工程建设监理课件（精选8篇）
1要明确每位监理人员的安全责任，项目总监理工程师为安全管理第一责任人；
建设工程安全生产事关人民群众的生命和财产安全，做好安全监管工作责任重大。由于建筑施工自身的特点，建筑业是继矿山、交通之后的第三大高危行业，根据《中华人民共和国安全生产法》、《建设工程安全生产管理条例》等法律法规，建设工程的建设、监理、施工等单位应对建设施工安全生产承担各自的责任。
监理单位的安全法律责任监理单位的安全法律责任是指：监理单位在建设工程安全生产工作中应承担的安全责任和法律责任，来自三个方面：
1.法律法规的规定、企业的社会责任
2.委托监理合同的约定
3.公司赋予的项目安全监管责任
一、建设行政主管部门对工程监理单位的安全生产监督管理 1.建设行政主管部门对工程监理单位安全生产监督检查的主要内容。
（1）安全生产管理内容是否纳入监理规划，以及在监理规划和中型以上工程的监理实施细则中是否制定对施工单位安全技术措施的检查方面的内容。
（2）审查施工企业资质和安全生产许可证、“三类人员”及特种作业人员取得考核合格证书和操作资格证书情况。（3）审核施工企业安全生产保证体系、安全生产责任制、各项规章制度和安全监管机构建立及人员配备情况。（4）审核施工企业应急预案和安全防护、文明施工措施费用使用计划情况。
（5）审核施工现场安全防护是否符合投标时的承诺和《建筑施工现场环境与卫生标准》等标准要求情况。
（6）复查施工单位施工机械和各种设施的安全许可手续情况。
（7）审查施工组织设计中的安全技术措施或专项施工方案是否符合工程建设强制性标准情况。
（8）定期巡视检查危险性较大工程作业情况。
（9）下达隐患整改通知单，要求施工单位整改事故隐患或暂停施工情况；整改结果复查情况；向建设单位报告督促施工单位整改情况；向工程所在地建设行政主管部门报告施工单位拒不整改活不停止施工情况。（10）其他有关事项。
二、本公司对项目部安全监管的要求
公司三标一体程序文件《工程监理安全管理程序》WHGL-CX-7.5.1f中5.1条明确规定:项目总监理工程师为安全管理第一负责人。
2审核下列内容：
2.1审核施工单位的“施工组织设计”及专项安全方案(应急救急预案、重大环境因素清单和重大危险源清单)。2.2审核“临时用电施工组织设计”及方案。2.3审核分部、分项专项施工方案。
2.4审核施工单位安全生产许可证，三类人员的资格证书和特种作业人员上岗证，审查专职安全管理人员的配备是否与工程规模要求相匹配。
2.5审核施工单位建立健全安全管理和安全保证体系，建立岗位责任制和责任追究制度。监理要通过检查、整改等强制性手段，促使施工单位提高安全意识和安全施工水平。2.6审核现场防火、防爆安全措施和季节施工安全措施，要求承包单位施工现场消防管理制度和消防设施有效、启用可靠，以预防为主，防消结合。
2.7审核建筑起重机械特种设备和安全网、安全带、安全帽的产品合格证、备案证明等。(安全网按要求送试复检)2.8审核建筑起重机械安装单位、使用单位的资质证书、安全生产许可证和特殊工种作业人员操作证书和安拆专项施工方案。
3《监理规划》必须编制有安全监理内容的章节，明确安全管理的范围、内容和制度措施。对危险性较大的分部分项工程要单独编制《监理实施细则》，内容应包括：安全监理程序；安全检查方案；主要危险源监控措施。
4要不断提高监理人员的安全知识和安全管理水平，最大限度的消除不安全因素，把安全隐患消灭在萌芽状态。5专业监理工程师负责施工现场的安全巡查和管理，要对危险源进行逐一排查(记录)，并针对性的制定安全预控措施。6每次监理例会要把安全监管内容列入会议议程和主要议定事项。
7对检查发现的安全隐患，要及时下达安全监理通知单，要求施工单位限期整改，并对整改情况进行跟踪复查，确保安全隐患整改及时、到位。
8要监督进入现场的安全设施投产前的验收备案工作，一般安全设施由施工项目经理组织验收，报监理备案，大型安全设施（垂直运输机械、脚手架、模板支撑）由施工单位技术部门组织验收并向监理备案。
9督促总包单位检查各分包单位的安全生产规章制度和专职安全员配备及特殊工种持证上岗情况，将检查结果报监理备案。
10检查施工现场的各种安全标志、安全设施、安全防护是否符合强制性标准规定，发现问题及时要求施工单位整改，确
浅析建设工程安全监理
保现场施工安全。
11在混凝土浇筑前必须对模板支撑系统验收，合格后再进行钢筋、模板及水电预留预埋的验收，全部合格后才可签署混凝土浇灌令。
12发生安全事件按《建设工程安全生产管理条例》进行调查取证，写出书面报告按相关程序上报。
13贯彻执行《建筑工程安全生产管理条例》第十四条的规定；工程监理在实施监理过程中，发现存在安全事件隐患，应当要求施工单位整改，情节严重的，应当要求施工单位暂停施工，并及时报告建设单位；施工单位拒不整改或不停止施工的，应当及时向有关主管部门报告。
14监理安全管理的一切活动要做好相关记录工作。
三、安全监理工作方法
1、建立安全检查工作制度
项目监理部在工程开工后，就要每周定期或不定期地组织一次参建各方(建设单位、施工单位、监理单位)进行一次现场安全检查，对施工单位安全管理人员是否在岗、现场围挡、封闭管理、安全警示标识、材料堆放、施工场地、现场住宿、现场防火、进场的大型机械设备、基坑开挖、坑壁支护、脚手架、支撑架、防护架、“三宝四口五临边”、临时用电、防触电、防坍塌、防物体打击、防高空坠落、防大型机械设备伤害等等，对施工现场易发生重大安全事故的部位、环节进行检查监控。检查后，项目监理部整理出安全隐患排查记录，一份报建设单位备案，一份送施工单位限期限时整改，一份项目监理部留存。
2、规范使用监理工程师通知单
监理工程师通知单(简称“监理通知单”)是指监理工程师在检查承包单位在施工过程中发现的问题后，用通知单这一书面形式通知承包单位并要求其进行整改，整改后再报监理工程师复查。《建设工程监理规范》中5．4.11条规定：“对施工过程中出现的质量缺陷，专业监理工程师应及时下达监理通知单，要求承包单位整改，并检查整改结果”。在条文说明中规定：“在监理工作中，项目监理机构按委托监理合同授予的权限，对承包单位所发出的指令、提出的要求，除另有规定外，均应采用B1表（即《监理工程师通知单》)。监理工程师现场发出的口头指令及要求，也应采用B1表予以确认”。
由于监理人员的业务工作水平、思想认识和经验上的不同，目前在签发监理通知单方面往往出现不统一和很多不规范的地方。结合监理工作实践，就如何规范使用监理通知单谈以下几点体会。
1)监理通知单的意义与作用
监理通知单是监理工程师在工程建设过程中向承包单位签发的指令性文件。目的是督促承包单位按照国家有关法
现。
它能督促承包单位及时进行整改，促进工程建设的有效进行，有效地维护建设单位的利益。同时，签发监理通知单也是考核监理如何行使手中权利的一个指标，是对监理业务能力和管理水平的一种检验。
3)、目前监理通知单签发中存在的不规范表现
(1)提出的存在问题不详细，缺乏具体表述；或实际内容有偏差，证据不足。有的监理通知单中所述的问题空洞、抽象，如“现场钢筋保护层厚度不符合要求’，就缺少存在问题的具体钢筋部位、保护层厚度的实测数据、违反的规范名称和具体条款的描述，让人摸不着头脑，给人感觉是监理未到现场实测实量，而是凭拍脑袋想出来的问题。另外，由于监理人员业务能力和技术水平等综合素质的差别，将缺乏证据或有偏差的内容也写进监理通知单，从而影响到承包单位和建设单位对监理的评价，进而削弱或降低对监理的可信度和权威。
(2)缺乏时间观念，对监理通知单的时效性缺乏认识和重视。具体表现在监理签发监理通知单的时间和承包单位签收通知单的时间均不具体，多数只署年月日，没有详细到时点分，时效观念弱。监理通知单的生效是以承包单位在回执上签署姓名和收到的时间为准，如签发和签收时间不具体，直接造成通知单的生效时间含糊。如承包单位在上道工序施工中发生质量问题时监理签发了通知单，但当天承包单位在问题未整改的前提下擅自进入下道工序施工，此时对方即可辩称收到监理通知单时已完成了上道工序，开始转入下道工序施工，如要求他现在整改，则需要返工，既影响进度，又造成成本增加。此刻监理可谓骑虎难下，左右为难。原因就在于监理通知单签发时间不具体。尤为严重的是，如因对方未及时整改，造成重大质量或安全事故，追究责任时可能因为监理签发通知单的时间不具体而影响到责任界定的划分。另外，缺乏时效性还表现在通知单中要求承包单位整改的时限不具体，这样承包单位对质量或安全问题不能及时进行整改，而是无限期拖延，给监理工作带来被动。
(3)仅仅要求承包单位采取整改纠正措施，未要求其采取预防措施。签发监理通知单不仅仅是针对本次发生的问题，更重要的是要求承包单位分析问题产生的原因，并采取相应的预防措施防止类似问题的再次发生，但此点在实际操作中往往被忽视。试想一下，如果不分析本次发生问题的原因，律法规、合同约定、施工规范和设计文件进行工程施工，保证工程建设中出现的问题(不符合设计要求、施工技术标准、合同约定等)能得到及时纠正。监理通知单具有强制性、针对性、严肃性的特点。监理通知单一旦签发，承包单位必须认真对待，在规定期限内按要求进行落实整改，并按时回复。
2）、善于运用和签发监理通知单是监理有所作为的体 2
不采取相应的预防措施，不对人、机、料、法、环等导致问题产生的关键因素予以消除，承包单位的整改只能是治标不治本，类似问题还会在以后一而再、再而三地反复发生。
(4)用口头通知代替签发监理通知单。有的监理人员习惯于发现问题后均用口头通知承包商进行整改，不留下书面痕迹。这样，一方面不能完整地体现监理自身的工作情况，是一种监理有所不为的表现：另一方面如发生质量安全问题，就为责任界定留下后患。有的承包单位不恰当地把监理通知单与上级管理部门对其的质量安全处罚或考核指标挂钩，使之对监理通知中特别敏感，这无形中也为监理正常签发监理通知造成压力。而监理为顾全与承包单位的关系，采取少发甚至尽量不发监理通知单，进而凡是发现问题均采用口头通知的办法。
(5)不允许承包单位申诉，强令执行。监理通知单虽有一定的强制性，但根据FIDIC合同条款规定，应允许承包单位申诉。承包单位如认为监理通知单内容不合理，应在收到监理通知单后24小时内以书面形式向监理提出报告，监理在收到承包单位书面报告后24小时内作出修改、撤销或继续执行原监理通知单的决定，并书面通知对方。紧急情况下，监理可要求承包单位立即执行监理通知单，或承包单位虽有异议，但监理决定仍继续执行监理通知单，此时承包单位应予以执行。如因监理通知单指令错误发生追加合同价款和给承包单位造成的损失由建设单位承担，延误的工期相应顺延。
(6)未及时抄送建设单位，监理通知单回复后更是不转发建设单位。监理往往将监理通知单在第一时间内下发给承包单位，却迟迟不抄送建设单位，影响了建设单位在第一时间对施工中出现问题的全面掌控，导致监理自身也失去了一次争取建设单位对监理处理相关问题支持的机会。另外，监理通知单回复如不及时转发建设单位，建设单位对监理提出问题的整改落实情况也就不得而知。
(7)签发时监理人员冒名顶替或未做到亲笔签名。主要表现在监理员以专业监理工程师的名义、专业监理工程师以总监理工程师的名义签发监理通知单，在总／专业监理工程师签名栏上出现冒名签字或者直接打字上去的做法削弱了监理通知单的严肃性，也不利于培养和树立监理人员的责任心。
(8)缺乏能真实反映问题的工程照。有的项目监理机构未配备数码相机，监理人员在日常巡视检查过程中发现问题就不能做到就地拍照取证，并反映到监理通知单中，直接降低了反映问题的直观性和客观真实性。
安全监理的主要工作内容和工作程序概括起来就是：编制规划，制定细则，认真履行“一审二查三停四报”的工作职责。
一审：认真做好施工组织设计的审查工作，主要是符合性和程序性审查。审查安全技术措施是否符合工程建设强制性标准。
二查：检查施工单位的安全生产管理体系是否有效运行，安全措施和安全费用是否落实，对现场的安全生产状况进行巡视和检查，认真做好记录；发现安全事故隐患要以书面形式通知施工、建设单位；适时提请业主组织安全检查，书面通报安全检查结果，书面下达安全隐患整改通知书。三停：发现现场安全情况严重的应按监理规范规定发出暂停工令，及时用书面形式报建设单位。
四报：施工单位在监理通知发出后拒不整改或者在暂停工令发出后不停止施工的，应当及时向建设单位，本监理单位和建设主管部门报告。
二级及以上项目范围，根据《工程监理企业资质管理规定》 一般公共建筑：
14—28层；24—36米跨度（轻钢结构除外）； 单项工程建筑面积1万—3万平方米
住宅建筑：
建筑面积6万—12万平方米；单项工程14—28层
为了使项目的风险降到最低,一些省市的行业主管部门也开始在信息系统建设中推行由监理进行工程质量管理的做法。
1 传统的建设工程监理
国外的建设监理是指咨询顾问为建设项目业主所提供的项目管理服务。
我国的建设工程监理的概念与国外基本一致,但也有其特殊的地方。按照建设部、国家计委制定的《建设工程监理规定》,建设工程监理是指对工程项目建设,社会化、专业化的建设工程监理单位接受业主的委托和授权,根据国家批准的工程项目建设文件、有关工程建设的法律、法规和建设工程监理合同,以及其他工程建设合同所进行的旨在实现项目投资目的的微观监督管理活动。
2 信息工程监理
依据信息产业部《信息系统工程监理暂行规定》,信息系统工程监理是指依法设立且具备相应资质的信息系统工程监理单位,受业主单位委托,依据国家有关法律法规、技术标准和信息系统工程监理合同,对信息系统工程项目实施的监督管理。信息系统监理的主要业务范围有信息网络系统、信息资源系统、信息应用系统的新建、升级、改造工程。根据国内信息系统监理的实践,它涵盖计算机工程、网络工程、通信工程、结构化布线工程、智能大厦工程、软件工程、系统集成工程以及有关计算机和信息化建设的工程及项目。该监理的中心任务是科学地规划和控制工程项目的投资、进度和质量三大目标,并以此保证工程的顺利进行和质量。
3 信息工程监理和传统的建设工程监理的相同点
3.1 任务相同
工程监理都是对工程建设项目的目标进行有效的协调控制。具体来说,就是对经过科学的规划所确定的工程或项目的三控制(质量控制、进度控制和投资控制)、两管理(合同管理和信息管理)和一协调(全面组织协调)。
3.2 目的相同
工程监理都是“力求”实现工程建设项目目标。这是因为监理单位及其监理工程师并不能直接实现工程项目目标。在预定的投资、工期和质量目标内实现建设项目是参与工程建设项目各方的共同目标。
3.3 在监理过程中工作的依据总体上相同
工程监理都是根据国家批准的工程项目建设文件、有关工程建设的法律、法规和建设工程监理合同,以及其他工程建设合同。
4 信息工程监理和传统的建设工程监理的不同点
4.1 监理单位的介入时间和结束时间
监理单位的介入时间和结束时间不同。
传统的建设工程有时也需要前期的可行性论证,但这些传统建设项目的监理公司往往是在项目的施工设计完成后才介入监理工作的。因此,传统建设项目往往是在对施工单位进行招标之后再进行工程监理公司的招标,而信息工程项目则一启动就需要监理机构的介入,并由该机构协助业主组织对施工、开发单位的招标工作。有时,在工程项目验收之后,业主还要求监理单位继续协助制定信息化设施的运行管理制度。因此,信息工程监理的范畴,远远超出了传统建设工程监理的范畴,覆盖了信息工程项目从“可行性研究”,甚至从立项开始到运行和验收的全过程。
4.2 工程中期的监理内容
在工程中期的监理内容也不太一样。
在工程的中期,信息系统监理的内容包含三个部分的施工与开发的监理(即综合布线、网络系统集成及应用软件开发),工程后期的监理内容主要为试运行及验收的监理。如与传统建设工程相比,信息工程多了“软件开发”这一部分的内容,它的监理也是信息工程监理的最大难点,它涉及到对无形产品设计、开发过程的监理,这是传统建筑工程监理中绝对没有的,这也是信息工程监理与传统建设工程监理最本质的区别。
4.3 监理工作依据的行业技术质量标准规范
在监理工作依据的行业技术质量标准规范上,两者存在着不同的地方。
在施工监理过程中,往往需要请专家推荐某个厂家的企业标准或是将技术论坛上提出的某个标准作为具体工程的质量标准,经过业主和开发商同意,将其写入工程合同中,或与开发商协商,由其推荐某个标准,经研究后认为可行,再以文字确立为合同条款。
4.4 设计监理和施工监理是否分开
在设计监理和施工监理是否分开的问题上,两者也不同。
传统建筑工程的设计和施工是分开的,一般由建筑设计院负责设计,建筑工程公司负责施工,因此,传统建筑工程的设计监理和工程监理是可以分开的,而监理工作的中心则在施工阶段。而信息工程的设计、施工、系统集成和开发是密不可分的,因此,信息工程的监理最好实施设计、施工、系统集成和开发全过程的监理。
4.5 依靠专家网和技术协作网,组织机构社会化
由于信息技术涉及的门类多,又都处于当代迅速发展的科技前沿,而任何一个信息工程咨询监理机构都不可能独自具有掌握众多前沿科技的专家,所以,从咨询工作的需要出发,一个合格的信息工程咨询监理机构必须在社会上有一个专家网络,这些专家平时在各自的科研(教学)单位工作,一旦咨询监理机构承接了信息工程的咨询监理任务,就可以根据需要随时请相应领域的专家协助工作。
同时,信息工程质量检测需要大量先进的仪器,一个咨询监理机构不可能也没有必要将所有可能需要的仪器都购置齐全,往往也是与社会上的高校或科研单位建立协作关系,当需要时,租用其仪器或送去检测。因此,信息工程咨询监理机构必须在社会上有专家网和技术协作网的支持,如果缺少这些支持,咨询监理机构是无法独立生存的。所以,信息工程咨询监理机构的组织结构具有社会化的趋势。
4.6 归口管理部门
目前,建设部开始承担建筑物综合布线工程的管理职责,颁布了设计与施工单位资格认定办法并由各省政府的建设厅亲自进行操作。这种状况也是必然的,因为信息工程与土木建筑工程在综合布线的领域上重合,其归口管理部门自然而然从土木建筑的管理部门延伸过来。但是除了综合布线之外,信息工程与土木建筑工程不重合的地方太多了,信息工程咨询监理业究竟是由建设管理部门还是由信息化管理部门归口管理应当慎重选择。深圳市信息化在全国处于领先地位,该市的信息工程咨询监理业就是归口由信息化领导小组及其办事机构管理的,其经验可供各地借鉴。
5 结语
传统建设工程监理已实施多年,积累了比较丰富、成熟的经验,它为信息技术行业实施对计算机信息工程监理提供了可参考的样板。通过比较信息工程监理和传统建设工程监理的相同点和不同点,可以进一步促进信息工程监理的发展。
摘要：简单介绍了传统建设工程监理和信息工程监理,通过比较两者的相同点和不同点,希望能够借鉴传统建设工程监理,促进信息工程监理的发展,降低信息工程项目的风险。
关键词：信息工程监理,传统,建设工程监理,发展
参考文献
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[4]张任新.信息化工程监理的内容[J].中国建设监理,2005(2):60-61.
关键词：监理工程师 监理 建筑工程
建设工程监理是目前我国建筑工程管理的主流模式，在推动我国经济建设的发展中发挥了巨大作用。监理工程师作为建筑工程监理工作的直接把控者和执行者，责任重大。如何做好监理工作，是每一位监理工程师必须思考的问题，也是整个建筑行业发展所要面对的问题。
1 监理工程师职责分析
监理工程师要做好监理工作的第一步就是要明确自己的工作职责，清楚自己的工作内容。如何对这些不了解，监理工作会杂乱无章，造成自己工作内容的漏项，甚至会造成严重的建筑工程质量事故。
1.1 以质量控制为中心。监理工程师在工作中会对建筑工程的项目投资、工程进度、生产安全等方面进行控制，最终的目的是保证工程的质量，使工程质量达到设计要求和使用要求。如果工程失去了质量保证，质量低劣，存在安全隐患，监理所做的其他管控工作也就毫无意义。所以，监理工程师要牢固树立“百年大计，质量第一”的思想，以质量控制为中心，引导和开展自己的各项工作。
1.2 增强责任意识和廉洁意识
1.2.1 责任意识。这对于一个监理工程师来说至关重要。责任意识关系到监理工作是否到位，进而影响工程的质量控制。如果没有足够的责任心，不管监理工程师的专业素质有多高，其监理工作没有源动力，会浮于表面，监理工作难以做到实处。
1.2.2 廉洁意识。监理工程师在监理执行中，要对不合格的工程叫停，并督促施工方返工；对不合格的建筑材料和施工设备做出拒绝进场和使用的决定；对不符合施工安全的情况要求施工方进行整改。以上情况都会引起施工方或建设方建设成本的增加，监理人员也会因此受到侵蚀。如果监理人员不能廉洁自律，工程的质量控制就会大打折扣，造成质量失控。所以，要加强廉洁意识，对不符合要求的工程不留情面。
1.3 把握审查审批和巡视旁站环节
1.3.1 把握审查审批环节。施工组织、施工方案、施工工艺是否合理、，原材料质量是否符合要求，质量控制参数是否准确，开工条件是否具备等等，都是需要监理工程师进行审查和审批的环节。监理工程师要按照详细的审查审批信息，严格按照相关流程，履行监理的职责，对不按监理程序履行相关手续的施工方和人员进行制止，并予以纠正，使审查和审批工作落到实处。
1.3.2 把握巡视旁站环节。监理旁站和巡视是监理工作的重要方式，也是实现工程质量控制的重要手段，监理工程师一定要贯彻执行。施工工艺、施工操作是否符合施工要求，工程结构是否与设计方案一致，施工防护措施是否满足安全生产的要求等都可以通过监理旁站进行解决。监理旁站将质量隐患消灭在萌芽状态，同时对质量缺陷制定具有针对性的措施进行纠正，是施工现场发现问题、解决问题的关键环节。此外，监理人员每天要对工程进行一次全面的巡检，将巡检结果和巡检中发现的问题，形成文字记录，存档。
2 建筑工程施工前的监理工作
2.1 建筑工程监理工作文件的编制。监理机构在工程施工前，要做好工程监理工作文件的编制，是监理工作具有指导性和针对性。建筑工程监理文件包括监理大纲、监理规划和监理实施细则。监理大纲的主要内容是监理机构针对建设工程制定的开展监理工作的基本方案。监理大纲根据建设工程各方面的技术标准、规范的规定，结合实际，阐述对该工程监理招标文件的理解，提出工程监理工作的目标，制定相应的监理措施。监理规划是指在总监理工程师的主持下编制、经监理单位技术负责人批准，用来指导项目监理机制全面开展监理工作的指导性文件。监理规划的编制要以监理大纲为基础，充分结合建设工程的实际情况。监理实施细则是在监理规划的基础上，由项目监理机构的专业监理工程师针对某一专业或某一方面的监理工作编写，并经总监理工程师批准实施的操作性文件。监理实施细则反映了监理单位对项目控制的理解能力，程序控制技术水平。
2.2 加强项目施工前设计文件的审核。建筑工程的施工是根据施工的设计图纸进行的。设计图纸是否正确，能否满足工程要求，直接影响到工程的质量。所以，监理单位要加强设计图纸的审核工作。监理单位要组织建设单位、施工单位和设计单位进行设计图纸的会审，对设计方案中存在的问题，提请业主进行方案或者设计的修改，并督促设计部门的修订进度。在修改完成后，经过变更的图纸要由总监理工程师签字确认。
3 建筑工程施工阶段监理工作
3.1 严把材料关。原材料、半成品和施工配件是建筑物的建设基础，其质量的优劣直接关系到建筑物的工程质量，因此要加强建筑材料的质量检测。①仔细检查进场材料的合格证、生产许可证和出厂检测报告等证明材料是否齐全，证明材料不全，禁止进场，对已经进场的“三无”材料要清退出场。②在工作中要加大对工程检验批、分项的检查，要及时对检验批进行检查，不合格的及时返工或推倒重来，把问题消灭在萌芽阶段，对工程分项、分部验收，严格标准，增加对工程巡回检查的次数，对查出的质量问题决不姑息，坚决处理。③加强施工材料的取样送检。
3.2 重视旁站监理及巡视检查。旁站监理和巡视检查是监理工作的重要组成部分。监理旁站的执行是在施工现场，现场施工中出现的问题可以第一时间被发现，并得到及时的解决，工程的施工质量处在时时受控的状态。旁站监理要求监理工程师对工程的实施方案有详尽的了解，对施工要求和施工规范等各项标准进行充分的理解，具备现场质量控制工作的相应素质，在监理工程中才能对出现的问题进行判断、解决，并对解决方案的可行性做出合理的选择。同时，监理工程师要对自己负责的工程进行定期和不定期的巡检。在巡检中，发现问题及时整改和处理，使安全、质量隐患消灭在萌芽状态，避免安全、质量事故的发生。旁站监理和巡视检查都要形成详细的文字记录，并备案，发现的问题要在监理会议上及时提出，尽快形成解决方案。
3.3 重视监理资料的管理。建筑工程从施工到竣工验收会形成大量的资料，这些文字资料不仅是工程验收的组成部分，同时资料形成的过程也是一个规范性很强的工程。工程技术资料涉及到项目的成本控制、质量控制、进度控制和施工管理的可追溯性，是反映工程成果的重要文件，监理工程师要加强监理资料的管理。在具体的操作过程中要注意以下两点：①监理资料的编制要来源于施工现场的第一手资料，反映工程的实际情况；②监理日志应真实、详细、准确，随施工进度随时记录，监理资料要由专人负责整理归档，实行岗位责任制，并由总监理工程师负责。
4 做好与参建各方的沟通、协调工作
建筑工程是综合性、系统性的工程，参建部门众多，工程的顺利实施需要各个部门的协调和沟通。监理单位在建设工程中属于服务性部门，对工程的整体质量进行把控，在监理工作的开展中要加强与参建各方的沟通与协调。
4.1 加强与建设单位的沟通。监理机构要对监理工作中有关工程质量、投资、进度、安全等控制方面的发展情况，以及监理工作中存在的困难和阻力，及时向业主汇报和商讨，有利于监理工作的开展。
4.2 加强与施工方的沟通。监理工程师在施工过程中发现问题，严格履行监理职责的同时，要及时与施工方沟通，寻求施工方的理解与支持，使问题得以顺利解决，保证施工进度。
4.3 加强与监理内部的沟通。各监理人员之间加强协调、加强沟通，相互促进，形成一个有机的团队，对提高监理的威信，促进监理工作，减少监理内耗非常有必要。
参考文献：
[1]徐强，关于建筑工程监理的问题及对策[J]，黑龙江科技信息，2011，（23）.
[2]王凌云，关于建筑工程质量控制监理的探讨[J]，科技资讯，2008，（05）.
尊敬的各位专家老师：你们好！
我公司在认真阅读 公开比选建设工程监理入闱资格比选文件和有关资料基础上，结合工程项目的实际情况，我司将按监理工作服务的范围和内容要求，组建满足工程监理工作需要的项目现场监理机构，配备专业搭配合理监理人员，同时明确各自岗位分工，建立各类人员岗位责任制，我司在项目监理工作中将依法、依规严格监理，我们本着强势而不霸道、规范而不死板、到位而不越位的监理工作理念，优质、高效、廉洁地实现建设单位的建设预期目标。若我公司有幸入闱，本人作为拟派项目总监对项目的监理工作计划作如下陈述:
一、质量控制方面
1、按照建设工程监理规范的要求，针对本工程特点编制针对性及可操作较强的监理规划、监理实施细则、旁站监理方案、见证取样送检计划、各分项工程监理交底书等技术指导文件；并督促项目监理人员严格按指导文件要求规范、有序地开展监理工作。
2、认真审查承包单位及分包单位提交的施工组织设计，关键分部分项工程的专项技术方案，质量保证体系、措施并督促承包单位严格按审定方案落实；
3、通过巡查、旁站、平行检查、见证取样对本工程使用的各种材料、构配件、机械设备和各分部分项工程及工序质量实施事前、事中、事后的全过程、全方位跟踪监督和检查，及时发现问题并及时督促整改；
4、强化事前控制，要求项目监理人员认真熟悉设计图纸、规范标准及方案要求，在每项分项工程施工前向施工单位项目部作监理交底，并要求施工单位项目部随后向班组交底，让项目全部管理人员及操作人员在实施前熟悉技术标准，规范、正确的进行施工操作，避免无谓的返工、整改。
5、每周召开一次监理例会或现场质量分析会，对工程实施质量进行评估和小结，及时解决施工中存在的质量问题，确保各分部分项工程的施工质量，从而确保该工程总体质量达到建筑工程施工验收规范要求的合格标准，使质量处于受控状态。
二、进度控制方面
1、审查施工单位现场的管理组织机构、人员资质、设备、单位资质、业务水平等是否适应工程的需要并提出审查意见；
2、审查施工单位提交的工程项目总进度计划是否符合总工期控制的要求与施工方案的协调性和合理性等，并按拟定总进度计划分解为月、周进度计划，并督促其执行；
3、审查施工单位的施工方案，主要审核保证工期，充分利用时间间歇的技术组织措施的可行性、合理性。审核施工总平面图与施工方案、施工进度计划的协调性和合理性。制定由业主供应材料、设备的需用量及供应时间参数、编制有关材料、设备部分的采供计划。督促施工单位尽量采用新工艺、新技术，采用高效能的施工机械设备从而缩短工艺过程和工序间的技术间歇时间；
4、进度的事中控制，一方面是进行进度检查、动态控制和调整；另一方面，及时进行工程计量，为向施工单位支付进度款提供进度方面依据。
5、提醒建设单位按合同规定的时间及时向施工单位支付工程进度款；保证资金供给。
6、在每周的监理例会及时进行实际进度与计划进度的比较，分析进度提前或拖延的原因，并建议对施工单位项目部阶段进度实施适当的奖惩制度，以激励项目部进度主动控制的热情，对已不适宜项目需要的进度计划督促施工单位及时进行调整。
三、投资控制方面
1、建立健全的监理组织，完善职责分工及有关的经费签证制度，落实好投资控制的责任；熟悉设计图纸、设计要求、招投标书，分析合同价构成因素，明确工程费用最易突破的部分和环节，从而明确投资控制重点；
2、严格工程计量和工程变更程序；工程变更、设计修改要慎重，事前应进行技术、经济合理性预分析；
3、审核施工组织设计及施工方案，积极推广新技术、新材料、新工艺；选择最佳的施工方案，合理开支施工措施费，提高综合经济效益；
4、及时进行计划费用与实际费用的比较分析，找出偏差并时提请注意进行调整；
5、加强合同管理，防止过早过量的进度支付；
6、加强全面履约的管理，减少索赔的可能性，正确地处理业主与承包商双方的索赔；
7、搞好与各协作单位的协调与配合，不造成对方索赔的条件；
四、安全及文明施工管理方面
1、要求施工单位项目部必须建立、健全安全生产责任制，责任落实到人；安全保证措施及体系须报监理审查签认。
2、编制的施工组织设计应有全面具体的安全技术措施，监督施工单位的安全保证措施及体系在施工过程中能切、有效运行。
3、工程开工前，必须进行安全技术交底。分部分项工程必须进行全面、具体、有针对性的书面安全交底，并经交、接双方签字确认。
4、特种作业人员，必须经培训考试合格后，持证上岗；
5、建立安全检查制度。安全检查要有书面记录，检查后履行签字手续。对查出的重大事故隐患要发整改通知单，并及时整改；
6、要求施工单位采取合适的措施确保在施工期间或材料设备运输期间公共道路的清洁；
7、监督施工单位在选择施工设备、设施和施工方法时，应遵守贵阳市有关部门的要求，考虑噪音标准和对周围居民的影响；
8、对工程现场排水及废水的处理应督促施工单位采取措施，其处理方法应符合管理机构和监理工程师的要求，禁止将泥浆排入河道、沟渠或雨、污水管。
五、合同、信息管理方面
1、拟订本工程项目合同体系及合同管理制度。
2、对合同执行情况的进行分析和跟踪管理；
3、协助业主处理与项目有关的索赔事宜，调解合同纠纷。
4、收集、传达、并监督执行政府主管部门文件精神，收集与项目相关的信息供项目决策层参考。
5、按建设工程资料、档案管理规定，监督施工单位及监理项目部规范工程资料的收集、归档工作。
六、组织协调方面
项目总监理工程师是公司派出的全面履行监理合同和全权负责人，行使监理合同授予的权限，并领导项目监理部的工作，对外向业主负责，对内向公司负责。
项目总监理工程师最主要的任务--“协调”：
对外协调--业主、设计单位和施工承建单位之间关系，对内协调--项目监理部各专业监理人员分工、协作、团结、配合的关系（包括人员到位、到岗等）。其工作方法是：通过日常、大量、各方面的协调工作，履行其职责并实现“三要”--工作要有计划（事前预控）、工作要严谨（事中监控）、工作要有记录（事后防患）。
1、监理工程师应从以下几方面加强与业主的协调。
1）．监理工程师首先要理解建设工程总目标、理解业主的意图。对于未能参加项目决策过程的监理工程师，必须了解项目构思的基础、起因、出发点，否则可能对监理目标及完成任务有不完整的理解，会给他的工作造成很大的困难。
2）．利用工作之便做好监理宣传工作，增进业主对监理工作的理解。
3）．尊重业主，让业主一起投入建设工程全过程。
2、与承包商的协调
监理工程师对质量、进度和投资的控制都是通过承包商的工作来实现的，所以做好与承包商的协调工作是监理工程师组织协调工作的重要内容。
1）坚持原则，实事求是，严格按规范、规程办事，讲究科学态度。
2）协调不仅是方法、技术问题，更多的是语言艺术、感情交流和用权适度问题有时尽管协调意见是正确的，但由于方式或表达不妥，反而会激化矛盾。而高超的协调能力则往往能起到事半功倍的效果，令各方面都满意。由于双方的目的都是为了项目能够顺利完成，因此只要监理工程师能够端正态度，本着监帮结合的原则做事，就能得到施工单位的理解和支持，顺利完成协调工作。
3、与设计单位的协调(1)真诚尊重设计单位的意见。
(2)施工中发现设计问题，应及时向设计单位提出，以免造成大的直接损失；
(3)注意信息传递的及时性和程序性。
4、与政府主管部门的协调
工程质量监督站是由政府授权的工程质量监督的实施机构，监理单位在进行工程质量控制和质量问题处理时，要做好与工程质量监督站的交流和协调。
（1）认真执行工程质量监督、安全监督部门发布的各项工程质量、安全管理规定，督促施工单位及相关单位的落实情况；
（2）主动与质监、安监部门加强联系，及时、如实汇报工程质量、安全情况以及监理单位质量体系执行情况；
（3）尊重质监站的权限，并密切配合使之在工程项目上行使顺畅，形成工程建设各主体单位对质量监督工作的积极支持、全力配合的局面；
（4）积极配合质监、安监部门对工程实施的监督和检查；在工程各阶段验收中按时向质监站报送相关工程质量资料，接受质监站的审查，并对存在的问题认真督促各相关单位积极整改并按时报告。
七、监理的难点、重点及建议：
1、施工阶段全过程监理，工程施工涉及队伍多，专业多、分包多，造成合同管理，信息管理、监理人员专业配置及协调量大是工程监理工作的难点和重点；
2、建筑工程多处于高空作业，对安全文明施工带来极大的安全隐患；
3、市政工程监理工作面临严重的安全施工问题，市政工程的施工地点是在城市居民聚集区,其施工会给城市居民的正常工作、生活都造成非常严重的问题,具体来说,会造成一定的人身安全问题、交通堵塞问题、施工噪声污染问题等，这是市政工程施工的一大难点。
工程质量要求较高，工程质量难以控制，为了出色地完成好工程的监理任务，确保工程质量、工期、投资按预定的目标进行，抓好以上重点和难点，监理工作才能园满地完成任务，监理工作也才能事半功倍，就如何抓好以上工作，现叙述如下：（1）开工前组织监理人员认真阅读、研究施工图，做到熟悉施工图及有关技术资料，发现矛盾、疏漏、错误等及时提醒设计研究解决，避免图纸上的不足带到工程上，减少和避免以后返工和变更。
（2）严格审查施工单位编织的施工方案，达到技术可行，经济合理、施工方便，有确保工程质量的技术和组织措施。
（3）搞好各种中间验收，审查隐蔽工程验收记录，查看施工现场，把好工序、单元、分部验收关。建议：
（1）业主、监理、承包商三方关系要明确，责任要分清，要讲规范，要努力完善操作程序。
（2）业主对工程施工招标最好选择有专业技术知识、有一定的施工经验和施工能力并具有一定经济实力的对口施工企业承包。
（3）加强雨季施工管理，指导承包商制定切实可行的雨季施工管理方案和施工技术方案，科学合理的加大工程投入保证工程质量安全可靠。
（4）响应各级领导的提出的可持续发展政策，加强环境意识、环境保护，定期开展环境保护教育，杜绝环境污染事件发生。
以上为本人对监理工作及投标监理大纲监理主要工作内容的一些浅见，不当、不足之处很多，请各位专家给予批评、指正。谢谢！
陈述人：
摘 要：公路工程的施工阶段是决定项目建设成败的关键。施工阶段的巡视监理是确保工程质量的一项重要而关键的事中控制工作。适时的巡视不仅能够严密监控施工过程的关键环节和部位，还可以有针对性的进行事前控制，减少质量和安全问题的发生，避免费用的额外增加，保证进度的正常进行，减轻交工及缺陷责任期阶段的监理工作。
关键词：公路工程，施工阶段，监理，巡视。
0 引言
公路工程是国家的重要基础设施。近些年，随着国家经济发展水平和综合实力的大幅提高，县乡公路、高速公路等各级公路的建设高潮迭起。由于种种原因，公路施工质量问题和质量事故仍然常见。一般情况下，质量问题（事故）的主要责任者是承包商。监理是否也应负有监管力度小，未从程序、材料、试验、操作工艺、检查验收等各个环节做到严格把关的责任呢？
工程质量是施工阶段监理的重点，是决定项目建设成败的关键。施工阶段的巡视监理是控制工程质量的重要手段，适时的巡视检查还能够有效控制施工进度、减少施工安全问题、避免增加额外费用、减轻交工及缺陷责任期阶段的监理工作。结合监理工作经验，谈谈对公路工程施工阶段巡视监理的认识。1 编制监理计划、巡视细则，制订巡视方案
1.1《公路工程施工监理规范》（JTGG10-2006）（以下简称《规范》）对巡视的定义：监理人员对施工现场进行的经常性巡回检查活动。《规范》要求：监理人员每天对每道工序的巡视应不少于1次，并详细做好巡视记录。
1.2 “监理计划”是开展监理工作的指导性文件，是从事项目监理活动的“宪法”。编制“监理计划”时应充分考虑并体现对巡视要求，把巡视监理提升到一定的高度。并且不能仅仅将其视为质量控制的手段，还应是安全、环保、费用、进度控制和合同管理的手段之一。
1.3编制“巡视监理细则”，使其成为一部“基本大法”；或制订巡视监理
制度，使其成为项目监理机构的若干制度（考勤制度、学习制度、工地会议制度、试验制度、旁站制度等等）之一；并制订切实可行的巡视方案，根据项目实施情况及时调整。总监或驻地监理应组织监理人员学习，并定期检查执行情况。
1.4巡视宜分为全场性巡视、专业性巡视和作业面跟踪巡视。全场性巡视检查一般由总监或驻地监理定期组织进行，专业性巡视一般由各专业监理工程师进行，工作面跟踪巡视一般与旁站监理相结合，由监理员进行。
一般情况下，对重要的工序、工艺或部位施工全过程除了进行旁站监理外，专业监理工程师应坚持每天巡视至少2次,总监或驻地监理应坚持每天巡视。2 依据《规范》5.19条，明确监理巡视内容
2.1正在施工的分项、分部工程是否已批准开工
为了防止承包商擅自施工，避免出现工程质量、安全等问题，监理每日巡视应特别注意检查，未经批准的分项、分部工程不得施工。虽然承包商都有一套管理制度，总监办也制订了整套的程序和制度，但由于公路工程建设战线长、工作面广，施工队伍多等特点，难免发生擅自施工的现象。
2.2质量检测、安全管理人员是否按规定到岗；质量、安全及环保措施是否实施到位
承包商现场质量、安全管理人员应在其位、担其责，巡视人员如发现其不在岗时应即时向承包商提出，要求其履行职责；发现其能力不足时应及时向总监汇报，以便要求承包商调整。检查质量、安全及环保措施落实情况，应坚持措施不到位不许继续施工的原则。
检查正在施工的部位或工序应当符合设计要求和相关的规范、标准等有关规定。如发现有存在质量问题之处，应及时要求承包商技术、质检人员及时处理，避免留有后患，且要求其处理部位未经验收不得进行下一步施工。
坚持每天巡视检查安全施工和环境保护情况，使之始终处于受控状态。当检查发现安全隐患或有产生隐患苗头时，应立即要求施工单位马上整改，必要时可暂缓施工，直至消除隐患。同时要注意检查承包商的安全和环境保护教育情况，调查工人掌握安全文明施工的基本常识和相关的安全操作规程情况，如有不足应督促承包商加强教育，必要时监理人员参与承包商的安全、环境保护教育和安全技术交底。
2.3特种作业人员是否持证上岗
特殊工种工人必须持证上岗，上岗证必须是相关管理部门颁发的证件，无证人员严禁上岗，有证无能人员要予以辞退。要注意检查证件的有效期和年检情况；还要注意观察检查相关人员是否身体健康，是否适合某项工作。聘用的特种作业人员证件应由承包商及时到有关部门换证（特殊情况的要检查聘用证书）。
2.4现场使用的原材料或混合料、外购产品、施工机械设备及采用的施工方法与工艺是否与批准的一致
工程所使用的原材料或混合料、外购产品、施工机械设备必须经监理人员批准，未经批准不得擅自使用；承包商必须按照批准的施工组织设计（包括批准的专项施工方案）组织施工，不得擅自改变或调整施工工艺、方法。一经发现，巡视人员有权立即制止并及时向总监汇报。
原材料或混合料、外购产品、施工机械设备与设计要求不同，确需变更时，应征得总监、设计和业主的同意；巡视人员只能向总监提出意见，不得自行批准。若承包商准备采用另外的施工方法或工艺，应当重新向监理工程师报审，经研究并试验确能提高工效、不增加费用和工期、既安全又环保的，应及时批准实施。巡视时要防止承包商在报审期间实施。
2.5试验检测仪器、设备是否合理使用
试验检测仪器、设备是否状态良好直接影响到工程质量，必须按规定正确使用。比如测量仪器在强烈阳光、雨天、潮湿环境下应伞遮保护。各类试验检测仪器、设备在使用前必须进行常规检验和校正，监理人员要注意检查超过鉴定周期。如全站仪、GPS定位仪等在有资质的部门每年应检测校准一次，磅秤、普通压力表等每半年应校准一次。巡视检查还要看承包商仪器和设备的存放环境是否干燥、通风、防震、防雾、防尘、防锈等。
2.6是否按规定进行了施工自检和工序交接
承包商必须贯彻施工自检和工序交接制度，检查承包商是否存在不自检、不交接或自检、交接不认真现象，否则监理工程师应拒绝验收。注意防止承包商弄虚作假，填报虚假资料，一旦发现必须严查严办。
承包商自检人员应按照专业监理工程师批准的工艺流程和提出的工艺检查程序，在每道工序完工后首先进行自检，自检合格后，申报监理工程师进行检查认可；
若自检不合格，可自行返工或 补救。对完工的工序进行检查，检查合格并签认后进入下道工序；不合格的工序应指示承包人进行缺陷修补或返工。未经签认的不得进行下道工序。
2.7其他
当巡视发现施工管理人员、施工工人、设备数量等不足或工效降低时应立即汇报，以确保施工进度。特殊天气和节假日要加强巡视，防止方式安全问题和事故。大风、雷电、雨雪、高温天气和冬季施工的巡视要有针对性，预计施工作业不安全或影响施工质量时应当要求施工单位及时停工或采取有效措施。节假日的巡视，要注意观察班组工人的思想动态，思想不稳定易出安全、质量问题（事故），此时应要求承包商进行思想教育或采取其他有效措施进行安抚。3 巡视发现问题的处理
3.1严格监理，管帮结合
监理单位接受业主的委托，就要在监理合同期限内对公路工程的质量、费用、进度、安全、环保等方面进行严格的监督和管理。为了促进项目又好又快的完成，除了指出承包商的错误和遗漏，还要主动给予帮助、提供建议，使其信服监理，有利于问题的解决。当巡视发现问题时，进行管帮结合是一种高度责任心的体现。
3.2及时汇报，不越权处理
巡视发现问题后如不在本人职责处理范围内，应及时向上级汇报，并执行好上级的处理意见和要求，不能越权处理；如某些问题在现场不能及时处理，应在巡视检查结束后马上研究解决。
3.3下达监理指令或处罚单
发现问题后承包商一般情况下会按照巡视人员现场提出的要求进行整改；当口头指令（一般性问题）未奏效时，应及时下达“监理工程师指令单（B1）”、“监理工程师通知单(B2)”、“处罚通知”等书面文件，要求限期整改；对重大质量、安全等问题应向业主汇报后及时下达“工程暂时停工指令(B4)”。
3.4与业主代表沟通，征得业主支持
对某些问题，承包商不配合整改或不积极处理时，要及时向业主汇报，征得业主支持，避免在现场与承包商产生冲突；更不要在现场火冒三丈、对班组长和工人指手画脚、带不良口语，造成矛盾激化、情绪对立，使问题解决陷入被动。
3.5召开专题会或专家座谈会
巡视发现重大问题，项目监理机构可召集相关参建单位人员召开专题会议，共同讨论会商解决方案。遇有难题，可邀请有关方面的专家听取汇报并考察现场后，组织召开专家座谈会，研究确定解决方案。4 关于巡视的几点建议
4.1注意信息采集
利用巡视全面采集信息，可采取多种方式留存原始资料，由资料员分类存放、妥善保管，便于调阅。原始资料一般有书面记录、拍照、录音、录像、材料封样、封存现场等。
4.2及时填写记录
巡视记录一般应巡视完毕后即填写，不应次日补写或他人代写；对当即不能处理的问题，可待处理完成后补记处理情况，也可在处理当日的记录中记述，使内容交圈。记录应做到真实、条理、整洁。
4.3提高巡视效率
优化巡视路线，并根据工程进展情况及时调整，提高巡视效率，避免巡视“盲区”。由于各专业监理工程师分工职责不同，应加强监理内部信息沟通和相互配合，防止各自为战、漏掉边缘，应达到“无缝覆盖”。巡视不能流于形式，应合理的划分为重点、次重点和一般几个层次，提纲挈领、统筹安排，避免茫然巡视，力争面面俱到。
4.4加强业务学习
监理日常工作的主要形式就是巡视检查，经验丰富、业务能力强的监理工程师在巡视时能敏锐的发现问题和潜在的发展苗头，从而能采取及时有效的措施进行控制。由于目前公路工程的建设规模和监理企业现状，有不少项目的监理人员达不到这样的层次。因此，应加强业务学习，积极实践，提高专业技能和综合素质，真正的发挥监理的作用。
4.5进行检查评比
巡视记录作为单项监理资料，一般总监应每周检查（可抽查）一次，分季度进行阶段考核、年终综合考评，奖优罚劣，激励监理人员的积极性、主动性，不断改进完善，提高巡视意识，促进巡视质量。结语
通过监理工程师对施工阶段的原材料、各道工序、工艺方法的巡视，及时发现问题并督促承包商采取有效的措施处理，把施工质量控制在验收标准范围内，确保工程质量。巡视检查承包商施工能力、施工环境和自然环境对工程的影响，从进度方面把影响施工的不利因素找出来，逐一分析后逐步去解决，引导承包商排除各种不利因素，有效地控制好工程进度。根据巡视掌握的现场实际情况建议设计挖潜、优化设计，提出合理的变更，为业主节约费用、使业主的有限资金得到更好的利用，认真履行费用控制的职责。还应就安全施工、环境保护等方面进行巡视，做到科学、有效的监管。从而提高监理工作质量，完成合同约定监理任务，立足公路工程基础设施建设，更好的服务于社会。
参考文献
绪论
1细胞工程:应用细胞生物学和分子生物学的理论、方法和技术，按人的设计，有计划地大规模培养组织或细胞以获得生物产品，或改变细胞的遗传物质以产生新的物种或品系。
2生物工程:也称生物工艺学,一般称为生物技术.是以生命科学为基础,利用生物体系和工程学原理来获得生物制品和创造新物种的一门综合技术。
生物工程的发展历史
传统生物工程:利用非纯种微生物自然发酵工艺为标志的生物技术，如酿酒。
1857，Pasteur L发现发酵是微生物作用的结果，而后形成的采用纯种微生物的发酵工艺。
近代生物工程：以抗生素工业的兴起为标志。
现代生物工程：1973基因工程和1975年单克隆抗体技术建立为标志的生物工艺。
生物工程的组成
一、发酵工程
二、酶工程
三、细胞工程
四、基因工程
五、蛋白质工程
六、生化工程 一，发酵工程
1现代发酵工程主要指利用微生物、包括利用DNA重组技术改造的微生物在全自动发酵罐或生物反应器中生产某种商品的技术。
现代发酵工程是生物代谢、微生物生长动力学、大型发酵罐或生物反应器研制、化工原理等密切结合和应用的结果。
2一般发酵工程包括以下基本步骤：（1）菌种选育；
（2）细胞大规模培养即发酵过程；（3）生产活性产物的诱导；（4）菌体及产物的收获
3发酵工程的产品范围非常广泛。
从食品、药品、精细化工产品到许多工业用原料等等，生物可降解塑料PHB等
四，基因工程
1基因工程是指在微观领域（分子水平）中，根据分子生物学和遗传学原理，设计并实施一项把一个生物体中有用的目的DNA(遗传信息)转入另一个生物体中，使后者获得新的需要的遗传性状或表达所需要的产物，最终实现该技术的商业价值。2 稀少珍贵的蛋白质药物
1982年，美国食品与药物管理局批准了首例基因工程产品——人胰岛素投放市场——它标志了基因工程产品正式进入到商业化阶段。
人生长激素、表皮生长因子、肿瘤坏死因子、a-干扰素、纤维素酶、抗血友病因子、红细胞生成素、尿激酶原、白细胞介素-
2、集落刺激因子、乙肝疫苗等等 3畜牧业中的应用
动物疫苗、生长激素等
例：从转基因羊的羊奶中提取出治疗心脏病的药物tPA 4种植业中的应用 用携带外源基因的农杆菌Ti质粒转化植物原生质体，使外源DNA与植物染色体DNA整合，通过原生质体的培养分化成愈伤组织，最后发育成具有新性状的完整植株—转基因植物 抗化学除草剂基因，转基因西红柿，固氮酶基因„„
环境保护等等
五，蛋白质工程：利用生物技术手段，对蛋白质的DNA编码序列进行有目的的改造并分离、纯化蛋白质，从而获得自然界没有的具有优良性质或适用于工业生产条件的全新蛋白质技术。
蛋白质工程的主要步骤通常包括：
（1）从生物体中分离纯化目的蛋白；
（2）测定其氨基酸序列；
（3）借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段，尽可能地了解蛋白质的二维重组和三维晶体结构;（4）设计各种处理条件，了解蛋白质的结构变化，包括折叠与去折叠等对其活性与功能的影响；
（5）设计编码该蛋白的基因改造方案，如点突变；（6）分离、纯化新蛋白，功能检测后投入实际使用。
六，生化工程
生物化学工程是由生物科学与化学工程相结合的交叉学科，主要研究将生物技术的实验室成果转化为生产力过程中的带有共性的工程技术问题。
细胞工程的分类
1、根据研究对象划分：微生物细胞工程、植物细胞工程、动物细胞工程。
2、根据研究水平划分：组织水平、细胞水平、细胞器水平、基因水平。
细胞工程主要研究内容
1）植物细胞和组织培养技术
2）动物细胞和组织培养技术
3）细胞融合技术（体细胞杂交技术）
4）细胞器移植技术
5）染色体工程技术
6）胚胎工程技术
第三章
植物组织培养
第一节 植物组织培养
植物组织培养的基本概念
植物组织培养的应用 1.无性系快速繁殖
2.去除病毒、真菌和细菌等病毒 3.培育新品种的得力手段 4.种质资源的保存 5.次生代谢物的生产
植物组织培养的基本流程
脱分化：一个成熟细胞转变为分生状态的过程即形成愈伤组织叫脱分化。愈伤组织：在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。再分化：愈伤组织内的细胞具有异质性，能重新分化成各种类型的组织细胞。
植物组织培养的理论依据（1）细胞全能性
全能性：任何有完整的细胞核的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的遗传信息，理论上都能发育成为一棵植株。
植物组织培养是建立在细胞具有全能性的理论基础上的，（2）细胞分化
在体内维管组织是高度分化的部分，主要受生长素和蔗糖的影响，木质部的分化与细胞分裂素、赤霉素和细胞分裂相关。
在体外的培养细胞通过茎芽的分化或细胞胚胎发生能再生长成为完整的植株
第二节 植物细胞培养
1所谓细胞培养,是指在离体条件下,将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中进行振荡培养,得到分散成游离的悬浮细胞,通过继代培养使细胞增殖,从而获得大量细胞群体的一种技术.2.与植物组织培养的区别
细胞培养是指动植物细胞在体外条件下的存活或生长,此时细胞不在生长成组织.对于植物,组织培养主要是指我们常用的快繁技术,而细胞培养主要有以生产次生代谢产物为目的的大规模细胞培养技术.植物单细胞培养技术 一.单细胞的分离
１.由植物器官分离单细胞
（１）机械法
主要通过机械磨碎.切割植物体从而获得游离的单细胞．
（２）酶解法
这种方法是目前最为有效的一种获得单细胞的方法，主要是利用果胶酶的处理，获得大量的细胞． ２.由愈伤组织获得单细胞
该方法通过愈伤组织培养获得愈伤组织，并通过培养使愈伤组织增殖．由于愈伤组织细胞之间的结构非常疏散，因此可以通过高频率振动使细胞脱落，从而获得单细胞．
二.单细胞培养方法
（１）平板培养法:指将制备好的单细胞，按照一定的密度，接种在约１mm厚的薄层固体培养基上进行培养的方法．
（２）看护培养法:
指利用生长的愈伤组织所产生的物质来培养单细胞的方法
（３）饲养层培养法
指用处理过的无活性的或者分裂很慢.不具备分裂代谢能力的细胞来饲养所需培养的细胞，使其分裂和生长．
（４）液体浅层静置培养法
将一定密度的悬浮细胞放在培养皿中形成一浅薄层，封口静止培养．
（５）细胞悬浮培养法
主要指将细胞接种于液体培养基中，在保持良好的分散状态情况下进行培养
悬浮细胞同步化的方法
（一）物理方法
1、体积选择法
2、冷处理法
（二）化学方法
1、饥饿法
2、抑制法
3、有丝分裂法
细胞的保存
１.继代培养保存法
每隔1—2周换液进行一次继代培养 ２.低温保存法
5—10℃培养,每10天换液 ３.冰冻保存
原生质体的分离和培养
原生质体定义：植物除去细胞壁分离剥下的部分 来源:叶片,根尖,愈伤组织.一，原生质体的分离
1）机械法：在细胞质壁分离的状态下，用利刀切割
2）酶解法
二，.原生质体鉴定与活力测定
(一)原生质体鉴定
1.低渗爆破法
2.荧光染色法
(二)原生质体活力测定
1.渗透压法
2.氧电极法
3.二乙酸荧光法(FDA)三，原生质体培养方法
1.液体培养法
2.固体培养法
3.双层培养法
在琼脂培养基上部加入一薄层液体原生质体培养液培养原生质体
四，原生质体的发育和植株的再生
1.细胞壁再生
2.分裂
3.愈伤组织的形成 4.植株再生
3.3植物器官培养
植物器官培养：指将植株上的各种器官从母体上分离出来，放在无菌的人工环境中让其进一步发育，最终长成幼苗的过程。主要包括：毛状根，芽，体细胞胚等
3.31植物脱毒培养技术
如何在一个已经受感染的群体中获得无病植株？
a.种子繁殖
b.消除病原菌 消除病原菌的方法
a.热处理：热水或热空气。b.茎尖培养。c.愈伤组织培养。
3.32 体细胞胚胎发生
体细胞胚：在离体或活体条件下，由除受精卵之外的体细胞形成的胚。体细胞胚胎发生的过程
1、取植物的一部分组织(如根、茎、叶的切段或胚等)，用组织培养的方法，分裂产生愈伤组织，这个阶段一般采用固体培养方法。通常所采用的脱分化试剂是2,4-D，有的植物除2,4-D以外，还需要附加少量的细胞分裂素。至于2,4-D的浓度，则因植物而异，一般宜采用较高的浓度。外植体的年龄也很重要，一般幼龄的较容易产生愈伤组织。
2、用所得的愈伤组织进行悬浮培养，使细胞分散。
3、将悬浮培养物倒在没有植物激素的固体平面培养基上，再进行固体培养，其中有些胚性细胞就有可能发生体细胞胚。
3.33 人工种子
利用人工种皮包被体细胞胚可以制造人工种子，用以繁殖遗传工程植物，自交不亲合植物，稀有植物，远缘杂交种等
人工种皮：藻酸钠 人工种皮的选择: 1)对所要包埋的胚乳无伤害。
2)有足够的柔软性,可以保护胚乳,并允许其发育.3)具有一定的硬度,避免运输.操作过程中的伤害.4)具有穿透性,传递细胞生长所需的营养;并能容纳其他附加成分。5)可以用现有的温室或农机机械进行播种。
海藻酸盐具有成胶容易、操作条件温和、使用方便、毒性极低、成本低廉等特点。
人工种子的包埋方法
1.复合凝聚：两种带相反电荷的电解质在水中相互作用形成多聚体包被溶液.2.界面聚合：在两相界面处因溶解度低而成膜.3.离子交换凝胶：经过离子交换而形成络合物成为凝胶.4.变温凝胶：高温下为液体，低温下为固体凝胶。
3.4植物细胞的生物反应器大规模培养
生物反应器培养（培养方法和各自特点）
1、分批培养：一次性添加培养液培养，期间不更换培养液。是一种封闭式的培养体系。
2、半连续培养：在培养过程中将部分培养液和新鲜培养液进行交换的培养方法。
3、连续培养法：在培养过程中不断抽取悬浮培养物并注入等量新鲜培养液，使培养物不断补充并保持其恒定体积的培养。
目前生物反应器主要分为以下三种：
机械搅拌式、鼓泡式、气升循环式
植物细胞两相培养技术
如何使细胞内的次生代谢产物分泌出来并加以提取分离是降低成本、进行连续培养的关键。两相培养技术是在培养体系中加入水溶性或脂溶性的有机物或者具有吸附作用的多聚化合物，使培养体系形成上下两相，细胞在水相中生长，合成的次生代谢产物分泌出来后转移至有机相中。
可以减少产物的反馈抑制作用从而提高产物含量；通过有机相的不断回收及循环使用实现培养的连续化。
植物细胞固定化方法
1、海藻酸盐固定化
2、卡拉胶固定化
3、琼脂糖固定化
4、琼脂固定化
植物细胞固定化生物反应器培养
1、流化床生物反应器
2、填充床生物反应器
3、膜生物反应器
第四章
动物组织培养
1、连接方式：
（1）紧密连接
（2）间隙连接：质膜间有2—3nm的间隙
（3）隔壁连接：20--30nm的间隔，有横隔
（4）中间连接： 20--30nm无横隔的透明区
（5）桥粒连接
动物细胞与组织培养的定义
定义：是从动物体内取出细胞或组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术 体外培养分为原代培养和传代培养
原代培养指将机体取出的细胞或组织进行实效培养的过程
传代培养：从原代培养的细胞继续转接培养
体外培养的细胞根据生长方式分为
1、贴附型细胞
（1）成纤维细胞型细胞
（2）上皮型细胞（3）游走型细胞
（4）多形型细胞
2、非帖附型细胞
动物细胞体外培养的特点
（1）哺乳动物细胞只有附着在固体或半固体的表面才能生长
（2）动物细胞对营养要求更加苛刻
（3）对于培养环境的适应性更差，对环境极其敏感
（4）动物细胞生长缓慢，培养时间较长
（5）动物细胞培养还需要防治污染问题 培养工具：无毒塑料制成的培养瓶、培养皿
载体：空心纤维和微珠 培养条件
（1）温度：最适温度37℃
（2）PH：最适PH7.2—7.4
（3）气体
（4）营养：①天然培养基
②合成培养基 ③无血清培养基
④动物细胞培养必需的溶液
动物细胞培养必需的溶液
1、平衡盐水
2、培养基PH调整液
3、细胞消化液
4、抗生素溶液
培养液中加入适量的抗生素，可以预防由于操作不慎而产生的微生物污染。
青、链霉素:青霉素能抑制细菌细胞壁的合成;链霉素能抑制细菌蛋白质的合成.卡那霉素:卡那霉素也能抑制细菌蛋白质的合成.制霉菌素:干扰细菌细胞质膜的合成.体外培养细胞的生长与增殖过程
（1）原代培养期：1—4周（2）传代期：10—50次
（3）衰退期
动物细胞培养的传统方法
（1）悬滴培养法
（2）旋转管培养法（3）灌注小室培养法
（4）培养瓶培养法（5）培养板培养法
生长特
①游离期
②吸附期：平均时间5－20分钟
③繁殖期：接触抑制
④退化期：轮廓变强，细胞内有膨胀的线粒体颗粒堆积
动物细胞大规模培养技术
（1）气升式深层培养系统
（2）悬浮培养技术
（3）微载体培养系统
（4）多孔载体培养
（5）微囊化培养技术
（6）中空纤维培养法
组织工程是应用细胞生物学和工程学原理，将人体某部分的组织细胞种植和吸附在一种生物材料的支架上进行人工培养繁殖、扩增，然后种植到人体内所需要的部位，从而达到器官修复或再造的治疗目的的一种技术
器官培养：取出动物器官或进一步修整成器官型植块，将其接种到培养基上或培养液中，在适当的营养、气相、生长基质等条件下使其存活或生长的技术
第五章
细胞融合与单克隆抗体
第一节
细胞融合 定义：又称体细胞杂交.指用自然或人工方法,使两个或更多个不同来源的原生质体相融合并使之分化再生、形成新物种或新品种的技术。细胞融合的意义
1、用于遗传性状的改良。
2、克服远缘杂交中的不亲和障碍。
3、可以更加广泛的组合起各种植物的优良遗传性状，从而培育出理想的新品种。
细胞融合技术
为了使制备好的原生质体或细胞能融合在一起，选择适宜有效的诱导融合方法很重要。诱导融合方法可分为：
1、仙台病毒法
2、PEG（聚乙二醇）诱导法
3、电融合诱导法
一，生物法——仙台病毒法
仙台病毒也称日本血凝病毒，是RNA病毒，多呈颗粒状，由于被感染细胞表面发生某些改变，使得这些细胞容易发生融合，甚至处死的仙台病毒也具有促进细胞融合的作用。
仙台病毒具有促使凝结的细胞发生融合的能力，这是因为各种能被其作用的细胞均有相应受体的缘故。现已基本知道，其促进细胞融合的有效部位在于它的膜，被超声波打碎的病毒膜片仍具有促进细胞融合的功能。
病毒促使细胞融合的主要步骤如下
1、两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼 此靠近。
2、通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间相互渗透，胞质互相渗透。
3、两个原生质体的细胞核互相融合，融为一 体。
4、进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种子细胞。
二、PEG（聚乙二醇）诱导法
原理：由于PEG分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成氢键，从而在原生质体之间形成分子桥，其结果是使原生质体发生粘连进而促使原生质体的融合。
PEG诱导融合的特点
1）其优点是融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过程不受物种限制。
2）PEG可能对细胞有毒害。
三、电融合诱导法 电融合的基本过程：
1）细胞膜的接触：当原生质体置于电导率很低的溶液中时，电场通电后，电流即通过原生质体而不是通过溶液，其结果是原生质体在电场作用下极化而产生偶极子，从而使原生质体紧密接触排列成串；
2）膜的击穿：原生质体成串排列后，立即给予高频直流脉冲就可以使原生质膜击穿，从而导致两个紧密接触的细胞融合在一起。优点：
1、融合率高，达70％－80％，甚至100％。
2、不存在对细胞的毒害问题。
3、融合技术操作简便。
融合细胞的选择
1、遗传互补筛选法
2、抗性互补筛选法
3、利用物理特性筛选法
4、利用生长特性筛选法
1、遗传互补筛选法
利用每一亲本贡献一个功能正常等位基因，纠正另一亲本的缺陷，令杂种细胞表现正常。
如：亲本1：叶绿体缺陷型
亲本2：光致死型
两亲本在光照下一种死亡，另一种呈白色，融合细胞长成植株呈绿色，并能成长。
2、抗性互补筛选法
利用亲本细胞原生质体对抗生素、除草剂及其它有毒物质抗性差异选择杂种细胞。
如：亲本1：对放线菌素D抗性，但在MS培养基上不能生长
亲本2：对放线菌素D很敏感，但能在MS上生长
杂种细胞能在含有放线菌素的MS培养基上生长，而亲本和其它细胞死亡。
3、利用物理特性筛选法
根据亲本的原生质体大小、颜色、漂浮密度及电泳迁移率、形成的愈伤组织的差异筛选杂种细胞。
亲本1：用异硫氰酸荧光素染色原生质体
亲本2：叶肉细胞原生质体
在荧光显微镜下，亲本1为红色，亲本2为绿色，杂种细胞可以区分。
4、利用生长特性筛选法
利用原生质体对培养基成分要求与反应的差异选择杂种细胞。
例如：粉兰烟草与朗氏烟草细胞原生质体均需外源激素才能生长，但其融合细胞可以产生内源激素，在培养基上不需加激素。
第二节单克隆抗体
抗原：进入动物体内对肌体的免疫系统产生刺激作用的外源物质。
特点：外源性、结构性（分子表面具有稳定的环状结构基团作为识别位点）、特异性（抗原与抗体的反应）。
单克隆抗体(monoclonal antibody，简称McAb)：将能够产生抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。
单抗的制备过程 动物免疫与亲本细胞的选择 细胞融合：淋巴细胞杂交瘤的制备 3 HAT培养基筛选杂交瘤细胞 杂交瘤细胞的筛选：有限稀释法等 5 杂交瘤细胞的克隆化培养 6 单克隆抗体的大量制备
一、亲本细胞的选择
骨髓瘤细胞：一般不分泌抗体，能在体外无限繁殖和连续继代培养，且为HPRT－(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)或TK－（胸腺嘧啶核苷激酶）。多用BALB/C 小鼠的骨髓瘤细胞。
三，HAT选择系统
HAT是含一定浓度次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）及胸腺嘧啶核苷（T）的一种选择性培养基，其中三种成分与细胞DNA合成有关。DNA合成途径有两种。
杂交瘤技术中，常选用次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷（HPRT-）骨髓瘤细胞或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-）骨髓瘤细胞为亲本之一。HPRT-细胞的嘌呤只能由全合成途径产生； TK-细胞的嘧啶只能由全合成途径合成。
含氨基喋呤培养基抑制了细胞内嘌呤和嘧啶的全合成途径。
淋巴细胞具有合成DNA的两条途径。
杂种细胞通过互补作用获得HRPT或TK基因，可应用培养基中次黄嘌呤及胸腺嘧啶核苷，通过补救合成途径合成DNA。
在HAT培养基中，HPRT-或TK-亲本细胞死亡，淋巴细胞亦逐渐死亡，只有杂种细胞存活。
单抗的大规模生产
1、利用微载体、微囊、旋转瓶、中空纤维培养系统等进行大规模培养。
2、体内接种杂交瘤细胞，制备血清或腹水 1）实体瘤法：
对数生长期的杂交瘤细胞按1-3×107个/ml接种于小鼠背部皮下，每处注射0.2ml。待肿瘤达到一定大小后（一般10-20天）则可采血，从血清中获得单抗含量可达1－10mg/ml，但采血量有限。2）腹水的制备
将稳定分泌单抗的细胞株，通过扩大培养，接种于Balb/c小鼠腹腔内，使其以腹水瘤形式在小鼠腹腔内增殖，从而得到大量含单抗的腹水。
方法是将异十八烷或石蜡油注入Balb/c小鼠腹腔，0.5ml/只，7天后腹腔接种1×106 个 杂交瘤细胞。10-20天后即可抽取腹水，每毫升腹水中约含5-20mg单抗。
第六章
染色体工程
染色体工程: 是在细胞遗传学研究的基础上,利用已在染色体上标记的基因, 人们按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体，从而达到定向改变遗传性和选育新品种的一种技术。
第一节 人工诱导多倍体
常见多倍体有三、四、五、六和八倍体。
多倍体产生的途径
1、原种或杂种所形成的未减数配子的受精结合2、原种或杂种的合子的染色体加倍 染色体加倍的技术方法
1、生物学方法
生物学上主要通过杂交尤其是种间杂交获得异源多倍体。
例如用雌性草鱼（2n＝48）与雄性三角鲂（2n＝48）杂交可以获得子一代染色体数目为72的草鲂杂种三倍体。
这种不同科、属、种之间的远源杂交、会导致第二极体不排出，而产生多倍体
2、物理学方法
温度休克法：冷休克法（0～5度）和热休克法（30度左右）。
定义：用略高于(冷休克)或略低于(热休克)致死温度来诱导三倍体或四倍体的方法。
关键：能否成功地阻止第二次成熟分裂或第二极体的排出。要达到这一点，必须考虑温度处理的开始时间（TA）、处理持续时间（D）和处理温度（T）这三个因素。目前对鱼类使用温度休克法诱导三倍体的工作报道较多。一般来说，冷水性鱼类如鲑科种类应用热休克法、而温水性鱼类用冷休克效果较好。
优点：廉价、易操作，是诱导动物细胞多倍体化的常用手段，也有利于大规模生产使用。
水静压法：采用较高的水静压（65kg/cm2）来抑制第二极体的放出或第一次卵裂产生多倍体。
这种方法诱导率高（一般在90％～100％）、处理时间（3～5min）短，对受精卵损伤小、成活率高。
但是，该法需要专门的设备——水压机，成本较高，其样品室容量有限，处理卵的量有限，所以不适于大规模生产的。
高盐高碱法:高盐高碱法是近几年才尝试使用的方法,采用高PH值或高盐条件来诱导产生多倍体.3、化学方法
有些化学物质也可以用来阻止第二极体的排出或受精卵的有丝分裂而产生三倍体或四倍体。
细胞松弛素B能抑制肌动蛋白聚合微丝，从而抑制细胞质分裂,常用于动物多倍体诱导。
秋水仙碱可以抑制细胞分裂中纺锤丝的形成，因而抑制有丝分裂，这在植物中已经广泛应用。
PEG是一种常见的细胞融合剂.用PEG处理虹鳟精子,使精子细胞融合后,再与卵子受精,也可获得三倍体.其它药物还有麻醉剂，如N2O、和聚乙二醇等。
缺点：化学药品一般比较昂贵、且具有毒性，影响处理后的胚胎发育，同时加上化学药物诱导产生的多倍体往往是在育种上没有价值的镶嵌体，所以化学方法在实际中的应用不及物理方法。第二节 人工诱导雌、雄核发育
雌核发育:俗称假受精，意指精子虽然正常地钻入和激活卵子，但精子的细胞核并未参与卵球的发育，精子的染色体很快消失，胚胎的发育仅在母体遗传的控制下进行。
赫特威氏效应:指只有在适当的高辐射剂量下，才能导致精子染色体完全失活，届时精子虽能穿入卵内，却能起到激活卵球启动发育的作用。
雌核发育的关键问题..要达到二倍体雌核发育目的，必须解决两个最主要的问题。第一：人为地使精子的遗传物质失活； 第二：阻止雌性个体染色体数目的减少。
染色体转移又称为染色体转导，是指把同特定基因表达有关的染色体或染色体片段取转入受体细胞，使之表达，并能在细胞分裂中一代一代传递下去的技术。
微细胞：是指含有一条或几条染色体（即只含有一部分基因组），外有一薄层细胞质和一个完整质膜的核质体
微细胞介导的基因转移法 方法：
1、微细胞的制备
用化学试剂阻断供体细胞的有丝分裂，使染色体停滞在有丝分裂中期，从而在染色体周围逐渐形成核膜而形成众多的微核。然后在细胞松弛素B的作用下使微核逐渐突出细胞膜外，最后经过离心获得含有一个微核、四周有一薄层细胞质和质膜界限的微细胞
2、微细胞融合与细胞融合方法相同
第七章 胚胎工程
胚胎工程（embryo engineering）是指所有对配子和胚胎进行人为地干预，使其环境因素、发育模式或局部组织功能，发生量和质的变化的综合技术。
胚胎工程的意义
1、发挥优良母畜的繁殖潜力
2、促进家畜改良的速度
3、作为胚胎操作的基础
4、保存遗传资源
精子的成熟和获能
精子离开精巢后，无使卵受精的能力，它必须经过在附睾中成熟及在雌性生殖道内获能，才具有使卵受精的能力。
在附睾液和精液中存在着附睾蛋白和精清蛋白，称为去获能因子，精液中的精子表面被覆了这种因子。在雌性生殖道中的分泌物可以去掉这些覆盖物而使精子质膜、顶体发生一系列变化。
早期胚胎发育
卵裂：合子发生分裂形成无数小细胞。卵裂细胞不生长而连续分裂。主要是卵裂球的有丝分裂器与表层胞质变化的过程。
桑椹胚：卵裂数次后，出现实心细胞团，形似桑椹得名 胚胎发育
胚泡：哺乳动物的胚胎处于16细胞期的桑椹期时，胚胎是球型细胞团，细胞之间形成充满液体的腔隙，然后它们联合形成一个大腔位于胚胎的一端，即为胚泡结构。
囊胚：桑椹胚随着卵裂出现充满液体的囊胚腔，围绕囊胚腔的细胞组成囊胚层
原肠胚：囊胚继续发育、分化，形成双胚层或三胚层的原肠胚。外层为外胚层、迁到里面的称为内胚层和中胚层。
7.2配子操作 采卵(方法)1输卵管内采卵：以鼠为例，一般为了防止干燥可将屠杀后取出的输卵管放在平皿内，用石蜡油覆盖，在实体显微镜下找到输卵管膨大部，用磨尖的钟表镊子，切开输卵管膨大部，使内容物溢出而找到卵。
2对于稍大一些的动物可以用活体输卵管采卵，例如将兔子的腹部正中线切开，找出子宫角和输卵管。然后利用逆向冲卵法，自子宫输卵管连接处插入注射针，伞部以平皿接着冲洗；或在子宫输卵管连接处下1cm处，剪成V形小口，插入塑料细管，自伞部输卵管腹腔口插入，将液体推入，得到冲出的卵。
3.对于屠宰场中的大中型动物，可以用注射器插入卵泡中抽取，或在手术后暴露卵巢，以注射器自卵泡中取卵。
4.对人而言通常在超数排卵步骤处理后，用B超检测卵巢表面卵泡发育情况，然后，在腹腔后部体壁进行局部麻醉，将腹腔镜望远镜插管插入，以观察卵巢表面卵泡成熟情况，然后用套有聚四氟乙烯套管的吸卵针将卵吸出，放平皿中检查。
体外受精（in vitro fertilization，IVF）就是将哺乳动物卵母细胞从母体取出，在体外进行精卵结合的过程。
胚胎操作
1胚胎培养
2胚胎移植
3胚胎保存
4胚胎分割
5胚胎嵌合 培养方法
即微滴培养法、输卵管培养法和中间受体培养法。
微滴培养法是利用塑料平皿制成50μl培养液小滴数个，每滴加入一定数量胚胎，在上面覆以灭菌且平衡好的液体石蜡。或先将液体石蜡倒入平皿中，用注射器吸培养液和胚胎，垂直伸到平皿底部制成小滴。然后将培养皿放到5％CO2、95％空气饱和湿度的37.5℃CO2培养箱中培养所需要的时间。如果更换培养液，应在实体显微镜下，用注射器或口控微吸管将培养液吸出，并加入新培养液，继续培养。
输卵管培养法取发情动物的输卵管洗涤后，置于培养皿中，培养液面超过输卵管，将同种或异种动物的胚胎自伞口注入输卵管，进行培养。中间受体培养法是指，将受精卵或早期胚胎移入同种或异种动物的胚胎，该方法没有种属特异性，但为了在培养后容易找到胚胎和对胚胎的保护，一般先用琼脂包埋后再培养。同期发情
胚胎移植时，供体胚胎必须与受体子宫内膜发育状态高度同步化，才能获得好效果，这个过程称为同期发情（oestrus ynchronization），包括自然同期发情和人工同期发情。
自然同期发情即不经任何药物处理，依靠动物自身的性周期规律，选择处于适当时期的母畜作为受体。
胚胎移植
移植分为手术移植和非手术移植，胚胎保存
保存的方法可以分为非冷冻保存和冷冻保存。
非冷冻保存主要有三种方法，即异种动物体内保存法、卵和胚胎的37℃保存法和冷藏保存法。
胚胎分割的原理
根据卵裂球具有发育成为一个个体的全能性的特点，人们就考虑用这种实验技术，生产同卵双胎或多胎，以加速优良种群的繁殖。
胚胎的分割在不同时期有不同的分离培养方法，如卵裂球分离培养法、致密化前各期胚胎分割法、桑椹胚至囊胚期胚胎分割法等。
嵌合体（chimera）是指在同一个体中，由于基因型不同的细胞或组织互相接触，且各自独自并存的状态
发育早期，如卵裂球甚至受精卵所形成的嵌合体称为原发性嵌合体，而把在发育的较晚期，如胚层已经分化，或器官开始形成后，通过组织移植或嫁接等方法所形成的部分组织或器官的嵌合，称为次生性嵌合体
植入前胚胎嵌合体的制作方法
聚合法
第一种可以利用胚胎与胚胎聚合，即使用发生致密化后的胚胎，用酸性台氏液（pH2.5）或0.5％链霉蛋白酶除去透明带，充分洗涤后，放入含有5μg/ml植物凝集素A（PHA）的聚合液滴中。让一个胚胎垂直位于另一胚胎之上，借机械压力和PHA的作用，更易聚合。若放到37℃时，效果更佳，聚合完毕后，洗除PHA，继续培养，或进行胚胎移植。
第二种是利用卵裂球或细胞与胚胎聚合，将胚胎卵裂球解离或用其他游离的细胞，与胚胎聚合。当用一个已经除去透明带的胚胎时，将卵裂球或细胞在胚胎的正上方慢慢释放，使两者直接接触，借助PHA的作用使之聚合。当用两个无透明带胚胎时，以类似“三明治”的方式，把细胞放到两个胚胎之间，使之聚合。
第三种利用两种细胞间聚合。聚合时，各取数个细胞或卵裂球，放入空透明带内，用PHA使之聚合在一起，并用琼脂包埋。通过中间受体培养一段时间后，观察其发育的情况。
囊胚注射法
第八章
细胞重组与克隆技术
细胞重组：又叫细胞拆合，是指从活细胞中分离出细胞器及其组分，然后在体外一定条件下将不同细胞来源的细胞器及其组分进行重组，使其重新装配成为具有生物活性的细胞或细胞器的一种试验技术 细胞重组的方式：
1、胞质体与完整细胞重组形成胞质杂种
2、微细胞与完整细胞重组形成微细胞异核体
3、胞质体与核体重新组合形成重组体
细胞重组技术
（一）显微操纵术
（二）细胞分离技术
1、梯度沉降分离法
2、等密度沉降分离法
3、流式细胞仪分离法
（三）细胞破碎方法
1、超声波破碎法
2、反复冻融法
3、化学裂解法
4、高速组织捣碎法
（四）细胞器的分离
（五）胞质体、核体和微细胞的制备
克隆的技术方法
（一）细胞核移植
细胞核移植技术是一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵内的精细技术
（二）核移植技术一般操作程序
1、核受体细胞的准备（1）卵母细胞的来源（2）核受体细胞的去核
2、核供体细胞的准备（1）核供体细胞的要求
（2）核供体的种类：胚胎卵裂球和体细胞
3、细胞核移植
胞质内注射和透明带下注射
4、激活
电刺激和化学试剂法（乙醇、DMAP）
5、重组胚的体内或体外培养
6、胚胎移植
克隆动物一般制备技术
1、胚胎细胞核移植法
2、胚胎干细胞核移植
3、胎儿成纤维细胞核移植
第九章
转基因生物与生物反应器
几种有效的转基因方法
一物理方法1电穿孔法
2、微注射法
3、裸露DNA直接注射法
4、基因枪介导的DNA转移 二，化学方法
1、DEAE－葡聚糖法
2、DNA-磷酸钙沉淀法
3、脂质体（liposome）介导的基因转移 三，生物学方法 病毒介导的基因转移
病毒载体包括：
DNA病毒载体
改革开放以来, 我国进入了大规模的经济建设时期。工程建设规模逐年加大, 建设项目的科技含量越来越高, 建筑施工水平显著提高。但是, 在施工过程中, 安全监理工作还存在着一定的差距, 安全事故时有发生。2000年以来, 建筑行业因高空坠落、土方塌陷、脚手架倒塌、支架失稳、触电等导致的安全事故频繁发生, 给国家造成了巨大的经济损失, 给伤亡人员家庭带来了重大的不幸。如何做好建筑业的安全监理工作, 避免或减少伤亡事故的发生, 成为社会各界关注的焦点问题。因此, 改革传统的工程建设监理模式迫在眉睫。
1 安全监理工作的现状
目前, 我国的工程建设监理项目中, 有相当一部分项目监理机构只注重对施工质量、施工进度及资金投入进行监控, 安全监理工作并没有得到应有的重视, 往往只是将其作为质量控制的附属内容。有些监理机构甚至没有配备专业的安全工程技术人员。这样, 在工程建设中, 安全监理的作用就不能完全发挥出来, 给施工现场留下了安全隐患。
近年来, 建筑物倒塌、大桥垮塌等事故频繁发生。有些事故是在建设过程中发生的, 而有些是在投入使用后才发生。例如1996年, 广东韶关公路大桥在即将竣工时发生坍塌, 造成数十人死亡。1997年3月, 福建莆田江口新光电子有限公司4层职工住宅楼发生整体倒塌, 78人受伤, 32人死亡。1999年3月, 宁波跨海大桥在尚未合龙的情况下桥梁出现裂缝。诸如此类的建筑事故, 究其原因, 有施工质量的问题, 也有施工过程中违章作业和违章指挥的问题。要从根本上扭转工程建设项目事故频发的局面, 必须加强工程建设中的安全管理工作, 加大安全监理的力度。
中咨工程公司所监理的核电项目, 严格遵守国家安全监理的相关规定, 在实践中不断探索规范化的安全监理程序, 总结出一整套经得起实践检验的安全监理经验, 从2006年至今所监理的项目未发生过任何安全事故。
2 工程建设中的安全监理
2.1 施工准备阶段的安全监理
首先, 项目监理机构要求建设单位提供以下文件和资料。①施工现场及毗邻区域内的供水、供电、供气、供热、通信、广播电视、排水等地下管线资料和地质水文资料, 相邻建筑物、构筑物、地下工程的有关资料。②拆改、重新装修工程, 如涉及建筑主体和承重结构变动或荷载发生变化的, 建设单位应提供原设计单位或具有相应资质等级的设计单位的设计文件, 对结构的安全性进行认定。当建设单位不能提供这类文件时, 监理方应提出不宜开工的书面陈述。
其次, 项目监理机构要求工程承包单位提供以下文件。①企业资质证书和安全生产许可证书。②承担安装、装卸起重机械设备, 整体提升脚手架、模板等自升式架设设施的企业和负责拆除、爆破工程的企业, 要提供企业的专项资质证书及专项安全生产许可证。③承包单位项目部的安全生产组织机构及负责人名单, 并附项目经理、现场专职安全生产管理人员的资质证书及建设行政主管部门核发的安全教育培训合格证书。④特种作业人员的作业操作资格证书、上岗证书、安全培训证书等。
再次, 项目监理机构要严格审查上述文件的合法性及有效性。总监理工程师必须组织专业监理工程师, 对施工组织设计及专项安全施工技术措施进行审查。审查内容主要包括:①施工单位编制的地下管线保护措施方案, 是否符合强制性标准的要求。②基坑支护与降水、土方开挖与边坡防护、模板、起重吊装、脚手架、拆除、爆破等分部分项工程的专项施工方案, 是否符合强制性标准的要求等。
2.2 施工实施阶段的安全监理
首先, 项目监理机构要时刻关注施工过程中的安全监理内容。①监督施工单位按照施工组织设计中的安全技术措施和专项施工方案组织施工, 及时制止违规施工作业。②定期巡视检查施工过程中危险性较大的工程作业情况。③核查施工现场施工起重机械、整体提升脚手架、模板等的自升式架设设施和安全设施的验收手续。④检查施工现场各种安全标志和安全防护措施是否符合强制性标准的要求, 并检查安全生产费用的使用情况。⑤督促施工单位进行安全自查, 并对施工单位的自查情况进行抽查, 参加建设单位组织的安全生产专项检查。
其次, 项目监理机构要针对安全生产和管理中存在的各种问题召开安全生产专题会议, 并做好会议纪要。对安全生产管理实施细则中规定的关键控制点, 实施必要的监控。
再次, 项目监理机构要做好安全监理记录, 完善自身的安全管理资料。包括施工单位安全保证体系资料、监理规划安全部分、监理安全管理细则、监理安全检查表、安全类书面指令台账、施工单位安全检查周报等, 记录及资料应当真实、清楚。在工程竣工后, 监理单位还应将有关安全生产的技术文件、验收记录、监理规划、监理实施细则、监理月报、监理会议纪要及相关书面通知等按规定立卷归档, 以备日后考证。
2.3 履行安全监理职责
首先, 要认真学习和掌握工程建设法规和强制性标准, 加强安全知识的学习, 努力钻研专业技术知识, 提高对施工组织设计中的安全技术措施或专项施工方案的技术性审查能力, 提高安全管理的专业水平。
其次, 加强对安全薄弱环节、安全事故多发部位的巡视和检查, 凡在施工方案中提到的安全措施, 一定要百分之百地兑现。对不符合工程建设强制性标准的建设行为, 应当坚决制止。当发现存在安全隐患时, 要求施工单位暂时停止施工, 立即进行整改。
再次, 如实记录安全监理工作, 及时收集、整理和保存安全生产资料、事故现场资料, 及时向监理企业、建设单位和建设主管部门汇报安全监理情况。
3 结语
安全监理是一项极其重要的工作, 有安全才会有质量, 安全与质量相互依存、相互渗透、相互牵连。在工程建设中, 一定要重视安全监理工作, 积极构建安全监理体系, 努力将国家有关工程建设安全的法律法规融入到安全生产中, 最大限度地发挥工程技术的潜力, 促进我国工程建设健康、有序地发展。
参考文献
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摘要：建设监理制是我国工程建设领域项目管理体制的重大改革举措之一，是一种科学的管理制度。由于水运工程施工的特殊性，影响其质量的复杂性，所以水运工程监理有其自身特点，本文从实践出发，对水运工程监理的要点进行探讨，希望为同僚的监理工作的实施具有理论支持和参考借鉴作用。
关键词：水运工程；监理要点；监理实践
1.水运工程建设监理制的重要意义
建设监理制是我国工程建设领域项目管理体制的重大改革举措之一，是一种科学的管理制度，监督管理的对象是建设者在工程项目实施过程的技术经济活动；要求这些活动及其结果必须符合有关法规、技术标准、规程、规范和工程承包合同的规定；目的在于确保工程项目在合理的期限内以合理的代价与合格的质量实现其预定的目标：建设监理制是我国实行项目法人责任制、招标投标制而配套推行的一项建设管理的科学制度。它的推行，使我国的工程建设项目管理体制由传统的自筹、自建、自管的小生产管理模式，开始向社会化、专业化、现代化的管理模式转变。
2.水运工程监理的内涵
2.1水运工程建设监理概念
按照水运部制定的《水运工程建设监理规定》，水运工程建设监理是指监理单位受项目法人委托，依据国家有关工程建设的法律、法规、规章和批准的项目建设文件、建设工程合同以及建设监理合同，对工程建设实行的管理。水运工程建设监理的主要内容是进行工程建设合同管理，按照合同控制工程建设的投资、工期和质量，并协调有关各方的工作关系。
2.2工程建设监理的内涵
2.2.1针对项目建设实施的监督管理
工程建设监理是围绕着工程项目建设来展开的，离开了工程项目，就谈不上监理活动。监理单位代表项日法人的利益，依据法规、合同、科学技术、现代方法和手段，对工程项目建设进行程序化管理。
2.2.2行为主体是监理单位
监理单位是具有独立性、社会化、专业化特点的，专门从事工程建设监理和其它技术服务活动的组织。监理单位在工程建设中是独立的第三方，只有监理单位才能按照“公正、独立、自主”的原则，开展工程建设监理工作。
2.2.3需要项目法人委托和投权
工程建设监理的实施需要项目法人委托和授权，这是工程建设监理的特点所决定的，也是建设监理制所规定的。工程建设监理不是一种强制性的，而是一种委托性的，这种委托与政府对工程建设的强制性监督有很大区别。
3.水运工程监理要点
3.1监理职责
3.1.1工程监理制度
水运工作想要开工，之前的准备工作之中，必然要有与该工程特点相匹配的监理工程师责任制度，使得工程质量与其有紧密的关联。
在现场监理工作之中，较为重要的一个程序就是工地会议制度，对于监理来讲，这是对工程的进展及质量情况与施工单位进行交流沟通最为重要的渠道。通过工地会议制度，对工程中出现的进度以及质量等方面的监督问题，进行良好解决，以保证水运工程的顺利进行。
另外，在水运工程开工之前，还要建立工程资料管理制度，及时将工程试验相关的资料，以及相关承包人及业主这二者之间的资金、进度等方面的报表进行整理，通过分类及编号进行存档，使所有的信息与资料都能够完整、真实与系统。
在水运工程施工过程之中，监理组要在内部形成监理制度，通过内部会议将监理自身的职责范围予以规定，同时还要将工程中出现的质量、进度及存在的问题进行整理分析，以便得到基本的监理情况，安排接下来的工作。
3.2监理职责
监理人员要针对水运工程的特点，在工程施工的过程中对承包人提交的工程计划进行一一审查，与此同时还应当监督承包人在施工过程中的每一个环节，使承包人能够按工程进度计划进行施工。[5]对现场进行效验工作，对施工单位的施工进行验收，对于工程中所使用的设备、材料以及相关的人员组织进行查验。对工程要按规定频率进行抽查，同时要进行巡视和旁站等工作。对于工程进度质量及问题每月要在监理月报中进行全面阐述，同时将月报上报于业主。
工程监理的工作通过实践可以表明，工程中因为监理工作的到位会取得良好的效果，而这与上述制定的各项制度都有着密切的关系。因此要切实的将上述制度进行全面的落实。
4 工程质量监理实施
4.1 加强监理旁站抽检程序
在工程进行过程中，监理工作中要加强现场旁站措施，同时对施工质量要在规范要求频率范围内，对工程进行独立抽检。在施工过程中如发现不合格工序，立即进行整改，达不到标准不允许进入下一步施工工序，以保证工程质量。
4.2 建立健全质量监理程序
在工程开始之初，要建立监理岗位责任制度，该制度由驻地的监理进行全面负责，对工程监理人员进行组织和学习，对所制定的各程序及技术规范进行研习，使工程质量监理在工程中能够对工程过程的每个环节，都纳入到质量监控体系中，使全体监理人员的质量意识得到提升。
4.3 强调主动监理，事前、事中控制
在工程施工监理的过程之中，对每一项工程施工，首先要进行工艺试验，以便在事前发现问题并及时解决，其次在项目施工中也要随时进行工艺检测，以防出现更严重的问题无法控制。
4.4 对工程施工方案中所存在的不合理措施，提出指令性意见和建设性建议
在工程施工的过程中，其施工方案如果存在问题，不能及时的改进，那么监理要坚决的使其进行措施落实，如果落实不到则不允许开盘。除此之外，对于施工中存在的问题，监理应当采取书面形式进行存在问题的指出，使施工单位及时进行改进。与此同时还将施工方案的改进同设计单位及业主进行确认，同时进行有效保护措施的制定，这些方法在实践中取得取很好的收效。
4.5加强试验监理人员对原材料和工程质量的检查、控制
监理工程师对工程质量进行控制，最主要的手段和依据就是试验，在整个质量控制过程中，监理最重要的部分就是用数据来说话，其质量好坏都由试验为准。因此监理人员必然要对工程中所涉及到的原材料，进行不断的试验来证明好坏，与此同时还要对成品加强抽检率，使工程中所使用的材料都能够保证质量。监理人员在工程实施过程中，要对实验数据予以重视，对检测监督力度要加大。
4.6监理人员加大对承包人不规范施工行为的检查控制
因为水运工程的特殊性，在施工的过程中，必然要坚持严格监理的方针，对于施工现场中存在的不规范行为，都要进行严格制止，同时还要限期进行整改与修正，只有完全达标才能继续工作。而对工程质量有影响的不规范行为，包括存在的安全问题，都要进行及时的纠正，只有完全达标后，才能继续施工。
5 结论
工程质量监理工作是工程质量的命脉，工程施工中监理的工作必不可少，它保证了施工工作的顺利进行，也减少了事故率的发生。水运工程由于其施工难度和施工环境的因素，在工程质量的控制方面更具特殊性，本文结合了水运工程施工监理的实践经验，对影响水运工程施工因素相对更复杂的特点，提出更具有针对性的实践注意事项。
本文对水运工程在施工阶段如何建设监理工作，以保证监理工作能够顺利实施做了相应介绍，为同僚的监理工作的实施具有理论支持和参考借鉴作用。
参考文献
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