但第一次忘记别人名字的时候，我们就会想到可怕的老年痴呆症。当然，大多数人不会紧接着就患上这种令
人生畏的疾病，但他们很可能得忍受一些记忆的丧失，这是进入老年后会发生的。我们能做些什么？我们能否吃些什么药改善记忆？
银杏树已在世上存活了2000多万年。这种植物在18世纪由中国引入欧洲，成为很受欢迎的装饰用树，也当做药物使用。制药商首先采摘银杏的叶子，干燥，磨成粉末，然后用丙酮水提取粉末中的物质，溶液挥发后，剩余物会被压制成很多药片。这种剩余物的有些成分可能具有有益效果：它们可能促进血液向脑部循环。临床研究证实，银杏提取物可扩张血管，促进动脉和毛细血管中的血液流动，其中的两类复合物，即黄酮类复合物和萜类复合物，在这方面比较有效。不过，就像大家预料的那样，银杏剩余物中包含多种复合物，其成分可能因对银杏处理方式的不同而不同。所以若想将银杏作药用，它就必须被标准化。换言之，我们需要知道我们服用的是什么活性成分，以及它们的分量大小。
好消息和坏消息
现代化学使我们能够进行这种标准化，所以标准药片可以买到。实际上，在德国这种药早就有了，银杏药物在那里是畅销药。生产商将这种药标注为含有24%的黄酮类复合物和6%的萜类复合物。检测银杏效果的绝大多数研究中所使用的就是这种药。令我们感兴趣的是这些研究的显示结果。首先是好消息：一些研究证明银杏提取物可改善记忆。然后是坏消息：这种改善作用不大。
目前结果最好的也许是那个有309位患者参与的研究，这些患者们要么患有老年痴呆症，要么因中风记忆受到了影响。患者被随机分为两组。一组摄入120毫克银杏制剂，另一组摄入对照剂。大约有三分之一服用银杏制剂的患者，在一些测试中显示出有所改善，这一结果明显。最好的结果出现在记忆受损最轻微的患者身上，这说明银杏也许在延缓痴呆上有作用。还有一些草药支持者认为，银杏可以改善耳鸣和头晕，但对照研究没能证明这一点。
试用银杏补充剂有没有风险？可能性看起来很低。尽管银杏可能导致轻度胃肠道不适、头痛和过敏反应等副作用，但这些副作用的程度和试验中对照剂组的人相同。银杏唯一令人忧虑的一点是，它会阻碍血液凝结。这就解释了科技文献中报告的内出血的严重案例。当然，成百上千万的患者中出现三例，其比例是微不足道的，除非你碰巧属于这少数派。这也意味着银杏会给正服用稀释血液药物（如阿司匹林、华法林）的人带来危险。服这类药的人应在服用银杏补充剂之前，咨询精通银杏用法的医生。
上文提及的研究是针对已经因疾病出现严重健忘的病人，那么用银杏能否缓解普通的因年龄造成的健忘？如果你看银杏的电视广告，它们肯定会让你相信，银杏正是改善所有人记忆的东西，因为家庭主妇们声称她们能够更好地记住自己的购物单；学生们暗示自己在考试中表现更好了。不过，这些说法缺乏有力的证据。在一项研究中，8位服用大剂量（600毫克）银杏的女性感到记忆力有所改善，但这在其他人身上没有效果。在另一项典型的研究中，每日服用120毫克常用剂量银杏达3个月的2了名受试者，在记忆测试中每13人中仅有1人的表现比另27个服用对照剂的受试者表现好。所以银杏的基本情况并不令人欢欣鼓舞。虽然有测试显示它可以使老年痴呆患者有略微改善，但效果太微小。想试用银杏的人应当只考虑服用标准的银杏产品。找标签上写有类似于“效力24%”的药片，记得每天服用，因为它很可能一个月才见效。
更给力的改善记忆法
其他的改善记忆的有效物质确实存在，而它们还没像银杏那样被讨论过，而且它们缓解健忘的希望更大。磷脂酰丝氨酸就是其中之一，它存在于所有神经细胞的细胞膜，在信息传递中显示出重要作用。在一项对149名年龄在50到75岁的身体正常的志愿者的研究中，一半志愿者在12周里每天服用300毫克磷脂酰丝氨酸，另一半服用对照剂。那些服用磷脂酰丝氨酸的人在记忆和回忆姓名、面容和数字方面显示出巨大改善。比服药更具吸引力的可能是一个日本的研究，研究人员发现，日本米酒中的某种东西，可抑制大脑中的一种与记忆损伤有联系的酶。这一研究我不太敢肯定。我有几位大学里的朋友曾经很喜欢喝米酒，可我记得他们第二天早上就不记得前一晚狂饮米酒的事了。
说到大学生，一些研究表明，气味可以刺激考生的记忆。研究人员让耶鲁大学的学生想象着巧克力的味道，写下40个常见形容词的反义词。研究人员未告诉他们，他们第二天会被要求做同样的练习。随后研究人员重复了实验，这次有些学生会在写字的过程中闻到巧克力味，有些在回忆时闻到，有些在两个过程中都闻到，有些在两个过程中都闻不到。那些做练习的过程中闻到的和在回忆时闻到的学生，做得明显要好。巧克力味很宜人，但不是必需的；甚至樟脑丸都有效，只要在做练习和回忆的过程中出现的是同一种气味。学生们能否受益于在不同的科目用不同的气味？在考物理时用苹果味，在考化学时用桃子味？在训练飞行员
应对防空紧急情况时，使用气味联想怎么样？这种可能性会让人脑子眩晕。
另一个改善记忆的要素是锻炼。不错，身体需要锻炼，大脑也一样。填字游戏、桥牌和国际象棋都很不错。我希望，阅读令人兴奋的科学信息也不错。记住你刚才读过的东西，会给你提供大剂量的脑部体操。感觉现在我几乎已经把记得的关于健忘的所有事都告诉你们了，我感觉我以前知道的更多。也许我需要一些银杏药片，但我觉得我不会记得去吃它们。
怎么是正常呢?有时是一本简朴的宝书。有时是一件美丽的衣服，有时是你做的一件最自豪的事情，有时是一份发自内心深处爱的记忆。
好久没看到雪了，一粒粒白色的雪花从天而降，落到树上树变白了，落到屋顶上，屋顶变白了，落到地上路边白了，家前的湖也结了一层薄冰，天地一片白茫茫年幼的我，在雪地里快乐的玩耍，刨雪堆，吃雪，堆雪人，沉浸在童年的乐趣之中，突然我的身体变得僵硬，眼前一黑，口吐白沫倒在了地上。
当我醒来的时候，背一个人背在背上，模糊的.看见了外婆的侧脸，是外婆在背着我，年过花甲的他还在雪地里没命的跑着。尽管天这么寒地这么动，她的脸颊上还是留下了一粒粒豆大的汗珠，外婆见我醒了，开心又着急的说，娃儿，你终于醒了，你可是急死我了，刚从屋里出来就看到你这个样子哎哟，你再坚持一会儿，马上就到医院了。(原创投稿 )
从家到医院一共也有三四公里，真无法想象外婆是怎样背着一个，有他一半体重的小孩在冬天里飞跑。
到了医院，外婆连一把汗都不接，把我放在凳子上，就去挂号泡了后，他坐到了旁边才呼呼的喘气外婆见我身体直打哆嗦啊，话也不说的就把他的外套脱下，披在我的身上，把那双长满老茧的手在嘴里吹了水，拿起我的手来回的搓着，边搓边问，怎么样，好点了没?以后可别这样子了，其实外婆就穿了两件衣服，里面的毛衣早已经湿透了，十分冰冷，我说道，外婆，您穿上吧，外婆笑笑说，外婆不冷，这时我再也忍不住了，泪水流了下来，鼻子酸酸的，为了不让外婆担心，趁他专心的为我取暖，我赶紧拭干了眼泪。
秋天，银杏树上的叶子都变成了金黄色，就像穿上了一件金色的外衣。远远望去，到处都是一片金黄金黄的景象。
树上的叶子都是伞形的。看，这些树叶像一把把金色的小伞，那么精致，它们是秋天精心雕琢的一件件精湛的艺术品。一阵风儿吹来，叶子都纷纷地落下了。树叶就像一只只金色的蝴蝶随风飘荡。有的叶子落到了水里，变成了一只只金色的小船，在小河里畅游。这个秋天真有趣啊！
瞧！那些银杏果也成熟了，颜色也从绿色变成了白色。出于好奇，我摘下一颗果子，盯着看了半天，发现它的形状和花生很像，但大小只有一颗葡萄那么大。银杏果的外皮是白色的，果肉呈橘黄色的外皮是皱巴巴的，茎呈褐绿色。银杏树上每根枝条都有很多的银杏果。远看就像无数串橘黄色的小糖葫芦串在一起，剥开皮儿，一股跟榴莲差不多的臭味从果肉中冒了出来，里面露出来白色的果核，形状是两头尖尖的，中间鼓圆。咬开果核，就是果仁了，果仁有一层白色的衣皮，刮去这层皮，便是果仁，闻起来居然还会有一点淡淡的清香呢！
不是愁，但依旧还是出了门。想散散步，走着走着便不知其路。曲径幽深，就顺着小路而行。入眸征住，漫天的金黄飞舞，天空好像都镀上了一层金。舞动身姿的树又将地上铺上了一层银杏叶，稀疏的让人无从下脚。不自觉的就走进来这幅画卷，何奇美丽!
是谁留下了这幅画?画中的我望着树，树倒有些年岁了，只是不知该从何说起，我两只手都抱不过来。密砸砸的枝条被风一吹便沙沙的响，树叶子便飒飒地落下。又好似千灯许愿的孔明灯，站满了整个天空。是风的追求将它们带向天空，树还是站在那里没有追不挽留。
我站在一片黄金中，竟兀自笑了起来。踏过一地箔金，含笑而行。不是风的追求，也不是树的不挽留。而是大地的呼唤，让我倒在了一堆金箔中。
画中意向不明，人月何曾有过此等好风景?大概是在心上才留有此意境。
自然风光无限，既使风停了，叶落尽了，树枝光溜溜的一丝不挂。但我心有好风景，再不怕风景异。
1 材料与方法
1.1 实验材料
实验动物:40只SD雄性小鼠,体重18~22 g,购自三峡大学实验动物中心。主要试剂:银杏内酯购自宜昌康正药业有限公司(规格:2 ml/支,批号:1408143),酒精度42%(V/V)稻花香白酒,湖北稻花香酒业股份有限公司,ALT、AST检测试剂盒,MDA、SOD试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司,全自动生化分析仪(迈瑞BS-350,中国迈瑞公司),离心机(TG16-WS,上海卢湘仪公司)。
1.2 方法
1.2.1 动物分组
将40只SD雄性小鼠按体重随机分为五组:空白组、模型组、银杏内酯低、中、高剂量组,每组8只。
1.2.2 给药方法
空白组、模型组用生理盐水灌胃10 d,银杏内酯低、中、高剂量组小鼠分别采用银杏内酯0.4、0.8、1.6 g/kg灌胃,连续10 d,第11天隔夜禁食后,模型组和银杏内酯各组小鼠白酒灌胃0.016 L/kg(6.72 g/kg),空白组灌胃相同剂量的蒸馏水,3 h后处死。
1.2.3 血清AST、ALT及肝脏MDA、SOD测定
小鼠断头处死后,迅速心脏采血与分离肝脏,-80℃保存备用。心脏采血后,13 000 r/min,离心15 min,取血清,在全自动生化分析仪上检测ALT、AST。取肝组织0.3 g,观察其病理变化,将剪碎的肝组织在玻璃匀浆管中匀浆,再将匀浆液离心13 000 r/min,离心10 min取上清液,分装待用,分别按MDA、SOD试剂盒说明书操作,采用考马斯亮蓝法测定肝组织蛋白含量,通过计算可求出样品中的MDA的含量及SOD的活力。
1.3 统计学处理
所得实验数据采用SSPS 11.0进行分析,计量资料用(±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 小鼠血清AST、ALT水平比较
模型组血清ALT及AST水平高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.01),说明动物模型复制成功。银杏内酯各组小鼠血清中ALT和AST水平均低于模型组,随银杏内酯剂量增加,小鼠ALT、AST水平降低。银杏内酯中、高剂量组AST、ALT水平低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),见表1。
2.2 各组肝组织MDA、SOD水平比较
模型组肝组织MDA明显高于空白组,SOD明显低于空白组,差异均有统计学意义(P<0.01);银杏内酯中、高剂量组肝组织MDA均低于模型组,SOD均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),见表2。
2.3 肝组织病理学观察
光镜观察空白组肝组织形态学正常;而模型组可见紊乱的肝细胞索,肝细胞肿胀变性,胞质疏松,胞质内可见大小不一的脂肪空泡和水样变性,小叶内片状坏死,毛细血管及汇管区内胆管胆汁淤积,汇管区大量炎细胞浸润,以中性粒细胞和淋巴细胞为主,门管区有不同程度的小胆管增生,与正常组有明显差异;银杏内酯低剂量组与模型组无明显差异,而银杏内酯中、高剂量组表现为肝细胞点状或灶状坏死,甚至有的仅有肝细胞变性和点状坏死,肝小叶结构基本正常,与模型组比较有明显差异。
3 讨论
肝脏是酒精吸收后的主要代谢场所,对酒精发生生物转化作用。正常情况下,机体内存在活性氧和自由基清除抗氧化系统,自由基清除剂对维持机体的正常生命活动起着重要的作用。乙醇导致肝细胞损伤的机制较复杂,普遍认为抗氧化损伤、脂质过氧化损伤及免疫损伤等起主要作用[3]。乙醇作为一种强烈的氧化应激源,在代谢过程中诱生出大量的自由基,许多疾病的发生都与自由基的氧化破坏有关,是造成多器官、多系统损伤的重要机制之一[4,5]。过量饮酒,当超过机体抗氧化系统的清除能力时,氧化损伤难以避免,其中以肝脏的损伤最为严重[6]。
本研究采用酒精急性肝损伤模型,一次大剂量酒精冲击(42%V/V,0.016 L/kg)和禁食联合造模,其机制除与乙醇早期干扰肝脂质代谢外,还与禁食引起肝脂肪动员有关,引起糖原含量降低,加速糖异生合成脂肪[7,8]。ALT与AST主要分布在肝脏的肝细胞内,其升高的程度与肝细胞受损的程度相一致,在一定程度上可以反映肝细胞的损伤程度。本研究发现,预先给予银杏内酯进行干预,银杏内酯中、高剂量组和模型组比较,血清ALT和AST水平明显降低,可见银杏内酯对急性酒精性肝氧化损伤具有较强的保护作用。MDA是脂质过氧化反应的主要产物之一,MDA也是反映肝损伤程度的有效指标,其含量越高说明肝细胞膜脂质过氧化越强,受损越严重[9]。SOD为自由基清除剂,是生物体内清除自由基的首要物质,减弱机体的氧化应激状态。本研究预先给予银杏内酯进行干预,银杏内酯中、高剂量组和模型组比较,肝组织MDA明显较低,肝组织SOD明显较高,说明银杏内酯可提高肝组织SOD水平,降低MDA水平,从而有防治酒精性肝损伤的作用。
综上所述,不同剂量的银杏内酯可以降低小鼠血清中ALT、AST和肝组织MDA水平,并能提高SOD水平,结合光镜观察结果,说明银杏内酯起到抗脂质过氧化作用,对小鼠酒精性肝损伤有保护作用,为临床上银杏内酯用于防治酒精性肝细胞氧化损伤提供科学依据。
摘要：目的:探讨银杏内酯对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用。方法:将40只SD小鼠随机分为五组,分别为空白组、模型组及银杏内酯低、中、高剂量组。采用一次大剂量酒精灌胃制作小鼠肝损伤模型。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)来评估银杏内酯对小鼠肝脏的作用。结果:模型组血清ALT及AST水平高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.01),说明动物模型复制成功。银杏内酯中、高剂量组AST、ALT水平低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);模型组肝组织MDA明显高于空白组,SOD明显低于空白组,差异均有统计学意义(P<0.01);银杏内酯中、高剂量组肝组织MDA均低于模型组,SOD均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:银杏内酯对小鼠急性酒精性肝脏氧化损伤有保护作用。
关键词：银杏内酯,酒精,氧化损伤,保护作用
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关键词：茉莉酸；银杏；高温胁迫；生理特性
中图分类号： S664.301文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）06-0211-02
收稿日期：2013-09-16
基金项目：江苏农牧科技职业学院重点科研资助项目（编号：ZD1208）
作者简介：姜宗庆（1976—），男，江苏兴化人，博士，副教授，从事植物生理研究。E-mail：wheatjzq@126.com。茉莉酸类物质广泛存在于自然界，是1种植物生长调节剂。前人关于外源茉莉酸对植物的抗逆作用进行了不少研究[1-6]。茉莉酸能提高植物抗病、抗盐、抗渗透胁迫、抗旱、抗寒能力。目前关于茉莉酸与植物耐热性研究较少。江苏省是银杏大省，银杏集果用、叶用、材用、绿化、观赏于一体，是我省多用途经济生态型树种[7]。受全球气候变化的影响，全球异常高温天气 30 年内或更为频繁，这对银杏的生长十分不利[8]。开展银杏抗热机制研究对于充分开发利用银杏这一特色林业品种具有十分重要的意义。笔者研究不同浓度茉莉酸（JA）对高温胁迫下银杏盆栽苗叶片生理特性的调控效应，了解高温胁迫下银杏各项生理生化指标的变化，旨在为开发利用银杏资源提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料
供试材料为江苏农牧科技职业学院园林科技系苗木基地培育的3年生银杏盆栽实生苗。
1.2方法
采用单因素随机试验设计，茉莉酸浓度设50、100、150、200 μmol/L 4个水平，蒸馏水作为对照，共5个处理（表1）。2012年8月将在室外自然生长的一批3年生银杏盆栽苗移到温度为28 ℃/18 ℃（白天/夜晚），光周期为14 h/10 h，光照度为1 800 lx的智能温室中，对银杏叶片分别喷施不同浓度的茉莉酸溶液，对照喷施蒸馏水，直至叶片湿透为止。每天上、下午各喷洒1次，连续进行2 d，第3天将盆栽苗移至 （45±0.5） ℃ 的智能温室中高温胁迫4 h（光照度为 1 800 lx），空气相对湿度保持50%，土壤水分保持在田间最大持水量的65%～75%，每处理6株。处理完成后，立即测定电导率，并随机剪取叶片超低温冷冻后测定各项生理指标。
茉莉酸浓度单因素随机试验
处理 茉莉酸浓度（μmol/L）CK 0J150J2100J3150J4200
1.3测定项目
采用DDS-11A型电导仪[9]测定相对电导率。采用硫代巴比妥酸法[9]测定脂质过氧化产物（MDA）含量。采用蒽酮法[9]测定可溶性糖含量。采用考马斯亮蓝G-250法[9]测定可溶性蛋白含量。采用NBT光化还原法[9]测定超氧化物歧化酶（SOD）活性。采用紫外吸收法[9]测定过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性。
2结果与分析
2.1茉莉酸对高温胁迫下银杏盆栽苗叶片细胞膜特性的影响
在45 ℃高温胁迫下，不同茉莉酸处理下银杏叶片相对电导率从大到小依次为CK>J1>J2>J4>J3。J1處理下银杏叶片相对电导率与对照无显著性差异，J2、J3、J4处理下银杏叶片相对电导率均显著低于对照，表明适宜浓度的茉莉酸处理可降低高温胁迫下银杏盆栽苗叶片的相对电导率。随着茉莉酸浓度的增加，银杏叶片MDA含量呈先下降后上升趋势，不同茉莉酸处理下银杏叶片MDA含量由大到小依次为CK>J1>J2>J4>J3，J3处理最低，各茉莉酸处理下MDA含量均低于对照，J3处理与J1、J2处理下叶片MDA含量均差异显著，说明J3处理可有效降低高温胁迫下银杏盆栽苗叶片的MDA含量。
2.2茉莉酸对高温胁迫下银杏盆栽苗叶片渗透调节物质含量的影响
由表3可知，45 ℃高温胁迫下，不同茉莉酸处理下银杏叶片可溶性糖与可溶性蛋白的含量从大到小依次为CK>J1>J2>J4>J3，CK处理最高。J1处理下银杏叶片可溶性糖含量、可溶性蛋白含量与对照无显著性差异。J2、J3、J4处理下银杏叶片可溶性糖含量、可溶性蛋白含量均显著低于对照。由此可知，适宜浓度的茉莉酸处理可减少高温胁迫下银杏盆栽苗叶片的可溶性糖含量与可溶性蛋白含量。
2.3茉莉酸对高温胁迫下银杏盆栽苗叶片抗氧化酶活性的影响
抗氧化酶是生物体有效清除活性氧的重要酶类，被称为生物体抗氧化系统的第一道防线。由表4可知，不同浓度茉莉酸处理下银杏叶片SOD活性、CAT活性、POD活性从大到小依次为J3>J4>J2>J1>CK，各茉莉酸处理处理下银杏叶片抗氧化酶活性均高于对照。J2、J3、J4处理下银杏叶片抗氧化酶活性与对照均存在显著差异。抗氧化酶活性的增强提高了清除自由基能力，从而提高了银杏盆栽苗对高温的抗逆性。
3结论
研究表明，茉莉酸与植物抗逆性密切相关。本试验结果表明：茉莉酸预处理降低了银杏盆栽苗叶片的相对电导率，银杏叶片MDA含量随着茉莉酸浓度的增加呈先下降后上升的趋势，表明适宜浓度的茉莉酸处理可降低高温胁迫下银杏盆栽苗叶片的相对电导率及MDA含量。茉莉酸预处理降低了银杏盆栽苗叶片的可溶性糖含量及可溶性蛋白含量，通过降低渗透势来增强银杏渗透调节能力及吸水能力，维持银杏正常代谢水平，从而保护其膜系统，缓解高温胁迫对银杏的伤害。
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——题记
窗外的繁叶，早已是枯黄，殊不知它们为盛夏增添了多少，无尽的秋风是怎也抹不去的。天空中一缕晨曦透过，勾起我往日无数思绪，想起它的绚丽风景，修饰自然。湖泊中倒影依旧可见，却也难寻它的踪迹。仿佛穿上一层白纱想要掩饰自己的一切。
在不经意的瞬间，忽然飘落了几片金黄的叶子，它们好似小精灵一般飞舞着，落在了我的脚边，拾起一片，视珍宝一样将它小心翼翼地放在手心里，用手摩挲着它，金黄，那么太阳般的颜色闪着我的双眼，那棱角分明的形状有些扎人;接着又弯下腰来拾起另一片，仔细端详，它们是长得差不多，但又差很多，说不出的异同。
没错，同样是银杏树叶，但是为什么相同又不同呢?因为世界上是不会有两片一模一样的树叶的。
银杏树又被人称为白果树。因为银杏树上结出的果实是白色的，平常吃的开心果就是银杏树的果实—白果，白果的营养价值特别高，可入药有滋润止咳的作用。银杏的枝叶特别茂盛，发涩绿色。
一颗银杏树每长一年都会有一截痕，这样可辨认出这颗银杏树活了多少岁。我总是搞不懂人们为什么叫银杏树为“活化石”，就在老师的一堂课上，我才弄懂了：银杏树早在三千多年前出现的，就有那么一颗银杏已活了三千多岁了，经受三千年的风吹雨打。三千年前的东西早已成为“化石”但银杏树没有，还活着所以人们叫银杏树为“活化石”。
夏天，地里的银杏枝叶绿的可爱。密密麻麻的银杏树拥挤在田地里。茂盛的枝叶为农民们遮阳。
秋天，银杏叶都换上了金灿的衣服，慢慢的枝干上飘到地上，如金黄的蝴蝶在飞舞，美丽极了!
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
链脲佐菌素(Streptozocin, STZ)、乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)、左旋硝基精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)、亚甲蓝(methylene blue,MB)均为Sigma产品;去氧肾上腺素(Phenylephrine,PE)为上海禾丰制药有限公司生产;银杏内酯B购自合肥标品生物科技公司;NO、NOS试剂盒购自南京建成公司,PAF试剂盒(RD,USA)Krebs-Henseleit(K-H)液:NaCl 118mmol/L、KCl 4.7mmol/L、KH2PO4 1.2mmol/L、MgSO4·7H2O 1.2mmol/L、NaHCO3 25mmol/L、glucose 5.5mmol/L、CaCl2 2.5mmol/L。其余试剂均为国产分析纯。离体血管环灌流装置和Medlab/8C生物信号采集系统(南京美易科技公司);JZl01型张力传感器(北京新航兴业科贸有限公司),强生稳豪型血糖仪(美国强生公司)。
1.2 实验动物及其分组
24只S-D雄性大鼠(180±200)g,购自南京青隆山动物养殖场(合格证号SCXK2008003),大鼠自由饮水、进食,保持垫料干燥。适应性喂养1周,随机分为四组(每组12只),即正常对照组(NC control group,NC group),银杏内酯B对照组(Ginkgolide B group,GB group),糖尿病模型组(diabetes melites group,DM group)和糖尿病模型+银杏内酯B(diabetes melites+Ginkgolide B group,DM+GB group)处理组;DM组大鼠模型根据张严等[6]文献制备,大鼠禁食12h后腹腔注射溶于无菌柠檬酸缓冲液(pH4.5)的链脲佐菌素(Streptozocin,STZ),用量为65mg/kg,48h后空腹尾静脉采血,葡萄糖氧化酶GOT法测血糖,血糖值 16.7mmol/L的大鼠视为糖尿病模型复制成功;NC组和GB组大鼠注射与上述等量的柠檬酸缓冲液做对照,在此基础上,NC组和DM组大鼠每天早晨8时腹腔注射生理盐水2ml,而GB组和DM+GB组大鼠每天早晨8时腹腔注射GB(5mg/kg),一直持续8周。
1.3 离体主动脉血管环制备及功能测定
上述各组大鼠尾静脉采血1ml,低温超速离心后取上清液-20℃保存待测。采血后颈椎脱臼致死,迅速打开胸腔,取胸主动脉环制成10%组织匀浆, 保存于-70℃冰箱用于生化检测,另取约4mm长的胸主动脉环,将其悬挂于盛有预通O2的容量为10ml的K-H液浴槽内,用不锈钢丝分别连于张力传感器和浴槽底部,浴槽恒温37℃并持续通以95%O2+5%CO2混合气体,记录血管张力。以0g张力起步,稳定30min,逐步调节至最适张力1.5g,期间每15min换液1次,平衡1h后开始实验。(1)1×10-5mol/L PE诱导大鼠离体胸主动脉环收缩后,记录(1×10-8～1×10-4mol/L)ACh诱导大鼠离体胸主动脉环舒张幅度。(2)用一氧化氮合酶抑制剂L-NAME(10-4mol/L)或鸟苷酸环化酶抑制剂MB(10-5mol/L)孵育糖尿病大鼠离体内皮完整胸主动脉环20min,观察间隔5min累积给予浓度为1×10-8～1×10-5mol/L的PE诱导的主动脉血管环的收缩反应反映血管张力的变化。记录张力变化,并计算血管收缩率(vascular contraction rate,VCR)。血管收缩率(%)=(累加PE后的血管最大收缩张力-基础血管张力)/空白组最大收缩张力平均值×100%。血管舒张率(%)=(加PE后的主动脉血管环收缩张力-累加ACh后的血管张力)/(加PE后的血管最大收缩张力-基础血管张力)×100%。以上每一轮实验完成后用K-H液反复冲洗3～5次,直至主动脉血管环张力恢复到实验前的基础水平才可以开始下一轮实验。
1.4 生化指标检测
使用UV-3200PCS紫外分光光度计检测胸主动脉组织匀浆中NO含量及NOS活性;使用Model-680型酶标仪测定血浆中PAF水平;用血糖仪测定血糖水平。
1.5 统计学处理
所有数据用均数±标准差
2 结果
2.1 从图1可知,糖尿病模型组血糖明显增高,与NC组相比较具有统计学意义(P<0.01),提示造模成功;而DM+GB组血糖较糖尿病模型组无统计学意义(P>0.05)与NC组比较,有显著性差异(P<0.01),提示GB对糖尿病大鼠血糖无影响;银杏内酯B组血糖与NC组无统计学意义(P>0.05)。
注:与 NC 组比较,*P<0.05,**P<0.01;与DM组比较,#P<0.05,##P<0.01。
2.2 离体主动脉血管环灌流实验结果
2.2.1 各组大鼠离体主动脉血管环对ACh刺激的舒张反应:与NC组相比,DM组大鼠离体主动脉血管环对ACh的舒张反应明显地下(P<0.01);腹腔注射GB(5mg/kg)8周后,糖尿病大鼠胸主动脉环对ACh的舒张反应改善明显,且呈浓度依赖性,与DM组相比差异显著(P>0.05),与NC组相比无统计学意义(P<0.05),GB组和NC组相比无显著性(P<0.05)。见图2。
注:与NC组比较,*P<0.05,**P<0.01;与DM组比较,#P<0.05,##P<0.01。
2.2.2 不同阻断剂预处理后主动脉血管环对PE刺激收缩的反应:(1)非选择性一氧化氮合酶阻断剂L-NAME孵育前后相比较,各组主动脉血管环对1×10-8～1×10-5mol/L的PE诱导的收缩幅度均有升高。NC组主动脉血管环L-NAME孵育后PE诱导的最大收缩幅度与未孵育时PE诱导的最大收缩幅度相比差异有显著性(P<0.01);DM组孵育前后无统计学意义(P>0.05);DM+GB组大鼠孵育前后相比差异有显著性(P<0.05);GB组与NC组相比无统计学差异(P>0.05)见表1。由此提示GB干预后糖尿病大鼠血管内皮功能改善,NOS活性明显提高,NO活性也相应增加。(2)亚甲蓝(1×10-5mol/L)预孵育20min阻断鸟苷酸环化酶功能后,各组主动脉血管环对1×10-8～1×10-5mol/L的PE诱导的收缩幅度均有升高。结果表明,NC组主动脉血管环L-NAME孵育后PE诱导的最大收缩幅度与未孵育时PE诱导的最大收缩幅度相比差异有显著性(P<0.01);DM组孵育前、后无显著性差异(P>0.05);DM+GB组大鼠孵育前后相比差异有显著性(P<0.05);GB组与NC组相比无统计学差异(P>0.05)见表2。由此提示GB干预后糖尿病大鼠血管内皮功能改善,NOS活性明显提高, NO活性也相应增加,可能是通过NOS-GC-NO途径实现的。
注:与NC组比较,*P<0.05,△P<0.01;与NC+L-NAME组比较,#P<0.05,▲P<0.01;与DM组比较,aP<0.05,□P<0.01 ;与DM+L-NAME组比较,bP<0.05,■P<0.01;与DM+GB组比较,cP<0.05,◇P<0.01;与GB组比较,dP<0.05,◆P<0.01。
2.3 NO、NOS及PAF测定 生化检测结果显示,与NC组相比,DM组血浆PAF水平增高,胸主动脉环NOS活性及NO含量降低(P<0.01);同DM组相比,DM+GB组大鼠血浆PAF水平降低(P<0.01),胸主动脉环NOS活性及NO水平明显改善(P<0.01);GB组与NC组相比无显著性差异(P>0.05)。见表3。
注:与NC组比较,*P<0.05,△P<0.01 ;与NC+MB组比较, #P<0.05,▲P<0.01;与DM组比较,aP<0.05,□P<0.01;与DM+MB组比较,bP<0.05,■P<0.01;与DM+GB组比较,cP<0.05,◇P<0.01;与GB组比较,dP<0.05,◆P<0.01。
注:与NC组比较,*P<0.05,△P<0.01;与DM组比较,#P<0.05,▲P<0.01。
3 讨论
心血管并发症是糖尿病患者最主要的死亡原因,内皮功能障碍是糖尿病心血管并发症的共同病理生理基础和关键起始事件,内皮依赖性血管舒张功能损伤作为内皮功能紊乱的早期标志在糖尿病早期即可出现,改善内皮功能是公认的改善糖尿病血管内皮依赖性舒张功能的有效措施。NO是血管内皮细胞产生的一种自由基性质的气体分子,作为信使分子穿透生物膜屏障,半衰期极短,很快被超氧化物等氧化成硝酸盐和亚硝酸盐而失活。内源性NO是由NOS催化L-精氨酸而生成。故NOS活性直接影响到NO的生成。Wu等[7]观察到在DM大鼠中血管内皮NO水平为正常的15%,并认为NOS辅因子(如NADPH)缺乏也可能是糖尿病NO合成减少的原因。糖尿病大鼠内皮源性NO合成释放减少,同时NO的舒血管活性亦减弱,由此导致了内皮依赖性血管舒张功能损伤。而Sushant[8]等报道STZ糖尿病组大鼠4周血浆NO含量增加并导致潜在的线粒体膜的变化,引起细胞色素C释放,从而触发细胞凋亡。因此也有学者认为可能在糖尿病早期NO含量增加,而出现糖尿病并发症时NO含量降低。
笔者发现:与NC组相比,DM组大鼠血糖浓度明显增高(P<0.01),ACh诱导的血管舒张反应低下, 而DM+GB组大鼠血糖浓度与DM组相比无显著差异(P>0.05),与NC组比差异显著(P<0.01),胸主动脉环对ACh诱导的舒张反应明改善显(P<0.05),和NC组相比无统计学意义(P>0.05);GB组与NC组相比差异无显著性 (P>0.05);提示GB干预后对糖尿病大鼠血管的内皮有保护作用,但无降糖作用。生化检测进一步证实,与NC组相比,DM组血浆PAF水平增高,胸主动脉环NOS活性及NO含量降低;同DM组相比,DM+GB组大鼠血浆PAF水平降低(P<0.01),胸主动脉NOS活性及NO水平明显改善(P<0.01)。随着糖尿病病程的进展,糖尿病大鼠血管内皮功能呈进行性受损,其NOS活性和NO含量减少,对ACh诱导的内皮依赖性血管舒张反应减弱;PAF是强有力的脂质介质参与炎症和动脉粥样硬化,介导氧化应激和炎症[9],而GB作为PAF天然的特异性受体拮抗剂,具有抗自由基[3],抗动脉粥样硬化作用[4],可能改善了糖尿病血管内皮功能,促进了糖尿病大鼠血管内皮NOS表达和NO的生成。
研究表明,一氧化氮(nitric oxide,NO)在血管内皮细胞中合成后通过一氧化氮合酶催化L-精氨酸与氧结合后释放NO,通过激活可溶性鸟苷酸环化酶(sGC),引起环磷酸鸟苷(cGMP)升高,从而导致PKG的活性增加,而cGMP依赖性蛋白激酶使钙内流减少,增加肌浆网钙ATP酶对钙的摄取或直接作用于收缩蛋白去磷酸化,从而产生舒血管的作用[10]。
通过胸主动脉环张力实验结果显示,分别用非特异性NOS抑制剂L-NAME与cGMP抑制剂亚甲蓝阻断孵育血管环20min后,其对PE引起的收缩反应与孵育前比较均升高,NC组主动脉血管环分别经NOS抑制剂L-NAME和cGMP抑制剂亚甲蓝预孵育20min后PE诱导的最大收缩幅度与未孵育时PE诱导的最大收缩幅度相比差异有显著性(P<0.01);DM组孵育前、后无显著性差异(P>0.05);DM+GB组大鼠孵育前、后相比差异有显著性(P<0.05);GB组与NC组相比无统计学差异(P>0.05)。说明DM组大鼠血管内皮功能受损,NOS活性低下;而GB干预后糖尿病大鼠大鼠血管NOS活性明显提高,NO活性也相应增加,可能是通过NOS-GC-NO途径实现的,至于其确切机制有待进一步的深入研究。
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