微生物药敏试验报告（共16篇）
广东省食品药品监督管理局：
我公司生产智聪健眼按摩器（商品名：视力健），产品于1999年12月24日该产品已通过广东省医疗器械质量监督检验站检验合格，检验类别：准产注册；检验依据：Q/19SZZC01-1999智聪健眼按摩器，检验项目：全性能（含生物性能试验）。于2001年1月15日顺利获得中华人民共和国医疗器械注册证，注册号：粤药管械（准）字2000第2260128号。因注册证有效期限临近，2005年4月12日该产品通过广东省食品药品监督管理局重新注册，注册号：粤食药管械（准）字2004第2260396号（更）。2007年该产品需增加110项安全性能检测并重新注册，根据关于医用电气设备产品注册执行GB9706.1－1995标准的要求，产品重新检验合格。重新检验的产品，材质、性能和使用范围均相同。特向贵局申请豁免生物学试验，请贵局以予批准为谢！
申请单位：深圳智聪科技发展有限公司
1 病兔情况调查
(1) 向养殖者询问送检病兔的产地、兔龄、数量、饲料情况 (有无换料、营养搭配) 和发病率、死亡率、出现的症状、治疗措施及有无改善。此外还应调查有无应激 (断奶、惊吓、免疫) 、卫生消毒措施以及附近养殖场的疫病情况。 (2) 2013年3月, 泰安某兔场专业户饲养的50多只刚断奶10来天的仔兔突然发病, 死亡了4只。观察该场饲养条件良好, 饮水清洁, 饲料未发生霉变。 (3) 病兔精神沉郁, 食欲减退, 饮水量增加, 体重减轻, 被毛粗乱, 腹泻腹胀, 水样粪便, 肛门周围毛尤其脏乱, 病兔迅速消瘦, 并严重脱水。
2 病理解剖、取样
(1) 处死病兔后沿腹白线切开腹壁, 用镊子挑起腹肌防止刺破肠管。检查腹水的颜色、多少和清浊度。打开腹腔后, 依次检查腹膜、肝、胆囊、胃、脾脏、肠道、胰、肠系膜、淋巴结、肾脏、膀胱和生殖器官。胸腔暴露后, 依次检查心、肺、胸膜、气管的病变。必要时, 打开口腔, 鼻腔及颅腔作检查。 (2) 取出有病变的组织并拍照, 同时取少许胃内容物、盲肠内容物4度备用, 并测定各自的PH值。盲肠、回肠各取两段于10%福尔马林液保存。 (3) 解剖发现病兔肺部气肿, 有肉变;盲肠胀气, 内容物呈流体状, 肝脏有白色小结节, 其他尚无明显的病变。取肺脏、盲肠、回肠各一段保存备用。
3 致病菌分离
无菌取盲肠内容物接种在伊红美兰培养基 (用于分离大肠杆菌) 、胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂 (用于分离魏氏梭菌) 和MRS培养基 (用于分离乳酸菌) 中, 同时将肺脏剪碎、研磨、稀释、震荡, 无菌接种于伊红美兰培养基、多杀性巴氏杆菌培养基、葡萄球菌选择性琼脂。37℃恒温培养24h (魏氏梭菌厌氧培养) , 观察结果。
4 药敏试验
无菌取盲肠内容物接种在LB培养基中, 凝固后打孔并加入抗生素 (头孢噻肟 (TB) , 头孢曲松 (QS) , 庆大霉素 (QD) , 阿米卡星 (AM) , 阿奇霉素 (AQ) , 新霉素 (X) , 泰乐菌素 (TL) , 氟苯尼考 (FB) , 浓度为30ng/l) , 37℃恒温培养24h后, 在琼脂平板上观察抑菌效果 (见附表) 。
(mm)
试验结果说明培养24h, 大肠杆菌及产期荚膜梭菌均较多, 头孢噻肟、头孢曲松、阿米卡星和新霉素对盲肠内容物细菌具有较高的敏感性。
4 讨论
根据兔场发病的总体情况、临床症状和病理变化, 参考以往对兔腹泻病的鉴别诊断经验, 可以排除兔球虫、沙门氏菌病、巴氏杆菌感染和兔病毒性出血症的发病可能。经微生物学诊断, 病兔的盲肠中存在大量的大肠杆菌和魏氏梭菌, 结合临床症状和病理变化, 初步诊断为魏氏梭菌既发大肠杆菌引起的腹泻腹胀, 如需确诊还要进行多重PCR试验鉴定是何血清型引起。考虑到大肠杆菌和魏氏梭菌均为条件性致病菌, 做好日常饲养管理可明显减少发病率。同时药敏试验显示, 头孢噻肟、头孢曲松、阿米卡星和新霉素对该病兔的肠道菌抑菌效果均较好。结合现场问询结果, 发现该场之前用过泰乐菌素, 约有半年时间, 之前未用过头孢曲松及头孢噻肟, 因此可以考虑使用其进行治疗。
一、材料与方法
1.材料
试验于2015年4月安排在西华县龙池头村。土类为潮土，质地为沙壤，肥力中上等，地力均匀。该地块耕层土壤养分为：有机质13.5克/千克，碱解氮105.5毫克/千克，速效磷（P2O5）15.4毫克/千克，速效钾（K2O）135.6毫克/千克。供试作物黄瓜，品种为“津优35”。供试“微生物菌剂”（有效活菌数≥2.0亿/毫升）由周口亮米生物技术有限公司提供。
2.方法
本试验设四个处理，随机区组排列，重复三次。小区面积40平方米。
处理1：常规施肥+供试微生物菌剂100毫升兑水30千克，于黄瓜幼果期和膨果期各喷施一次，共2次；
处理2：常规施肥+与处理1同期喷施等量基质；
处理3：常规施肥+与处理1同期喷施等量清水；
处理4：常规施肥。
试验在当地常规施肥的基础上进行。常规施肥为：底肥为腐熟的厩肥3000千克/667平方米、45%（15-15-15）复混肥70千克/667平方米；追肥三次，每次冲施45%（20-15-10）复混肥15千克/667平方米。
试验地黄瓜于2015年2月12日温室育苗，2015年3月20日移植，每667平方米密度3600株，宽窄行种植，行株距（80∶40）×30厘米，扣大棚，严格按照试验方案的要求于2015年4月20日、5月4日喷施2次菌剂、基质或清水。黄瓜于4月25日开始采收，6月20日采收结束。采收时分小区单收单称分别记产并同时进行田间调查与考种，产量系4月20日～6月20日分次采收的累计产量。试验除按方案要求喷施菌剂、基质或清水外，其他管理措施同一般大棚黄瓜田生产。
二、结果与分析
1.不同处理对黄瓜成产因素的影响
黄瓜喷施“微生物菌剂”改善了成产因素。由表1可知：处理1与处理2、3、4相比，单株结瓜数分别增加0.23个，0.4个、0.45个，单瓜重分别增加5.2克、7.3克、5.1克。说明在常规施肥的基础上，黄瓜喷施“微生物菌剂”能够增加单株结瓜数和单瓜重。
2.黄瓜喷施“微生物菌剂”对产量的影响
黄瓜喷施“微生物菌剂”提高了产量。由表2可以看出：处理1较处理2平均每667平方米增产277.8@千克，增产率6.76%；处理2较处理3平均每667平方米增产105.5千克，增产率2.63%；处理3较处理4平均每667平方米增产-11.1@千克，增产率-0.28%。对各处理产量结果进行方差分析（见表3），处理间产量差异达显著水平。采用PLSD法进行多重比较（见表4），处理1与处理2、处理3、处理4之间产量差异达显著水平，处理2与处理3、处理4之间产量差异不显著，说明喷施“微生物菌剂”增产效果显著。
三、结论
1.试验结果表明：7在当地常规施肥的基础上，每667平方米用“微生物菌剂”100毫升兑水30千克，于黄瓜幼果期和膨果期各喷施一次，与同期喷施等量基质相比，增加了黄瓜的单株结果数与单果重，每667平方米增产277.87千克，增产率6.76%，产量差异达显著水平。
本文通过试验验证了LLMO微生物强化技术对酵母废水的处理效果.结果表明,酵母废水经LLMO技术处理后,出水COD均值低于1000 mg/L,去除率可提高30%左右,且消除了处理过程中的明显臭味;在污泥驯化成功后,LLMO菌不需补加;与投加絮凝剂相比可降低处理费用.
作 者：肖应锋 蔡攀 戴亚 Xiao Yingfeng Cai Pan Dai Ya 作者单位：肖应锋,Xiao Yingfeng(宜昌市华润科技开发有限责任公司,湖北,宜昌,443003)
蔡攀,Cai Pan(安徽工业大学,建筑工程学院,安徽,马鞍山,243002)
戴亚,Dai Ya(三峡大学,机械与材料学院,湖北,宜昌,443002)
在实验室小试和现场中试的基础上,采用预制床处理工艺对江汉油田4种不同类型石油污染土壤进行实用规模的生物处理技术研究.工程运行结果表明,当稀油、稠油、特稠油和高凝油污染土壤中石油烃总量(TPH)为(25.8～77.2)g・kg-1时,经过86d的运行,TPH去除率为39%～66%.TPH的降解速率除与微生物的生长环境有关外,还与石油的理化性质密切相关.4种石油污染土壤的.降解速率依次为:稀油＞高凝油＞稠油＞特稠油,TPH的组分对其降解速率有童要影响.本试验研究为大规模石油污染土壤异位生物修复提供了科学的理论依据.
作 者：赵江 臧波 杨利 作者单位：赵江,臧波(江汉石油管理局农林处,湖北潜江,433124)
杨利(湖北省农科院,湖北武汉,430064)
刊 名：科技资讯 英文刊名：SCIENCE & TECHNOLOGY INFORMATION 年，卷(期)： “”(26) 分类号：X53 关键词：石油污染土壤 预制床 生物修复
采用传统流化床反应器处理生活污水,通过调整水力停留时间,考察反应器对COD、氨氮等的`处理效果.试验结果表明:传统流化床处理生活污水能够同时除碳脱氯.在HRT=4h条件下,传统流化床反应器对COD、NH3-N的平均去除率分别为90%、80%,指标达到<城镇污水处理厂污染物排放标准>(GB18918-)中规定的一级B排放标准.
作 者：鲍利 鲍彬 陈颖 吕天舒 作者单位：鲍利,陈颖(哈尔滨北方环保工程有限公司,黑龙江,哈尔滨,150090)
鲍彬,吕天舒(黑龙江省科学技术情况研究所,黑龙江,哈尔滨,150036)
纸片法是生产中最常用的药敏试验方法。它操作简单, 应用普遍, 出结果快, 费用低, 便于生产。试纸片可以购买成品, 也可根据各养殖厂用药情况自制各种抗菌素试纸片。
1 病料的采集
采集具有典型症状的畜禽的肝脏、肠道、泄殖腔棉拭子。采集时应做到无菌。
2培养
将所采病料以划线方式均匀涂布于普通营养琼脂平板表面, 用无菌操作方法贴试纸片于培养基上。试纸片不要贴太密, 以防相邻抑菌圈太大而联合。一般中间一片, 周围贴四片, 并且应在平板上标记好试纸片名称, 以防相互混淆。将贴好纸片的平皿翻转, 底部朝上, 置37℃恒温箱中培养24h, 观察结果。
一例犬瘟热的中西医诊治
赵海玉
(青海省共和县倒淌河镇兽医站813000)
中图分类号:S858.292文献标识码:B文章编号:1007-1733 (2011) 07-0096-02
犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的一种急性、高度接触性传染病, 其特征为双相热呼吸道卡他性胃肠炎及神经病状为特征, 少数病犬可见鼻和足垫角化过度, 发病和死亡率极高。
1发病情况
2008年8月25日, 本镇牧户才某带3岁的母犬来门诊就诊, 主诉:该犬已病5d, 精神萎靡不振, 食欲废绝, 停食2d, 呕吐, 稀便, 稀粪里有鼻液样粘液, 流鼻、流泪、咳嗽。现将诊治报告如下。
2 临床症状
病犬精神沉郁, 食欲废绝, 呻吟、口流清涎, 流脓性鼻液、流泪, 腹式呼吸, 气喘、严重脱水、体温41℃。听诊肺部干啰音, 肛门周围泻粪污染, 气味恶臭, 泻粪内有血并附粘液。四肢瘫痪, 并带有神经症状, 共济失调、颈部强直、肌肉痉挛。
3 诊断
根据发病情况, 临床症状初步诊断为犬瘟热病。
4 防治
【关键词】禽源大肠杆菌；细菌分离；药敏试验；抗菌药物
禽源大肠杆菌病是指部分或全部由致病性大肠杆菌感染引起的家禽局部或全身性感染的传染病，临床表现为多种病型：胚胎死亡、脐炎、败血症、肉芽肿、卵黄性腹膜炎、全眼球炎、气囊病、禽蜂窝组织炎、肿头综合症、腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎等。家禽的大肠杆菌病一年四季均可发生，各种年龄和性别都易感。在规模养殖的条件下，该病是影响养禽业发展的重要疾病之一，造成的损失不可低估。大肠杆菌血清型复杂多样，为该病的防治带来了一定的困难。
1材料与方法
1.1 材料
高压灭菌器、显微镜、冰箱、电泳箱、微量糖发酵管、大肠杆菌O型抗血清（O1、O2、O78、O119）、麦康凯琼脂培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤，试验动物：5日龄健康雏鸡。药敏试验纸片：氨苄青霉素（AMP）、阿莫西林（AMX）、头孢吡肟（CPI）、头孢曲松（CRO）、头孢克洛（CEC）、链霉素（STR）、四环素（TET）、利福平（RIF）、红霉素（ERY）、诺氟沙星（NOR）、复方新诺明（SXT）、头孢噻肟（CTX）、新霉素（NEO）
1.2 样品采集
从常州、南京及附近雞场采集临诊上具有典型大肠杆菌病病变的病死鸡作为病料，采集十二指肠、肺以及肝脏作为分离细菌的材料。
1.3 方法
1.3.1 细菌分离培养
用无菌操作的方法将样品分别接种于普通营养琼脂、麦康凯琼脂及营养肉汤培养基上，置于37℃环境中培养24h后观察结果。挑取疑似大肠杆菌的菌落连续纯培养，获得单个菌落细菌。
1.3.2 显微镜检查
置于37℃环境中培养24h后， 挑取表面光滑、边缘整齐、微隆起的红色单个菌落，经革兰氏染色，在光学显微镜下观察细菌的形态和染色特征。
1.3.3 生化鉴定
按常规方法对所有分离取得的分离菌培养物进行葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖的发酵试验，同时进行吲哚、MR、V-P、枸橼酸盐利用试验和硫化氢试验。糖发酵试验在24h时观察结果，其他生化试验在48～72h内观察结果。
1.3.4 血清型鉴定
用大肠杆菌单因子血清对大肠杆菌分离株进行O血清型鉴定。将被检菌株培养物水浴1h，破环其K抗原，在载玻片上经凝集试验检测分离菌株的血清型。
1.3.5 PCR检测
针对fyu A保守序列设计引物P1：5’-GCGACGGGAAGC GATGACTTA-3’，引物P2：5’-CGCAGTAGGCACGATGTTGTA-3’（引物由上海生工生物工程公司合成）。PCR反应体系：PCR Mix 12.5?L，P1、P2各1?L，模板（ RT反应液） 2?L，加蒸馏水至总25?L。反应条件为95℃预变性3min；95℃变性45s，58℃退火45s，72℃延伸45s，30个循环，72℃延伸10min。取PCR反应产物5?L，用1.2%琼脂糖凝胶电泳（1%Goldview）20min，置于紫外灯下观察并拍照。
1.3.6 动物接种实验
将分离菌接种于营养肉汤，置于37℃恒温培养箱中培养24h。取健康雏鸡10只，随机分为A、B两组，每组5只，A组腹腔接种营养肉汤菌液，每只0.2ml；B组腹腔接种等量的灭菌生理盐水作对照，隔离饲养观察。
1.3.7 药敏试验
采用K-B纸片法对13种药物进行耐药性检测：用灭菌接种方法环取大肠杆菌纯培养物，置于5ml灭菌生理盐水中，用灭菌玻璃棒充分混匀，将此液滴于普通琼脂培养基表面，用灭菌玻璃棒涂布使其覆盖整个培养基表面，置于37℃环境中培养8～10min后取出。用灭菌尖头镊子取13种抗菌药纸片分别对称贴到上述的营养琼脂培养基上，每个平皿贴4种纸片，为使抗菌药纸片与培养基表面密贴，可用镊子轻轻按一下纸片，在药敏纸片上做上标记或在平板底上用笔写上其药名或贴上标签，将贴纸片的平板底部朝下，置于37℃温箱中培养18～24h。
2 结果
2.1 细菌的分离和培养
通过以上实验共分离到细菌40株，所有细菌在麦康凯平板上均生长为表面光滑、边缘整齐、圆形、隆起的红色菌落；普通琼脂平板上形成表面光滑、湿润、半透明、灰白色、圆形微凸起、中等大小的菌落。
2.2 显微镜检查
被检菌为两端钝圆、散布或成对、偶尔有2～3个连在一起的革兰氏阴性短杆菌。大多数菌株以周生鞭毛运动，除少数菌株外，通常无可见荚膜。革兰氏染色镜检均为形态均一、中等大小、散在排列的红色杆菌，菌体两端较深染，初步确定为大肠杆菌。
2.3 生化实验结果（见表1）
注：+代表阳性（产酸）， 代表阴性（不产酸）。
2.4 血清型鉴定结果
经平板凝集试验，确定了40株大肠杆菌的血清型：优势血清型为078，占62.5%；其他血清型以0119居多，这两种血清型共占92.5%。（见表2）
2.5 PCR结果
以细菌DNA为模板进行PCR扩增试验，结果扩增出与目的片段大小一致的DNA片段（见图1）。
1：Marker DL2000；
2～12：随机从40株大肠杆菌中抽取11株；
13：阳性对照。
2.6 动物实验结果
雏鸡实验结果：接种1周后，A组雏鸡全部死亡，剖检死亡雏鸡，大部分表现为败血症，少数表现为纤维素性心包炎、心包积液、肝表面被一层薄膜状纤维素性渗出物覆盖、气囊炎。用死鸡的心血、肝、脾接种于普通营养琼脂培养基上，置于37℃环境中培养24h后，有菌落生长，革兰氏染色及生化化鉴定表明此菌与接种菌为同种细菌；B组雏鸡则正常。动物试验结果表明：此次分离出的细菌对雏鸡均有较强的致病性。
2.7 药敏试验结果
40株致病性大肠杆菌的13种抗生素药敏试验结果表明：所有细菌对RIF的耐药率为100%。40株大肠杆菌全部对1种或多种抗生素有耐药性，均敏感，其中只有1株对1种药物耐受。（见表3）
3 讨论
本试验通过对被检病料进行病原分离与纯化、病菌形态学检查、培养特性、生化试验以及血清学试验，鉴定为大肠杆菌。
用标准O抗原单因子血清进行玻片凝集试验，结果表明分离出的致病性大肠杆菌的血清型为O78。致病性大肠杆菌血清型多，有研究报道称在禽类大肠杆菌病中，常见的病原性血清型包括O1、O35、O8 ，但在本次实验中除出现了1株（占4. 2% ）O1外，并未见其他血清型，与国内已有的报道存在差异，这说明我国禽类大肠杆菌血清型分布存在着地区性和多样性，这给本病的预防带来很多困难。
药敏试验结果表明：不论是同一地区的同一血清型或不同血清型，还是不同地区的同一血清型或不同血清型，它们对同一种药物的敏感性可能相同，也可能不同，其原因可能与用药历史不同或细菌在传代过程中质粒丢失或增加使其耐药性降低或提高有关。
大肠杆菌很容易产生耐药性，由染色体或质粒介导，它可以通过菌毛将耐药质粒传递给其他大肠杆菌。近几年来，由于各种抗菌药物的广泛应用，耐药菌株迅速增加。尤其是在一些养鸡场内，为了控制大肠杆菌和某些细菌感染，养殖者在饲料中添加或在治疗中盲目使用抗菌药物，致使大肠杆菌耐药菌株越来越多、耐药性也越来越严重。由于不同菌株对药物的敏感性存在差异，建议在使用药物治疗病原菌时要加强对病原菌的耐药性检测，篩选出对病原菌敏感的药物，按临床指导合理用药，以减缓细菌耐药性的产生。
4 结语
致病性大肠杆菌是重要的人畜共患病病原，盲目地使用抗生素类药物，会使抗生素所带来的负面影响越来越重。抗生素残留问题的加剧，会直接影响禽类产品的质量，威胁人类健康。动物的大肠杆菌病常常通过食物链的途径对人类健康造成严重危害，因此，加强对病原菌耐药性的检测，定期总结经验，观察耐药趋势，对指导临床合理用药和减缓细菌耐药性产生具有重要意义。为此，我们应做到以下几点：
（1）以全价优质饲料喂养，经常喂给多种维生素和电解质，增强机体抵抗力；
（2）定期清扫粪便，对地面、工具、水槽、料槽进行清洗和消毒，保持饲料和饮水的清洁卫生；
一、备案范围
（一）属于下列情形的化学药，应当进行BE试验备案： 1.仿制已上市的参比制剂，其活性成分、给药途径、剂型、规格应与参比制剂相一致。参比制剂应为原研药品。
2.已批准在境内上市，需通过BE试验开展相应变更研究的药品。
3.已在境内上市，需通过BE试验与参比制剂进行质量和疗效一致性评价的药品。参比制剂应为原研药或国际公认的仿制药。
（二）属于下列情形的化学药，如需开展BE试验，可按照《药品注册管理办法》的有关规定申报受理和审评审批。
1.放射性药品、麻醉药品、第一类精神药品、第二类精神药品和药品类易制毒化学品；
2.细胞毒类药品；
3.不适用BE试验方法验证与参比制剂质量和疗效一致的药品；
4.不以境内注册申请或仿制药质量和疗效一致性评价为目的进行BE试验药品；
5.注册申请人认为BE试验可能潜在安全性风险需要进行技术评价的药品。
二、备案程序
（一）注册申请人向具有资质的药物临床试验机构提出申请，获得该机构伦理委员会的批准，并签署BE试验合同。
（二）注册申请人开展生物等效性试验前30天，应当在国家食品药品监督管理总局指定的化学药BE试验备案信息平台进行化学药BE试验备案，按要求提交备案资料。
（三）备案资料主要包括注册申请人信息、产品基本信息、处方工艺、质量研究和质量标准、参比制剂基本信息、稳定性研究、原料药、试验方案设计、伦理委员会批准证明文件等。
（四）注册申请人BE试验的参比制剂及各参与方的基本信息等向社会公开。
（五）注册申请人在获得备案号后，应在第1例受试者入组前在国家食品药品监督管理总局药物临床试验登记与信息公示平台完成开展试验前的所有信息登记，并由国家食品药品监督管理总局向社会公示；1年内未提交受试者入组试验信息的，注册申请人须说明情况；2年内未提交受试者入组试验信息的，所获得备案号自行失效。
（六）注册申请人应严格执行《药物临床试验质量管理规范》（GCP），按照试验方案开展BE试验。BE试验过程中，参比制剂、原料药、制剂处方、工艺等发生变更，注册申请人应停止试验，通过备案平台提交试验中止的申请，国家食品药品监督管理总局将公示其中止试验。注册申请人根据变更情况，向国家食品药品监督管理总局提交备案变更资料，生成新的备案号后重新开展BE试验。
（七）注册申请人应当在BE试验完成或因故终止一年内，在备案平台提交BE试验的总结报告或情况说明。
（八）注册申请人完成BE试验后，应将试验数据申报资料、备案信息及变更情况提交国家食品药品监督管理总局，在此基础上提出相应药品注册申请。注册申请人要承诺其注册申请资料及数据的真实、完整、规范。
竹材CTMP高浓制浆废水动态曝气生物处理试验研究
摘要：本文对竹材CTMP废水(先经厌氧处理)好氧处理的效果进行研究.采用在SBR法基础上改良的专有技术--好氧动态曝气工艺,通过研究溶解氧(DO)、进水量、运行模式等因素对动态曝气工艺的影响,确定该工艺用于和厌氧联合处理竹材CTMP废水的.优化条件:运行模式采用2周期/天,进水0.5h,曝气6.0h,后3h通过逐步降低曝气机输入功率达到减少曝气量的目的,停曝搅拌3.0h,沉淀2.0h,排水0.5h.作 者：孙玉 丁来保 施英乔 房桂干 Sun Yu Ding Lai-bao Shi Ying-qiao Fang Gui-gan 作者单位：中国林业科学研究院林产化学工业研究所,江苏,南京,210042期 刊：造纸科学与技术 PKU Journal：PAPER SCIENCE & TECHNOLOGY年，卷(期)：,27(4)分类号：X793关键词：竹材CTMP废水 动态曝气 好氧处理 氨氮
摘要：水禽的各年龄段都易感大肠杆菌病，给水禽的养殖造成很大的损失。检测病死水禽分离到的大肠杆菌对自制的药敏试纸的敏感性，找出合理预防和控制大肠杆菌病的敏感药物。
关键词：水禽源大肠杆菌；药敏；诊治
水禽大肠杆菌病是水禽感染致病性大肠杆菌引起的一种急性或慢性的细菌性传染病。水禽感染大肠杆菌后，由于其年龄、抵抗力以及大肠杆菌的致病力、感染途径等不同因素，会产生许多症状和病变不同的病。如急性败血症、气囊炎、肝周炎、心包炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、眼炎、关节炎、肉芽肿。大肠杆菌病的病原由某些血清型的大肠杆菌所致，雏鹅有O1、O2、O6等血清型，雏鸭有O78、O8、O7、O73、O19等血清型，产蛋鹅有O2K39、O2K1、O39等血清型。
笔者采取3株来自江苏、安徽等地的雏鹅、雏鸭的心血及纤维素性渗出物、母鹅的变性卵泡等作为被检病料分离到大肠杆菌，通过对自制的药敏试纸敏感性检测，找到科学防治水禽大肠杆菌的药物。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 病料 ①江苏姜堰10日龄鹅，肝肿大，有纤维素性渗出，腹腔中有未被吸收的卵黄；②安徽合田种鹅，患病死亡的母鹅卵黄性腹膜炎，凝固蛋白，输卵管里黄色纤维素性渗出物；③江苏扬州15日龄鸭，肝肿大，有包膜，易剥离，有不凝心血，关节红肿。
1.1.2 药敏试验培养基 营养琼脂平板、血琼脂平板、麦康凯平板培养基。
1.1.3 自制药敏试纸 分别为1-林可霉素（15mg/片）、2-庆大霉素（2mg/片）、3-卡那霉素（12.5mg/片）、4-环丙沙星（2mg/片）、5-复方磺胺嘧啶（10mg/片）、6-强力霉素（5mg/片）、7-复方甲氧嘧啶（10mg/片）、8-链霉素（2000单位/片）、9-氟哌酸（1mg/片）、10-氟苯尼考（15mg/片）。
1.2 方法
1.2.1 细菌分离 1#：姜堰雏鹅：无菌取肝、纤维素性渗出物接种血琼脂平板和营养琼脂平板、麦康凯培养基，37℃有氧培养。
2#：安徽合田种鹅：无菌取变性卵泡接种血琼脂平板和普通琼脂平板、麦康凯平板培养基。37℃有氧培养。
3#：扬州雏鸭：无菌取肝、脑、关节，接种血琼脂平板，37℃，5%CO2厌氧培养和有氧培养24h后，厌氧培养和有氧培养都形成灰白色单个菌落，挑取单个菌落重新划线麦康凯培养基，24h形成红色菌落。
1.2.2 染色镜检 分离到的细菌挑取单个菌落进行革兰氏染色镜检。
1.2.3 细菌生化鉴定 根据细菌的培养特征、染色形态特征，挑取单个菌落接种大肠杆菌微量生化鉴定管，置37℃恒温箱培养24h，观察结果。能够分解葡萄糖和甘露醇，产酸；分解阿拉伯糖、木胶糖、鼠李糖、麦芽糖、乳糖；不分解侧金盏花醇和肌醇；能产生靛基质，不产生尿素酶和硫化氢。符合上述生化反应的，确定为大肠杆菌。
1.2.4 血清学鉴定 将被检菌株的培养物分成2份，一份经121℃高压蒸汽加温2h，破坏K抗原，一份加0.5%福尔马林摇匀后37℃放置24h。分别用各种单因子抗O血清和抗OK血清对处理后的两份菌液作凝集试验。如该菌株含有K抗原，则各种抗O血清不能使经福尔马林处理的菌液凝集，但可被各种抗OK血清中的一种凝集。经高压蒸汽加热的菌液可被一种单因子抗O血清所凝集。
1.2.5 药敏试验 将分离到的大肠杆菌进行药敏试验。挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到营养琼脂培养基上。将含有定量抗菌药物的试纸片贴在已接种了细菌的琼脂表面上，37℃，培养24h。抑菌圈的大小反映出细菌对药物的敏感程度。
2 结果
2.1 细菌分离 三组病料均分离到灰白色、湿润、光滑、不溶血、边缘整齐、麦康凯培养基呈红色菌落、镜检均为G-杆菌。
2.2 这3株细菌经鉴定均为大肠杆菌。
2.3 分离到的细菌血清型为O6、O39、O19。
2.4 药敏试验结果 见表1。
这3株来自不同日龄的鹅和鸭，有着不同的血清型的大肠杆菌，对药物的敏感性大不同，但它们同时对氨基苷类的庆大霉素、卡那霉素高敏感。1#姜堰雏鹅株还对链霉素高敏感，2#合田种鹅株还对氟苯尼考高敏感，3#扬州雏鸭还对环丙沙星和5-复方磺胺嘧啶高敏感。
3 治疗
根据药敏试验结果，给出如下治疗方案：
3.1 姜堰雏鹅，建议养殖户挑出有症状病鹅，隔离饲养，肌肉注射庆大霉素2mg/kg·w，每日2次，连用3d。
3.2 合田种鹅，挑出病重的母鹅淘汰。症状较轻的母鹅，隔离饲养，肌肉注射庆大霉素3mg/kg·w。每日2次，连用5d。检查公鹅的阴茎，有肿大、在不同部位有脓性或干酪样结节的，淘汰。
姜堰雏鹅和合田种鹅群中其它无症状的鹅，饲料中添加林可霉素，每只禽3.0mg/kg或饮水17mg/kg进行预防。
3.3 扬州雏鸭，症状明显的治疗同姜堰雏鹅。其它鸭饲料或饮水中添加环丙沙星，1g药粉加入5kg饲料，或1g药粉加入10kg水进行预防。
这三群鹅和鸭，经过治疗，3d后病情得到控制。禽群中不再出现死亡病例。7d后，鹅群及鸭群恢复原有的采食量，精神状况良好。
4 体会
大肠杆菌是动物肠道中的常在菌，10%～15%的大肠杆菌属于有致病力的血清型。水禽场卫生条件差、地面潮湿、舍内通风不良、氨气味大、饲养密度过高等易诱发本病。初生雏禽的感染是由于种蛋被传染，因此，应注意育雏期保温及饲养密度，改善通风，降低灰尘，勤于除粪，减少氨气的含量；禽舍、孵化器及用具经常清洁和消毒。
禽群中发现发病或死亡的禽只，应及时细菌分离，进行药敏试验，找出该菌较敏感的几种药，添加到饲料和饮水中，会取得较理想的效果。但是，有时也会出现药敏试验很敏感的药，而实际应用效果很差，这时就要更换敏感药，找到最有效的治疗药物。
由于养殖过程中不科学、盲目滥用抗菌药，致使疾病发生后，对治疗药物的选择就显得困难，特别是长时间饲养的场地，只能选择不常用的药物治疗，若药物不敏感有效，不仅造成了药物的浪费，而且还延误了病情，给养殖户造成很大的经济损失。因此，在养殖水禽的过程中，科学合理用敏感药物预防，对控制大肠杆菌病非常重要。
1 资料与方法
1.1 标本来源
201 3年6—12月经Phoen ix-1 00系统鉴定的265株葡萄球菌 (剔除重复菌株) , 其中金黄色葡萄球菌183株, 凝固酶阴性葡萄球菌82株。
1.2 检测方法
D-试验:依据美国临床实验室标准委员会 (NCCLS) 2004年版推荐的方法进行操作。在MH琼脂平板 (法国梅里埃公司) 上, 分别贴红霉素 (15μg/片) 和克林霉素 (2μg/片) 纸片。两种纸片距离分别选用15mm、26mm, 35℃培养16~18小时。若靠近红霉素纸片处克林霉素纸片抑菌圈缩小或呈“D”形状, 则显示为诱导型耐药。β内酰胺酶检测用Nilrocefin法, 按操作说明进行, 颜色变红为阳性。β内酰胺酶纸片、红霉素 (E) 纸片、克林霉素 (CC) 纸片 (均购自Oxoid公司) , Phoen ix-100及其配套的鉴定药敏卡 (美国BD公司) 。质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923, 质控最低抑菌浓度 (MIC) 测定结果均落在允许范围之内。
2 结果
2.1 β内酰胺酶检测结果
Phoen ix-1 00系统检测结果:对青霉素表现为高度耐药250株 (94.3%) ;对青霉素敏感仅15株 (5.7%) , 其中金黄色葡萄球菌13株 (7.1%, 13/183) , 凝固酶阴性葡萄球菌2株 (2.4%, 2/82) 。1 5株对青霉素敏感菌株进行β内酰胺酶测定, 并对β内酰胺酶阳性结果进行修饰, 结果产酶株1株。
2.2 D-试验结果
Phoen ix-1 00系统检测结果:对红霉素耐药克林霉素敏感菌株122株 (46.0%) , 其中凝固酶阴性葡萄球菌47株 (57.3%, 47/82) , 金黄色葡萄球菌7 5株 (4 1.0%, 7 5/1 8 3) 。1 2 2株对红霉素耐药克林霉素敏感菌株进行D-试验, 阳性51株 (41.8%) , 其中金黄色葡萄球菌30株 (40.0%, 30/75) , 凝固酶阴性葡萄球菌2 1株 (4 4.7%, 2 1/4 7) 。
3 结论
Phoen ix-1 00系统全自动微生物鉴定/药敏分析仪 (药敏系统已更新至最新版本) , 在葡萄球菌药敏判断中存在局限性, 不能对所有药敏结果做出准确判断。青霉素敏感时, 仪器无法正确识别是否产β内酰胺酶, 对红霉素耐药克林霉素敏感时, 同样不能准确判断其药敏结果, 造成临床对青霉素、克林霉素结果可能出现误判、迟判, 影响临床用药。
青霉素是临床最常用的药物之一, 葡萄球菌的耐药率达90%以上。当葡萄球菌对青霉素敏感时, 可预测对其他青霉素类、头孢类和碳青霉烯类抗生素也敏感;一旦对青霉素耐药, 则对所有青霉素酶不稳定的β内酰胺类抗生素耐药, 需要检测其对苯唑西林的敏感性。如对苯唑西林耐药, 为耐甲氧西林的葡萄球菌菌株, 提示该菌株对所有β内酰胺类抗生素耐药, 感染需要用万古霉素等药物治疗。如对苯唑西林敏感, 提示感染可选用对酶稳定的青霉素、β内酰胺酶抑制剂复合药、头孢菌素和碳青霉烯类抗生素治疗[1]。根据2013年CLSI抗菌药物敏感性试验执行标准, 葡萄球菌对青霉素敏感时, 必须进行诱导β内酰胺酶测定, 如为阳性青霉素应修饰为耐药。本文结果显示, 265株葡萄球菌中有15株青霉素敏感, 敏感率为5.7%, 主要为金黄色葡萄球菌, 具体原因尚未明确, 其中1株β内酰胺酶检测阳性, 需要将青霉素结果修饰为耐药, 阳性率虽不高也要谨慎对待。因此, 对青霉素敏感菌株应得到充分关注, 是否其真正敏感, 应慎重报告, 否则将误导临床。
克林霉素为对青霉素和头孢菌素过敏者的常规替代药品。随着青霉素和头孢菌素类药物的大量使用, 大环内酯类药物也呈现较高耐药性, 且红霉素具有诱导克林霉素耐药的作用[2]。诱导型耐药是指红霉素作为诱导剂可通过衰减机制诱导erm的表达而产生克林霉素耐药, 其表型为对红霉素耐药对克林霉素敏感, 诱导型耐药用常规药敏试验会造成漏检, 导致临床上的治疗失败[3]。因此, 对红霉素耐药克林霉素敏感的葡萄球菌应做D-试验检测克林霉素诱导型耐药, 以保证克林霉素耐药检出的准确性。本文结果显示, 26 5株葡萄球菌中红霉素耐药克林霉素敏感菌株1 22株, 发生率46.0%, 其中D-试验阳性率41.8%, 发现红霉素诱导克林霉素耐药率较高, 需引起关注, 并对D-试验阳性结果进行修饰。
综上所述, Phoen ix-100系统鉴定葡萄球菌药敏时存在局限性, 在青霉素敏感、红霉素耐药克林霉素敏感时不能给出准确报告, 临床应根据β内酰胺酶检测结果、D-试验结果进行修饰, 指导临床合理用药。
参考文献
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[2]关幼华, 周金凤, 陈梅, 等.葡萄球菌属中红霉素诱导克林霉素耐药的检测[J].中国抗生素杂志, 2011, 36 (7) :540.
间歇曝气对膜生物反应器影响的试验研究
膜生物反应器是生物处理和膜分离相结合的`一种高效的废水处理方法.通过研究,膜生物反应器具有较好的硝化能力.主要通过间歇曝气的运行方式来考察MBR对有机物和氨氮的去除效果.试验结果表明:合理的间歇时间能提高反应器对有机物和氨氮的去除效果.
作 者：由昆 傅金祥 琚冉 YOU Kun FU Jin-xiang JU Ran 作者单位：沈阳建筑大学市政与环境学院,沈阳,110168刊 名：工业安全与环保 PKU英文刊名：INDUSTRIAL SAFETY AND ENVIRONMENTAL PROTECTION年，卷(期)：32(7)分类号：X7关键词：膜生物反应器 生活污水 间歇曝气
一体式膜-生物反应器同步硝化反硝化中试试验
摘要：当污泥浓度维持在19～20 g/L时,一体式平板膜-生物反应器运行112 d,通量稳定在25.2～25.7 L/(m2・h),运行过程除正常曝气以保持对膜进行水力冲刷外没有进行任何物理和化学清洗.试验考察不同DO浓度对同步硝化反硝化效果的影响,结果表明,反应器内有较好的硝化反硝化效应,当温度在18～12 ℃变动时,膜生物反应器的.硝化反硝化效果基本不受温度的影响.作 者：刘江锋 王志伟 吴志超 王文标 顾国维 作者单位：同济大学环境科学与工程学院污染控制与资源化研究国家重点实验室,上海,92 期 刊：环境工程 ISTICPKU Journal：ENVIRONMENTAL ENGINEERING 年，卷(期)：, 25(1) 分类号：X7 关键词：一体式膜-生物反应器 平板膜 同步硝化反硝化 污水处理
1三培法药敏试验简述
根据对病死畜禽尸体剖检及内脏器官纤维素性炎症病理变化的不同, 分别采用SS琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、普通琼脂培养基3种培养基同时做药敏试验。当怀疑有变形型大肠杆菌感染时, 还可用去氧胆酸盐琼脂培养基做药敏试验, 但前3种较为常用, 因此, 称为三培法药敏试验。
2三培法药敏试验准确率高的原因
畜禽在患白痢病、禽副伤寒病、大肠杆菌病、副大肠杆菌病、变形大肠杆菌病、链球菌病时, 通常为其中几种病菌混合感染, 只用1个培养基做药敏试验, 准确率就很低。不同的细菌需要在不同的培养基上才能发育生长, 如鸡白痢杆菌、副伤寒杆菌适于在SS琼脂培养基上发育生长, 变形型大肠杆菌适于在去氧胆酸盐琼脂培养基上发育生长, 副大肠杆菌、大肠杆菌适于在麦康凯琼脂培养基和普通琼脂培养基上发育生长, 链球菌适于在血液琼脂培养基、普通琼脂培养基上发育生长。根据各种细菌对培养基的选择性、亲和性, 应采用3种不同培养基做药敏试验, 才能保证药敏试验的准确性。
3药敏片的制作
3.1
用口径6 mm的打孔器把定性滤纸打成直径6 mm的纸片, 置于平皿中, 经高压灭菌备用。
3.2
每个药敏片的药物含量:抗生素类每片含药物200 IU, 粉剂类每片含药物10 mg。
3.3
在平皿中将制作药敏片的药物, 用灭菌蒸馏水配成溶液。青霉素类每片含200 IU, 用水0.2 ml, 如果做100片, 需青霉素2万IU, 用水20 ml;醛诺酮类每片10 mg, 用水0.2 ml, 如果做100片, 需醛诺酮类1 000 mg, 用水20 ml。其他药物参照上述药物浓度配制。
3.4
将灭菌的滤纸片在配好的药液中浸泡2 min, 边浸泡边晃动, 使药液充分均匀地被纸片吸附, 然后, 将余下的药液从平皿中倒出。用灭菌镊子把重叠的药敏片依次分开摆均, 把平皿放到40℃的保温箱中待干燥后备用。
4培养基的制作
4.1
从市场上购买SS琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、普通琼脂培养基各取1 g分别倒入100 ml的三角烧杯中, 常水24 ml, pH值必须在7.0～7.3之间, 否则会影响菌落的发育, 影响抑菌圈的出现。将盛装配制好培养基溶液的三角杯放到水锅中煮沸3 min, 然后降温至60℃, 分别倒进直径100 mm的3个平皿中, 凝固后备用。
4.2
培养基煮沸灭菌时间不能超过3 min, 否则, 培养基中的水分蒸发较多, 培养基浓度大, 湿润性差, 既影响菌落发育, 也影响药敏片上的药物向周边扩散, 抑菌圈会出现假阴性而影响判定。
5药敏试验方法
5.1病料采取
在发病的鸡群中采取3只以上的病死鸡肝、脾、肠管, 作为病料来源吊菌培养用。
5.2病料消毒
用酒精棉火焰在死鸡的肝脏、脾脏、肠管表面进行火焰消毒, 然后用消毒过的剪子或者外科刀在病料表面做3～4个创口, 长度以3～5 cm为宜。
5.3吊菌划线
用消毒过的吊菌圈在病料创口处吊菌, 在培养基上划线;也可用小病料块在培养基上轻轻涂抹, 然后划线。一般吊菌4次, 在培养基上边吊菌边划线, 划线要平行、均匀, 线与线之间不要留空隙。吊菌次数不要太多, 太多则菌落数量大、过于密集, 抑菌圈受抑制而影响判定。
5.4药敏片的贴放
在经过消毒的平皿上标出1～3号, 按号贴放1～3个药敏片;每个药敏片圆心距离以24 mm为宜。3个平皿上的培养基都贴放相同的药敏片, 如1号是庆大霉素, 3个培养基上的1号都贴放庆大霉素;2号丁安卡那, 3个培养基上的2号都贴放丁安卡那。药敏片贴放后, 把3个平皿培养基放进37℃的保温箱内, 培养8 h。用药时, 选择抑菌圈最大, 圈内非常明亮清楚且没有零散的菌落出现的药物用药疗效最佳。从2003～2007年, 笔者做各种畜禽肠道传染病的药敏试验552次, 其中有肉鸡、蛋鸡、野鸡、家猪、野猪、奶牛、鹿和毛皮动物等。根据三培法药敏试验用药, 4～5 d病情痊愈。
6试验注意事项
6.1
做药敏片时, 最好使用纯粉制剂或者含单一药品针剂。如果用复方粉剂或者针剂, 必须按主导药物含量去做。
6.2
抑菌圈的大小与纸片的药物含量浓度以及吊菌划线次数有关。一般每个药敏片药物含量, 抗生素类不得超过200 IU、粉剂类不得超过10 mg。吊菌划线以4次为宜, 否则, 会出现假阳性或者假阴性。
6.3
不采用细菌纯培养去做药敏试验。凡做纯培养的药敏试验, 准确率都很低, 因为肠道传染病一般都不是单一的细菌感染, 多半是混合感染。
6.4
剖检患大肠杆菌病没有死的鸡或刚死不久的鸡尸体, 取其肝脾脏器时, 往往细菌随血液流出而含菌量很低, 做药敏试验时往往没有抑菌圈的出现。因此, 必须采取已尸僵的死鸡肝脾的病料吊菌划线, 准确率才能高。
6.6
【关键词】直接药敏实验 常规药敏实验 血液细菌检验 临床应用 价值研究
【中图分类号】R44 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）08-0294-02
在现代的临床医学中，血培养对于败血症以及菌血症的临床诊断具有相当重要的现实价值，而相关的研究也显示，在败血症病发之前的3天之内进行必要的抗生素治疗也具有明显的临床价值。鉴于此，对血液标本进行准确而快速的直接或常规药敏实验，以使其知道临床中合理、科学的用药，而不断的减少并降低临床用药的盲目性十分必要。现阶段，各个实验室中均没有统一的、方便快捷的药物敏感实验标准，所以，我院的实验室运用较为直接与快速的直接药敏实验与常规药敏实验两种药敏实验方式来进行临床血液细菌的检验，现将详细的研究结果报告如下：
1 材料与方法
1.1材料
本项研究的研究材料为2009年12月—2011年12月期间的200例血液标本，其标准菌株为：金黄色葡萄球菌（ATCC29253）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）以及大肠埃希菌（ATCC25922）。
本项研究中所有的仪器和试剂选择如下：其一，全自动血液培养系统Bactec9050，BACTED PLUS以及血液培养瓶等；其二，细菌的鉴定系统运用的是法国梅里埃公司的API坚定板条；其三，巧克力平板以及血平板等来自于广州的乐通泰公司；其四，药敏纸片以及MH干粉均来自于英国的OXIOD公司；其五，实验中一次性的无菌针筒来自于美国的BD公司。
1.2方法
首先，在全自动血液培养系统Bactec9050报警之后，将陽性瓶快速的取出，并运用无菌针筒抽取培养液，并将其放置在无菌试管中做好梯度离心。离心之后收集上清液，再对其进行离心处理，待15分钟之后取其沉淀物。之后用生理盐水洗涤之后收集其菌细胞粘液，然后在图片革兰染色之后观察其细菌的形态。在培养18—24小时之后，量出直接药敏纸片抑菌圈直径的大小，并判定其敏感、耐药以及中介的相关结果。
对于革兰阴性杆菌，应该选用头孢他啶、头孢曲松、环丙沙星以及哌拉西林等，而革兰阳性球菌则应该选用青霉素、氨苄西林、万古霉素以及环丙沙星等。
1.3统计学处理
本次研究均采用SPSS16.0统计学软件进行处理分析，计量资料采用t检验，组间对比采用X2检验，P＜0.05为差异显著性，有统计学意义。
2结果
200株血液培养标本中的细菌构成比主要由革兰阳性杆菌以及革兰阴性杆菌所共同构
成，在革兰阳性杆菌中，以凝固酶阴性葡萄球菌以及金黄色葡萄球菌为主，革兰阴性杆菌则以大肠埃希菌以及铜绿假单胞菌为主。
3 讨论
血培养对于现代临床中败血症以及菌血症的诊断与治疗具有相当明显的现实意义，它不仅可以使医疗工作者合理的根据病原菌来进行科学的抗生素治疗，更加有助于患者用药耐药性的减少，并最大限度的降低患者住院的时间及费用。基于此，现代的临床中进行快速而安全的药物敏感试验，从而为临床的诊断及治疗提供科学的方、开辟新的途径。1973年美国的著名学者Barry曾经提出有关临床标本直接的药敏实验，这一论述对于全球的临床用药均具有较为重要的指导价值。随着上述实验方法关注人数的不断增加，这种研究逐渐走入了人们的视野，直到1986年美国的知名学者Fincgold再次提出了快速药敏实验这一说法，他认为，想要做到快速药敏实验最基本的方式便是直接对临床的血液标本来进行药敏实验，取得的结果是最为有效和直接的。
本项研究评估了直接与常规药敏实验的准确性，得出了如下的研究结论：直接药敏实验与常规药敏实验的符合率为89.9%。由于药敏试验的方法是根据抑菌环以及抗生素的抑菌程度的负相关所特意设计的一种定性实验，其不可避免的会存在着诸多的局限。相关的文献报道曾经记录纸片扩散的方法与药敏实验的方法二者之间的误差值为±2 mm，基于此，本项研究如果将此种误差忽略不计的话，然后再将两者进行必要的比较，那么其符合率必然会大幅度提升，为96.87%。这与国内相关文献报道中的数据统计结果具有一致性。
综上所述，对临床中的血液样本进行直接的药敏实验具有相当重要的临床意义，在血培养阳性报警之后，应该对标本进行及时的处理，除了链球菌之外，直接与常规的药敏实验不仅有助于患者抗生素的治疗，更加有助于及时的控制患者的感染，并减少相关并发症的发生，以不断的提高医院的诊治水平。
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