核酸检测证明（共14篇）
进入冬季以来，农村地区零星散发病例和局部聚集性疫情明显增加，严重影响当地正常生产生活秩序。农村地区防控能力薄弱，疫情防控难度大，特别是春运期间返乡人员明显增多，人员流动增大，将会进一步加大疫情传播风险。
为严格落实内防反弹的防控策略，对返乡人员加强疫情防控管理十分必要。核酸检测是目前尽早发现新冠病毒感染者的有效手段，要求返乡人员持核酸检测阴性证明能够有效降低疫情传入农村的风险，保障大家度过一个健康、平安的春节。
返乡人员包括哪些人群?
工作方案所指返乡人员是指从外地返回农村地区的人员。
主要包括：一是跨省份返乡人员;二是来自本省内中高风险区域所在地市的返乡人员(中高风险区域内部人员原则上不流动);三是本省内的进口冷链食品从业人员、口岸直接接触进口货物从业人员、隔离场所工作人员、交通运输工具从业人员等重点人群。
返乡前核酸检测阴性证明如何获得?
返乡人员可在出发地或目的地的任意一家有核酸检测资质的医疗机构、疾控机构或第三方检测机构进行检测，凭7天内核酸检测阴性证明或包含7天内核酸检测阴性信息的健康通行码“绿码”返回农村地区。
谁负责查验核酸检测阴性证明?
1 材料与方法
1.1 材料
样本来源:2014年5月12日至2014年6月16日。共检测手足口病疑似病例咽拭子样品102份。
试剂和仪器:①核酸提取试剂德国QIAGEN公司的RNeasy Mini Kit,批号:145048635;②病毒采样盒(采集咽拭子):海南兴南峰医药器械有限公司,批号:20140428,有效期:20150427;③肠道病毒通用型核酸测定试剂盒,批号:H20140501,有效期:20150519;③肠道病毒71型核酸测定试剂盒批号:H20140301-1,有效期:20150305;④柯萨奇病毒16型核酸测定试剂盒,批号:H20140301-1,有效期:20150310。仪器设备:美国BIO-RAD IQ5实时荧光定量PCR扩增仪。
1.2 方法
(1)标本采集:发病7日内咽拭子标本,专用棉签,适度用力试抹咽喉壁与扁桃体两侧,避免触及舌与口腔,采样后迅速置入盛有病毒保存液的采样管中,折断棉签,旋紧瓶盖密封,送检,部分以4℃留存送检。
(2)核酸提取:①德国QIAGEN公司生产的RNeasy Mini Kit提取试剂盒在生物安全柜内对咽拭子样品进行核酸提取,取配套无菌Eppendorf管,加入RLT,置入标本悬液,混匀,加入二硫基乙醇,混合加入75%乙醇混匀,取收集管,标记加入以上留取混合液,离心去离心液,按照说明书上操作步骤提取数份病毒提取液;②提取核酸后使用上海之江试剂公司生产的肠道病毒通用型核酸测定试剂盒、柯萨奇病毒16型(CA16)核酸测定试剂盒、肠道病毒71型(EV71)核酸测定试剂盒对样品进行实时荧光定量PCR检测,使用的PCR扩增仪为美国BIO-RAD公司的实时荧光定量PCR扩增仪,Ct值>32为阴性,否则则为阳性。
2 结果
101份样品中肠道病毒通用阳性45份(感染率44.55%、比重26.01%),其中EV71阳性3份(感染率2.97%、比重6.67%),CoxA16型阳性34份(感染率33.66%、比重75.56%),其它型肠道病毒8份。
3 讨论
手足口病(Hand—foot一mouth Disease,HFMD)是一种常见流行性传染病,常见感染病毒包括Cox病毒、埃可病毒以及新型EV病毒,近年来常见CoxA16以及EV71,本次检测结果也证实了这一点。手足口病常呈间断性爆发,90年代后在亚太地区不止一次爆发,我国于2008年呈现流行性爆发,感染数十万例,此后,HFMD呈区域性爆发,成为公共卫生问题。
本疾控中心实验室采用目前通用的核酸PCR检测,样本采用咽拭子,检测符合率较高,可基本满足需要。目前常用的HFMD病毒检测方法包括RT-FCR、FQ-PCR等,FQ-PCR略优于RT-FCR法,且技术实现难度更小、操作更简便[2]。
HFMD病毒类型常见CoxA16、EV71,不同时间、不同地域间,统计比重存在较大差异。如王翔军等统计,临沂某院2010—2011年咽拭子核酸测试34例均为EV71型,2011—2013年检测113例,EV71占69.91%,杜银菊统计聊城2010—2012年EV71占HFMD核酸阳性比重为29.31%,提示HFMD致病病毒流行存在诸多影响因素,季节、地域均可成为致病病毒感染比重。
综上所述:本市HFMD防治状况仍不容乐观,月间报告例数仍较多,呈小规模流行趋势,手足口病监测网络发挥作用,实验室相关核酸检测阳性率较高,多见CA16型病毒感染,HFMD防治工作任重道远。
参考文献
[1]刘民,刘闯.手足口病的流行病学特征及预防[J].中国皮肤病性病学杂志,2010,24(7):591-593.
到2009年10月底为止,我国已报告HIV(艾滋病病毒)感染者和艾滋病病人近32万,全国31个省(自治区、直辖市)均已发现感染者,据估计目前存活HIV感染者和病人约74万。艾滋病在我国正处于快速增长期,传播途径从以吸毒为主转变为以性传播为主,性传播占比已超过50%,这意味着艾滋病从高危人群向一般人群传播的速度在加快。
值得关注的是,男男同性恋人群的HIV感染率正在快速上升。我们对北京、沈阳等地的男男同性恋人群调查发现,该人群中高达21%的人曾经献过血。在我们调查的3719人中,发现253名HIV感染者,感染率是6.8%;我们对尚未感染的3000多名男男同性恋者每6~8周进行一次随访检测,在14个月的观察期中,发现有75名新发HIV感染者,这其中有15名是抗体检测阴性而核酸检测阳性被发现的。
HIV进入人体后通常经历一过性的高水平病毒复制,可以出现类似感冒的症状,此时病毒复制水平高,传染能力强。随后在机体免疫应答的控制下,病毒下降到较低水平,此后经过8~10年的临床潜伏期,HIV逐渐把感染者体内的免疫细胞破坏殆尽,感染者进入艾滋病发病期。此时,病毒复制水平再次上升,出现机会性感染、肿瘤等最终死亡。
HIV感染以后,可以通过一系列检测被发现。感染者体内最早被检测到的是病毒核酸,且病毒血症呈一过性高水平,此后水平有所下降但始终存在;P24抗原出现早于抗体,但呈现一过性;IgM类抗体早于IgG类抗体,此后整个病程中抗体始终呈现阳性反应。
目前国内外针对抗体检测的试剂已经先后推出4代,其中三代试剂可以同时检测IgM和IgG类抗体,四代试剂可以同时检测P24抗原、IgM和IgG类抗体,“窗口期”已经缩短至不足3周,但这仍然不是HIV感染后最早的蛛丝马迹。
国内外研究已经证明,核酸检测可以比三代试剂的“窗口期”缩短大约11天,比四代试剂“窗口期”缩短5天左右。有研究报告,一些国家较早开展NAT的核酸检测后,对血液安全起到了重要作用。
我国政府高度重视血液安全工作,已经采取了一系列措施加强血液监管力度确保血液安全。但是由于我国艾滋病流行特点以及高危人群献血比例等因素,经血传播艾滋病的风险依然存在。因而尽快开展核酸检测,降低HIV经血传播的残余风险,就能为百姓安全用血提供强有力的保障。
(据《健康报》文/中华医学会检验分会主任委员、卫生部艾滋病专家咨询委员会委员 尚 红 )
延伸阅读
核酸检测(NAT)技术平台知识要点
◎ 混合样本检测问题
目前绝大部分商品化NAT平台(包括全部国产试剂)均为混合样本检测模式。而优化的小样本混合检测模式,能够确保每一份NAT阳性报告均经过初筛和拆分复检两次确认。这样做能有效避免因假阳性造成的血液浪费。通常由于血小板假阳性造成的损失更为严重。另一方面,还能有效保护献血者。因为按照国际惯例,NAT阳性的献血者将被排除在合格献血者人群外,意味着NAT假阳性会造成本应合格的献血者流失。
◎ HIV-2 覆盖问题
目前国家强制要求血站现有常规酶免测试项目必须包括HIV-2型。因为伴随各种国际交流与合作越来越频繁,HIV-2的感染风险已逐渐增加,将HIV-2检测纳入NAT平台很有必要。
◎ HBV(乙肝病毒)漏检问题
亚洲为HBV高流行区域,从实际血液样本中检出HBV阳性样本的能力对于NAT技术至关重要,过硬的NAT技术将能够大大降低漏检的机会。
◎ 临床应用经验问题
目前市面上有几家NAT平台,但其前期临床应用的情况差异巨大,有的只做过数量有限的注册临床试验,而有的则已借助地方支持尝试做了大量常规样本筛查。而选择合适的NAT平台,有利于保障NAT试点评估工作顺利开展,得到的结果科学、准确,有助于帮助政府部门决策。
虽然现在已经是秋天了，但天气还是跟三伏天似的。大中午的太阳像一个超级大的火球一样，炙烤着大地，阳光是那么强烈，整个世界都笼罩在一片耀眼的光芒之中。
到了体育中心，只见做核酸检测的队伍像一条条长龙，一眼望不到边，每人间隔一米，大家井然有序地排着队，等待做核酸检测。
左等右等，终于轮到我了。我手拿身份证给工作人员登录信息。登记完之后，我就往前走，由另一位医人护人员给我做核酸检测。我打量着眼前这位医护人员，她顶着炎炎烈日，身上穿着密不透风的防护服，只见她拿出一支棉签让我张开嘴巴。这时，我很紧张。医护人员看我很紧张，便安慰我：“检查真不可怕，只是有点痒。”然后，我照着她说的做了。这时，我仔细观察这位医护人员，她被防护服包得很紧，紧得和一个在蒸笼里的一个包子一模一样，她的汗水像豆子般滴下。哦，在这样闷热的如包包子似的医务人员，对待我们却还却还是那样有耐心。她们真了不起。
根据目前的相关政策，新冠肺炎确诊和疑似患者进行新冠病毒核酸检测、血清病毒抗体检测所发生的费用，由医保基金和财政负责与医疗机构进行结算，无需患者个人负担。对于自愿进行新冠核酸检测的市民，则需要自费支付。
此次，国家医保局发布的最新通知，明确各地应按程序将针对新冠病毒开展的核酸、抗体检测项目和相关耗材纳入省级医保诊疗项目目录，并同步确定支付条件。
此外，通知还鼓励各地对核酸检测试剂集中采购，检测项目不“按病立项”，有序引导降低偏高的检测费。专家表示，核酸检测等项目费用纳入医保、降低收费，将更加有利于疫情常态化防控，但是为了避免过度检测、资源浪费，相关部门应该尽快明确“应检尽检”的标准，并且对“应检”和“愿检”制定不同的医保支付比例。
根据相关规定，“应检尽检”人员包括：
一、对密切接触者、境外来深人员、国内中高风险地区来深人员、发热门诊患者、新入院患者及陪护人员、急诊留观患者、有流行病学史的普通门急诊患者、医疗机构工作人员、集中隔离医学观察场所工作人员，口岸检疫、转运安置和边防检查人员，福利机构、养老机构、救助管理机构、精神卫生医疗机构、母婴服务类机构、公安司法监管场所等相关人员，以及学校、幼儿园新上岗教职员工实行核酸检测“应检尽检”。
二、对农贸市场、大型商超生鲜肉档、海鲜档、进口水果档等从业人员，以及学校和单位食堂接触生鲜肉、海鲜、进口产品等从业人员做到应检尽检。
属“应检尽检”人员，核酸检测费用由政府承担，个人无需自付。
“愿检尽检”的参保人按医保政策享受相关待遇
未被纳入市新型冠状病毒肺炎疫情防控指挥部明确的“应检尽检”人员范围的属于“愿检尽检”人员，所需费用由用人单位或个人承担。
新型冠状病毒的核酸检测流程
对于新型冠状病毒的核酸检测，首先根据试剂盒说明书”样本要求“部分进行样本采集，常规的样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。
获得患者样本后，需尽快进行检测，如无法立即检测需要转运的样本，应按照说明书的要求进行低温封装，并送到专门的检测机构进行检测。检测机构收到样本后，对样本进行核酸提取，核酸提取试剂应使用批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒。
病毒RNA需要首先逆转录为cDNA，再进行扩增检测。PCR扩增和检测应使用批准产品说明书中指定的荧光定量PCR仪，通过荧光定量PCR所得到的样本Ct值的大小，可以判断患者样本中是否含有新型冠状病毒。
上述过程中样本的采集、保存、转运，样本核酸的提取和检测、结果的判读均须严格按照试剂盒说明书要求进行。
核酸检测的“假阳性”与“假阴性”
核酸检测的“假阳性”是指患者本来没感染新冠病毒，但核酸检测出现阳性结果。此“假阳性”的出现通常是由于实验室检测过程中标本间的交叉污染或实验室核酸污染造成的。在技术层面上讲，只要实验室严格落实质控工作，可有效避免“假阳性”的产生。
核酸检测的“假阴性”是指从患者的临床症状、肺部影像学结果甚至流行病学史都支持为新冠肺炎，但患者病毒核酸检测结果为“阴性”，检测结果与临床不符。
通常“假阴性”产生原因为：
(1)病毒入侵人体初期，人体内病毒量尚未达到可检测的程度。在病毒潜伏期、轻度症状、严重症状的不同时期，人体的不同部位(如鼻咽部、口咽部、气管、支气管和肺泡)的病毒载量会存在差异。所以，采样时机和采样部位的不同，可能导致所采集的标本中没有足够量的病毒;
(2)任何检测试剂都有其检测下限(即敏感性)，如果患者标本内的病毒达不到所使用试剂的检测下限，则会出现假阴性;
(3)实验室仪器设备性能和人员检测能力差、质量管理落实不到位等也会产生“假阴性”;
我和爷爷奶奶一起来到了学校的东门。这里人山人海，我想：这要排到什么时候啊！警察叔叔们在一旁维护秩序，早已汗流浃背。到了大门口，有几位叔叔阿姨为我们测量了体温。学校里设置了五条走道，上面都有遮太阳的黑布，脚下是相距一米的蓝线，旁边还有志愿者拿着大喇叭不断的喊着：“请戴好口罩！请不要讲话！请保持一米距离！”为了方便老人和小孩，还专门开辟了绿色通道。我们随着队伍缓慢的移动，每十人为一组。终于要轮到我了，我想：这会不会很痛呢？一名穿着白色防护服的医生将我们的身份信息录入手机，待身份确认后，我紧张的握紧了拳头，另一名医生拿了一根长长的棉签在我的喉咙里转了几圈，然后把棉签放进了一个密封的罐子里，就做完了。
我们做完核酸检测已经大汗淋漓了，那些穿着白色密封防护服的医生，从早上五点开始工作到晚上很晚才休息，真是太辛苦了！
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我站2011年7月~2014年12月的79089份无偿献血标本。用于核酸检测标本:带分离胶ED-TA-K2抗凝真空采血管 (5ml/管) ;用于酶免4项和ALT检测标本:EDTA-K2抗凝真空采血管 (5ml管) 。准确记录具体的采集样品编码、日期等基础信息, 所得到的标本通过离心处理后放至2℃~8℃冰箱内, 在72h内做ELISA法HBs Ag检测和HBV核酸检测。
1.2 仪器与试剂
Uranus AE200全自动酶免仪, HAMIL-TON STAR全自动加样仪, ABI7500荧光扩增仪, HBs Ag (ELISA) 检测试剂 (上海科华和珠海丽珠) , HBV/HCV/HIV三联核酸提取试剂和检测试剂 (上海科华) 。
1.3 检测方法
1.3.1 ELISA检测
在完成HBs Ag检测过程中给予所得到的每份献血标本2种ELISA试剂, 每批实验需具有空白对照组、室内质控、阳性, 阴性对照组。具体判定标准为:S/CO≥1 (阳性, 血液检测结果不符合标准) , S/CO<0.7 (阴性, 血液检测结果符合标准) , 0.7≤S/CO<1 (灰区, 血液检测结果不符合标准) 。
1.3.2 核酸检测
采用混样的方法检测核酸, 每份混样有8个标本且设定内对照及室内质控, 将混合测定呈阳性者予以拆分检测和将混合测定阴性判定为阴性, 当拆分测定呈阳性则判定为NAT阳性, 呈阴性则判定为NAT阴性。
2 结果
经血清学检测, 2种酶联免疫法吸附试剂检测无偿献血标本的HBs Ag均呈阴性的79050份无偿献血标本进行核酸检测, 核酸检测呈阳性者12份, 检出率为0.015%。其中乙肝“二对半”检测全阴性3份, HBs Ab单独阳性1份, HBc Ab阳性8份;HBs Ag单试剂阳性的19份标本, 核酸检测呈阴性18份, 阳性1份;HBs Ag双试剂阳性的20份标本, 核酸检测呈阳性18份, 阴性2份。因本次研究未对所有单试剂阳性标本和双试剂阳性标本进行核酸检测, 因此未做HBs Ag (ELISA) 检测单试剂漏检率和核酸检测漏检率的统计与分析。
3 讨论
核酸检测技术先后被亚洲及欧美等20多个国家和地区作为筛查献血者血液的方法, 作为高度敏感、特异的筛查输血传染因子的检测方法主要针对的是HIV、HCV和HBV, 我国通过核酸方法检测HBV正逐渐被推广应用。有相关研究表明[6,7], 在献血者血液筛查中应用核酸检测技术能有效提高输血安全。同时也有相关研究资料发现, 经核酸检测能够缩短HIV、HBV、HCV的ELISA“窗口期”, 大幅度降低病毒经输血传播的风险。本文研究结果显示, 两种酶联免疫法吸附试剂检测无偿献血标本的HBs Ag均呈阴性的79050份无偿献血标本, 经核酸检测呈阳性12份, 检出率为0.015%。其中乙肝“二对半”检测全阴性3份, HBs Ab单独阳性1份, HBc Ab阳性8份。由此可以看出, 乙肝“二对半”检测全阴性的3份标本是处于ELISA窗口期在核酸检查时被发现且有HBV感染现象;其余9份标本则属于HBV的隐匿性感染[8], 这进一步说明核酸检测对血液筛查具有重要的意义。另从HBs Ag单试剂阳性的19份标本, 核酸检测呈阴性者18份, 阳性者1份;HBs Ag双试剂阳性的20份标本, 核酸检测呈现阳性18份, 阴性2份的结果可以看出:使用HBV核酸检测方法和ELISA方法检测HBs Ag对无偿献血者进行血液筛查, 均存在单一方法或单试剂漏检情况, 尤其在病毒载量较低的情况下运用核酸筛查难以准确检测出。因此它不能完全替代ELISA, 只能作为其补充, 二者共同应用可提高检测准确性和血液安全性。此外, 在应用核酸检测时所使用的试剂要求具备高度特异性和灵敏性且实验环境比ELISA检测要求更为严格[9]。
综上所述, 应用核酸检测对献血者血液进行乙型肝炎病毒筛查, 不仅具有较高的敏感性, 能有效缩短ELISA方法检测HBs Ag的窗口期, 而且能有效降低隐匿性乙型肝炎病毒的输血传染风险, 但两者不能相互取代, 使用两种方法共同对无偿献血者进行血液筛查, 相互补充, 能够进一步提高血液的安全性。
摘要：选取采用两种酶联免疫法吸附试剂检测无偿献血标本的乙肝表面抗原 (HBs Ag) 均呈阴性的79050份进行核酸检测, 核酸检测结果呈阳性的标本进行乙肝“二对半”检测。此外, 选取HBs Ag单试剂阳性标本19份、双试剂阳性标本20份, 进行核酸检测。HBs Ag双试剂检测均呈阴性的79050份标本, 核酸检测呈阳性12份, 检出率为0.015%, 其中乙肝“二对半”检测全阴性3份, HBs Ab单独阳性1份, HBc Ab阳性8份;HBs Ag单试剂阳性19份标本, 核酸检测呈阴性18份, 阳性1份;HBs Ag双试剂阳性20份标本, 核酸检测呈现阳性18份, 阴性2份。应用核酸检测献血者乙型肝炎病毒有较高的敏感性, 能有效降低隐匿性乙型肝炎病毒的输血传染、缩短HBs Ag检测的窗口期, 一定程度上弥补了ELISA的局限性;另从HBs Ag单试剂阳性标本19份, 核酸检测呈现阴性18份, 阳性者的1份;HBs Ag双试剂阳性20份标本, 核酸检测呈阳性18份, 阴性2份的结果可以看出, 使用HBV核酸检测方法和ELISA方法检测HBs Ag对无偿献血者进行血液筛查, 均存在单一方法或单试剂漏检情况, 因此不能相互取代, 使用两种方法共同对无偿献血者进行血液筛查, 相互补充, 能够进一步提高血液的安全性。
关键词：献血者,乙肝炎病毒,核酸检测
参考文献
[1]何亚琴, 徐立, 杨爱龙, 等.核酸检测在筛查献血者乙型肝炎病毒中的应用[J].中国输血杂志, 2013, 26 (3) :147-149.
[2]黄宏亮, 徐志华, 贾红志, 等.核酸检测技术在江苏省盐城地区献血者筛查中的应用[J].国际输血及血液学杂志, 2014, 37 (1) :20-22.
[3]赵桂红, 陈晓欢, 邓雪莲, 等.献血者HBs Ag ELISA检测与HBV DNA检测的比较分析[J].国际检验医学杂志, 2012, 33 (19) :2388-2389.
[4]曹晓, 曹庆宝, 李杰, 等.核酸检测技术在唐山地区献血者血液筛查中的应用[J].检验医学与临床, 2014, 35 (5) :634-635, 637.
[5]褚小慧.荧光定量PCR检测HBV DNA与ELISA检测乙肝病毒血清标志物结果的关系探析[J].现代诊断与治疗, 2013, 23 (16) :3794-3795.
[6]王杏芳.两种检测法对乙肝表面抗原弱阳性及少见模式标本的对比分析[J].现代诊断与治疗, 2013, 23 (17) :3953-3954.
[7]蔡丽娜, 陈宝安.核酸扩增技术 (NAT) 在献血者血液初筛中的应用现状[J].中国实验血液学杂志, 2014, 22 (4) :1171-1177.
[8]刘丽, 王明民, 赵林.隐匿性乙型肝炎病毒感染的研究进展[J].疑难病杂志, 201331 (7) :123-125.
本次活动根据市新冠肺炎疫情防控工作实际，以“不漏一户、不落一人”为工作要求。当日，志愿者们准时到达核酸检测点集合，并依照《防护服穿脱指南》规定，穿戴好隔离衣、头套、面屏、口罩、手套等医用防护用具。随后，引导群众有序排队，检测体温、提醒群众戴好口罩、保持“一米线”距离，做好核酸检测登记工作，保障每一项工作都严格按照防疫要求落实到位，用实际行动和责任担当，协助核酸检测工作平稳有序进行。
直至18时，一整天的核酸检测志愿服务工作圆满结束，多个小时的坚守，志愿者们充分发扬了年轻人不怕苦不怕累、勇于拼搏的志愿服务精神，在抗疫一线展现新青年的战斗力，筑牢疫情防控屏障。
由于时间紧、任务重，人手不足，大丰区众心助困联合会志愿者蒋卉、冯锁平，董桂强，成俊杰、李俊宽等主动请缨，清晨5点天还没亮，他们已经早早来到检测点就和社区工作人员一起自愿服务滨河社区全员核酸检测工作。
勤洗手养成健康生活方式在核酸检测现场，蒋卉、冯锁平，董桂强，成俊杰4人穿上大白担任信息釆集员，收集居民信息采样码，、李俊宽他俩拿着小喇叭维持现场秩序，为居民群众测量体温，引导居民群众有序排队，并不断提醒大家戴好口罩，保持距离。
遇到老人、孕妇、残疾人士等特殊群众时，志愿者会积极主动上前帮助，引导他们通过“绿色通道”完成高强度核酸采样测试，减少他们排队等待的时间。志愿者耐心地解答群众提出的各种问题，帮助群众顺利完成核酸采样。
1 材料与方法
1.1 材料
2010年1月1日-2010年8月1日本市各大医院传染科住院的433名手足口病患者的咽拭子标本。仪器:高速微型离心机 (杭州汇尔仪器设备有限公司) 、小型漩涡振荡器 (北京华尔博科技有限公司) 、全自动荧光定量PCR检测仪 (广州市炳阳生物科技有限公司-美国) , ClassⅡTypeA2生物安全柜 (北京东联哈尔仪器制造有限公司) 。试剂:北京金豪制药股份有限公司的核酸分离试剂盒 ( 硅胶膜吸附法) 。
1.2 方法
标本保存:取患者的咽拭子标本和大便标本立即放-20℃保存。RNA提取:采用北京金豪制药股份有限公司的核酸分离试剂盒 (硅胶膜吸附法) 。反应体系:RT-PCR反应液 19 μl、聚合酶1 μl、 逆转录酶0.35 μl、 标本RNA 5 μl。设置循环条件:逆转录及变性50℃ 30 min;95℃ 3 min;预扩增95℃ 15 s, 50℃ 30 s;72℃ 1 min。扩增及荧光收集95℃ 10 s, 55℃ 40 s。
1.3 结果判断
阴性质控品:扩增曲线无对数增长期或无Ct值显示;阳性质控品:扩增曲线有明显对数增长期, 且Ct<30;表示实验有效。如果检测样品的扩增曲线无对数增长期或Ct>37, 判断样品为阴性;如果检测样品Ct≤37, 且曲线有明显的对数增长期, 判断样品为阳性。
2 结果与讨论
用荧光PCR法对433份咽拭子标本进行肠道病毒核酸检测, 结果有253例呈肠道病毒核酸阳性, 阳性率为58.4% (253/433) 。在253肠道病毒核酸阳性病例中经分型检测, EV71型为146例, Cox.A16型为107例, 未见有混合感染。手足口病是以手掌、脚掌、口腔黏膜上发生疱疹和溃疡为特征的一种病毒感染性疾病, 但有些患者没有典型病症, 病情发展很快。因此及时检出和发现患者是否感染EV71和Cox.A16, 可为临床提供实验诊断依据。而常规诊断方法存在一些弊端, 如病毒分离培养对技术要求较高, 费用较昂贵, 耗时需要4~15 d, 而且各实验室分离的阳性率各不相同, 无法满足病毒流行期间同时处理大量样本的需要;中和抗体检测常需比较患者急性期血清与恢复期血清的中和抗体滴度, 有时仅靠检测单份血清的中和抗体滴度很难做出诊断;RT-PCR技术虽然克服了以上缺点[2], 已成为快速诊断的重要手段, 但PCR后需要进行凝胶电泳分析, 操作也较繁琐。今年年初本市手足口病又有抬头趋势, 为了及时控制疫情笔者采用实时荧光定量PCR法对433例可疑患者做了EV71和CA16检测, 为及时控制疫情发挥了作用。本文使用的实时荧光定量PCR法操作简单快速, 整个操作只需两步, 不到3 h, 即可获得高质量的数据;具有灵敏度和特异性高、能实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点, 该技术在医学临床检验及临床医学研究方面有着重要的意义。
关键词：荧光PCR,手足口病,肠道病毒
参考文献
[1]金奇.医学分子病毒学〔M〕.北京:科学出版社, 2000:606-613.
原则上每1000-1500人设置1个采样点，每500-1000人设置1个采样台，每个采样点开设1-2条绿色通道，面向老年人、儿童和孕妇等特殊群体提供服务，减少等待时间。
二、设置要求
乡镇（街道）负责选择确定采样地点，应当遵循安全、科学、便民的原则；一入口、一出口，室内、室外采样点均应当为独立空间，具备通风条件，内部划分相应的清洁区和污染区，配备手卫生设施、取暖设施，设立清晰的指引标识，并明确采样流程。
三、分区要求
确定采样点后，要组织人员勘察设计场地布局，根据原有场地条件，科学划分为分流等候区、现场待查区、入场测温区、临时隔离区、扫码登记区、核酸采集区、物资保障区、临时隔离区、医疗垃圾存放区，设置检测通道，保证人员单向流动，落实“1米线”间隔要求，严控人员密度，采样点的医护人员采样位置宜处于上风向，所有人员都应佩戴口罩，避免交叉感染。
（一）分流等候区：设置相对宽敞、通风区域，受检群众接受核酸采样前等候休息，并根据天气条件配备防暑、遮雨等设施。
（二）入场测温区：合理设置人行通道，采取绕场排队方式单线进入采集区。
（三）临时隔离区：用于暂时隔离在采集过程中发现的疑似患者或高危人群。
（四）扫码登记区：设置帐篷、遮阳伞、警戒线、办公桌椅、测温枪、水银温度计、消杀用品、充电宝、发电机、供暖设施、无线网络等现场所需物资。
（五）核酸采样区：使用隔离线或标识设置人行通道，设置1米线距离提醒。并搭建临时帐篷，配备充足的桌椅、采样设备、个人防护用品、医疗垃圾桶、手消毒液、消毒药械和宣教材料等,并应当为受检人员准备纸巾、呕吐袋和口罩备用。
（六）物资保障区：选择空间相对密闭，供采集人员更换个人防护装备，放置与采样点规模相匹配的防护物资、拭子和采集管、消毒药品、户外消杀设备。
（七）医疗垃圾存放区：卫生院放置医疗垃圾转运箱，用于暂存医疗垃圾。
四、标识要求
统一设计全员核酸检测使用的指引标识、分区标识，要求在采样现场悬挂醒目的指引标识，并设置采样流程和注意事项的公告板。
五、基本设施标准
1．简易（棉）帐篷（室外采样点）2个，办公桌椅4套，体温枪1个，水银体温计，隔离锥，护目镜；
2．警戒隔离带数米；
3．文具若干套；
近段时间以来，部分地区又出现了局部疫情比较严重的现象，同时，一部分农村地区也有零星散发的新冠肺炎病例和局部聚集性疫情现象的出现。这些情况的出现，都会严重影响当地的正常生产生活秩序。况且，由于农村地区的疫情防控能力比较薄弱，疫情防控的难度要大于城市，再加上春运期间返乡人员会明显增多，人员流动性会逐渐增大等原因，从而使农村的疫情防控形势更加紧张。为了保障大家都能够度过一个健康、平安的春节，日前，有关部门发布了《冬春季农村地区新冠肺炎疫情防控工作方案》，《方案》中称，有三类人员返乡需持有7天内的有效新冠病毒核酸检测阴性证明，而且，在返乡后实行14天居家健康监测，在这期间不聚集、不流动，并每7天开展一次核酸检测。
那么，《方案》中所称的三类返乡人员都是指的哪些人呢?
1.跨省返乡人员
所谓的“跨省”一词起源于“福建三网民案”。是指居住地与工作地不在同一个省份。最近几十年来，出门到外省打工的人员越来越多，而这些出门到外省打工的人员返乡就被称为“跨省返乡人员”。
2.来自本省内中高风险区域所在地市的返乡人员
原则上来讲，中高风险区域内的人员是不允许流动的。如果真有必要需要流动，则必须依照方案中的规定执行。
3.本省内的进口冷链食品从业人员、口岸直接接触进口货物从业人员、隔离场所工作人员、交通运输工具从业人员
进口冷链食品是指从国外进口的冷冻食品。在以前，我国很少从国外进口冷冻食品。而随着国际贸易的日益频繁，近些年来，我国已经开始从国外大量进口各种冷冻食品，从而导致越来越多的人需要从事进口冷链食品工作。而由于国外的疫情还很严重，有些从国外进口的冷冻食品还不太安全。因此，凡是在本省内从事进口冷链食品工作的人员，在返乡时都需要严格执行《方案》。
另外，在口岸直接接触进口货物的从业人员、隔离场所的工作人员以及从事交通运输的人员，也需要严格执行《方案》。
那么，核酸检测需要去哪里做呢?费用是多少?
现在，许多正规的三甲医院都可以做核酸检测，另外，一些定点的医院也可以做核酸检测。因此，外出务工人员在返乡前需要到工作地的相关医院进行核酸检测，并索取健康通行码“绿码”。当自己拿到“绿码”后，方可返乡，否则，不但无法返乡，而且，还需要在当地进行隔离治疗。
据称，核酸检测结果在1到2天内就可以出来，检测试剂的费用各地不等，大约都在100-200元之间，需要自费进行检测。
那么，返乡前还需要做哪些工作?
据介绍，返乡人员在返乡前应告知当地村委会，返乡后由村委会查验其7天内核酸检测阴性证明或包含7天内核酸检测阴性信息的健康通行码“绿码”。
那么，这个《方案》从什么时候开始执行?
持核酸检测阴性证明返乡从1月28日春运开始后实施，至3月8日春运结束后截止。
由此看来，跨省及其他人员在春节期间返乡还是相当麻烦的。因此，这些人员最好是响应“非必要不返乡”的倡议，留在当地过年，以免有这么多的麻烦。
在惠州哪里可以做核酸检测?做一次要多少钱?要多久?
因为前阵子刚刚去了一趟外省，应公司要求，回来惠州后需要做核酸检测。网上查了一下，没有特别的攻略，不知道核酸检测需要带什么，要不要挂号，只知道检测地点。刚好我去做了一次核酸检测，把经历分享出来，给有需要的人吧。
首先惠州提供核酸检测的机构，挺多的，大家可以在检测点名单中挑离自己最近的。我在惠城，去的是第一人民医院，以第一人民医院为例。
带上身份证和社保卡，直接去第一人民医院，不需要挂号，进医院后到引诊台，问工作人员，核酸检测去哪里，他们会告诉你的。第一人民医院在5楼健康中心，带上证件直接付费就行，核酸检测一次是75元，可以刷医保卡，从卡里扣费。
付款后，他们会给你一个小瓶子，去一间小屋子，全身防护服的医护人员会拿着一根长长的棉签，往你舌头根部搅两下，就可以走人了。全程从付费到做完核酸，不到10分钟。
核酸检测结果不需要再回医院拿，核酸检测结果会同步到你的粤康码里，大约检测完第二天，即可从你的粤康码里查看自己的核酸检测结果。
各地核酸检测费用是多少?
目前各地检测试剂的费用多数在100-200元，非政府组织的筛查、个人出行的核酸检测费用都是自己负担。从公开的核酸诊断试剂集中招标价格看，各地的中报价并不统一，最低价格为12.9元/人份，也有22.3元/人份。
1.苏州核酸检测费用
核酸检测项目价格为120元/次(含试剂等耗材);如核酸混样检测，则按实际检测人数平均分摊计费。
2.湖南省核酸检测费用
在按规定对自愿进行新型冠状病毒核酸检测的个人开展检测时，收取新型冠状病毒核酸检测费，检测费用标准为110元/人一次。
3.河南省核酸检测费用
从河南省医保局获悉，将开展新冠病毒(-nCov)相关检测试剂集中采购工作。核酸检测试剂价格从120-180元/人份降至12-15.6元/人份，抗体检测试剂价格从30-60元/人份降至5.8-27.78元/人份。
4.江西南昌核酸检测费用
进行核酸检测之前，医生或者是相关工作人员会建议，检测前半小时最好是不要喝酒、抽烟以及口香糖，因为这些物质中含有一定的有害物质，而核酸检测一般是通过口腔或者鼻腔，用拭子采集咽部的分泌物，来进行检测。
要是核酸检测前半个小时患者抽烟，那么会使得咽部分泌物增多、咳嗽、吐痰，使得核酸检测出现假阴性。
除了不可以抽烟之外，前半个小时不可以嚼口香糖、喝酒以及避免进食等，注意个人防护，带好口罩，保持一米的安全距离，回家之后做好消毒。
抽烟的人核酸检测会是阳性吗
一般是不会的。
核酸检测的原理是利用新型冠状病毒的标志性DNA片段做引物，与样本进行一系列的匹配杂合，当检查到有结合，提示样本中含有该病毒片段。
如果只是之前有抽烟，不会影响到核酸片段和片段结合，因为影响核酸检测结果的准确率，与取样、运输、病程长短、病情严重程度等有一定的关系。
但核酸检测釆样前半小时一般不能喝酒、嚼口香糖，在检测两小时以前尽量不要喝水、进食，避免不必要的事故发生。
做核酸检测需要空腹吗
需要提前禁食2小时。
做核酸检测不一定要空腹状态，但是在做核酸检测时要提前2小时禁食。因为做核酸检测时需要到咽喉部位进行黏膜采样，这样就会对咽喉部位造成刺激出现咽反射症状。如果在做核酸检测之前刚好有进食的话，刺激咽喉部就会容易出现呕吐的情况。
一、工作开展情况：
(一)总体情况：
1、xx镇共计11个点位、26个采样台(不含机动台)同步开展工作。
2、本次共计参与人数1885人，其中党委政府参与人数为35人，村社区参与人数为81人，志愿者参与人数为92人，核酸采样人员为27人，信息登记人员34人，核酸被采人员7270(其中包含学校940人)人，公安民兵29人，出动车辆30辆。
(二)前期准备
1、充分调研制定方案。
我镇党委政府高度重视此项工作，主要领导带队到各村(社区)进行调研，制定了《xx县xx镇全员核酸采样工作方案》，并制定xx镇全员核酸采样作战图、便民告知书。
落实工作目标，明确工作职责，确保工作人员各司其职。
2、抓好基础摸底。
通过召开专题会议、镇纪委下村监督相结合，督促各村(社区)做好常住人口的摸底工作，并将特殊人群、弱势群体、在家党员、在家民兵等进行梳理建立台账，增加志愿者替补人员储备。
2、狠抓业务培训。
镇党委、政府组织组织点长、技术点长、志愿者、采样人员、信息录入人员等，就点位设置、个人防护、信息录入等方面开展业务培训，并要邀请医务人员进行现场演示防护服穿脱和xx核酸检测系统录入操作培训，进一步提高业务人员的检测能力。
3、做好物资储备。
在前期充分调研的基础上，及时购买物质，并将物质及时发放到点位。
(三)工作流程
会议部署：xx月xx日在县疫情防控指挥部调度会议结束后，xx镇立即组织镇村干部对xx月xx日大规模核酸检测工作进行安排部署。
设置采样点：xx月xx日下午，各采样点后勤保障组人员在xx月xx日下午完成采样点帐篷搭建、桌椅(凳子)摆放、张贴各类标识标牌等工作。
动员组织群众采样。
各村(社区)xx月xx日采取下发通知、张贴便民告知书、喇叭广播等形式宣传动员群众xx月xx日上午8点到采样点进行采样。
xx月xx日上午8：00，镇指挥部应县级指示在镇村微信工作群宣布：xx镇全员核酸检测现在开始。
1、启动全镇大规模核酸检测工作。
各村社区、场镇部门力量立即行动起来，开展全员核酸检测工作。
2、工作小组进驻采样点。
各采样点组织点长组织各工作小组在进驻采样点开展相应的工作。
3、信息登记与采样。
采样小组对受检者进行信息登记和采样。
4、标本收集转运。
专人专车将标本送至指定的中转站。
5、环境消杀。
核酸检测结束后消杀人员对重点区域进行环境消杀。
6、医废转运。
由采样人员规范转运至医废暂存点。
二、工作亮点
1、组织有序：
(1)参与核酸检测的人员都能按照责任分工，到点位开展工作。
经过前期培训，工作人员对自身职责和业务熟悉掌握。
(2)采样点布置较快，人员组织有序。
(3)本次大规模核酸采样设置了有智能机人员通道、无智能机(无手机)人员通道，极大的解决了人员易扎堆的问题，提高了采样的效率。
2、采样点前期准备充分：前期我镇根据各单位情况进行充分的调研，准备了充足的核酸检测物质，确保本次核酸检测工作有序高效推进。
3、动员群众能力较强：接到大规模核酸检测指令后，xx镇各村(社区)及时通过广播、微信群发布消息，迅速组织群众到点位进行核酸检测。
在比较快的时间内完成核酸检测。
4、院落长功能发挥到位：本次通过充分发挥好院落长作用，做好了前期的常住人口摸排，信息发布，人员组织等工作，为核酸检测工作增添了助力。
5、准备工作扎实：(1)将老年人、小孩、智力有问题等无手机人员的信息绑定到亲人的天府健康通的家庭码上，并将上诉人员的二维码打印，提高了信息录入的效率。
(2)将前期摸排的特殊人员(老年人、智力障碍人员、小孩、残疾人等)信息，提前按村社打印，方便在特殊人员丢失基础信息的情况下，及时提供基础信息。
二、存在的问题
1、物质方面问题：帐篷需要增加。
比如应对极端天气需要增设帐篷保暖避雨。
2、点位设置问题：
(1)部分村的人员进出路线设置不太合理。
(2)部分村的工作提示和场所码没有规范张贴。
(4)部分村没有设置好车辆停放点，导致了秩序紊乱，容易造成安全隐患。
3、秩序问题：
(1)核酸采样点群众有未戴口罩的问题。
(2)个别群众在采样点会出现距离间隔不足一米的情况。
(3)个别被采样后群众逗留采样点周围的问题。
4、人员问题：
(1)个别信息采集员业务和不熟悉，登记信息出现端口选错的问题，导致后期重新录码问题。
(2)转运样本人员业务不熟练的问题，导致装箱速度比较慢。
(3)个人防护问题：部分秩序维护员、扫码人员没有穿戴隔离衣，戴一次性医用帽子、戴一次性医用手套。
(4)采样员的业务培训需要加强，部分采样员的业务不够熟练。
(5)部分医务人员的准备不充足，进场比较慢。
5、系统问题：出现xx核酸检测系统不显示录入信息的问题。
6、部门与部门之间的配合问题：卫健办与卫生院在信息沟通上存在不同步，导致了xx省核酸采样系统新老版本使用不清楚的问题。
下一步打算
1、继续加强工作人员的业务培训，采样员和信息采集员、转运员的培训，由各村(社区)驻村干部包教包会，同时增加点位工作人员的替补人员，增加秩序维护员和志愿者并加强培训。
2、再次进行研判和分析，找到工作漏洞，补足短板。
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