繁殖培养

繁殖培养（推荐8篇）

繁殖培养 篇1

青杨组织培养快速繁殖

建立了青杨( Populus cathayana) 组织培养系统.最适合的外植体是新切下的枝条插入含有蛭石和充足水的营养钵中24 h以上,使其在弱光下迅速长出嫩枝的茎切段和茎尖.茎切段和茎尖外植体经0.1% HgCl2 或5% NaClO溶液表面消毒后,接种到大量元素减半、含0.5 mg/L 6-BA和0.03 mg/L NAA的MS 培养基上诱导芽,试管苗的.生根采用含0.5 mg/L IBA的MS 培养基.试管苗茎段的分化依外源激素条件的不同而异.

作 者：耿飒 姬生栋 袁金云 周春娥 赵晓进 GENG Sa JI Sheng-dong YUAN Jin-yun ZHOU Chun-e ZHAO Xiao-jin 作者单位：河南师范大学,生命科学学院,河南,新乡453007刊 名：河南师范大学学报(自然科学版) ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF HENAN NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)年，卷(期)：34(2)分类号：Q944.6关键词：芽 青杨 组织培养

繁殖培养 篇2

1.1 黄芩的植物学性状

黄芩学名Radix Scutellariae, 为多年生草本植物, 属唇形目唇形科。中药上所称的黄芩是指它的干燥根。黄芩又名黄金条根、黄芩茶、山茶根、土金条根、条芩、枯芩等, 始载于《神农本草经》, 列为中品, 是我国中医常用的大宗药材之一。它具有清热燥湿、泄火解毒、止血、安胎等功效。用于发热烦躁、肺热咳嗽、泻痢热淋、湿热黄疸、胎动不安、痈肿疮毒等症。

1.2 黄芩的生长环境及分布

黄芩喜温暖, 耐高温, 耐寒, 成株地下根部能耐-30℃的低温, 植株又能耐35℃左右的高温。目前, 黄芩在我国主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、河北、河南、山东、四川、云南、山西, 陕西、甘肃、内蒙古等省 (区) 。

1.3 中药发展史

黄芩作为我国传统常用中药材, 应用历史悠久, 需求数量较大, 是全国中药材大品种之一, 是清热泻火、消炎镇痛的主要药材品种。目前我国中药产业已经初步形成了具有一定规模、结构完整的产业体系, 特别是近年来呈现出快速增长的态势, 是我国医药经济产业体系中的重要组成部分。

1.4 黄芩国内外研究现状及需求情况

目前黄芩的应用和开发越来越受到国内外医学界的关注, 需求也随之急剧增加。我国黄芩的商品主要来源于野生资源, 但由于连年的无序采挖, 使野生资源的提供能力日渐减弱, 在这种情况下就给中药材种植提供了巨大的发展空间。通过应用组织培养的方式完成苗木繁育的快速和一致, 达到中药材繁育的快速、高效、优质的目的。我国中药材生产目前还处于初级阶段, 种子和种苗还没有农作物那样专门的种子公司或种子供应商进行经营, 大多数是药农从其他产地和某些推销商那里购得。多数种子依赖野生采集, 加上长期重复使用, 种子质量逐渐退化。

随着我国加入WTO, 我国和国际市场对黄芩的需求量会越来越大。随着我国和黑龙江省制药工业的发展, 不少企业试图打入国际医药主流市场, 不少外国制药企业也要求供应标准化的中药原料。

1.5 进行黄芩组织培养的必要性

黄芩繁殖幼苗一般都用扦插繁殖和分根繁殖, 速度较慢。这样很难满足黄芩种植户对黄芩幼苗的需求量。因此, 黄芩幼苗的繁殖将成为一项很具有市场潜力的新项目。组织培养技术已经是一项很成熟的技术。组织培养的好处有:脱毒、节省土地、生长快、效果好、产量高等。

在理论上, 黄芩的组织培养与快速繁殖, 可以确定最佳的诱导培养基、最佳继代培养基和最佳生根培养基, 为黄芩以后的组织培养实验提供理论依据。同时, 可以缩短黄芩组织培养实验的时间, 加快实验进程, 为黄芩工厂化生产组织培养苗提供理论基础。生产实践上, 可以更加快速地培育出黄芩幼苗, 为市场需求提供保证。通过组织培养技术培养黄芩幼苗, 可以减少病害的发生, 提高黄芩的品质。同时, 也可以加快黄芩幼苗工厂化生产, 并为其提供技术支持。因此, 利用组织培养技术进行快速繁殖黄芩有着重要的意义。

1.6 该项研究的技术创新点

该项研究运用了当前先进的组织培养技术, 此次试验研究可使黄芩的增殖数较以前的研究提高10~20倍。这样就大大地增加了黄芩出苗的数量, 保证黄芩幼苗的市场供给量, 加快中药利用组织培养进行繁殖的速度。该项研究在国内外都是比较先进的。

2 试验材料与方法

2.1 培养材料

选取健壮、无病虫害的幼苗带节茎段, 幼苗长有6~7个节段为宜, 去掉两侧叶片, 作为外植体。黄芩种苗由黑龙江省北药技术开发有限公司提供。

2.2 培养条件

培养温度25℃左右, 光照度为1500~2000lx, 每日光照时间12h。

2.3 培养方法

外植体的消毒:先剪其带节茎段, 去掉两侧叶片, 剪成3~4cm的节段, 在自来水下冲洗1h。然后拿到无菌室里先用75%的酒精对其消毒30s, 再用0.1%的HgCl2溶液消毒3min.用无菌水冲洗4~5次。将灭菌后的外植体首先用灭菌滤纸吸干, 然后放到无菌培养皿中切成1cm的小茎段, 接种于不同激素浓度的诱导培养基中。每瓶接种1个外植体, 这样可避免外植处之间交叉感染, 是降低污染率的最好方法之一。诱导培养基为MS+3.0%蔗糖+0.75%琼脂, 附加不同浓度的6-BA和NAA, pH值为6.0。增殖培养基为在上述培养基基础上附加不同浓度的6-BA和NAA。无根苗的生根培养基为1/2MS培养基, 附加不同浓度的NAA。

3 试验结果与分析

3.1 培养材料的诱导

外植体接种后20d左右, 叶腋内开始萌动生长, 并形成愈伤组织, 呈现质地疏松、晶亮带点绿色的状况。黄芩4周时的长势情况:①培养基配方为MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L, 诱导率为67%;②培养基配方为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L, 诱导率为78%;③培养基配方为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L, 诱导率为23%;④培养基配方为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L, 诱导率为68%;⑤培养基配方为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L, 诱导率为10%;⑥培养基配方为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L, 没有变化;⑦培养基配方为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L, 诱导率为34%;⑧培养基配方为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L, 诱导率为24%。综合以上试验结果统计得出, 在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L这个激素组合下, 诱导率最高, 达到78%, 该激素水平适合黄芩的诱导。

3.2 愈伤组织诱导

愈伤组织长到1个月左右, 表面开始出现许多绿色的芽点, 随后芽点逐渐增大。然后接种到MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L的培养基中, 经过20d左右的继代培养, 1个带节茎段的幼苗可产生20个左右的芽, 芽段增殖25~30倍。

3.3 生根培养

当苗高长至4~6cm, 从愈伤组织的基部切断, 转移到1/2MS+NAA0.2mg/L的生根培养基中, 经20d左右出现根。一棵苗可长出4~5条根, 根多而且苗壮、苗色绿。

4 移栽

4.1 出瓶后的管理

移栽前把生根苗直接从瓶中取出, 取苗时动作要轻, 避免根苗受伤, 取出后用清水除去根部的培养基。在高为4cm的育苗盘中装入草炭与蛭石, 比例为2∶1。栽培温度25℃左右, 湿度为80%~90%。栽培后要遮阴和保温, 确保组培苗的成活率。如无温室夏季可搭建30~50cm的小拱棚, 其上覆盖薄膜, 膜上方加遮阳网, 以防太阳暴晒。定植后1周是关键时期, 此时幼苗非常细弱, 从培养基到土壤中, 环境条件变化大, 光照、温度和湿度均与此前不同, 植株变成自养, 根系不发达, 稍不留心就可能造成死苗。这段时期的管理工作主要是防风蔽阴, 防暴晒, 保持膜内湿度, 并注意防霉, 4~5d后打开薄膜, 适量施一些营养液。经1个月左右, 见幼苗色绿、粗壮、挺拔后, 即可移栽至花盆或露地中。

4.2 露地的栽培方法

黄芩应选择土层较厚、排水良好、疏松肥沃、阳光充足的壤土、沙壤土或腐殖土种植为宜。选好地块后, 要及时耕翻30cm以上, 然后将组培苗移栽至选好的露地上。

5 小结

a.在黄芩的诱导培养基中, 最佳者为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L, 不仅平均分化苗数多, 而且矮壮、叶色绿。

b.在黄芩的继代培养基中, 最佳者为MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L, 平均增殖系数为90%, 而且苗壮、叶色绿。

c.在生根培养基的试验中, 最佳者为1/2MS+NAA0.2mg/L, 生根率高, 苗壮, 长势好, 成活率高, 易于移栽。

摘要：取黄芩的带节茎段为外植体, 在诱导培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L中培养20d左右, 叶腋内开始萌动生长, 并形成愈伤组织, 呈现质地疏松、晶亮带点绿色的状况。愈伤组织长到1个月左右, 表面开始出现许多绿色的芽点, 就是以后的丛生芽, 丛生芽的增殖培养基以MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2 mg/L为佳, 芽长的大且粗壮。粗壮芽转入1/2MS+NAA0.2 mg/L生根培养基中, 生根率较高。

关键词：黄芩,组织培养,快速繁殖

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草莓组织培养与快速繁殖技术 篇3

关键词:草莓;组织培养;脱毒;快繁

中图分类号:S668.4 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2010)03-0109-02

草莓是一种营养丰富的高档水果,通常采用匍匐茎繁殖,由于繁殖系数小和新茎分枝繁殖苗苗质差,影响产量和品质;采用种子繁殖,由于草莓属异花授粉作物,实生苗之间个体变异较大,很难保持原品种的优良性状。目前无病毒苗繁殖体系建立尚不完善,农民自繁自育,反复留种,致使种苗退化,病害滋生蔓延。盲目引种又会造成品种杂乱。采用草莓脱毒、快繁技术,提高草莓的繁殖系数,建立无病毒苗快繁体系,是提高草莓产量和品质,促进草莓产业化的有效途径。草莓脱毒苗既可确保原品种的种质纯度,又可提高品种的抗逆性,脱毒苗生长速度快,长势强,产量可增加30%以上。

1 脱毒的理论依据

病毒是一种纯寄生的无胞型微生物,它寄生在植物体内引发病害,直接影响植物体的生长和代谢。茎尖是植物顶端的原生分生组织,细胞分裂旺盛,生命力强。茎尖分生组织培养之所以能除去病毒,是由于病毒在感染植物体内不均匀分布,老叶及成熟的组织和器官中病毒含量较高,而幼嫩及未成熟的组织和器官中病毒含量较低,生长点(0.1～1.0 mm区域)则几乎不含或含病毒很少,是因为病毒繁殖运转速度与茎尖分化区细胞生长速度不同,病毒向上运输速度慢,而分生组织细胞增殖快,这就使茎尖分生组织区域的细胞不含病毒。经离体培养的再生无病毒植株就是脱毒苗。

2 组织快繁

即通过植物体的茎、叶等组织进行增殖扩繁,其生长周期短,一般为25～28 d,繁殖系数大,一年内一个生长点顶端细胞可培养出600～800万与母体生理特征完全一致,且不带病毒、类病毒、细菌、真菌的植株,同时苗木生长速度快,产量高。

2.1 无菌材料的获得

从正在生长的植株中,选择生长健壮﹑无病虫﹑长势强﹑具有本品种特征的匍匐茎尖或单株心茎,去掉可见叶,用10%洗洁净泡8～10 min,在流动的自来水中冲洗20～30 min,吸干水分。在无菌室内的超净工作台上,用75%酒精处理20～30 s,0.1%升汞和吐温1～2滴灭菌8～12 min,再用无菌水冲洗5～7次,然后借助于 80～100倍双目解剖镜剥取生长点 0.1～0.3 mm,含有1～2个叶原基,快速接种到诱导与分化培养基中,封口后转到培养室进行培养。同时做好标记(品种、接种时间、接种次数),以便观察与记载。

2.2 组织培养条件

基本培养基为MS;①诱导与分化培养基MS+6-BA 0.5～1.0 mg/L +2,4-D 0.05～0.2 mg/L + GA3 0.5～1.5 mg/L;② 继代与增殖培养基MS+6-BA 1.5～2.5 mg/L+IAA 0.5～1.0 mg/L+IBA 0.5～1.0 mg/L+GA3 1.0～1.5 mg/L;③壮苗培养基MS+6-BA 1.0～2.0 mg/L+IAA 0.1～1.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L+GA3 1.0～1.5 mg/L;④生根培养基1/2MS+6-BA 0.1～0.5 mg/L或1/2MS(15～20 g/L蔗糖),附加蔗糖30 g/L,琼脂6 g/L,pH 5.6～5.8。培养温度(24±2)℃,相对湿度为65%～70%,光照强度1 800～2 200 lx,光照时间12～14 h/d。

2.3 分化与增殖培养

快速接种到诱导与分化培养基中的生长点, 30～40 d后有芽萌动, 50～60 d即可分化出丛生芽,待芽高3～5 cm时,可将丛生芽分开或单芽转入继代与增殖培养基中进行增殖培养。10～15 d有丛生芽长出,35 d左右丛生芽生长高度达3～5 cm,当每个生长点分化出20～30株小苗时即可进行生物学病毒检测,经检测后,不符合标准的全部淘汰,无毒苗在继代与增殖培养基中加速繁殖,继代周期为25～28 d。循环往复,增殖倍数一般为8倍,最高可达15倍以上。

2.4 壮苗与生根选取生长势好的芽苗转入壮苗培养基中,经过25 d左右培养的小苗生长健壮,可转入生根培养基中,进行生根培养,15 d后,芽的基部有白色隆起,25 d左右,有95%以上的植株长出3～5条2～3 cm长的根,待植株生长28～35 d时,有3～5片展开叶,苗高2～3 cm即可备苗移栽。

2.5 炼苗与移栽

炼苗前揭开培养瓶的封口膜,练苗5～7 d,然后小心取出,用自来水冲去苗基部的培养基,移栽到灭菌的腐殖质与碎炉渣(3∶2)的混合基质中,前期适当遮荫并保持相对湿度85%～95%,逐步降至70%,定期喷洒40%多菌灵800倍液杀菌,每7～10 d一次,15 d后生长加快。

移栽前应设隔离空间,用80目的防虫网,严防传毒昆虫进入;揭开培养瓶的封口膜炼苗5～7 d,使其适应自然环境生长,用镊子小心把草莓苗取出,再用自来水洗去基部的培养基,以防感染,然后用多菌灵800倍液浸5～10 min备用;将脱毒苗移栽至灭菌的腐殖质和草木灰与珍珠岩(2∶1∶1)混配的基质中;加塑料罩保水,半月后去掉,前5～7 d适当遮荫并保持85%～90%的相对湿度,以后相对湿度保持65%左右,温度15～25℃,定期(5～7 d)喷洒多菌灵800倍液杀菌2～3次,成活率可达90%以上。

3 脱毒草莓苗圃繁殖要点

3.1 加强田间管理,合理运筹肥水

脱毒草莓苗定植后浇透水,苗期保持土壤湿润,保持田间持水量在75%左右。小苗生长15~20 d后每666.7m2追施氮磷钾复合肥15～20 kg,8月份停施氮肥,只施磷钾肥。生长发育期间要结合中耕除草保持土壤疏松,严防板结。

3.2 认真进行除蕾、摘心

脱毒草莓苗现蕾后及时摘去花序。匍匐茎发生后应在母株四周均匀摆布,并在着生苗节位前3～4 cm处压蔓,促进子苗生根。定植起苗前1个月对匍匐茎摘心,并摘除过密的弱小幼苗,以保证子苗健壮生长,提高育苗质量。

3.3 草莓的壮苗标准

繁殖培养 篇4

沙漠乔桑的组织培养和快速繁殖技术

选取待萌发的沙漠乔桑冬芽、萌发的侧芽为外植体,常规消毒后接种于培养基(MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L)上,约4周诱导出芽长1～2 cm;以MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L为最佳增殖培养基,在MS+NAA 0.2 mg/L培养基上生根成苗,移栽到草炭:珍珠岩:蛭石=3:1:2的混合基质中,4周后移入大田.

作 者：石文山 李树丽 作者单位：滨州职业学院生物工程系,山东滨州,256624刊 名：安徽农业科学 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES年，卷(期)：200634(21)分类号：Q943.1关键词：沙漠乔桑 组织培养 快速繁殖

奶牛繁殖管理经典 篇5

奶牛繁殖管理

办奶牛场的目的：一，通过多产牛奶获得利润；二，增殖扩群。要达到上述的目的，需要有高水平的繁殖成绩为基础，而高水平的繁殖成绩离不开科学细致的繁殖管理。因此，奶牛繁殖管理规范化，对于奶牛场是十分必要的。

一、繁殖指标：

1、年总受胎率≥95%（成+青）

2、年情期受胎率≥55%（成+青）

3、年一次配种受胎率≥65%（成+青）

4、年空怀率≤5%（成+青）

5、产后平均始配天数：80天，平均配准天数：115天

6、平均胎间距（产犊间隔）：400天

7、青年牛初配标准：月龄16-18个月，体重≥370kg

8、初产月龄：25-28个月

9、难孕牛≤5%（经产牛半年以上未妊+青年牛20个月以上未妊）

10、年流产率≤7%

11、年繁殖率≥90%

二、发情牛的观察

1、人工授精员，饲养员，夜班工共同观察，以人工授精员为主。

2、每天最少观察3次，一般3—6次，上槽前半小时，下槽后半小时为观察的最佳时机。每个运动场每次观察不少于五分钟。

3、对于已计划参加配种的青年牛未见发情者要重点观察并及时进行产科检查，并采取相应措施。

三、分娩

1、要有专门的产房，及产间。设有专门的接产人员要经过培训，具有相当的技术水平。

2、妊娠牛距预产期7—15天提前进入产房。

3、要保障分娩在产间进行。产间用前、用后要及时消毒，及时更换褥草。

4、接产人员要穿工作服，接产前手臂及一切相关器械都要进行消毒。

5、分娩母牛后躯产前、产后进行消毒。母牛在产间期，每天后躯消毒一次，产间每天消毒一次。

6、以自然分娩为主，需要助产时，由兽医技术人员按产科要求助产。

四、产后监护

1、产后注意观察母牛有无异常反映。如努责强烈，排血过多等症状要及时进行检查是否还有胎儿遗留腹中，及产道有无损伤，及时发现宫脱出。

2、产后12小时内，注意观察胎衣是否排出。胎衣不下者，应在12—36小时内，实施人工剥离，易者要剥离干净，难者不宜强行剥离。术后子宫内投入土霉素等抗生素药物，以防止感染，有全身症状者请兽医配合治疗。

3、产后7—10天，子宫内注入土霉素等其它抗生素药物以预防子宫感染。

4、产后随时观察恶露排出情况：7天以内有大量恶露排出且气味恶臭或10天以上仍有恶露排出应采取措施。

5、子宫复旧及卵巢监控：

①产后30—35天通过直检，检查子宫复旧及卵巢变化情况，并注意生殖道分泌物有无异常。

②子宫复旧的判定：触摸子宫的大小、软硬、薄厚、位臵等鉴定。分为：A正常 B基本正常 C硬厚 D较硬厚 E稍硬厚 F肥厚 G角大 H下垂等，当然还可以分得更细，如：硬厚，再可分为厚硬，硬字在前意为硬是主要的；厚字在前，厚是主要的，其它亦如此。具体如何界定，自己可以通过多次反复实践与比较得出自己质的概念，自然会有升华。正常与基本正常者，不治疗，其它均需要治疗。

6、通常卵巢检查只记录形态变化，暂不做处理。如已确定是囊肿，静止的，需进行治疗。

7、产后50—60天未见牛发情，需再次进行直检，如子宫未恢复正常，且阴道分泌物异常要马上治疗。

确定卵巢囊肿或静止，要马上治疗。其它可先用雌激素治疗，如三合激素，也可直接使用内分泌生殖激素治疗。

使用雌激素治疗，1—2个疗程无效者要依据触摸卵巢的结果来选再用内分泌生殖激素治疗，直至发情参加配种。

五、参加配种的管理

1、每月提前做好配种计划，（成母牛、青年牛）随时审视计划完成情况，对那些未能及时参加配种的牛采取相应措施。

2、及时认真详细的填写配种日记录（配种日志）如：子宫，卵巢、分泌物等。

3、对于配种2—3次未能受孕的牛要依据当时的临床症状及以往的记录材料确定治疗方案，及时治疗，如：配后清宫，碘制剂治疗，抗生素治疗等。

六、妊娠期的管理

1、母牛配种后两个月通过直检确定是否妊娠，确妊者登记造册，直检原始记录保存至分娩，以便出现疑问时查对。

有疑问的牛需再次直检确认，以杜绝误认，有时可能需要几次直检才能确认。

已确定未妊的母牛要查明原因及时催情配种和治疗。

2、妊娠满五个月左右进行第一次复检，发现无胎者查明原因并及时催情配种治疗；发现死胎（木乃伊）及时采取措施，可一次肌肉注射已烯雌酚20mg。一天一次连用3天。随时观察死胎是否排出，发现排出即可停针，如未见效果可再次肌注（一般不超过五次），可配合子宫内注石蜡100—200ml。肌注前列腺素0.4—0.6毫克（2—3支）效果最佳。

3、妊娠成母牛满七个月的前七天进行第二次复检，杜绝干奶后无胎。

4、母牛分娩出不足月胎儿。从时间上分为两种：满七个月为“早产”，不满七个月为流产。

流产及复检无胎母牛，子宫角正常，发情即可配种，不发情应及时采取措施，流产牛90天以上不孕应计为空怀日。早产牛视同正常分娩处理。

注：以上有关技术措施方法，用药剂量、疗程等参阅繁殖工作要点。

七、记录报表

1、分娩及产后监护记录

2、生殖疾病病历及续页

3、出产房子宫主要记录

4、子宫炎症治疗简记

5、性腺激素催情记录

6、内分泌生殖激素治疗记录

7、胎衣不下记录

8、逐月配种记划（成、青）

9、配种日记录（日志）

10、配种登记

11、妊娠登记

12、流产记录

13、空怀天数统计表

14、配种受胎月报

（一）15、始配、配准、空怀月报

（二）16、生殖疾病与繁殖月报

（三）17、配种及难孕牛月报

（四）18、年产犊计划与实际产犊情况

八、记录报表的填写使用及繁殖指标的统计计算

1、分娩及产后监护记录

①每天或分阶段在每月底前依据产房分娩记录，将分娩母牛按分娩先后时间顺序逐项填写清楚，以备产后30—35天直检时使用。②产后30—35天按照时间顺序每天或分阶段进行直检，日期内容逐项写清楚。其它一格为填写除卵巢子宫角以外的异常情况

③恶露栏：指产后七天的恶露量明显多余一般的量且气味恶臭，颜色发红，或产后超过七天仍有大量恶露排出。

④产后第一次发情日期，第一次配种日期：如果第一次发情未有配种，只填写发情日期，待下次发情即配种时再填写第一次配种日期。第一次发情即配种的两栏内时填写日期项内，其余的可随配种日记录一块填写，或分段从配种日志上抄写，这样做是为了能够很容易的查看某月产后牛参加配种的情况。

⑤备注栏可填写一切本表格栏目不涉及的其它有关的内容。

⑥再孕否栏指本次分娩后再次配种确妊后在此栏记“+”号，表示重新妊娠，以备可以随时查出半年到一年以上的未孕牛。

2、生殖疾病病历

①记录一切有关生殖疾病的治疗情况。曾经用雌激素催情及清宫的牛可暂不记录，但如末能发情配种或受孕需进一步治疗，在进一步治疗时要将雌激素及清宫等情况补记上。

②当母牛发生生殖疾病，建病历时，首先清楚的填写好牛号，并依据本胎次的产后监护记录逐项填写所需要填写的项目。然后添写所发现的临床症状，处理方法、用药。如有需补记情况，记在此前面。治疗后应注明是否发情配种，如果受孕记“+”符号；如再次治疗接续填写。③备注栏内填写其它有关产科疾病或有可能影响受孕的疾病，如：子宫脱出，酮病等。

④如需续页。要在前一页末写上转下一页，后一页上写上承前一页将两页粘贴一起。每张续页开始都要注明牛号，标明页数，以便查阅，防止错乱。

⑤病历按牛的小大号顺序排列，放到一个或多个档案袋内，以便于填写查看使用。

⑥病历按自然存放保存，跨情况时要在上一注明转下年，下一年病历开始时注明详见上年。

3、出产房子宫注药记录：

主要记清，用药名称、剂量、日期以备日后需上病历时提供材料，同时也是此项工作实施的佐证。此记录应每年分开月月打段，以便于统计总结工作。

4、子宫炎症的治疗简记：

①治疗子宫炎症，填写病历的同时填写此表。此表要写清牛号，简单的依次在治疗栏内，记清治疗日期，以便安排当前的工作。治疗结束，要在结束的日期后记“√”符，表示结束，再次治疗在“√”后继续记录日期，如此连续衔接，此条栏内不够用可粘贴上小纸条解决。

②备注栏内填写一些需要注明的内容如：胎衣不下，子宫脱，清宫等。③此表要每年分开，月月打段以便统计总结工作。

5、性腺激素催情记录：

①此表为那些卵巢没有明显的病变肌注性腺激素就可能发情（三合激素，己烯雌酚等）的母牛而设臵，只记录用药剂量、日期。日期格按治疗日期一次记录，以便安排当前工作，如：发情在下一格记录“发”字；未发情，再次治疗，隔一格继续填写，不见效果，改用内分泌生殖激素治疗，在备注栏内标注。

②备注栏内可填写：病名，性腺激素，流产后、配后末孕不发情等。③此表要每年分开，月月打段，以便统计总结工作。

7、胎衣不下记录： ①按照发生日期顺序逐次填写，以备需进一步治疗时填写病历。②备注栏内填写早产，流产，子宫脱出等内容。③此表每年分开，月月打段，以便统计总结工作。

8、逐月配种计划（成、青）

①此项工作比较简单，但对做好繁殖工作是十分必要的，要每月的前一个月做出。

②成乳牛依据分娩月份向后推两个月（如一月推为三月）为计划配种月，再按照分娩的日期依次列出牛号，在牛号的右上角标明分娩日，配种计划即为做好，以后逐月类推。

③当母牛如期参加配种即在牛号上用红笔圈记“○”符号。未能如期参加配种，用性激素治疗的标“刺”字样，用内分泌激素治疗标“内”字样，以备随时了解计划完成及人工催情情况。

④青年牛配种计划：根据月龄、体重、体高，按照牛号小大顺序做一份计划。亦可将参配月份标记在配种登记青年牛号的右上角处。

9、配种日记录（日志）① 母牛发情输精后当时填写以保障公牛号准确无误。②

一般一次发情输一次精，在输精时间栏内填上早或中、晚，表示早班或中班、晚班输精。亦可填具体的时间，如（9点、21点）。如两次以上输精，依次填写即可。③

发情配种次数栏：如果是成乳牛产后第一次或青年牛初次参配在此栏填写1，第二次填2，如此类推。注意：要在上一次记录“妊否”栏内标“—”表示此牛重新发情配种。如果是第一次要在“配种计划表”上标明该牛已发情配种标记（○）。④

备注栏内首先要简明的填写本次发情的卵巢状况，如是性腺激素发情标“刺”字，内分泌激素发情标“内”。如有粘液异常，清宫，肌注促排也应标明，以便统计分析，总结工作，内容多可粘贴小纸条解决，或多隔一行。⑤

始配天数：凡第一次发情情配种的牛根据分娩日期计算出到第一次发情的天数即是填写在此栏内即可（应在作日报前填写完）青年牛从出生日期计算。⑥ 配准天数：确定妊娠后用同样的方法计算出天数在月报前填写完毕。（计算的截止日是确定妊娠的配种日）⑦

此表按配种划分（即上一年的10月——下一年的9月），月月要分开，以便统计计算总结工作。

10、配种登记： ①

此表按配种计划，以保障与配种记录的协调一致。②

此表应在的8月份前准备就绪，即按牛号、小大顺序一次抄写填完毕，并将8月份分娩的母牛的分娩日期填好备用。往后月份分娩的牛按月陆续填写。成乳牛、青年牛分开，成乳牛在前，青年牛在后。青年牛号下加填出生日以备计算始配天数及配准天数。③

的第一个月（10月份）开始使用，在填写配种日记录的同时，按照牛号，月份，找到所对应的格位“日/牛号”,如此填写，如是肌注性激素加注“刺”；如是肌注内分泌激素治疗加注“内”字样。注意字迹不要过大，以备一个月内有两次发情配种。④

的最初3个月（10、11、12月）以后则很少有，尤其10月份，配种的牛不都是第一次配种，而是有的牛上一已经有过一次或多次配种在填写时应在日期和牛号前加注上、已经配种的次数，并加圈○以示明了。同时要把上分娩日转抄在本分娩日栏内。⑤

凡上配种妊娠，过度到本后尚未分娩的牛，应在本登记表内，上最后配种日栏内登记上最后配种日，并标记上“+”符号，以示妊娠。⑥

年内死亡淘汰等出群牛号要在备注栏内标注明白。其他需要说明内容也可在此栏内明示，已以备统计总结工作。

11、妊娠登记： ①

母牛配种两个月不发情经直检确定妊娠后。首先，应依次在配种日记录孕否栏，分娩及产后监护再孕否栏，配种登记对应月份栏标记“+”符号（最好用红笔）。如果曾经有过生殖疾病治疗史应在生殖疾病病历的治疗后面，写明几次配种及具体妊娠日期。然后依据配种的日期先后在妊娠登记上逐项登记，并推算出预产期，填在预产期栏内。②

两次复检完成时分别填上各次的日期，如查出干胎、无胎等要在备注栏内注明。③

如发生流产或死亡淘汰出群等情况在备栏内说明，并注明日期。④

此表每年分开，月月打段，以备统计总结工作。

12、流产记录 ①

发生流产，首先按照流产牛号在配种登记本上找到妊娠月份，把表的“+”用○圈起表示已经流产，在分娩日栏内写明日期，需要加注“流”字。②

如是早产，在分娩及产后监护记录相应的月份内登记，并注明“早产”。依据早流产月往后推两个月，在配种计划的相应月份补做计划待配。如果是其它类别的流产，哪月流产补在哪月的配种计划上。③

发生的流产在预产表备注栏注明流产日期，并写流产类别。④

发生流产在流产记录表上按项目逐项认真填写。有其它需要说明的情况填在备注栏内。此记录要每年分开，月月打段，以便统计总结工作。

13、空怀天数统计表： ①

母牛确定妊娠后，在月报前，查阅配种日记录，配准天数，把那些超标的牛依次按项目要求登记此表上，并计算出空怀天数，填写在空怀数栏内，并把每头牛的空怀天数相加，计算出总天数，统计出头数，填写在月报对应的格内。②

上的最后一个月（9月）月报时：查出哪些牛到9月30日超过标准天数末孕并计算出天数填入统计表内成乳牛115天青年牛578天即成乳牛6月8日前分娩的牛，青年牛即上年3月2日前出生的牛超多少天，计多少天，填9月报表。这些牛下妊娠从10月1日计算，有一天算一天。③

此表要将成乳牛青年牛流产、正产分开统计。每年分开，月月分段，以便于使用。每年计算出总空怀天数。

14、配种受胎月报：

（一）①

第一次配种天数——成乳牛产后第一次参加配种（包括流产后第一次配种），青年牛初次参加配种（包括流产后第一次配种）的头数，配种日记录发情配种次数栏一次的牛即是。②

上年转下年头数——上一配种参加配种未孕下继续参加配种的牛，亦称复配。此项目统计较麻烦，在配种的第一个月（10月）15日后，填写配种日记录时，注意如果是本月份重复发情配种的牛，在发情配种次数圈上 “○”符号。本月除去有“○”符号及第一次发情配种的牛，其它牛即是上年转下年的牛。其它月主要是11月，12月，其余月则很少了，如是上已经发情配过种（9月前，包括9月份），在发情配种次数上记“△”符号。有“△”符号的牛就是上年转下年的牛。③

实际配头数（实配头数）——第一次配种头数与上年转下年的头数相加。④

配种情期数（配种头次数）——第一次发情配种头数与其它配种次数的总和（每参加配种一次计一头）。注：以上各项在统计月报时，因死亡淘汰等出群的牛未能确定妊娠，最后的一个情期不参加统计，但以往的情期必须统计。⑤

合计——成乳牛+青年牛 ⑥

累计——以往月与本月相加。的第一个月累计与合计相同，最后一个月（9月）累计即全年总计。⑦

一次配种受胎头数——统计第一次配种就受胎的头数。⑧

本报表在月底月初上报，上报的是前两个月的情况，如5月底，6月初报的是3月份的。⑨

总受胎率=妊娠头数/实配头数×100% ⑩

情期受胎率=妊娠头数/配种情期数×100% ⑪

一次配种受胎率=一次配种妊娠头数/一次配种头数×100% ⑫

配后两个月内未能确定妊否出群的牛可不参加统计，配后超过2个月出群的母牛一律参加统计。

15、始配、配准、空怀月报： ①

始配、配准、通过配种日记录统计。②

空怀通过空怀天数统计表获得。③

饲养日向管理生产情况的人查询。④

此表累计与上报时间规则同配种受胎月报

16、生殖疾病与繁殖月报

（三）①

生殖疾病栏内的两空格为其它病准备，用时填明即可。② 预产头数与流产头数从妊娠登记上统计。流产头数，要求是按预产月统计，与表四不同。③

累计——以往月与本月相加，年初第一个月，累计与合计相同，年末累计即全年总和。④

上月底下月初按自然月上报

17、配种及难孕牛月报

（四）①

存栏头数——向管理生产人员查询。②

已妊头数——从妊娠登记表上统计。减去已经分娩、早产、流产和出群的牛。③

流产牛数——按自然月统计。与表三不同。④

未配头数——存栏头数减去已妊头数，再减已配种头数。即截止到上报月配种计划上未配牛的头数。⑤

难孕牛在上报统计时，其最后的配种日未超出时限，可暂不统计，确定未妊再统计。⑥

上月底下月初按自然月上报。

18、年产犊计划与实际产犊情况 ①

前七个月从妊娠登记上逐月统计填写。已出群或流产不统计在内。②

8月、9月两个月按上年11月、12月两个月配种头次数估计。10月、11月、12月预产按1月、2月、3月配种计划头数与以前配种可能返情的头数综合估计。成乳牛一般按50%情期受胎率估计，青年牛按85%估计。

19、胎间距，母牛本次分娩日与上一个分娩间隔的天数，如：本胎1月31日分娩，上胎上年的1月1日，胎间距为395天。两胎次间发生流产造成胎间距的时间延长的天数要计算在内，早产牛按正常犊处理。20、青年牛初产月龄，从出生日统计到初分娩日，中间发生流产耽搁的时间计算在内。早产按正常犊处理。

21、年空怀率=年平均空怀头数/年平均母牛头数×100% 通过始配、配准月报查出年总空怀天数与总饲养日。总空怀天数/365天=年平均空怀头数

总饲养日/365天=年平均头数，再用上述公式计算。注：成乳牛产后超过115天，青年牛出生后超过578天，流产后超过90天开始计算空怀天数。空怀率直接用：总空怀天数/总饲养日，结果更精确。

22、平均始配天数与配准天数，末从始配、配准、空怀月报上统计查出。成年牛，青年牛正产、流产累计天数分别除以各自累计头数。

23、难孕牛比率=（成乳牛半年以上未孕头数+青年牛21个月以上未孕头数）/（成乳牛存栏头数+青年牛20个月以上未孕头数）×100% 此数值通常每月月底统计一次。

24、年流产率=年预产头数/流产头数×100%

年预产头数——按自然月统计（从妊娠登记上统计生殖疾病及繁殖月报的年终累计头数）。

流产头数——按预产月统计的头数（即生殖疾病及繁殖月报的流产头数，年终累计头数。）

25、年繁殖率=年实繁头数/应繁头数×100%

实繁头数年内所有成乳牛、青年牛分娩头数，早产计算在内，即：生殖疾病报表实产头数的年终累计头数。

应繁头数：年初成乳牛头数减去年内不满13个月出群头数加上年内满28个月的青年牛头数。另外如果有不满28个月提前产犊的青年牛还要加上。

动物的繁殖活动 篇6

科学概念：

1、有的动物通过产卵来繁殖后代，有的直接产下小动物；卵生和胎生是动物产生新生命的主要方法。

2、很多动物的繁殖与绿色开花植物的繁殖有共同点，都要受精。

【教学过程】

一、复习回顾：

1、卵是由（）（）（）（）（）等构成的。

2、卵生动物有（）（）（）（）（）（）等。

二、探究过程

1、卵生动物的繁殖活动

（1）自读教材P37，思考：植物繁殖与动物繁殖有什么共同点？

（2）交流、：

植物的花蕊分为雄蕊和雌蕊，雄蕊的花粉传到雌蕊的柱头，并与子房里的胚珠结合，使胚珠受精，便形成了果实和种子。

动物和植物一样，动物也分为雄性和雌性，当雄性动物的精子与雌性动物的卵相结合，使卵受精，新的生命便开始孕育了。

（3）动物的哪些活动是在为繁殖做准备呢？

（筑巢，发情，洄游，交尾，产卵，孵化等。）

(4)你还知道哪些动物是靠产卵繁殖的？

鸟类、鱼类、两栖类、爬行类、节肢类、软体类各举一种。

2、胎生动物的繁殖活动

(1)胎生与胎生动物。

自读教材P38，思考：什么叫胎生动物？你还知道哪些动物是胎生动物？ 像猫、狗、兔等这样繁殖后代的方式叫做胎生。

用胎生繁殖的动物叫胎生动物。

(2)哺乳。

胎生动物一般都用哺乳的方法喂养小动物。

3、总结动物产生新生命的几种方式。

(1)填表(小组活动)。动物名称，繁殖方式。

(2)汇报交流。

（3）了解克隆技术。阅读P39—40资料库。

三、小结

动物的繁殖方式主要有卵生和胎生两种。

卵生动物通过产卵来繁殖后代，胎生动物直接产下小动物。

四、质疑与讨论

（1）教师质疑：卵生动物和胎生动物哪一种后代的成活率高?为什么?

（2）学生思考。

繁殖培养 篇7

1 材料与方法

1.1 外植体选择及准备

1.1.1 外植体。花托、茎尖、花梗。

1.1.2 外植体的处理。选取直径为1 cm左右、花苞片处于紧包状态的花蕾, 用脱脂棉蘸清水将花蕾洗净, 在超净工作台上先用70%酒精消毒45 s, 再用0.1%升汞灭菌10～15 min, 用无菌水冲洗5次, 剥去包片和全部小花, 留下花托并切成2～4块进行接种。

1.2 培养基与培养条件

1.2.1 培养基。所有培养基制备后, 均经121℃、152.0 kPa灭菌20 min后备用。

(1) 芽分化培养基。以花托为外植体, 接种在“池上真一培养基”上 (配方如下:KNO31 900 mg/L、NH4NO31 650 mg/L、KH2PO4170 mg/L、MgSO4·7H2O 370 mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、FeSO4·7H2O 27.8 mg/L、EDTA 37.3 mg/L、MnSO4·7H2O22.3 mg/L, NaH2PO485 mg/L、H3BO36.2 mg/L、KI 0.83 mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25 mg/L、CoCl2·6H2O 0.025 mg/L、ZnSO4·7H2O8.6 mg/L、CuSO4·5H2O 0.025 mg/L、VB130 mg/L、VB61 mg/L、烟酸10 mg/L、硫酸腺嘌呤80 mg/L) , 并附加不同浓度的6-BA和NAA;以茎尖为外植体, 接种在MS培养基, 并附加不同浓度的KT和IAA;以花梗为外植体, 接种在MS培养基, 附加不同浓度的6-BA和IAA。

(2) 继代增殖培养基。已分化出芽的材料切割后, 分别接种在MS并附加不同浓度的KT或6-BA和IAA的培养基上培养。

(3) 生根培养基。继代培养时, 切下高于2 cm的小苗, 剔除基部的愈伤组织, 转入生根培养基进行生根培养, 生根培养基为1/2 MS附加不同浓度的IBA、IAA、NAA。

1.2.2 培养条件。培养温度为25℃、光照强度1 500～2 000lx、光照12 h/d[3]。

2 结果与分析

2.1 非洲菊不定芽的诱导

试验结果表明, 在温度25℃、光照强度1 500～2 000 lx、每天12 h光照的条件下, 外植体在芽分化培养基上培养28d左右, 开始形成愈伤组织, 愈伤组织上开始出现一些小绿点, 随后分化出不定芽, 经过2个月的培养逐渐形成完整的试管苗。其中, “池上真一培养基”+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5mg/L最适合花托外植体不定芽诱导与生长培养;MS+KT 10mg/L+IAA 0.5 mg/L最适合茎尖为外植体的不定芽诱导与生长培养;接种在MS+6-BA 10 mg/L+IAA 0.5 mg/L最适合花梗外植体的不定芽诱导与生长培养。

2.2 非洲菊试管苗的增殖培养

试验结果表明, 在试验范围内, 随着KT和6-BA浓度提高, 非洲菊试管苗的增殖速度相应提高。但在较高的6-BA浓度条件下, 非洲菊的3个芽苗会变细、变弱, 且随着6-BA浓度进一步提高, 芽苗变得丛生、细弱, 有的叶片畸形而产生变异;在继代培养应用激动素KT时, 分化出的苗健壮, 叶态正常。根据这种情况, 生产上在提高芽苗增殖率的同时, 还应保证分生芽苗的健壮。因此, 建议在非洲菊试管苗继代增殖培养时宜采用MS+KT 10 mg/L+IAA 0.5 mg/L培养基, 幼苗可以每月1∶10的倍数增殖。

2.3 非洲菊试管苗的生根培养

非洲菊试管苗大部分品种易诱导生根, 经25～30 d的生根培养, 所有品种的生根率均可达到90%以上, 每苗的平均生根数都在4条以上;生根培养时, 应用IBA 1 mg/L生出的根粗短, 易脱落, 移栽成活率低。应用IAA 1 mg/L生出的根较细小, 移栽易成活, 但开花较迟。应用1/2 MS+NAA 0.03mg/L培养基时, 非洲菊试管苗生出的根长短粗细适中, 植株移栽成活迅速, 成活率高达100%, 移栽3～4个月后即可开花。

3 结论与讨论

(1) 非洲菊的花托、茎尖、花梗为外植体进行组织培养快速繁殖试验, 结果表明:适合花托外值体愈伤组织不定芽诱导的培养基为“池上真一培养基”+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5mg/L, 适合茎尖外植体愈伤组织不定芽诱导的培养基为MS+KT 10 mg/L+IAA 0.5 mg/L, 适合花梗外植体愈伤组织不定芽诱导的培养基为MS+6-BA 10 mg/L+IAA 0.5 mg/L;适合非洲菊试管苗继代增殖的培养基为MS+KT 10 mg/L+IAA 0.5 mg/L;适合非洲菊试管苗生根培养的培养基为1/2 MS+NAA 0.03 mg/L。

(2) 非洲菊的周年繁殖。8月接种—10月中旬芽分化—10月中旬至次年1月中旬试管增殖—2月下旬生根培养—3、4月驯化移栽[4]。

(3) 驯化与移栽。非洲菊最适合大田移栽的时期是每年4 月, 将生长并生根良好的非洲菊试管苗从试管中取出, 洗净小苗基部的培养基, 然后移栽入疏松的土壤中, 浇透水并加盖塑料薄膜小拱棚保湿, 以后逐渐通风使非洲菊试管苗慢慢适应外界环境, 一般15 d后非洲菊试管苗成活并长出新根, 此时可移去塑料膜[5,6]。

摘要：以非洲菊的花托、茎尖、花梗为外植体进行组织培养快速繁殖试验, 结果表明:适合花托外植体愈伤组织不定芽诱导的培养基为“池上真一培养基”+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L, 适合茎尖外植体愈伤组织不定芽诱导的培养基为MS+KT 10 mg/L+IAA 0.5 mg/L, 适合花梗外植体愈伤组织不定芽诱导的培养基为MS+6-BA 10 mg/L+IAA 0.5 mg/L;适合非洲菊试管苗继代增殖的培养基为MS+KT 10 mg/L+IAA0.5 mg/L;适合非洲菊试管苗生根培养的培养基为1/2 MS+NAA 0.03 mg/L。

关键词：非洲菊,组织培养,快速繁殖

参考文献

[1]中国花卉协会.花卉快速繁殖[M].上海:上海科学技术出版社, 1989:75-80.

[2]刘福平, 林丽仙, 邹小鲁, 等.非洲菊组织培养简报[J].亚热带植物通讯, 2000, 2 (2) :13.

[3]黄丽云, 陈雄庭.非洲菊组织培养研究进展[J].福建热作科技, 2006, 2 (2) :15-17.

[4]张平.非洲菊组织培养研究进展[J].宁德师专学报:自然科学版, 2004, 1 (3) :23-26.

[5]杨桂芬, 王毓, 丁红光, 等.非洲菊组织培养与快速繁殖[J].植物生理学通讯, 2000, 36 (4) :333-334.

贡水白柚组织培养快速繁殖技术 篇8

关键词：柚；组织培养；快速繁殖

中图分类号： S666.304+.3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）01-0031-03

收稿日期：2014-04-03

基金项目：湖北省教育厅项目（编号：Q20122902）。

作者简介：石开明（1980—），男，湖北大冶人，博士，讲师，主要从事林学园艺植物遗传育种研究。E-mail：skm331@163.com。

通信作者：方响亮，硕士，实验师，主要从事野生动物植物保护与利用研究。E-mail：94486529@qq.com。柚子是芸香科植物柚的成熟果实，柚果实清香、酸甜、凉润，营养丰富，药用价值很高，是人们喜食的名贵水果之一。柚果实是柑橘类果实中生长周期最长的品种，采摘期避开了柑果上市“洪峰”，加上柚果大而皮厚，非常适合贮藏，生产上辅以适当保鲜条件和贮藏调控库的特殊处理，便可周年供应，风味不减，成为柑果类中的“天然罐头”。

目前，国内柚苗木繁殖技术还相对落后，各种保护技术措施不能得到落实，田间繁殖的柚苗木携带有很多病毒和病原体，在推广过程中容易造成病原传播，往往使得柚株生长不良，树势衰弱，产量减少，品质退化，给柚类生产带来严重影响。植物组织培养技术可以克服传统苗木繁殖方法易带毒的不足，同时能获得基因型统一、表型优良的一致性群体，应用植物组织培养技术对良种柚的苗木进行快速繁殖具有重要的意义。柑橘类组织培养快速繁殖研究，目前以甜橙和宽皮柑橘较多，关于柚的报道较少，一般也都是使用由种子萌发而产生的试管实生苗，并不能解决脱毒问题。在已有的试管苗的组培微繁研究中，涉及到有关不同外植体、上下胚轴、子叶和根尖等不同部位对芽苗分化的影响。目前，我国在研究柚类组培方面的试验材料已有沙田柚、砧板柚、文旦柚、下河蜜柚、酸柚[1-5]等。通过实生繁殖要克服种子发芽的困难，嫁接无性繁殖用工成本高，不能适应良种柚苗木的快速大量推广和应用。通过建立一套高速有效组织培养快速繁殖体系，才能克服上述弊端，从而为柚种质资源的基础研究、生产应用提供一条更好的途径。本研究分别以4个品种柚消毒的种子、营养器官外植体为材料，研究种子组织培养、激素浓度配比以及不同部位对柚组培快速繁殖的交互影响。

1材料与方法

1.1材料

柚组织培养快速繁殖系统的建立以沙田柚、蜜柚、红心柚、玉环柚成熟种子为试材。取成年柚子树上嫩叶、嫩茎尖、带芽茎段为外植体。柚嫁接树外植体组织培养供试品种取材为已挂果的5年生蜜柚、红心柚、沙田柚和玉环柚，取其梢尖、带芽茎段为外植体。沙田柚由湖北民族学院柚子园提供，蜜柚、玉环柚、红心柚由湖北省恩施市巴东县园艺场提供。

1.2培养基

1.2.1种子培养以MS和1/2MS培养基培养各品种柚成熟和未成熟种子。

1.2.2不同激素浓度诱导不定芽以MS培养基为基础，添加不同浓度6-BA和NAA，具体培养基组成见表1。

表1培养基激素浓度

序号激素浓度（mg/L）6-BANAA100.2200.5301.040.50.250.50.560.51.071.00.281.00.591.01.0

1.2.3不同外植体培养柚外植体的培养参见邹金美等的方法[4]，在MS培养基上辅以0.5 mg/L 6-BA，0.2 mg/L NAA。4个品种柚茎尖、茎段各设40个外植体处理，在组织培养条件下进行不定芽诱导。

1.3材料消毒

研究培养条件为白天25 ℃，夜晚18 ℃；光照强度1 000～2 000 lx；光暗周期16 h/8 h；相对湿度80%。琼脂用量为 6.0 g/L，培养基pH值5.8。相关化学试剂的配制：75%的乙醇、0.1%氯化汞、蒸馏水、MS培养基、1/2MS培养基。茎尖消毒：一般先取较大的茎尖，表面消毒后，再在无菌条件下借助解剖显微镜取出所需大小的茎尖培养。茎尖表面消毒：从柚母株上剪下带萌动的饱满芽嫩茎，作为外植体。先用蒸馏水浸泡3 min，再用流水冲洗30 min，用6%NaClO漂洗 10 min，然后转入超净工作台，用等体积75%乙醇浸泡30 s，无菌水冲洗3次后，用0.1%L氯化汞灭菌10 min。剥取生长点，切取茎尖顶端1.5 mm分生组织，转入无菌培养皿内，无菌滤纸吸干水，接种至MS培养基上进行培养。茎尖的剥离：在剥取茎尖时，把茎芽置于解剖镜下，1只手用镊子将其按住，另1只手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，解剖针蘸入90%乙醇并用火焰灼烧进行消毒。用解剖刀片切取分生组织时宜带1～2张幼叶，接种微茎尖时确保不与其他物体接触，只用解剖针接种即可。剥离茎尖时，应尽快接种，防止茎尖变干。茎段消毒：取健壮无病虫的幼嫩茎，去叶片剪成3～4 cm小段。在自来水中冲洗1～3 h，用75%乙醇灭菌30～60 s，再用0.1%氯化汞泡25 min，最后用无菌水冲洗4～5次后接种。取材时优先利用顶部的外植体，其次也可利用腋芽，取茎上部的腋芽培养效果较好。

2结果与分析

2.1不同品种柚种子培养条件对种子萌发的影响

在固体和半固体的MS、1/2MS培养基上接种不同品种柚的成熟与未成熟种子做对比，试验结果见表2。固体1/2MS培养基是常用于种子萌发的培养基。柚子在种子萌发阶段，种子在半固体培养基中比在固体培养基中更容易启动萌发，这可能与半固体培养基有更好的流动性有关，使营养成分能与种子充分的接触，更容易充分吸收营养的MS培养基作为组培常用的培养基，萌发出的无菌苗比l/2MS培养基上萌发的无菌苗更粗壮，这可能与MS培养基含有较高的无机元素有关。发苗的最佳方案是成熟种子在半固体1/2MS培养基上萌发后，转至固体MS培养基上培养。表2不同培养条件对种子萌发的影响

nlc202309012308

试验号培养基培养基状态种子类型品种萌发率（%）生长情况1MS固体成熟沙田柚78.0bc萌发晚，生长良好2MS固体成熟蜜柚67.0c萌发较早，部分黄化3MS固体成熟红心柚86.6ab萌发早，生长良好4MS固体成熟玉环柚72.0a萌发较早，生长较好5MS半固体未成熟沙田柚82.0ab萌发早，生长良好6MS半固体未成熟蜜柚76.0bc萌发早，生长缓慢7MS半固体未成熟红心柚81.3b萌发早，生长较好8MS半固体未成熟玉环柚78.0bc萌发早，生长缓慢91/2MS固体未成熟沙田柚88.0ab萌发较晚，幼苗较瘦弱101/2MS固体未成熟蜜柚96.0a萌发早，幼苗黄化、瘦弱111/2MS固体未成熟红心柚84.3b萌发较晚，幼苗较瘦弱121/2MS固体未成熟玉环柚85.2b萌发较晚，幼苗瘦弱131/2MS半固体成熟沙田柚89.0ab萌发较早，幼苗瘦弱141/2MS半固体成熟蜜柚90.0a萌发较晚，幼苗瘦弱151/2MS半固体成熟红心柚92.4a萌发较早，幼苗瘦弱161/2MS半固体成熟玉环柚91.4a萌发较晚，幼苗瘦弱注：同列数据后不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。表3、表4同。

2.2不同激素组合对诱导不定芽的影响

不同激素浓度组合对幼嫩茎段诱导不定芽的影响见表3。当培养基中6-BA和NAA的浓度搭配处于较低范围时，对外植体的出芽诱导影响不明显；随着激素浓度提高，外植体的诱导成活率却有一定程度降低，激素浓度为最大组合 1.0 mg/L 6-BA、1.0 mg/L NAA时，外植体的芽诱导率为275%～30.0%。结果表明，在未添加激素的基本MS培养基中，出芽诱导率很低，为3.1%～4.8%，观察到出芽的基本是由腋芽分化形成，未有通过不定芽诱导出芽的；在低浓度范围内，随着6-BA浓度的上升，出芽率也随之提高，当6-BA增加到0.5 mg/L、NAA浓度为0.2 mg/L时，诱导出芽率达到90%以上，当增加至10 mg/L时，出芽率下降至30%左右；单独分析NAA的影响可知，当添加1种激素NAA时，40个外植体最多诱导产生42个不定芽，诱导分化率很低，只有搭配合适的6-BA和NAA配比才能有效促进不定芽的诱导和分化。结果表明，在基本培养基上添加2种激素的最佳组配浓度为0.5 mg/L 6-BA、0.2 mg/L NAA时，诱导效果与其他处理间差异明显。表3不同激素组合对幼嫩茎段诱导不定芽的影响

激素（mg/L）6-BANAA蜜柚沙田柚红心柚玉环柚出芽率（%）总芽数（个）出芽率（%）总芽数（个）出芽率（%）总芽数（个）出芽率（%）总芽数（个）00.24.1d24.8d13.5d03.1d100.537.5bc3931.5bc2228.1bc3035.5bc3001.047.5b3847.5b3436.5b4255.5b380.50.290.0a9892.5a12292.0a11191.0a1100.50.587.5a10977.5a12775.5a12976.0a740.51.042.5b6555.0b7557.0b7350.0b721.00.237.5bc4142.5bc4340.5bc4439.5bc421.00.530.0bc3435.0bc3333.5bc3534.0bc331.01.027.5bc2830.0bc3128.5bc3029.5bc32

2.3不同外植體的培养对不定芽发生的影响

通过对4个品种柚茎尖和茎段的外植体进行培养，研究对不定芽产生的影响，试验结果见表4。通过前部分建立的柚最优体系培养的研究结果看出，各种类柚均能有效诱导出芽，出芽率均在80%以上，诱导形成的芽丛生且生长势强；不同外植体不同取材部位对诱导出芽率有较大影响，茎段最高的达950%，高于茎尖最高的87.5%，一般情况下，茎段可诱导形成3～4个丛生不定芽，茎尖则只有2～3个，有明显的差距。

表4不同外植体对不定芽发生的影响

品种外植体

部位外植体

数量（个）形成芽出芽外植

体数（个）不定芽诱

导率（%）芽生长

情况出芽所需

时间（d）沙田柚茎段403895.0a丛生20蜜柚茎段403485.0b丛生24红心柚茎段403690.0a丛生23玉环柚茎段403485.0b丛生22沙田柚茎尖403587.5ab丛生15蜜柚茎尖403280.0c丛生17红心柚茎尖403485.0b丛生18玉环柚茎尖403382.5bc丛生16

3结论与讨论

本研究通过对柚种子萌发条件、培养基激素组合以及不同外植体诱导的对比，研究贡水白柚组织培养各环节的主要影响调控因子，以期建立有效贡水白柚组织培养快速繁殖体系。结果表明，柚种子发苗的最佳方案是成熟种子在半固体1/2MS培养基上萌发后，再转至固体MS培养基上培养为宜；在激素配比中，最适合贡水白柚幼嫩茎段的6-BA浓度为0.5 mg/L，NAA浓度以0.2 mg/L为佳；不同外植体培养诱导率表明，春梢嫩茎段组织培养时出芽率高，生长迅速，可能与春梢外植体内含大量促进细胞生长分裂的激素和其他某些促进生长的调节物质有关。

相同品种不同取材部位外植体的再生能力不同，各品种柚茎段直接出芽能力均高于茎尖。相关研究表明，最初来自根段的茎尖外植体发生侧枝的数量和发生根的数量、长度、干质量及鲜质量都高于来自茎段的茎外植体和侧芽外植体[6-7]。本试验对柚茎段、茎尖外植体直接出芽能力作了分析，结果表明，2份品种均以茎段直接出芽能力最高，有利于快速繁殖和培养，从远离基部的表面诱导出芽苗的数目较多。

在离体繁殖时，多年生木本植物选择外植体的取材时期非常重要。耿文娟等研究表明，野生欧洲李组织培养时以5～6月的半年生枝梢为材料效果最好[8]。本研究中进行组织培养的柚外植体主要取自发育成熟的春梢和部分早秋梢，时间因物候期稍有差异，本试验结果基本与前人研究结果一致。可能与新梢自身的发育状况有关，也可能与新梢发育过程中随季节变化体内内源激素种类、含量的变化有关。

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[6]张海平，周建峰，任目瑾. ‘海沃德’猕猴桃组织培养快速繁育技术研究[J]. 陕西林业科技，2011（2）：8-11.

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[8]耿文娟，吴玉霞，袁海英，等. 野生欧洲李组织培养技术[J]. 经济林研究，2009，27（1）：45-48.郑鹏，郑晓萌，于磊，等. 牛DAZL基因序列分析、克隆及表达载体构建[J]. 江苏农业科学，2015，43（1）：34-36.