elisa步骤及注意事项

elisa步骤及注意事项（共12篇）

elisa步骤及注意事项 篇1

教学视频：http://v.youku.com/v_show/id_XMjI1MjUwNTk2.html

方法一：用于检测未知抗原的双抗体夹心法：

1.包被：用0.05M PH9，碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。

2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。

3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml，37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB(四甲基联苯胺)底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

方法二：用于检测未知抗体的间接法：

用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30～60分钟，洗涤，最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

酶联免疫分析技术(ELISA)

一、酶联免疫分析的基本原理和方法类型

1971年瑞典学者Engva11, 荷兰学者Van Weerman等分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，称为酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)。其基本原理与RIA相同。先将已知的抗体或抗原结合在某种固相裁体上，并保持其免疫活性。测定时，将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离成分。然后加入酶的作用底物催化显色，进行定性或定量测定。

ELISA可用于测定抗体，也可用于检测抗原。根据检测目的和操作步骤不向，有以下三种类型的常用方法。

1.间接法

此法是测定抗体最常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体，加入待检标本(含相应抗体)与之结合。洗涤后，加入酶标抗球蛋白抗体(酶标抗抗体)和底物进行测定。见下图：

操作步骤：

①用已知抗原包被固相载体； ②加待检标本，经过温育(37℃2h)，使相应抗体与固相抗原结合。洗涤，除去无关的物质；

③加酶标抗抗体．再次温育(37℃2h)与固相载体上抗原抗体复合物结合；洗涤，除去未结合的酶标抗抗体；

④加底物显色。终止反应后，目测定性．或用酶标仪测光密度值定量测定。

2． 双抗体夹心法

此法常用于测定抗原。将已知抗体吸附于固相载体．加入待检标本(含相应抗原)与之结合。温育后洗涤，加入酶标抗体和底物进行测定。见下图：

操作步骤： ① 用已知特异性抗体包被固相载体； ② 加待检标本，经过温育使相应抗原与固相抗体结合；洗涤，除去无关的物质； ③ 加酶标特异性抗体，与已结合在固相抗体上的抗原反应；洗涤，除去未结合的酶标抗体； ④ 加底物显色。终止反应后，目测定性或用酶标仪测量光密度值进行定量测定。

此法适用于多价大分子抗原的检测，而不能用于测定半抗原等小分子物质。

3． 竟争法

此法可用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。

以测定抗原为例．将持异性抗体吸附于固相载体；加入待测抗原和一定量的酶标已知抗原，使二者竞争与固相抗体结合；经过洗涤分离，最后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。见下图：

操作步骤：

① 用已知特异性抗体包被固相载体； ② 测定管加待测抗原和一定量的酶标抗原，经过温育，使二者与固相抗体竞争结合；对照管只加一定量酶标抗原．与固相抗体直接结合。分别洗涤，除去未结合的成分； ③ 加底物显色。

对照管由于只加酶标抗原，与固相抗体充分结合，故分解底物显色深；测定管的显色程度则随待测抗原和酶标抗原与固相抗体竞争结合的结果而异。如待测抗原量多，竞争性地抑制酶标抗原与固相抗体结合，使固相上结合的酶标抗原量减少。因此，加入底物显色反应较弱。分别测定两管的光密度(OD)值，根据对照管与测定管OD值之比．计算标本中待测抗原含量。

二、ELlSA方法的技术要点

1． 固相载体和免疫吸附剂的制备

ELISA法最常用的固相载体是聚苯乙烯，其对蛋白质有较强的物理吸附性能，不影响抗体和抗原的免疫活性；且价格低廉，并可制成各种形状的制品。

与固相载体结合的抗原或抗体称为免疫吸附剂。将抗原或抗体固相化的过程称为包被(coating)，由于载体不同，包被的方法也不同。使用聚苯乙烯制品为载体一般多采用物理吸附法。除载体的理化性质外，受缓冲液的离子强度、pH值、包被时的温度和时间等多种因素的影响。

很多蛋白质、细菌脂多糖、脂蛋白、糖脂及变性的DNA等均易吸附在聚苯乙烯表面。用于包被的蛋白质浓度一般为1-10μg／m1，每个凹孔内加100—200μl。包被液的蛋白量过大，可能会造成蛋白质分子的多层化．在洗涤时一部分蛋白分子容易被洗掉。包被用抗原或抗体的最适工作浓度，最好是预先经过选择。

用抗原或抗体包被后。固相载体表面往往尚残留少量未饱和的吸附位点。其后加入的血清标本和酶结合物中的蛋白质也会部分地被非特异吸附，导致本底偏高。为此．常用1％—5％BSA，或含5％—20％小牛血清的pH9.6碳酸盐缓冲液注满凹孔，37℃作用1h，可以消除此种干扰。这一过程称为封闭(blocking)。2． 抗原和抗体

如同免疫荧光技术和放射免疫测定一样，用于制备酶标记物和包被固相载体的抗原要求纯度高，抗原性完整；抗体需特异、效价高、亲和力强，并具有较高的比活性。如将抗体IgG用木瓜蛋白酶水解为Fab片段，再与酶连接，可以减少非特异性吸附，检测效果更佳。McAb的应用，进一步提高ELISA法的特异性和灵敏度。使用针对抗原分子中不同决定簇的两种McAb分别作为固相抗体和酶标抗体用于双位点夹心法，测定时可以将待检标本和酶标抗体同时加入，简化了操作程序。通常采用特异性较高的McAb作为固相包被抗体，与酶标记的多克隆抗体相结合进行检测，结果更为满意。

3、常用的酶及其底物

elisa步骤及注意事项 篇2

1. 暖气片安装的步骤。

暖气片又称采暖散热器, 是冬季采暖的最佳方式之一。由于采暖系统的水压一般都在0.4MPa以上, 如果安装不好, 一旦漏水将造成严重损失。因此, 暖气片的安装与暖气片的质量一样十分重要。从安装美观、确保安全方面考虑, 暖气片的安装应按照以下步骤进行。

(1) 与暖气片销售商的技术人员一起进行实地测量, 确定暖气片的型号、片数、进出水方式和具体的安装位置。技术人员应根据实际情况与销售商签订暖气片购销合同。

(2) 与暖气片施工单位签订施工协议, 以确保施工质量, 明确施工责任。一般施工单位要在施工协议上注明暖气系统的施工至少要质保一个采暖季。

(3) 暖气片安装的一期工程施工。暖气片的具体安装分为两个步骤。一期工程和二期工程。一期工程包括暖气设备的定位、开槽、布管 (或改管道) 、管道连接 (焊管) 、集分水器的安装、打压测试等;二期工程包括暖气片的安装 (暖气片的固定悬挂、阀门与暖气片和供暖管的连接) 、整个系统加压检测和暖气片的调试等。同时也应该注意到, 暖气一期工程施工是在墙壁改造后, 水电施工前或施工后并且必须在其他装修工序施工前进行。暖气一期工程没有施工完并经业主验收签字通过前, 其他装修工序绝不允许施工。

(4) 暖气片安装的二期工程施工。在墙壁已粉刷完毕或贴好墙纸后, 开始进行暖气片安装的二期工程施工。暖气片安装完毕并经打压检测合格后, 才可以进行木地板的安装。需要特别强调的是, 不能将暖气片安装的两个步骤合并为一个步骤, 即在装修前, 将管道连接好, 并将暖气片也一起安装上。这样安装好的暖气片在整个装修的过程中不仅容易被损坏, 沾染灰尘, 而且在粉刷墙壁或贴墙纸时还必须拆下来, 墙壁粉刷好或墙纸贴好后再重新装上, 在这个拆和装的过程中, 暖气片很容易被划伤和碰坏。这种做法实际是一种不规范和不负责的行为。

2. 支管和立管的安装。

(1) 立管安装。一是布置系统立管时, 应与建筑物的使用要求、供暖系统图式、散热器的布置情况等配合。要力求节省管材以便于安装和检修。立管一般是明装。立管明装时, 应尽量布置在外墙墙角及窗间墙处。双管系统的供水立管要布置在面向的右侧;回水立管布置在面向的左侧, 两根立管中心间距为80mm。二是暖气立管与干管连接时, 如立管直线长度小于15m, 立管与干管可用两个弯头连接;大于15m时, 立管与干管用3个90°弯头连接, 横节长度应为300mm, 且有1%坡度, 不应使用外丝加弯头来代替管段横节, 以保证立管胀缩得以补偿。三是住宅工程单顺序式热水供暖系统无闭合管的立管阀门可不装活接头, 有闭合管的立管阀门应设活接头, 但闭合管可不加活接头。四是闭合管的准确尺寸要按散热器进水与出水的中心间距, 加上散热器上、下支管的坡降值, 就是闭合管计算。五是供暖立管必须经过调直后才能安装。调直时应用气焊局部加温的方法进行。六是立管安装前, 应先将散热器就位, 找好平直度后, 才能安装立管。七是双立管上的半圆弯应准确、平正, 支管在半圆弯的中间, 不能错上或错下。

(2) 支管安装。一是支管的灯叉弯的椭圆率应符要求。管径不小于100mm, 允许偏差10%;管径大于100mm, 允许偏差8/100。二是暗装或半暗装的散热器支管灯叉弯必须与散热器槽墙角相适应, 达到美观。三是连接散热器的支管应有坡度。当支管全长小于或等于500mm时, 坡降值为5mm;大于500mm时应为10mm。上供下回的供水支管坡向散热器, 回水支管坡向立管。下供下回双管式在顶层供水立管上没有排气装置, 供、回水支管坡向立管, 其他层供水支管坡向散热器, 回水支管坡向立管。四是散热器支管长度大于1.5m, 应在中间安装管卡或托钩。五是散热器支管过墙时, 除应该加设套管外, 还应注意支管不准在墙内有接头。支管上安装阀门时, 在靠近散热器一侧应该与可拆卸件连接。散热器支管安装, 应在散热器与立管安装完毕之后进行, 也可与立管同时进行安装。安装时一定要把钢管调整合适后再进行碰头, 以免弄歪支、立管。

二、暖气安装过程中应注意的事项

1. 尽量不在暖气外加罩。

(1) 暖气被外罩包住后, 减小了空气的对流度, 影响了散热效果, 温度最多能降低30%左右, 就会使房间温度达不到设计值。

(2) 容易形成罩外美观, 罩内脏的情况。多年的灰尘积在罩内, 滋生细菌害虫容易形成卫生死角。

(3) 再好的暖气罩, 经过不断地热胀冷缩, 时间一长也容易变形, 反而不美观。

(4) 一旦暖气或系统出现问题, 检修时也很不便。

2. 重视铸铁散热器适用性。

传统的铸铁散热器给人们的印象是傻、大、笨、粗。因此, 许多房主往往将交房时安装的铸铁散热器更换成钢制、铝制或铜铝复合的散热器。然而, 当前的供暖水质和运行管理远远达不到新型散热器的使用要求, 比如, 集中供暖的小区大多是开式系统, 而供热操作并不规范, 往往很难达到新型散热器满水保养和补水除氧的要求, 很容易造成新型散热器的腐蚀, 三四年后就会发生漏水现象。相比之下, 铸铁散热器适用于当前任何水质及采暖系统。所以, 消费者不要过于追求时髦。

3. 慎买造型艺术的暖气。

现在市场上的暖气造型多样, 颇具艺术性。肖曰嵘教授认为, 这些新型散热器的管壁厚度往往在1.5mm以下, 口径小, 更换后容易造成过水量小, 散热率低, 易形成气塞, 暖气也不热了。而这些艺术暖气多为焊接产品, 薄壁焊接部位最易成为被腐蚀的漏水点。

T梁预制场设计步骤及注意事项 篇3

摘要：某工程2号预制场预制任务从K124+703新场互通主线桥至K126+760上坝中桥段桥梁20m箱梁、30m、40m预应力简支T梁预制工作。本人主要阐述了T梁预制场设计步骤及注意事项。

关键词：T梁；预制场；设计步骤

1 预制场整体设计

路基开挖→地基碾压夯实→软弱地基换填砂砾石→场地平整碾压→测量放样→防排水施工及场地硬化→梁底座施工→行走系统施工→拼装龙门架→检查验收→试吊。

2 预制场地的布置

2号预制场利用新场互通与李子园之间路基作为T梁预制场地，起止桩号：K125+080--K125+300，长220米，路基宽24.5米。整个场地分为预制梁区、钢筋和钢绞线制作区、生活区三大部分。

预制梁区设置在K125+080--K125+300路基上，利用运梁炮车纵移，架桥机安装。预制场预设16个台座，其中20米箱梁台座8个；30米T梁台座6个；40米T梁台座2个。考虑到2号预制场预制生产的20米箱梁多于40米T梁，在40米T梁预制完成后，稍作修改底座仍可用于20米箱梁预制。同进考虑30mT梁是全线的绝大多数，当20m箱梁、40mT梁梁预制完成后，所有底座全部改成30mT梁底座，进行30mT梁预制工作，以减轻其它预制场的工作压力。

吊装系统分为主吊和辅吊两大系统，主吊用于T梁的吊移和提升，辅吊用于T梁模板安拆、混凝土浇筑、张拉设备运输及其他。T梁混凝土在龙桥大型拌合站集中拌合后再由砼灌车动输到预制场。

3 底座施工

路基土石方开挖及回填至路面高程下30cm，压路机反复碾压平整夯实达到要求后，测量放样出预制区范围及底胎，然后对各个预制台座的的基础开挖宽1.5米，深0.4米的坑槽，在台座两端T梁支点处开挖宽3.0米，深度0.8米。开挖后底胎基础清除虚土后再进行人工夯实。先浇筑底胎下基层C20片石混凝土，表面拉毛，台座下基层浇筑完成后，进行台座的制作，台座用C40砼浇筑。上基层混凝土完成后进行场地硬化，场地硬化砼采用C20砼，每台座之间纵、横设置2%双向横坡，便于排水。上基层在梁端三米范围内设置一层防裂钢筋网，整个底胎范围内预插锚筋以便和底胎连接为整体。

底胎施工注意事项：

① 放样、开挖基础，检查地基持力层符合要求后，安模设置足够支撑浇筑基础混凝土，埋预埋钢筋。

②底胎的边线误差不得超过±1mm，高程误差不得超过±1mm。每个底胎尺寸为T梁底板设计尺寸-5mm，误差控制在1mm以内，两边预埋[50槽钢，T梁砼浇筑时槽内埋φ35胶管，防止漏浆。

③底胎采用C40小石子混凝土掺适量磨石浇筑，混凝土强度达到100%时用磨光机抛光，平整度≤1mm，以保证梁板底面的平整光洁。经监理工程师检查验收后涂抹模板漆，以防止槽钢生锈。

④在底胎基础两端部3m范围内设置防裂钢筋网，钢筋直径φ10，底胎厚35cm。

⑤在浇筑底胎时注意预埋Φ50PVC管，按T梁模板拉杆间距尺寸定位，并支撑牢固防止砼浇筑时偏位。便于安装T梁模板时穿拉杆。

4 龙门吊及轨道施工

主、辅龙门吊均采用门跨式。主龙门架为厂家定制120T专用龙门架（见示图）。平车、起吊与龙门架配套。

120t主龙门架辅桁架采用上弦二根I20b工字钢，下弦每边用2[14b，组合成三角桁架。立柱为I25b工字钢、斜拉杆2∠75×8mm角钢组合成支撑系统（见下图）。支撑工字钢与斜撑角钢采用焊接，焊缝均按二级焊缝要求施焊。行走小车采用厂家定制，设计承重为80t。轨道基础采用开挖扩大基础并浇筑C20片石混凝土。

龙门吊轨道施工注意事项：

（1）整平龙门吊基础3m范围内地面，碾压密实。放样、开挖轨道基础，检查地基持力层和几何尺寸，符合要求后浇筑50cm厚的片石混凝土（不符时要求换填）。

（2）钢筋制作与安装必须按施工技术规范进行，预埋轨道螺栓时严格控制螺栓间距与线形，保证轨道的安装不超出误差范围。立模浇筑轨道基础混凝土，，并严格控制砼顶面，其纵向高差不超过+5mm，左右两轨道高差不超过5mm，且轨道纵向偏移不大于3mm。

（3）安放钢轨，并调平调直，固定牢固。

（4）钢筋加工、砼拌合场地、生活设施临建施工

K125+080--K125+300路线右侧作为钢筋制作、临时设施场地。

科目三上车准备步骤及注意事项 篇4

1、检查车辆。学员从右边下车，转到车后，检查车身情况，再逆时针方向转到车正前方，面向车头3-5秒拍照，之后到驾驶室前，立正向考官报告：“报告考官，车辆检查完毕，一切正常，请求上车”。待考官同意上车后，学员方可上车。

2、上车。左手拉开车门，右手放方向盘十二点处，右脚先跨入车内。坐稳关好车门后开始调整座椅前后和靠背，观察各仪表盘，重点检查车辆是否处于待速状态(若转速表盘处于800转左右，说明车辆待速正常，若处于“0”刻度处，说明车辆处于熄火状态，需要打着车辆)。一切检查完毕后，系好安全带。观察后视镜，确认车外安全后，向考官报告：“报告考官，仪表工作正常，请求起步。”等考官同意起步后，学员方可起步。

助学金的申请步骤及注意事项 篇5

这是专门为贫困生准备的，大家尽力争取，我们不能选择出生，但是可以选择改变和前进的方向，从申请助学金开始吧。

1、填写家庭调查表。一般录取通知书中会有，如果没有，可以电话咨询一下学校，填好后，在所在地乡镇或者街道民政部门加盖公章。

2、加盖公章的时候，同时要手写一份贫困证明，也要加盖公章，建议自己先写好，格式也很简单的，标题，家庭状况概述。

3、建议将加盖公章后的家庭调查表和贫困证明留一份备份，可以照相或者复印，以便以后有不时之需。

4、回校后将这些交给学校，一般是先交给班长，后续如果还要填写什么表格，班上会通知，而且不用加盖公章了，所以调查表和贫困证明一定要在返校前整理好。

5、步骤其实很简单，加盖公章的时候注意相关部门的上班时间，这样可以避免来回跑。

elisa步骤及注意事项 篇6

交通事故伤残鉴定的申请步骤及注意事项

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交通事故伤残指因道路交通事故损伤所致的人体残疾。包括：精神的、生理功能的和解剖结构的异常及其导致的生活、工作和社会活动能力不同程度丧失。根据道路交通事故受伤人员的伤残状况，将受伤人员伤残程度划分为10级，从第I级(100%)到第X级(10%)，每级相差10%。

一 办理交通事故人身伤残评定的程序一般如下：

1、被评定人应携带加盖办案单位公章和办案人签字的伤残评定申请书;

2、携带县级以上医院的诊断证明，检查结果以及损伤初期和治疗终结后的CT、X片及诊断报告;

3、从治疗医院借阅有关手术病历和检查记录;

4、对被抚养人的劳动能力进行评定时，还应携带评定人的身份证及户籍证明和有关政府部门的说明;

5、评定时应以事故直接所致的损伤或确定的并发症治疗终结为准，对治疗尚未终结，因调解需要提供赔偿依据的，在申请书中说明;

6、评定者需要亲自接受检查并缴纳规定的评定费用。公安部《交通事故处理程序规定》第四十条第二款：当事人因交通事故致残的，在治疗终结后，应当由具有资格的伤残鉴定机构评定伤残等级。具有资格的检验、鉴定、评估机构应当向省级人民政府公安交通管理部门备案，公安交通管理部门可以向当事人介绍符合条件的检验、鉴定、评估机构由当事人自行选择。由此看出伤残鉴定的时间是在治疗终结，应有出院诊断证明。应向公安交通管理部门提出申请，由公安部门推荐鉴定机构由当事人自行选择。

二 律师提醒

伤残评定是公安交通管理部门依法指派或聘请的具有专门知识、承担道路交通事故受伤人员伤残评定的人员在客观检验的基础上，评价确定道路交通事故受伤人员伤残等级的过程。

交通事故的当事人因交通事故受伤致残并需要进行伤残评的，必须在治疗终结后15日内即应以事故直接所致的损伤或确因损伤所致的并发症治疗终结后15日内，由受伤的当事人先向公安机关申请伤残评定，公安机关才可以进行评定，如受伤的当事人不提出申请的，则视为一般受伤。伤者必须在治疗终结后的15日内申请伤残鉴定。如果伤者15天内不提出伤残评定申请的，视为自动放弃得到残疾者生活补助费和残疾用具费的权利。超过申请期限提出的申请是无效申请，即医疗终结后15日以后的申请为无效申请，公安交通管理机关不再受理。申请应当向处理交通事故的公安机关以书面形式提出，公安机关在接到伤残评定申请书后30日内作出伤残评定，并制作伤残评定书送达当事人，或者向当事人推荐鉴定机构由当事人自行选择。

公安机关评定伤残等级的依据：一是医院证明，二是公安部关于道路交通事故伤残评定的标准。根据道路交通事故受伤人员的伤残状况，将受伤人员伤残程度划分为10级。受伤人员符合两处以上伤残等级者，应以伤残程度重的等级作为最终评定结论，但须分别写明各处的伤残等级。

当事人对伤残评定不服的，可以在接到评定书后15日内，以书面形式向上一级公安机关申请重新评定。这里的“当事人”仅指交通事故中因伤致残的当事人，不包括未受伤的另一方当事人。上一级公安机关在接到重新评定申请书后30日内，应当作出重新评定的决定，并将重新评定的结论以书面形式通知申请人。根据规定，上一级公安机关作出的重新评定的交通事故法律咨询----惠州交通事故赔偿网http:///huizhou/

结论是最终的决定。

三 法律依据

1、公安部程序规定：第四十条对精神病的医学鉴定，应当由省级人民政府指定的医院进行。当事人因交通事故致残的，在治疗终结后，应当由具有资格的伤残鉴定机构评定伤残等级。

elisa步骤及注意事项 篇7

通过一年来HC、PRSS-ELISA实验的检测工作, 本人摸索出一些做好HC、PRSS-ELISA实验的技巧和注意事项, 现总结如下:

1 所有的试剂包括反应板应在2~8℃储存。

使用前平衡到18~25℃ (控制温度) , 建议回温时是为2h以上, 使用后放回2~8℃储存;当冬天或室温较低时, 强烈建议在25℃恒温箱进行试剂盒的回温, 并且用到哪个试剂方取出 (提供2014年11月间PRSS-ELISA实验终止液回温不彻底和回温彻底时的反应板对照图示) 。

2 根据检测样本数量, 估算洗板所需要的洗液的体积, 稍超量配制。

配制时要注意浓度 (HC和PRSS都是10倍稀释) , 使用去离子水或蒸馏水配制。

3 因试剂盒是成批次生产, 组分已优化, 一次实验一定使用同一批号的试剂, 严禁不同批号的试剂混用, 更不能用过期的试剂盒, 未用完的反应板应保存在含有干燥剂的密封袋中;使用、处理每一试剂时, 严防试剂污染。

4 注意生物安全防护:实验时戴手套, 穿防护服, 口罩, 防止非实验液体溅入实验体系。

5 冷冻样品使用前及样品稀释后都应混匀, 检测样品要根据检测目的做合理稀释, 比如检猪瘟病毒抗体是1:2;检猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体则是1:40倍稀释。

6 避免底物TMB照到强光, 或接触到氧化剂, 可使用棕色瓶或用黑纸 (布) 包裹试剂瓶, 盛装TMB溶液的容器必须用干净器皿。

7 严格实验操作程序, 仔细加样, 洗液、计时、充分洗涤, 适度拍板, 及时读板。

8 如无650nm滤光片, 可使用630或620nm, 应适当提高实验室温度, 最高上限25℃。

9 保证酶标抗体不失活, 要避免将余下的酶标抗体返回酶标抗体瓶中, 禁止用吸头或移液器直接在瓶中吸取酶标抗体;避免酶标体结冰, 禁止其它成分混入酶标抗体瓶中。

1 0 必须关注试验有效的成立条件, 如果试验无效, 必须重复试验。

体育“课前说课”的步骤与注意点 篇8

关键词：体育教学；课前说课；步骤；注意点

一、课前说课与备课、上课的关系

说课是一种特殊的教研形式，虽然没有师生之间的互动和交流，但是通过说的形式，可以让听者明确说者的教学技巧和教学特色，是教师之间互相研讨和教学探究活动的重要手段，可以上课之前说，也可以上课之后说。体育教学区别于其他学科，有其不同的授课环境和身体特点。课前说课需要大量的准备工作，与备课活动相仿，包括对教材的选择、教学方法的运用、教学手段的合理性、学生的基本情况及基础特点、教学效果评估等等。因此，备课是课前说课和上课活动的前提，在教学研究活动过程中，教师说课是向他人表明个人的观点，體现自己的教学思想和风格，所以说课前说课也是正式上课之前的预演。

二、课前说课的步骤与注意点（以高三篮球“突破分球”教学为例）

首先要明确描述本次课的教学内容、学段、水平段及课程性质。

1.说“教材”

注意点：简明扼要地向他人介绍本次课教材，包括学段、内容、课的形式、教材所处地位、教材选择的依据等，要有明显的概括性，但不能笼统、含糊不清。

2.说“教学目标”

注意点：需要贯彻“三维健康观”和“目标引领教学”的理念，包括认知目标、技能目标和情感目标三个方面。由于教学目标是对本次课教学效果的预判，也是评价教学效果的一个依据，因此，在预设教学目标时要体现可操控性、可量化性、可达成性，同时也为以下说课中的课堂教学行为埋下伏笔。

3.说“重点和难点”

本节课的教学重点是：合理地把握突破之后分球的时机。其依据是让学生明白突破防守之后，是不是每一个球都需要“分”？为什么要“分”？怎么“分”？教学难点是：正确判断同伴的位置，将球准确地传给同伴。其依据是在篮球实战时，突破防守之后，同伴不能站在原地“等球”，需要通过移动，寻找“空位”和进攻时机。

注意点：教学重点和难点是根据教学目标制订的，因为课堂教与学的行为都是围绕如何解决重点、突破难点而展开的。“重点”是在课堂上需要着重且重复练习的内容，而“难点”是学生在学习过程中理解困难、容易出错的环节。要想准确地把握重难点，就必须对教材、课程以及学生情况加以全面了解。可以这样说，不同的观察角度就会有不同的重难点。

4.说“学生情况”

注意点：学生是教学的主体，教学的目的也是为了学生得到良性、持续发展。介绍学情时需要重点描述学生的身心特点、技能水平和参与现状，明确“为什么教”。

5.说“教法、学法”

（1）为了优化课堂教学效果，遵循教学规律，本节课采用分组合作学习的形式，运用示范、讲解、直观演示、游戏、模拟实战等教学方法。其中采用小黑板作为战术演示板，让学生观摩战术示意图，学会布置单的战术配合、模拟NBA最后10秒钟的进攻战术配合演练等是本节课的亮点。

（2）为了遵循学生的认知规律，有效解决重难点。本节课采取模仿、尝试、创新等方法，在学生练习过程中运用比较法、竞赛法。

注意点：“教学有法、教无定法”。教法和学法的运用是否合理是解决教学重难点的关键，在说课时要精炼地描述，教师要能够结合自身的特长，抓住学生的特点，尤其要明确表述本节课的亮点部分，这样就可以让听课的人有所侧重。

6.说“教学流程”

注意点：“说教学流程”是一个重要环节。通过对教学流程的阐述，听者对这堂课能形成一个比较清晰的轮廓。针对事先制定的教学重难点，要说出在教学中采用什么方法一一解决，采用什么手段使教学目标有效达成。在这个环节中，要抓住重点部分清晰表述，教学亮点的设计意图，哪些手段可以解决问题等等，不能像“报流水账”一样。在说的同时可以适当加入一些示范和重点讲解，例如，技术动作、场地的分布、分组的安排等，提高说课的观赏程度。

7.说“场地与器材”

8.说“教学效果预计”

预计本次课学生的练习密度、运动负荷、平均心率。

注意点：课前说课由于没有经过实际操作，对教学效果的预测不能“假大空”。

三、建议与提高

（1）本篇文章采用的例子是课前说课，包含对教材的理解，对教法、学法的探究创新，对教学效果的预设等等，是对已有教学设计的再次分析和提高。

（2）“说课”最好是以脱稿的形式展示，在说课时要具备良好的自信心理。可以利用计算机、多媒体等手段辅助，并在适当的时候运用示范、讲解等演示教学，但不能照本宣科，盯着屏幕“读”是万万不可取的。

（3）“课前说课”要想吸引他人眼球，在表述过程中就需要有层次、有梯度、有重点。要抓住几个关键点：重难点是什么？采用哪些辅助方法去解决？运用方法和手段预期会有什么效果？说课本人认为“课的亮点”是什么？

（4）教学活动的目的是让学生从模糊向清晰状态逐渐过渡的认知过程，如果在说课时泛泛而谈，结果只会让听者“一头雾水”，越听越模糊。

参考文献：

刘庆添.如何上好中学体育课[J].剑南文学，2011（2）.

elisa步骤及注意事项 篇9

目的：认识苯的硝化反应。

用品：小烧瓶、量筒、滴管、水槽、烧杯、试管、玻管、单孔软木塞。浓硝酸(69％)、浓硫酸(98％)、苯。

原理：苯分子里的氢原子能被硝酸分子中的硝基所取代，这种反应叫做硝化反应。操作：在一个小烧瓶里盛浓硫酸8毫升和浓硝酸5毫升，浸在冷水里慢慢振荡，使混和均匀。然后把5毫升苯分5次加入，每加一次就要把烧瓶浸在冷水里，同时小心地振荡。一方面使这些液体能充分混和，另一方面不使液体的温度升得过高。苯加完后为了使硝化反应进行得更完全，在烧瓶上配以带有80厘米长的直玻管(回流管)的单孔软木塞，浸在50～60℃的热水里加热，同时不停地摇动烧瓶。10分钟后，硝基苯已经生成。把混和液倒在一个盛水的烧杯里，硝酸和硫酸都溶解于水，产物硝基苯则是一种淡黄色的油状液体，沉积在烧杯的底部，没有参加反应的苯则浮在液面上。

注意事项：

1.所用硝酸必须是浓的，否则硝化反应不会发生。浓硝酸是过量的，因为反应有水生成。

2.加热温度不能超过60℃，否则就有一部分二硝基苯生成。

3.加入浓硫酸有两个作用，一个是吸水作用，另一个是缓和硝化反应。

4.硝基苯是无色的，由于含有少量二硝基苯等杂质而显黄色。若要除去硝基苯中的杂质，可以用移液管把硝基苯转移到盛有5％氢氧化钠溶液的烧杯里洗涤，用分液漏斗进行分离，然后再用蒸馏水洗，最后，在洗过的硝基苯里加一小块无水氯化钙，放在水浴上加热到透明为止。

elisa步骤及注意事项 篇10

关键词：ELISA法,血液,尿液,肝脏,药物残留

酶联免疫法 (ELISA) 基本原理是:把受检标本 (测定其中的抗体或抗原) 和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应, 结合在固相载体上的酶量与标本中受体物质的量有一定的比例, 加入酶反应的底物后, 底物被酶催化水解或发生氧化还原反应而成为有色产物, 产物的量与标本中受检物质的量直接相关, 可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。ELISA法具有灵敏性高等特点, 广泛应用于动物体内药物残留测定。然而, 人们往往将动物尿液和脏器作为样品进行检测, 但脏器只能屠宰后才可进行检测, 尿液采集也因条件限制费工费时。能否利用动物血液来检测克伦特罗 (俗称“瘦肉精”) 含量, 十堰市动物卫生监督所和十堰市动物产品质量监督检验测试中心对此进行了技术尝试。

1 材料与方法

1.1 试验仪器及试剂

Sunrise酶标仪 (滤光片波长为450 nm/630 nm) 、离心机 (3 000~4 000 r/min) 、微量移液器 (10~300μL, 单道、多道) 。酶联免疫试剂盒Ⅲ、Ⅳ型 (由北京维德维康生物技术公司生产) :克伦特罗酶标板、标准品工作液 (浓度分别为0.0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1μg/L) 、高浓度 (100μg/L) 标准品、克伦特罗酶标记物浓缩液及稀释液、洗涤液、底物A液及B液、终止液、组织提取液等。

1.2 试验动物

随机挑选8头健康的育肥猪, 平均体重60 kg左右, 按常规饲养, 自由饮水, 饲喂配合日粮 (不含抗菌药物) , 于饲料中添加5 mg/kg盐酸克伦特罗, 连续饲喂20 d。

1.3 样品测定

分别于饲喂期第0 (6 h) 、1、2、3、5、7、10、14、20天采集猪的尿液和血液检测克伦特罗含量, 再于停药期第0 (6 h) 、1、2、4、8、10、14、20天采集对应猪的尿液和血液进行检测。停药当天, 采集血液和尿液后, 随机选择4头猪屠宰, 采其肝脏, 对应编号, 测定克伦特罗的含量;停药第20天, 屠宰剩余4头猪, 测定肝脏中克伦特罗的含量。

1) 样品的制备。尿样和血样:将饲喂期及停药期第0 (6 h) 、1、2天采集的尿液离心、取上清液稀释100倍待用, 血液稀释10倍待用;再将停药期第4、8、10、14、20天采集的尿液离心、稀释10倍待用, 血液不稀释。肝脏样品:取2 g均质后的样品, 加入6 m L稀释好的组织提取液, 充分涡动2 min, 4 200r/min以上离心10 min, 取上清液待检。

2) 溶液的配制。用酶标记物稀释液按1:10配制酶标记物工作液, 待用;用去离子水按1:20配制洗涤工作液, 取上清液进行检测。

3) 检测步骤。每孔分别加入标准品、待测样品 (标准品和样品做两孔平行试验) 各20μL;然后加入已稀释的克伦特罗酶标记物50μL, 盖好盖板膜, 轻轻振荡酶标板, 充分混合后, 室温 (25℃) 下避光反应30 min;洗板后, 每孔加入100μL底物 (A、B溶液按体积比1:1混合) , 室温下避光反应10~15 min, 每孔加入50μL终止液, 于酶标仪450 nm波长 (参考波长630 nm) 处测定结果。

1.4 添加回收试验

添加浓度为2μg/L的克伦特罗标准工作液, 8个平行, 方法同样品检测方法。

1.5 数据分析

各标准品或样品的平均吸光度值, 除以零标 (浓度为0μg/L标准品) 的吸光度值, 乘以100%, 即可得到各标准品对应吸光度的百分比。以吸光度的百分比为纵坐标、标准品浓度的自然对数为横坐标构建标准曲线。将待检样品的吸光度的百分比代入标准曲线, 得出样品对应的浓度, 再乘以样品的稀释倍数, 即为样品实际残留量。

用RIDAWIN数据分析软件对数据进行分析, 得出试料中克伦特罗的含量。

2 结果与分析

1) 饲喂克伦特罗6 h后, 猪尿液和血液中即出现高含量的克伦特罗, 8头猪尿液中的克伦特罗残留量达到242.0~916.0μg/L, 血液中的残留量达到6.2~13.8μg/L, 详见表1。

喂药期间, 猪尿液和血液中的克伦特罗残留量总体呈上升趋势, 并呈一定的正相关性, =86.17-326.06, =0.968 4, 在饲喂第10天达到高峰, 详见表2。

2) 停药后0~2 d, 猪尿液和血液中克伦特罗残留量迅速下降, 分别由停药当天的502.50、14.40μg/L下降到停药2 d后的73.30、5.43μg/L, 随后下降缓慢;停药后第14天克伦特罗残留量仍高于中国农业部规定的猪尿中最高检测残留量1μg/L的标准, 详见表3。

在整个休药期间, 尿液中克伦特罗含量和血液中克伦特罗含量也呈正相关性, =38.869+146.73, =0.958 7。停药当天肝组织中克伦特罗含量高达1 823.30μg/L, 说明克伦特罗容易在肝组织中累积;停药第20天屠宰, 肝组织中克伦特罗平均残留量为6.83μg/L, 仍然超标, 易引发中毒事件。

3) 每次检测均设置添加回收试验, 回收率范围在78.9%~94.2%。被检样品送省内大专院校运用GC-MS法进行验证, 与实验室检测结果相符。

3 讨论

通过试验表明, 随着饲喂时间的延长, 克伦特罗在猪体内的含量逐步上升并在猪体内累积, 存在相对稳定的趋势。在停药后第20天检测血液, 仍能检测到克伦特罗残留量, 而人们往往忽视了血液中克伦特罗残留的监控。本试验表明, 运用ELISA技术检测血液中克伦特罗含量, 从而监控生猪是否违禁添加克伦特罗是可行的。对于兽医部门来说, 血液是最容易获得、也是覆盖面最全的样品, 因此可通过检测血液中克伦特罗含量, 达到动物活动筛选的目的, 从而从源头上控制动物产品安全。

μg/L

μg/L

μg/L

ELISA法是检测克伦特罗较高效的免疫分析法, 也是国家标准中动物性食品中克伦特罗的筛选方法。从本次试验可以看出, 用ELISA试剂盒检测克伦特罗, 具有较高的灵敏度和特异性, 适用于大批量血液样品中克伦特罗的定性与定量检测, 能较好地满足基层实验室对生猪克伦特罗含量的检测。

制作裱花的步骤和注意事项 篇11

制作裱花的步骤和注意事项

裱花是制作蛋糕的一个重要步骤，它能够让蛋糕变得更加美观。为了让更多人能够熟练的进行裱花，市面上出现了裱花培训班，下面就一起去了解一下制作裱花的步骤和注意事项。

一、裱花的步骤

1、将做好的面包放置在裱花台上，并将奶油堆在面包上，使用工具刀并转动裱花盘，将奶油均匀的涂抹开。

2、利用一些小工具，将蛋糕上的奶油弄成不同的形状。

3、将鲜奶油装进裱花袋，再选择小号的圆圈，通过挤压奶油在蛋糕上弄出不同的花型，装饰蛋糕。

4、在蛋糕上面摆放水果碎片、巧克力碎片等，对其进行细节装饰，让蛋糕更加的美观。

二、裱花时的注意事项

1、在进行抹奶油时，拿抹刀的手一定的稳，这样才能够保障将奶油涂抹的更加均匀，使蛋糕更加的美观。

2、用两把工具刀将蛋糕托起来，这样才能够防止它遭到破损，保持其完整性。

3、在进行裱花时，各个部分最好做好大小相当，这样才能够保持整体和谐。在添加水果等佐料时，一定要注意色彩搭配，以使其更加美观。

elisa步骤及注意事项 篇12

启动过程中人员安排

值

长：负责对外联系、汇报。把握启动节奏，对重大操作进行监护，控制危险点。机 组 长：全面协调机炉电操作，协助值长对外联系。值班员A：汽机（主要监视操作给水系统和凝结水系统）值班员B：锅炉（主要监视操作风烟系统和制粉系统）值班员C：DEH操作、小机冲转、发变组恢复热备用。巡检员A：锅炉4米以上。

巡检员B：锅炉4米以下及电气侧。巡检员C：汽机侧

巡检员A、B、C在机长协调下相互补位，值班员C需要时就地监护指导巡检员操作。值长根据工作需要随时调配两台机组人员。

一、锅炉上水

1、锅炉上水时主要操作

(1)确认361阀出口至凝汽器管道电动闸阀关闭。(2)关闭锅炉所有疏放水阀。(3)关闭所有充氮阀。

(4)确认361 阀出口至排污扩容器管路电动闸阀开启。

(5)如果储水罐压力小于686kPa，开启所有锅炉排空气门以保证上水路径。

(6)上水至储水罐水位达到12米或更高时，稳定361阀开度在10%至25%，关闭锅炉给水系统所有排空气门，锅炉上水完成。

(7)完成锅炉上水后，储水罐水位由361 阀进行控制，通过361 阀和361 阀出口至排污扩容器电动闸阀的排污管道进行排污。

(8)进入锅炉的给水必须是合格的除盐水，且需化学加药。注意事项：

(1)控制上水温度、流量，尽量降低除氧器加热量(2)启动电泵时关闭中间抽头，再热汽减温水隔离门、调阀关闭，再热汽减温水隔离门“挂起”，防止低再积水。

(3)启动电泵时检查高旁减温水调门及隔离门均关闭，DCS上将高旁前疏水门、高排逆止门前后疏水气动门开启并“挂起”，就地检查高旁前疏水门、高排逆止门前后疏水气动门、手动门确实处在开位。

2、冷态开式清洗：

(1)开启361 阀和361 阀出口至排污扩容器电动闸阀。

(2)用辅助蒸汽加热除氧器，保证除氧器出口水温在100℃左右。

(3)锅炉冷态开式清洗过程中，361 阀出口至凝汽器电动闸阀关闭，361 阀出口至排污扩容器电动闸阀开启，清冼水排到到排污扩容器，直至储水罐下部出口水质Fe＜500ppb 或混浊度≤3 ppm，油脂≤1ppm； PH值≤9.5，冷态开式清洗结束。

3、冷态循环清洗

(1)开启361 阀出口至凝汽器电动闸阀，同时关闭361 阀出口至排污扩容器电动闸阀，启动系统清洗水由排往排污扩容器切换至凝汽器。(2)维持25%B-MCR清洗流量进行循环清洗，直至省煤器入口水质优于下列指标，冷态循环清洗结束： 水的电导率＜1μS/cm；Fe＜100 ppb ；PH值9.3～ 9.5。

注意事项：开式清洗要保持给水流量大流量、变流量，即流量在100～400T变化。开启凝汽器启动补水，通知化学启大泵，维持凝汽器水位。循环清洗时通知化学投前置过滤器及高混。逐步加大除氧器加热，注意轴封压力的调整。

4、锅炉上水过程中的危险点分析及控制措施

(1)锅炉上水时，防管壁金属腐蚀。措施：送进锅炉的水应进行除氧，化验合格后再上水。(2)锅炉上水时，金属应力过大。措施：

1、上水温度在100℃。

2、上水速度要以不应太快，升温速度2℃/min。

(3)锅炉上水时，防管道振动。措施：

1、上水前应将给水管路放气门及过热器等放气门开启，待管路内空气排净后，再关闭。

2、上水过程中，应监视给水管路、省煤器、水冷壁联箱等设备无泄漏和振动现象

(4)锅炉上水时，防止过热器进水。措施：

1、严密监视储水罐水位正常。

2、注意361阀调节正常，至炉排或疏扩的任一路开启。

3、注意上水速率不要过快。

(5)锅炉上水前开放锅炉顶部空气门，上水结束后关闭，上水过程中监视省煤器出口管道放空气门，见水后关闭。

二、锅炉点火

1、锅炉点火操作危险点分析：

⑪油枪或等离子投入运行前应确认锅炉吹扫工作完成，防止锅炉爆燃； ⑫防止制粉系统及燃烧器投运后燃烧不稳、积粉造成锅炉爆；

⑬锅炉启动初期A（F）层煤粉燃烧不完全，此时应防止锅炉二次燃烧； ⑭防止因配风及调整的不合理造成等离子燃烧器设备损坏。

2、锅炉点火前的准备工作：

人员分工：值班员B负责盘面、巡检员A负责就地 注意事项：

(1)检查锅炉吹扫完成。

(2)就地检查锅炉火焰摄像镜头冷却系统投入正常。检查锅炉火焰TV投入正常。

(3)检查空预器吹灰器进退灵活，火灾报警装置投入正常，空预器扇形板在自动位置。(4)检查炉膛、喷燃器、受热面和冷灰斗无结焦，捞渣机、灰沟内无灰渣堆积。投入锅炉渣水系统。投入锅炉渣水系统，炉膛冷灰斗水封建立，启动捞渣机。

(5)检查锅炉烟温探针进退灵活，投入锅炉烟温探针；锅炉各吹灰器全部退出炉外，处于备用状态。检查锅炉过热器出口PCV阀具备投运条件。(6)F（或A）磨煤机暖风器管道暖管。(7)将锅炉冲洗流量降至300吨左右。

(8)锅炉点火前应检查确认汽机油系统、盘车、汽机防进水、真空系统正常，汽机各主汽门、调门处于关闭状态。

(9)值班员B检查油循环建立，油系统油压正常，供油压力2.5Mpa，点火油压2.0Mpa，雾化蒸汽压力0.9Mpa，雾化蒸汽温度250℃以上，应根据需要启动两台燃油供油泵，以保障正常运行机组和所开机组的用油。(10)投入空预器连续吹灰。

(11)巡检员A检查就地油系统无泄漏，并恢复所以油枪至备用状态。

3、投入等离子，启动A（F）磨煤机

（1）打开A磨热风插板门和调门，建立A（F）磨一次风量，投入A磨暖风器（2）当1A磨煤机出口温度＞80℃时，准备启动1A磨煤机“等离子点火模式”。

（3）调整A层燃烧器辅助风挡板开度为35%，调整A磨煤机入口一次风量为≥63t/h，风速18～23m/s。

（4）检查各燃烧器等离子拉弧电流、电压等参数显示正确，检查等离子拉弧条件均满足，依次进行四个等离子点火装置拉弧。

（5）启动A磨煤机，启动A给煤机，调整A磨煤机给煤量为16t/h。就地观测着火情况，当着火正常后，调整A层燃烧器辅助风挡板开度为50～60%。根据需要增加A给煤机出力。

注意事项：

⑪巡检员A检查就地着火正常，值班员B监视A（F）磨出口温度达到100℃以上

⑫当任一台等离子发生器在180s内未点燃时，应立即手动停止相应磨煤机的运行,经充分通风、查明原因后再重新投入。

⑬在燃烧器显示壁温超过400℃且壁温仍然上升较快时，应及时采取降低壁温的措施，包括降低磨煤机出力、加大磨煤机的入口风量、降低等离子体发生器功率等，燃烧器显示壁温超过500℃时，应停止该燃烧器的送粉进行检查 ⑭一次风管未通风的情况下，等离子体发生器运行时间不能超过10min，防止烧坏燃烧器。⑮机组冷态启动时，在等离子投运初期，为保证锅炉燃烧，与等离子相关联的二次风门应尽可能的关小，因二次风温较低，很难起到辅助燃烧的作用，待等离子燃烧器着火稳定，二次风温较高时再加大相关二次风配风。

⑯在炉温升高后，锅炉燃烧变好时，应加强等离子燃烧器壁温的监视，以防超温结焦现象的发生。

⑰等离子投运初期，应保证空预器吹灰器连续吹灰，以防由于煤粉燃烧效率较低，飞灰可燃物含量较高，造成尾部烟道再燃烧事故。

启A（F）磨时的注意事项：

①就地检查润滑油油系统、液压油系统正常 ②启动给煤机后在最小煤量16t/h，尽量提高磨煤机出口温度，维持分离器转速350r/min，注意磨煤机振动情况。

③监视烟温升温趋势，监视火焰电视里燃烧情况 ④开大A（F）层二次风开度，注意炉膛负压波动 ⑤机长注意协调汽机侧值班员加强给水监视调整，确认361阀跟踪情况，维持给水流量在411.6t/h ⑥锅炉起压后，巡检员A检查锅炉放空气门关闭严密。⑦锅炉起压后，投入旁路系统，控制升温升压率。注意事项：

①旁路投入前，确认旁路已充分疏水、暖管 ②投入高低旁和减温水自动，注意旁路振动情况

③因高旁减温水调阀内漏较大，投旁路初期，禁止投高旁减温水

④加强给水流量控制，防止储水罐满水。如果储水罐满水造成主蒸汽管进水，要打开锅炉疏水门、主汽门前所有疏水阀和高旁阀前疏水阀充分疏水，此时严禁开高旁阀，防止水进入冷再系统

⑤控制给水母管压力与主蒸汽压力偏差不大于4Mpa,防止高旁减温水不严增大漏水量。⑥高旁阀开启前或者汽轮机冲转前，值班员和检修人员共同确认冷再管路放水完毕并恢复冷再管路放水措施，同时DCS上再次确认高旁前疏水门、高排逆止门前后疏水气动门在开启状态后，方可进行高旁阀开启或者汽轮机冲转操作

⑦手动开关高旁阀时操作要平缓，不准大幅度开关高旁阀，操作时就地有人监视冷再管路振动情况。如果开高旁阀后冷再管路振动较大，必须立即关闭。

⑧低旁阀关闭时要缓慢，防止低旁阀前压力突增造成再热器内蒸汽变成水，根据水蒸汽饱和温度和饱和压力对应表（见附表一）检查再热器内蒸汽有50℃过热度。（DCS显示的冷再压力+0.1Mpa=绝对压力）

⑨任何情况下，高旁减温水气动隔离门关闭“挂起”防止联开，但出现需使用高旁减温水情况时，手动“解挂”高旁减温水气动隔离门。

⑩开停机中经常检查冷再管路振动情况，发现振动必须立即汇报。

注：根据启动情况，在点火初期可选择性投入两三只启动油枪，启磨后逐步退出。

三、锅炉升温升压

人员分工：值班员B负责盘面、巡检员A、B负责就地

1、启动F（A）磨煤机 注意事项：

⑪热二次风温高于180℃，联系炉控强制磨煤机启动条件。⑫检查F12F34（A层）点火油运行正常 ⑬就地检查润滑油油系统、液压油系统正常

⑭启动给煤机后在最小煤量，尽量提高磨煤机出口温度，维持分离器转速350r/min ⑮监视烟温升温趋势，监视火焰电视里燃烧情况 ⑯开大F（A）层二次风开度，注意炉膛负压波动

⑰机长注意协调汽机侧值班员加强给水监视调整，根据361阀开度情况，调整给水流量

2、升温升压注意事项

⑪升温升压过程中，控制汽水品质合格 ⑫监视屏过、高过金属壁温 ⑬控制锅炉升温率1.5—2℃/min ⑭控制锅炉升压率0.15Mpa/min，达到1.25Mpa，维持参数热态清洗，合格后再升温升压。⑮空预器连续吹灰，值班员加强监视风烟及制粉系统，防止烟道再燃烧。⑯巡检员就地观察燃烧情况，根据燃烧情况逐步退出B、D层点火油枪。⑰检查空预器电流正常，否则联系检修调整扇形板位置

⑱当主汽温度高于380℃，投入二级减温水，再热气温高于330℃，打开给水泵中间抽头，投入再热减温水

⑲注意高旁开度调整，监视高旁后汽温变化，就地旁路振动情况

⑳机长协调给水与燃料量逐渐增加，直到汽温汽压达到汽机冲转参数要求 ⑴如果煤质不好，投入大量启动油时，要注意壁温变化，尽量在额定范围之内

⑵如果煤质变化时，应启动2台制粉系统运行，投退启动油应注意炉膛负压，严防锅炉大面积超温和锅炉爆燃

⑶烧参数过程中，应逐渐开打汽机旁路控制压力和温度同时达到冲转条件 ⑷起压过程中，应注意蒸汽管道疏水及其疏水门的关闭 ⑸升温升压过程中应注意各个受热面的温差。⑹升温升压过程中应注意监视空预器连续吹灰 ⑺升温升压过程中应检查烟温探针自动退出情况 ⑻升温升压时应观察和记录锅炉膨胀

⑼应加强控制燃烧，使其逐渐加强，并注意保持稳定 ⑽检修后锅炉，安全门在气压前应进行调整校验，以确保安全门可靠动作，锅炉起压后应让巡检就地检查是否有跑水漏气地方。

四、高压缸倒暖

人员分工：值班员A负责盘面、巡检员C负责就地

1、高压缸倒暖条件：

⑪、高压内下缸内壁温度低于150℃。⑫、汽机跳闸并处于连续盘车状态。⑬、凝汽器真空-88kPa以下。

⑭、高压缸倒暖所用冷再蒸汽压力要求在0.5～0.7Mpa，温度在200℃～250℃，且有28℃以上的过热度。倒暖时以控制汽缸金属温升率温升率不超过50℃/h，最高不得超过 70℃/h，即≯1.1℃/min。

2、高压缸倒暖操作准备

⑪、确认各抽汽电动阀、高排逆止阀关闭。

⑫、确认高排逆止阀前后、一抽逆止门前、高压调阀后导汽管疏水畅通。注意就地确认疏水器前、后手动关门已开启。开启高压主汽阀下阀座疏水阀、中压联合汽阀下阀座疏水阀，并就地检查阀前疏水手动门已全开，疏水10分钟以上。

3、高压缸倒暖操作

⑪、关闭高排逆止阀前疏水阀，关闭一抽逆止门前疏水阀，将高压导汽管疏水气动阀打开。⑫、开启倒暖电动截止阀，检查高压缸通风阀自动关闭（V V阀）。

⑬、缓慢开启暖缸倒暖调节电动门达10%开度保持30分钟，根据汽缸金属温升率调整暖缸调节阀的开度。

⑭、30分钟后，将倒暖调节门开启至30%。根据汽缸金属温升率调整倒暖调节门的开度。⑮、30%开度保持20分钟后，将倒暖调节门开启至55%，根据汽缸金属温升率调整倒暖调节门的开度，使调节级后压力逐渐升高至0.39 MPa～0.49MPa，高压内下缸内壁金属温度缓慢上升到150℃。⑯、高压内下缸内壁温度达到150℃后，关闭高压导汽管疏水阀进行闷缸，闷缸时间根据“高压缸暖缸闷缸时间曲线”来确定。闷缸时倒暖阀保持原有开度，缸内汽压有所上升，维持在0.5～0.7 MPa，但不得超过0.7 MPa，否则会产生附加推力。

4、高压缸倒暖结束后操作

⑪、将倒暖调节门关闭至10%，保持5分钟，然后在5分钟内逐步关闭倒暖调节门。

⑫、倒暖调节门全关后，缓慢开启高压调阀后导汽管疏水阀及一抽逆止门前疏水阀，注意高压缸蒸汽压力的下降速度。

⑬、在高压缸排汽压力达到-50KPa之后，开启高压调阀后导汽管疏水阀及一抽逆止门前疏水阀，注意高压缸蒸汽压力的下降速度。

⑭、关闭倒暖截止阀，检查高压缸通风V V阀自动开启。

5、高压缸倒暖的危险点防控

⑪、倒暖截止阀开启后，在倒暖调节阀稍开时应疏水暖管，且疏水暖管要充分，避免倒暖管道积水进入高压缸。

⑫、由于倒暖调节阀远方无开度显示，应在就地手动控制开度，以高压调节级后压力和高压内缸内壁温升速率为参照，就地操作时与盘前人员保持通讯畅通。

⑬、汽缸金属温升率必须符合规定且升温平稳，如升温不稳定应分析汽缸是否有积水，并进行相应处理，避免高压缸进水、倒暖蒸汽压力不合适或温升过快。⑭、暖缸时调节级后压力应在0.39MPa～0.49MPa，最高不得超过0.55MPa；闷缸时维持在0.5～0.7 MPa，最高不得超过0.7 Mpa。

⑮、经常检查上下缸温差、高压缸内外壁温差正常，注意温差最大不超过50℃，避免缸体和转子承受过大的热冲击。

⑯、注意监视盘车运转情况及汽缸膨胀、差胀及转子偏心度指示正常。注意监视主机润滑油油温变化，防止出现轴承振动大。

⑰、倒暖结束后应保证30分钟以上的时间保证高压缸内蒸汽排出才能冲转。但为了防止倒暖结束后长时间不能冲转导致高压缸内金属温度下降过多，在暖缸过程中预测冲转时间将推后较长时间，可适当延长闷缸时间。

⑱、炉侧注意加强燃烧，控制和保证足够的蒸汽压力和流量。⑲倒暖过程中要通过控制倒暖调节阀、导汽管疏水阀和相关抽汽逆止阀前疏水阀来调整金属温升速率。

五、高压调阀室预暖

人员分工：值班员A负责盘面、巡检员C负责就地

1、高压调阀室预暖条件

⑪、调阀室金属温度低于150℃时，必须对调阀室预暖。⑫、调阀室的预暖须在高压缸预暖结束后进行。⑬、预暖蒸汽来自主蒸汽，温度应大于271℃。

2、调阀室的预暖操作

⑪、确认汽机处于跳闸状态。⑫、确认EH油系统已投运正常。

⑬、确认主再蒸汽管疏水、高中压主汽阀座疏水和高压调阀后导汽管疏水开启。就地检查疏水阀前后手动门全开。

⑭、检查主蒸汽温度高于271℃。

⑮、进行汽轮机ETS复位，在汽机DEH“自动控制”画面点击“汽机挂闸”按钮，在操作面板上选择“挂闸”，按执行键。检查高中压主汽阀关闭，高压缸通风阀及事故排放阀开启。⑯、选择DEH“自动控制”画面“阀壳预暖”按下，在操作面板上选择“投入”，按执行键，状态显示“投入”，检查右侧高压主汽阀（#1）开启到预暖位置21%。

⑰、监视调阀室内外壁金属温差，当高于80℃时，选择按下“阀壳预暖”按钮，在操作面板上选择“切除”，按执行键，状态显示“切除”，关闭右侧高压主汽阀。

⑱、待调阀室内外壁温差低于70℃时，再次进行预暖操作，开启右侧高压主汽阀至预暖位置。

⑲、重复以上操作，直到调阀室内外壁金属温度均上升到180℃以上，且内外壁温差低于50℃，调阀室预暖操作结束，按汽机停机按钮，检查右侧高压主汽阀关闭。

3、高调阀预暖时的危险点分析：调阀室预暖时，要防止调节阀不严冲动转子，盘车脱扣。当转子被预暖蒸汽冲转后，应适当降低预暖压力，待转子静止后，重新投入盘车运行。

六、汽轮机冲转

人员分工：值班员C负责盘面、巡检员C负责就地，值长派另一台机一值班员到13.7米。

1、汽机冲转前检查：

⑪机侧巡检员就地检查润滑油压力0.176Mpa，润滑油温35—40℃，盘车运行正常，顶轴油系统运行正常，启动启动油泵。根据缸温和高调阀金属温度决定高压缸倒暖和暖阀。⑫值班员A检查主再热蒸汽压力8.63/1.0Mpa（主汽压6Mpa以上即可），主再热温度380/330℃。主再热蒸汽至少有50℃过热度。⑬抄录中压缸内壁温及凝汽器真空等参数 ⑭确认汽水品质化验合格

⑮高低旁处于自动且高旁开度在60%以上。⑯TSI无报警

⑰ETS主保护投入

⑱高中压缸上下缸温差在正常范围

⑲检查EH油压11.2±0.2Mpa，油温在30—40℃

2、冲转至1500r/min过程的注意事项 ⑪汽机冲转要在机长亲自监护下进行

⑫值班员联系巡检员携带测振仪、听针就位，保持通讯畅通

⑬挂闸前检查盘车运行正常，顶轴油系统运行正常，启动油泵运行正常 ⑭挂闸后巡检员就地检查各主再热蒸汽阀门状态正确，EH油系统无泄漏 ⑮挂闸后检查BDV阀、VV阀开启，高排逆止门关闭

⑯高中压调阀开启后汽机冲动，就地检查盘车退出正常，否则立即打闸停机 ⑰200r/min摩擦检查，巡检员就地测量并记录轴承振动，并与集控室核对正确 ⑱600r/min检查低压缸喷水自动开启

⑲冲转过程中严密监视润滑油温、轴承金属温度、汽缸壁温、轴向位移、差胀 ⑳检查监视调速系统无跳跃现象 ⑴就地与盘上核对转速一致 ⑵严禁在临界转速范围内停留

⑶机长协调燃料、给水匹配增加，维持主蒸汽温度、压力达到冲转参数要求，及时调整高低压旁路系统，按启动曲线控制汽温、汽压。

⑷及时调整凝汽器、除氧器水位、凝结水储水箱水位，注意轴封压力的变化。冲转至600r/min后及时调整主机润滑油温设定值在40℃

3、暖机过程中的操作

人员分工：值班员C负责盘面、巡检员C负责就地 ⑪投入低压加热器运行

①检查5678号低压加热器水侧已投入运行

②巡检员按低加系统疏水放气检查卡检查系统阀门状态正确 ③由低到高依次投入低压加热器汽侧

④低压加热器投入时要密切监视各低加温升 ⑤各低压加热器投入完毕，投入各疏水调阀自动 ⑥低压加热器投入后要密切监视各低加水位 ⑦投入前要注意抽汽管路充分疏水 ⑫冲B（A）小机 小机冲转分工

a巡检员C负责就地检查小机具备冲转条件，b值班员C负责B小机操作及监视

①检查供汽管道暖管结束，汽前泵运行正常。②速关阀前蒸汽温度高于150℃，真空大于73Kpa ③小机有关保护投入

④轴承润滑油供油温度大于35℃，油压0.15—0.25Mpa ⑤EH油压正常 小机冲转的注意事项：

①先冲至800rpm暖机，严密监视小机各轴承的震动、轴承温度、回油温度及轴向位移正常；

②监视小机缸温、排汽温度正常；

③巡检加强就地检查确认小机内部声音、各油压正常及进汽阀门状态正确； ④小机在冲转至3000rpm后切至遥控待并。⑬发电组恢复热备用

人员分工：值班员C负责发电组恢复热备用监护，巡检员B负责发电组恢复热备用操作。

4、中速暖机的结束条件

⑪汽机高压内缸内壁温﹥320℃ ⑫汽机中压内缸内壁温﹥305℃ ⑬高中压缸膨胀﹥8mm ⑭如高压内缸内壁温达不到320℃，暖机时间达4小时即可。

七、冲转至3000r/min 人员分工：值班员C负责冲转，巡检员C负责就地检查。

1、冲转至3000rpm过程中的注意事项： ⑪汽机冲转要在机长亲自监护下进行。

⑫冲转过程中严密监视润滑油温、轴承金属温度、汽缸壁温、轴向位移、差胀，必须注意监视汽机各部分金属内、外壁温差及温度变化率

⑬机长协调燃料、给水匹配增加，维持主蒸汽温度、压力达到冲转参数要求 ⑭检查冲转至2000rpm时顶轴油泵自停，否则手停。⑮严禁在临界转速范围内停留

⑯转速到达3000rpm后确认主油泵出口油压大于1.372Mpa，停运交流润滑油泵及交流启动油泵。

⑰检查低压缸喷水调节阀自动控制正常，低压缸排汽温度80℃以下

⑱根据风温、油温、水温、EH油温的要求，及时投入冷油器、氢冷器、定冷器、EH冷油器，并投入温度自动控制

⑲3000r/min时，及时调整主机润滑油温设定值在43℃

2、冲转过程中的危险点分析和控制

⑪汽轮机冲转时水击与大轴弯曲，控制措施：①.机组冲转前投入热机保护，胀差，上下缸温差合格后方可冲转。②.冲转前，汽温，汽压合格方可冲转。保证足够的过热度，疏水畅通。③.轴封供气温度合适，冷态启动先抽真空，后送轴封供气，热态先送轴封后抽真空。④.启动过程机组振动大时，应停止升速，不返回时应打闸停机查明原因。⑤.启动过程中汽温急剧下降应打闸停机。⑥.抽真空前应连续盘车。

⑫机组冲转过程中的振动

控制措施：迅速平稳的通过临界转速 ⑬机组冲动后盘车脱不开，控制措施：就地设专人监护，当盘车脱不开时，立刻紧急打闸停机 ⑭机组定速后停止高，低压油泵时，调速，润滑油压下降 控制措施：密切监视油压变化，当油压不能控制时，打闸停机 ⑮机组升速时烧瓦

控制措施：冲转时设专人调整润滑油油温，保证油温正常，防止油温波动较大，到机组保护动作时，立刻打闸

⑯机组升速时，调速油压偏高，控制措施：升速时调速油压不应升高，超过规定值，应及时调整，⑰机组升速，暖机及定速后凝汽器满水，真空下降

控制措施：加强对凝汽器水位监视，及时开启放水门，保持凝汽器可见水位 ⑱发电机并列后，风温高，控制措施：发电机并列后，及时投入冷却器，排净空气。⑲机组暖机时，金属温差超过规定值

控制措施：严格按照运行规程的要求按启动曲线进行暖机 ⑳低加满水

控制措施：

1、密切监视低加水位，2、无效时开启事故疏水 ⑴关闭导气管及其他疏水门时，管路振动或伤人

控制的措施：等待疏水完毕后，温度正常后，再关闭疏水门

八、发电机并网

人员分工：值班员C监护巡检员B操作发电机并网；值班员A给水调整，值班员B燃烧调整；机长协调

1、发电机并网时锅炉适当增加燃料量（每次不大于2t/h），值班员A根据燃料量关注361阀开度调整给水流量，机长监视主汽压力在8Mpa左右

2、机组负荷稳定在50MW，全面检查机组运行正常

3、切缸操作

人员分工：值班员C负责切缸操作，机长协调

4、切缸过程注意事项

⑪值班员B维持燃料量稳定，值班员A保持给水流量稳定 ⑫切缸时可设定调门开度在60%—70%，可适当增加升速率

⑬值班员C 切缸过程中监视中调阀缓慢开启，低旁逐渐关闭，在此过程中，监视机组负荷稳定在50MW，防止机组负荷过低，发电机逆功率保护动作 ⑭监视高调阀逐渐开启，高旁逐渐全关，否则手动关闭 ⑮监视高排逆止门打开，VV阀关闭

⑯切缸完毕，检查负荷稳定在90MW左右

⑰ 全面检查机组负荷、压力、温度稳定后，进行下一步操作（8）保证高压缸排气温度不超限，防止保护动作。（9）切缸时注意瓦温，轴向位移，振动、热膨胀及TSI内各项参数，发现异常时及时停止，不得强行切缸。（10）切缸时加强锅炉燃烧以保证有足够的蒸汽量，使切缸完成。和保证切缸后能带120mw负荷的蒸汽量。

（11）通过锅炉燃烧调整并逐一高旁开度，一般在60%左右。（12）高旁前主蒸汽参数合适。

（13）在DEH中设置阀位开度50%---70%，设置升负荷率为50mw/min左右。（14）检查总阀位开度接近20%，中调门全开（90%以上），高调门开始开启。Vv阀关闭，高排逆止阀得电被冲开，低旁关闭，高旁逐渐关闭，直至全关。

（15）切缸完毕后确认高低旁全关，汽机各项参数正常。（16）检查高旁减温水关闭，耳机减温水、三级减温水关闭。（17）设置DEH时，阀门开度指令要足够大，并根据气压选择合适的开度。

（18）设置升负荷速率时要足够大，一般不低于30mw/min，以免冲不开逆止阀。

5、投入高压加热器

人员分工：值班员C负责高加投运操作，巡检员C负责就地检查操作，机长协调 ⑪检查123号高压加热器水侧已投入运行

⑫巡检员C就地检查系统无振动，核对水位计与DCS一致 ⑬由低到高依次投入高压加热器汽侧

⑭高压加热器投入时要密切监视各高加温升 ⑮各高压加热器投入完毕，投入各疏水调阀自动 ⑯高压加热器投入后要密切监视各低加水位 ⑰投入前要注意抽汽管路充分疏水

6、除氧器汽源切至四抽

九、升负荷过程

1、启动B磨煤机，升负荷

人员分工：值班员B负责锅炉盘面、巡检员B负责就地

2、逐渐加负荷至150MW，在此期间，机长全面协调燃料、给水匹配增加，注意主蒸汽压力稳定在8Mpa左右，及时调整汽机调门开度，严防主蒸汽压力过高，闭锁361阀开。负荷至120MW，将DEH投遥控，即“自动控制”画面 “CCS投入”状态显示为“投入”，DEH从本地控制转为MCS控制，此时可投入汽机主控自动，将机组运行方式切换为汽机跟踪方式，机前压力设置为8.73MPa（热态、极热态启动设置为10.0MPa）。此后，随着锅炉燃烧量的增加，汽机高压调阀逐渐开大，维持机前压力8.73MPa，当高压调阀接近全开后（总阀位指令约90％，负荷约30％额定负荷。），机前压力随锅炉燃烧量的增加而升高，进入滑压运行阶段。

3、并B（A）汽泵 注意事项：

⑪机长亲自监护并全面协调

⑫缓慢增加B（A）汽泵转速，使B汽泵出口压力接近给水母管压力

⑬开启汽泵出口门前，严禁汽泵出口压力高于母管压力，造成给水流量大幅波动 ⑭汽泵并入系统后，给水流量保持与并泵前流量相等 ⑮并泵过程中，严禁其它重大操作

4、锅炉转直流运行

⑪缓慢加锅炉负荷，给水流量保持稳定，储水罐水位缓慢下降至11.3米，361阀逐渐关闭 ⑫保持主蒸汽压力不变，逐渐开大汽机调门 ⑬锅炉转直流后，检查给水流量自动跟踪正常

5、给水倒至主路

人员分工：值班员A负责汽机盘面，机长负责协调 ⑪倒主路过程中严禁进行其它操作 ⑫锅炉侧保持燃料量稳定

⑬检查机组负荷稳定在200MW ⑭检查给水旁路开度在90%以上 ⑮逐渐开启给水主路

⑯操作过程中注意保持给水流量稳定

6、并A（B）汽泵，退出电泵，投抢水备用。并汽泵注意事项：

(1)待第一台汽泵逐渐出力，而第一台汽泵逐渐关小再循环调门时要逐渐增加第二台气泵出力，防止给水流量波动大或第二台气泵处理被顶住。(2)整个并泵过程要保证给水流量波动小。

(3)并第二台气泵时将第一台汽泵的再循环调门且手动控制，防止给水流量过低跳泵。(4)如果并泵时出现第一台汽泵出力大，第二台气泵出力小，应先减少第一台汽泵出力后再加第二台气泵出力。不能只盲目地加第二台气泵的出力。(5)要密切关注给水流量，气泵出口出力及单台气泵的流量。

(6)尽量小幅度操作，尽量保持流量不变，保持稳定的煤水比，防止壁温和气温异常和负荷大幅波动。

(7)提高第二台气泵出力略小于给水压力时再开出口电动门，防止运行泵出力被顶住。(8)待给水出力均转移至汽泵后方可退出电泵。(9)并泵时，视给水流量略有增加时视为并泵成功。

7、启动D磨煤机，升负荷

人员分工：值班员A负责汽机盘面，值班员B负责锅炉盘面，机长负责协调 ⑪注意事项：

同B磨煤机启动注意事项

⑫逐渐加负荷至300MW，全面检查燃烧稳定，依次逐渐退出所有油枪，在油枪退出过程中，注意燃烧稳定。

8、切厂用电，将厂用电切至高厂变和高公变

人员分工：值班员C监护巡检员B操作厂用电切换；值班员A给水调整，值班员B燃烧调整；机长协调 注意事项：

⑪切厂用电过程中，杜绝其它操作 ⑫全面检查机炉参数稳定

⑬ 做好厂用电失去的事故预想

（4）切换厂用电必须持票操作，且必须有第二监护人，不得无票或者无第二监护人到场的情况下操作。

（5）正确使用保护及自动装置，环并时注意环流，开关动作后检查开关实际位置。（6）切换完成后必须检查备用开关直流电源投入完好。

（7）切换之前必须确认备用侧带电正常，严禁出现备用侧无电切厂用电。（8）切换之前检查6KV1A段厂用电快切装置无闭锁信号。

（9）检查6KV1A段厂用电快切装置无异常信号，已自动复归，否则手动复归。检查母线电压正常。

（10）厂用电切换前确认切换方式为“同时方式”。

（11）满足一定负荷后（从经济性与安全性的平衡考虑），在机组转干态后切厂用电至启备变带。