纸条（精选19篇）
石林县板桥小学 赵茜
美术课要想上好，其实还真不是那么容易。不论是课前的精心准备，还是教学中课堂的情景创设、多样评价，以及课后的反思等等一样都不可少，都需要美术教师下工夫来思考、推敲。
上完本课我发现美术课的准备绝不单单是教具的准备那么简单，它还需要有更为广泛的内容。在教学《纸条拉花》这一课时，为了让课堂更有氛围，我在课前不仅查找了纸条拉花的图片以及学生的作品图片，还利用空余时间准备了示范作品，自己制作了精美的纸条拉花。这些作品在课堂上展示的过程中激发了学生的浓厚兴趣，学生都迫不及待要尝试自己制作。
通过这节课，我发现了一个问题：课堂教学的有组织性和引导学生自由创作可能会出现的无序性的矛盾。所有老师都知道，课堂教学的有组织性是上好一节课的必要保证，这也是大多数教师认可的一个原则。可往往有些类型的美术课却不需要孩子们规规矩矩、端端正正地去完成要求的作业。比如这节手工课，我让两个人为一小组，共同制作一个纸条拉花，在他们共同创作的过程中，难免会各抒己见。而且他们也不会像成人那样有克制力，这样就会影响课堂纪律。还有一些课加入了猜谜语、动作展示等游戏，课堂也会显得“杂乱无章”，问题是这样形式上的“乱”却并非无效。我曾看过一篇文章说，国外的老师在上美术课时不需要孩子们坐得端端正正，他们给了孩子足够的空间去想象、去创作，学生甚至还可以画在桌子上，还可以“乱涂乱画”。学校要求的是课堂必须要有秩序，但一味的整齐、安静，往往会抹杀孩子的自由发展的个性，限制孩子的创造性。可怎样才能使两样兼顾呢？那就要求教师在组织教学上既要收放自如，又要做到不放纵，不压制。例如：，可以尝试采用比较开放的教学内容。教师可以借助一些外界的媒体，引导学生走向自然、走向社会，投身于五彩缤纷、五光十色的校外生活。在大自然中学美术，感受生活中的红、黄、蓝，感觉是那样的贴近自己，其实是一件非常惬意的事情。更何况这种学习方式还能够在潜移默化中培养学生主动学习的能力以及在生活中发现美、表现美的能力。本节课的内容是很丰富多彩的,过程中设计的环节不是很多,没有多少悬念,是靠着内容本身的魅力去吸引学生的注意力,激发兴趣,培养学生的审美能力,通过自己的制作,锻炼自己的动手能力。剪纸在我们的生活中运用是非常广泛的,因而,教与学生一些简单有效的装饰方法是很实用的。而没有比让学生获得成就感更能激发他们的学习兴趣了。在课堂中我学习运用一些有亲和力的语言、动作来活跃课堂的气氛,达到了很好的效果。
在继续进行教学时,我运用了如:举起大家勇敢的手、把掌声送给善于表达的他、你的理解连老师都自叹不如(竖起大拇指)、让我们更关注还没有发言的同学„„等激励性的语言和主动参与到学生的讨论中去,因此整个教学过程是在友好的、积极的氛围中进行,从他们的脸上和作品中都流露出对学习的喜悦之情。
语文课上，语文老师神采飞扬、滔滔不绝地讲着课。一向爱上语文课的李涛，此时却什么内容也没有听进去，心里念念不忘那张女生亲手给他的纸条。课已上了三分之一，他还在犹豫、挣扎着，心想：到底要不要冒着被同桌或老师发现的危险，把纸条拿出来看呢?课上了一半，李涛终于忍不住了，从裤子口袋里拿出那张小纸条，迅速地将纸条压在书下。然后，他装作认真看书的样子，手飞快地把纸条展开一小段，眼睛像做贼般四处窥视。没有人看见!他把纸条向上抽出一点，上面露出两行娟秀的字迹。他的目光刚触及这两行字，心就不由自主地乱跳起来。
“李涛，你好!有一件事我早就想跟你说……”看到这儿，李涛的心跳得更快了。长这么大，这种事情他还是第一次碰到。他用手挡住纸条，假装打了一个大大的哈欠，又用余光扫视了一遍四周。他忍不住向递纸条给他的女生看去，她正在认真听课，好像什么事都没有发生。李涛敲了一下自己的头，暗暗埋怨自己：“唉!人家女孩子都不怕这事，你怕什么?”他想起今天早上，她擦黑板时冲自己微笑的模样。那个微笑多么动人，现在想起来，还真是别有深意，让人回味不已。李涛心中涌起了一种从来没有体验过的甜蜜、羞涩和兴奋相交织的感觉，他定了定神，又将纸条抽出一截。
“一直找不到合适的机会，可是今天我不得不鼓起勇气跟你讲，真是不好意思……”看到这里，李涛的脸发烧了，他不禁开始浮想联翩。此时教室里一片安静，大家都沉浸在语文老师精心营造的氛围之中，品味着课文的意境，而李涛却独自心潮澎湃。他又回忆起几天前单元测试时的情景：由于疏忽，忘了带钢笔，是她毫不犹豫地将那支最心爱的钢笔借给了他。李涛想：那支钢笔我至今也没有还给她，她也没说什么，难道她早就对我……
好奇心驱使着李涛往下看。
“上次考试我借给你的钢笔，你还用吗?如果不用的话，请还给我吧，谢谢!”
天哪!原来是为了这件事!李涛不禁眼前一黑，好半天没有回过神来。
下课铃响了，李涛把带着体温的钢笔从口袋里掏出来，低着头，缓缓地朝那个女孩走去……
省惯了，便什么都省，活到60岁了，生活里只剩下了一个省字。即使现在的生活好了，她还是省。买东西捡最便宜的，只要省钱就行；生病了能扛就扛，不用去医院的就省了；衣服，全是她剩下改做的。为此，她经常和母亲生气。道理不知道讲了多少，但母亲依然如故。甚至，她回家给母亲买了东西，让母亲吃，等到第二次回家，东西还在那里放着，馊了也舍不得扔。
一辈子养成的习惯，哪能说改就改呢，她想来想去，最后想了一个办法，那就是，在家里最显眼的地方贴上了纸条。
在床头，她贴了两张纸条，第一张纸条上她写着：早上看——身体是革命的本钱，没了健康，其它的都是零，所以穿可以省一些，但吃绝对不能省。按健康平衡饮食基本要求每天要喝半斤牛奶，吃两个鸡蛋，一斤蔬菜水果，三两豆腐，六两主食，二两肉类。为了你的女儿可以省一些心，请您每天必须保持以上饮食。第二张纸条上写着：晚上看——您今天把这些东西都吃了吗？您的健康就是女儿最大的幸福，所以您一定要健康。
在厨房的调料柜前，她贴上了纸条：炒菜一定要放油，当然也不要太多，每次两勺即可。
洗手间，纸条上写着：千万别不敢用水，节能是必须的，但是要保证最基本的生活所需。
门上的纸条是这样写的：妈妈，你每天一定要看这些纸条，看见纸条，你就看见了女儿的心，你就能感觉到女儿天天在你身边，为了女儿，您一定要按纸条上写的去做啊，这可是最基本的要求哦！
贴纸条的办法很有效，母亲都按纸条上写的去做了。母亲是被女儿感动了，为了自己，为了女儿，为了女儿对自己那份沉甸甸的爱！
“谁写的这张纸条？”姜老师厉声喝道，并随即放下书本，拍案而起，手里还扬着那张揉得皱巴巴的纸条“是谁写的？姜老师！你可得当心点儿！”全班同学都吃了一惊，随即在私底下窃窃私语：
“谁呀，胆子够大的，还敢招惹老师！”
“不是我写的，可别看着我！”
“真好玩，真好玩，又有新花样了！”
孙满脸色苍白，想承认，但一看老师正在气头上，便悻悻地将手缩回袖筒里。
“不承认是吧，不承认我可要点名了！陈小刚，起立！是不是你？”陈小刚是个调皮的胖男孩，他很紧张，扭动着胖胖的身躯，又是摇头又是招手：“姜老师，我发誓，真不是我干的！”他说着，眼角还泛起了一两滴委屈的泪花。
“好吧，坐下！”姜老师又一次厉声说道“李万，起立！”李万活脱象个小猴精，上串下跳的，恶作剧有一半都是他想出来的，也难怪老师点他名。“老师，冤枉啊，您要硬说是我干的，那我还真是比窦娥还要冤啊！”“好吧好吧，坐下！”姜老师说。
“同学们，一定要诚实，我不管你们当中任何一位在写这张纸条的时候是怎么想的，老师只想知道，是谁？是出于什么样的原因写的？如果是老师的原因，老师向你们道歉，但如果问题不在老师这里，请你当面来解释，为什么要写这张纸条。”
姜老师话音未落，孙满“腾”地一下站起来：“老师，纸条是我写的，但您可能理解错了，我写‘姜老师，你可得当心点’是因为现在新冠状病毒来势汹汹，而您上课为了让我们听的清楚而不戴口罩，我只是想提醒您，一定要戴口罩，为了您的身体健康！”
短短几句话，姜老师的眼眶湿了：“谢谢你，孙满！”
喏，你看，这是妈妈留下的纸条：“早上好！大小陈，早点已经买来了，在餐桌上，快点吃喔！”；而这刚劲有力的钢笔字是爸爸写的，因为爸爸是当医生的，所以内容一般有关于医学的，如：“小家伙（我的昵称），中午上学之前吃根香蕉，以防早上跟我抢厕所！”再下一张也是老爸留给我的：“今天的心情不错吧！晚上陪你逛书店，早点完成作业！”而这张可是给妈妈的：“亲爱的阿毛,下班时有人请客，请老婆大人批准俺去吃饭，俺老孙去也……”想起那时妈妈下班后，一看纸条，抿着嘴笑，说：“呵呵，这老头。”有些纸条内容比较单调，如：“晚安！衣服在床上，早点睡”之类的，有时爸爸有病号要晚回来，妈妈总会压上纸条：“亲爱的，辛苦了，睡个好觉吧！”当然也有妈妈有事外出晚回，爸爸留给她这样的纸条：“亲爱的，别太辛苦！我会心疼的！”……
有时，我也会问爸爸，有些东西放在那里一下就能看见，或者打个电话不是挺方便的，干什么要写纸条那么麻烦？爸爸总是笑着摸着我的头，“傻丫头，这不好吗？虽然是一张纸条，里面可盛着浓浓的亲情！”我似懂非懂地点点头。想想也是，每一次看到爸爸妈妈留给我的纸条，我总有一种暖乎乎的感觉……-
也是从那以后，我也学着爸爸妈妈，把想对他们说的心里话写在纸条上，然后压在电视机上。如今这一行为已成为我家独特的一道“美味大餐”，我们饶有滋味地品尝着，永不腻烦。当然，着手整理装订成册的“美差”被我抢先包揽了。
最夸张的是，竟然有两位同学在上课时间传天书，甜言蜜语满天飞，但是他们把纸条揉成纸球，打开后一整个皱皱的，根本就看不懂在写什么，这样的传递有意义吗？
传纸条也被利用在“作弊”上，这时答案飞来飞去，老师的警觉性也很高，一被抓到，考卷就算零分了。
我对他,总是带有几分惧怕的,他深凹的眼眶里, 仿佛流转着几十年的风风雨雨。有时,他抓住我的手,我便能摸到一道道的沟壑, 里面流着生命的长河。他是经历过抗日战争、“文化大革命”的人。他们这代人的苦,我们无法体会,可是我们这代人的心,他们又怎会理解呢?
大概的确是这样的,我同他讲学校里的趣事的时候,他一言不发地听着。我讲完,他皱着眉,淡淡地说一句:“搞好学习就够了,管这些没用的干吗。”从此,我便宁肯在日记本上诉说,也再不告诉他我的种种心事了。这次也不例外。
下课的时候我与一群同伴玩闹, 有一个男生指着我说:“她以后要当厨娘的。”那时候看美国的电影,厨娘基本上就是那类又胖又丑的女人,扮几个鬼脸,吆几声脏话。我听了这话, 看到周围的同伴都以一种同情的姿势站着,有几个靠过来挽过我的手, 张口欲说几句千篇一律的安慰的话。我讨厌这样。于是我一言不发地走开了。一整个下午,我都在等太阳落山。我感觉胸腔里一股火热的东西在滚动着,可我没人倾诉。眼眶里滚烫的液体呼之欲出, 可我拼命忍着。“今天晚上又要与日记本相守了。”我是这样想的。
于是一言不发地在夕阳下拖着长长的影子回家,一言不发地用冰冷的水洗手,一言不发地用筷子扒饭。祖父大抵是看出我的不同往常了,他瞅着眼前的一盘豇豆,漫不经心地问我:“你怎么了?”他的语气又温暖又严厉, 催得我的情感就要爆发。我连忙用眼皮噙住眼泪,也学着他漫不经心的样子:“没什么。”学得不像,我感觉自己的声音发抖了。又不敢与他对视, 便咬着嘴唇,很专注地用筷子挑拨一片青菜,却很清晰地感觉到有一道尖锐的目光在审问着我,过了一会儿,宛若聚光灯调暗了光线, 那目光又柔和起来。良久,他轻轻叹了口气, 又发出了筷子与碗边接触的声音。
我小心地抬了头,看祖父在专心地吃饭。鹅黄的灯光下他的白发在闪光,好像一群枯草, 凄凉而又无力。祖父的手有些发抖,这是好几年前的老病根了。我感觉他故意不看我,用眼睛瞟着别处,余光却又好几次闪烁地落在我身上,他极其认真地吃饭, 又好像在认真地思索一件凝重的事儿。他的鼻尖上沁着细密的汗珠, 细长的眉毛却勾勒出一张颓然的脸。这让我突然感到莫名的愧疚。我感觉祖父像一口井,从岸上看深不可测,谁又知道里头的波光粼粼。
这片刻的愧疚后, 我又兀自忧伤自己的忧伤。吃完饭,我借口到外面透透气,跑到街灯暗淡的地方偷偷抹了几把眼泪。
回家后,我便把自己关进小书房。打开文具盒, 却见一张纸片安详地卧着。是一张淡米色的信笺纸, 好像在岁月里泡过, 闻起来还有一股木香味儿。我想起来,在祖父的桌子上见过这种纸。打开,果然是祖父清秀的字迹:
“有委屈别忍着。人生难免苦难,你经历得还太少。放宽内心。爱你的人比恨你的多。”
寥寥几笔,没有署名。这就是祖父的风格。
第一句就表明态度, 不仅是对我饭桌上行为的不满,又给予我敞开内心的豁口。写到第二句,他一定是又怀想起自己的青葱岁月,差一点被抓起来批斗,差一点被饿死,差一点被压在“三座大山”下。可他立刻又抓回徜徉开去的思绪, 这第三句, 语气上是命令,情感上却是无尽的爱抚。显然,祖父不是一个会轻易说爱的人,可我知道,他是爱我的。第四句,他把自己归在“爱我的人”的队伍里,投来一个最明媚的微笑。这样的安慰,是我最愿意看到的,好像有声音,好像言已尽而意无穷。
小心地把纸条折回原状, 折成一只小船,流成思绪万千。这张纸条,拭干了我的眼泪,抚平了我的内心。想起那句“厨娘”的嘲笑,我不再忧伤了,人生的苦痛何其多, 这次无苦无痛,何必矫情落泪,泪水再多也浸不平嘲笑,而努力的硕果终将有一天闪亮每一个人的眼。
打开房门,祖父半倚半坐,见我出来, 从眼镜背后投来一道深邃的目光,我朝他笑笑,于是我第一次看到他如此高兴地笑了。窗外灯光闪进, 我注意到了他眼角的一道缤纷。但这一次, 我看出了缤纷背后那颗复杂的心。
文具盒里的纸条, 是我与祖父心的桥梁,是让我明朗的一味妙药。
回房,写日记,今天只写五个字:
祖父,我爱你。
推荐人语
作文有字数要求。
一般人急着把事说完,把话说完。唯恐字数不够。
说完了,就完了。
有想法的人,不如此。
如是叙事,自当注重细节;如是抒情,自当注重回旋;如是议论,自当注重层次。
这篇作文,格外留心细节。在别人忽略过去的地方,驻足逗留。泼墨如注,不厌其烦。
说完了,其实没完。
细节立人,立文。
小刚是学校里有名的“刺儿头”。他比同龄的孩子高大、健壮，也许就是仗着这个优势，小刚经常欺负同学，很多同学都怕了他。经常有被打伤的学生家长找到老师，要求严厉处罚小刚，甚至不愿让自己的孩子与小刚同班。然而，小刚依然“恶习不改”。上学期，小刚又与几个“混小子”将四年级的一个学生拖到墙角，打了几个耳光。之后，被打的学生家长找小刚的家长讨说法。不得已，小刚的父母赔给对方一千元，并狠狠地打了小刚一顿。谁知，小刚不但不痛改前非，反而越发疯狂了，这让老师们伤透了脑筋。
这学期，我担任小刚的班主任。开学的第三天，小刚就惹事了。他把一个同学推倒，磕破了同学的头。我及时把两边家长都请到学校来，商量解决办法，当然，重点是加强对小刚的教育管理。家长说，小刚从小就没少挨打，一犯错，父母轻则训斥，重则动用拳头、棍棒。家长认为，给他点苦头会让他记住教训，不再犯错。然而，令他们想不到的是，小刚竟然痛也不改前非，如今家长也无可奈何。
面对这样的情形，我决定变个策略。第二天，我趁学生上体育课的时候，将早已写好的一张纸条夹在了小刚的语文书里。第二天语文课上，小刚翻书时发现了纸条。他先是一怔，接着，表情缓和了下来，将纸条又夹进书里，开始认真学习。整整一节课，小刚竟然没做出任何违反纪律的行为来。我又找机会给小刚留了几张纸条。在后来的几天里，小刚变乖了，不乱打乱闹了，有时还能为别的同学伸张正义。一次，在打饭的时候，有一个学生插队，小刚看见了，走过去说了声：“回去！”那位同学一看是“刺儿头”小刚，就乖乖地回到了原位。这件事让同学们对他刮目相看，而其他老师也对小刚近期这180度的大转变颇感奇怪，问我用什么办法“降服”了他。我笑了笑，拿出了一摞纸条（为便于反思教育教学工作，写纸条时我已复制了一份），老师们争着看起来。只见纸条上写着：
小刚，你有英雄气概，是个小小男子汉。但真正的男子汉是不欺负别人，也不乱打乱闹的。你的背后有一双眼睛关注着你，希望你管好自己，多幫助同学，为班级做好事。——一个喜欢你的人。
小刚，看到你一点点改掉自己的坏习惯，我们高兴极了。你开始变了，我们爱你，也一直关心你。——一些喜欢你的人。
小刚，你真了不起！不但自己能管好自己，你还帮助别人解决困难。我们感谢你，也永远支持你！你是我们心中的小男子汉。——我们喜欢你！
……
“这就是你的方法？”老师们惊奇地问。
我得意地点了点头。
【反思】
小刚的行为方式与其所接受的家庭教育模式关系甚密。长期的批评和棍棒教育，一来伤害了小刚的自尊，使其产生了自暴自弃、玩世不恭的心理；二来父母的处理方式慢慢内化为小刚与人交往的法则，于是遇到不合心意的人或事便拳脚相向。然而，我相信人性中有一种巨大的动力，即渴望别人承认自己的重要性。一句“喜欢”，轻柔绵软，却胜过拳脚、棍棒。凭借爱与激励的力量，小刚重新找到了自我，找回了自尊，激发了上进的动力，产生了要做个大家喜爱的好学生的愿望。有了愿望才有行动，小刚终于展现了一个崭新的自己。
（作者单位：胶南市琅琊中心小学 山东青岛 266408）
老师叫我们在四张纸条上写上时间、地点、人物、事件，至于我写啥，保密，等下再告诉你。写好后，把纸条放进相应的袋子里，打乱之后请同学到上面抽取四张小纸条，组成一句话。
第一局抽纸条的是林淇，只见她慢慢地抽出来，慢慢地打开，似乎是想给比赛增加一点点悬念。忽然，她的眉头皱了起来，我在心里想：该不会是抽到自己了吧。果然，后面的现实全部说明了一切。她的脸涨得红红的，说：“3月28日，林淇在学校念鬼诗。”哈，自己说自己，厉害！全班同学笑了出来。
最精彩的要数第三局了。我奸笑着，想：嘻嘻，这次是谁呢？现实说明：凡是要看别人笑话的人，自己也会别人笑话。只听见老师大声说：“在一个黑黑的夜晚，林越在女厕所里吃方便面。”What。霎时，全班笑开了花，同学们有的捶着桌子，有的问我：“林越，方便面好吃吗？”我想：这真是天意弄人啊！句子里的“黑黑的夜晚”还是我写的，真是自作自受。我无奈，但在快乐的沉浸下，我也笑了出来，笑得连眼泪都流出来了。真是“一笑十年少，我和同学都要笑回妈妈的肚子里了”。
于是，我未经母亲允许就擅自从柜子拿出了二十元，买了那本书，一开始，我读的津津有味，天长日久，就感到不过瘾了。恰好这时，书店又进了一批新书，里面有我梦寐以求的故事书《花仙子》，或许是我被“仙子”迷了头，就又从柜子拿出了十元钱，买了“它”。
我暗自庆幸没被父母发现。但第二天待我又想拿钱买书时，却发现柜子里有一张纸条，我小心翼翼的把它抽出，轻声读了起来，读着读着，我羞得满脸通红。我把纸条保存了起来。
从此，我再也没有犯过类似的错误，当然，我也要感谢这张纸条，是它提醒了我，他将成为我永生的警示。
简评：一张纸条，是一种爱与宽容。
回到办公室，我疑惑地打开纸条，上面只有两行字：“老师，您不是告诉我们要‘见纸弯腰’吗？难道教室门口那張纸您没看见吗？”我一愣：刚才上课时，的确看到门口有一张纸，本来打算进教室后让学生捡起来，可一进门看见炉子没生着，忙活起来就忘了，真没想到，居然被这个细心的孩子尽收眼底了。
本来以为这件小事就这样过去了，可没想到，第二天，阳的作业本里又出现了一张小纸条：“老师：‘言必信，行必果’是您教我们的，可为什么您教育我们要做到的，您却没做到呢？”看着这短短的两行字，我的脸一阵阵发烫：是啊，我口口声声地教育孩子们要“见纸弯腰”，自己却对门口的纸熟视无睹；我义正词严地告诉学生作业的书写必须工整、规范，要谨记“提笔即是练字时”，自己却在黑板上龙飞凤舞；我三令五申不许学生上网、玩游戏，自己却在“QQ农场”中流连忘返……
1.1采集的动物尿液, 应保存在洁净、干燥、不含任何防腐剂的塑料杯或玻璃容器内, 静置并恢复至25℃左右。若不能及时进行检测样品, 可在2~8℃下保存24h, 长期保存应在-20℃以下冷冻保存, 忌反复冻融。
1.2打开检测试纸条包装铝箔袋, 取出试纸条, 在20~30℃下保持2~3min。
2检测操作步骤
2.1保持操作环境温度在20~30℃之间。
2.2将检测试纸条水平放置于干净的台面上, 用试纸条自带的一次性塑料管吸取澄清采集的动物尿液数滴, 垂直滴加于试纸条上的加样孔中。
2.3加入3~5min后, 待试纸条显色区域内出现紫红色条带后, 观察结果。
3检测结果判定标准
3.1试纸条显色区域内, 字母C附近出现紫红色条带 (C线显色) , 字母T附近出现紫红色条带 (T线显色) , 结果判定为阴性。
3.2试纸条显色区域内, 字母C附近出现紫红色条带 (C线显色) , 字母T附近未出现紫红色条带 (T线不显色) , 结果判定为阳性。
3.3试纸条显色区域内, 字母C附近出现紫红色条带 (C线不显色) , 视为试纸条已失效。
4检测时应注意事项
4.1如果采集的动物尿液混浊, 应不能直接操作, 须离心或静止后提取上清液, 在进行检测。尿液被污染或存在干扰物质, 会影响检测效果。
4.2检测操作时滴加尿液的滴数, 因不同品种试纸条而要求滴数不同, 应按照具体试纸条使用说明书使用。
4.3检测操作时, 须确保操作环境温度在20~30℃之间。当实验室环境温度过低时, 会影响试纸条显色颜色的深浅, 易造成假阳性误判现象。忌冬季在室外直接进行检测操作。
4.4检测试纸条最佳的反应时间, 一般为3~5min, 因不同品种试纸条的要求而不同, 应按照具体试纸条使用说明书使用。
4.5当试纸条外包装铝箔袋开封后, 试纸条应在1d内使用完毕。
4.6试纸条在使用过程中, 应避免阳光直接照射或空调、风扇直吹。
5检测试纸条的存储和运输条件
这个游戏的名字就叫写纸条。老师说完游戏名后，有些同学都高兴到从凳子上跳起来拍手叫到：“太棒啦!太棒啦!”
老师摆出一个食指顶着另外一只手的掌心说：“好啦!好啦!同学们安静。”顿时教室里鸦雀无声。
老师说：“现在我来讲一下写纸条游戏的规则。游戏规则：每位同学拿到一张彩纸。在红色的纸条上写“谁”;橙色纸条上写“什么时间”;白色纸条上写“在哪”;粉色纸条上写“在干什么”。各色纸条传上来，放在四个袋中。老师从袋中各抽一张叫一位同学来读。凑成一句符合实际意义的句子就鼓掌，不符合的就一笑了之切莫计较。”
游戏开始了，我得到的是粉色的，我写的是“喝酒”。然后老师叫付义建上来读，付义建回答：“公元前一百零一年猴子在浴室里偷看男生吃饭”。大家都捧腹大笑。
接着张老师叫到了我。我上台后从四个袋子中各抽出一张读道：“公元前三百年刘博文躺在德国马路上睡大觉”。这个读完后，同学们笑得前仰后翻，甚至有的摔在了地上。
这件事在我们班一传十、十传百，这个人收到了，给那个人看，那个人看到了，又传给下一个，柏榆阳把他的给我看，我看到了这些字，和我的内容差不多，上面写着：“你好!我是神秘人，你也可以叫我神秘精灵，我想和你谈一件事情，请今晚12点，你的学校见。”我和柏榆阳商量了一下，又把所有收到纸条的人都叫到一起，成立了一个侦探团，我是团长，柏榆阳是副团长，夏晟尹带着这五六个人，他们是侦查组，许梓涵、肖雨桐等人是信息获取的人兼我的助手，然后我还邀请了几位想象力丰富的同学又成立了一个想象组。
我给侦查组分配了一个任务，今晚12点一起到学校，弄清楚到底是谁写的信，明天把所有信息都告诉我。到了晚上，夏晟尹等人一起去了学校，但是校门是锁着的，忽然，校门开了，有一个人神秘地说：“你们好呀!”接着，一只小精灵飞了过来，他有一对尖尖的耳朵，轻薄的翅膀。
乳汁孕酮 (P4) 浓度的规律性变化是标示卵巢活动的一项生理指标，孕酮含量的连续监测可以为发情鉴定、早期妊娠诊断、人工授精效果监测、繁殖疾病诊断等提供依据。1958年，Short发现奶牛外周血浆中孕酮浓度的变化可以反映母牛所处的生殖状态。在此基础上，Laing J A等[1]首次利用孕酮的放射免疫测定法 (RIA) ，证实了乳汁P4的变化所反映的发情周期阶段与直检卵巢的评估结果一致。
传统的孕酮测定方法有RIA、酶免疫测定法 (EIA) 、乳胶凝集测定法 (ELISA) [2]，但由于对设备要求高、操作较复杂使其在生产中的应用和推广受到限制。胶体金免疫层析技术是20世纪90年代在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易、快速的免疫检测技术。胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程[3]，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。研究拟运用胶体金竞争法建立一种胶体金免疫层析试纸条，用于快速检测孕酮，为科学开展奶牛繁殖状态的监控及提高奶牛繁殖效率提供技术手段，以提高牛群繁殖效率和奶牛养殖的经济效益。
1 材料
1.1 主要试剂
P4-11α-半琥珀酸酯，购自Fitzgerald公司;N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) ，购自联星生物;二甲基甲酰胺 (DMF) ，购自天津市百世化工有限公司;1, 3-二环己基碳化二亚胺 (DCC) ，购自上海市科丰化学试剂有限公司;氯金酸 (HAuCl4·H2O) 、牛血清白蛋白 (BSA) 、卵清白蛋白 (OVA) ，均购自Sigma公司;羊抗小鼠IgG，购自武汉博士德生物工程有限公司，均由天津商业大学生物技术与食品科学学院实验室提供。
1.2 主要仪器
格兰仕微波炉、恒温磁力搅拌器、日本岛津紫外分光光度计、日立H-7650透射电子显微镜、Eppendorf低温高速离心机、Millipore超纯水仪、酶标仪 (Thermo) 、点膜机 (美国Bio-Dot公司) 、切条机 (美国Bio-Dot公司) ，均由天津商业大学生物技术与食品科学学院实验室提供。
1.3 试验动物
Balb/c小鼠，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。
2 方法
2.1 完全抗原制备
取P4-11α-半琥珀酸酯5 mg，将其溶解在10 m L DMF试剂中，取NHS 8.94 mg和DCC16.02 mg分别溶于0.1 m L DMF中，将以上3种DMF溶液按100∶16.7∶16.7的比例混合，室温搅拌90 min。称取BSA 160 mg溶于10 m L PBS溶液中 (pH值7.0) ，加入上述混合液，4℃搅拌过夜;用0.1 mol/L NaHCO3溶液透析4 h，去离子水透析5 h，最后用PBS溶液 (pH值7.4) 透析平衡，透析完毕后离心30 min，取上清液，即得偶合物P4-BSA (完全抗原) ，测定抗原浓度。按同样的程序制备P4-OVA (检测抗原) 。
2.2 动物免疫及抗体纯化
首次免疫，每只小鼠颈背部多点皮下注射完全弗氏佐剂乳化的浓度为1.0 mg/m L的P4-BSA0.2 m L，第2次和第3次免疫加等量的不完全弗氏佐剂，第4次不加佐剂直接腹腔注射，每次间隔4周，免疫期间剪尾采血，以未免疫的健康小鼠血清作为阴性对照，PBS为空白对照，检测抗血清效价。抗血清采用Protein G亲和层析柱 (按说明书操作) 进行纯化，用0.2 mol/L甘氨酸 (p H值2.7) 洗脱，收集的抗体溶液立即用1/10体积的1.5 mmol/L Tris-HCl (pH值9.0) 中和至中性，透析过夜，测定抗体浓度。
2.3 胶体金的制备
用超纯水溶解氯金酸，终浓度为0.1 g/L。沸水浴将氯金酸溶液煮沸后，每100 m L加入1%柠檬酸三钠2.5 m L，沸水浴下快速搅拌，直至氯金酸溶液颜色稳定，继续沸水浴10 min。冷却至室温，用透射电镜镜检并用分光光度计检测颗粒均匀度及粒度。最后置于冰箱4℃保存，备用。
2.4 最适标记蛋白量的确定
用0.2 mol/L的K2CO3溶液将胶体金溶液调至pH值为8.2，分别加入胶体金溶液1 m L于试管中。将P4-BSA抗体逐级稀释后，各取等体积稀释液按顺序加入上述试管中，另设一不加抗体的对照管。放置10 min，在各试管中加入10%NaCl溶液0.1 m L，混匀后静置2 h。观察各试管中胶体金溶液变化，未加蛋白及加入量不足的溶液颜色由红色变蓝色，而加入蛋白量达到或超过的溶液则保持不变。标记蛋白量为在最低稳定胶体金溶液不变色的蛋白量基础上再加20%蛋白量。
2.5 胶体金探针的标记
取胶体金100 m L，用0.2 mol/L的K2CO3溶液将胶体金溶液调至p H值为9.0;缓慢加入P4-BSA抗体溶液425μL，缓慢搅拌10 min;加入BSA，使其最终浓度为1%，再搅拌10 min;加入5%PEG 200001.0 m L, 1 500 r/min离心15 min;取上清液，以9 000 r/min离心60 min;弃上清液，沉淀用0.01 mol/L的PBS溶液 (pH值8.2，含1%BSA, 0.02%NaN3) 悬浮;4℃保存，备用。
2.6 胶体金免疫层析试纸条制备
试纸条由玻璃纤维膜、硝酸纤维膜、加样纸、吸水纸组成。将玻璃纤维膜裁成6 mm的细条，然后放入含1%BSA的PBS液中浸泡30 min, 37℃烘干，最后将胶体金探针灌注到已处理好的玻璃纤维膜上，真空干燥，备用。在硝酸纤维膜上用点膜机将P4-OVA和羊抗小鼠IgG喷成2条线，分别为检测线和对照线，经真空干燥后，用1%BSA、0.01 mol/L PBS (pH值9.0) 封闭2 h，以0.01 mol/L PBS洗涤，真空干燥。将30 mm吸水纸、25 mm硝酸纤维膜、6 mm玻璃纤维膜、15 mm加样纸由顶部依次粘于PVC板上，裁成细条，备用。
2.7 检测与判读
样品:将已知浓度P4样品溶液分为10组，第1组为2.56μg/m L P4，第2组为1.28μg/m L P4，第3组为0.64μg/m L P4，第4组为0.32μg/m L P4，第5组为0.16μg/m L P4，第6组为0.08μg/m L P4，第7组为0.04μg/m L P4，第8组为0.02μg/m L P4，第9组为0.01μg/m L P4，第10组为0.005μg/m L P4;同时设3个对照组，第11组为PBS溶液，第12组为水，第13组为阴性牛奶。将加样纸一端插入待测液，湿润后取出，水平放置3～5 min，观察结果。试纸条硝酸纤维膜上仅对照线呈1条红色带，为阳性;出现2条红色带，为阴性;质控线不出现紫红色带，无论检测线是否出现，测试结果均无效。
3 结果
3.1 P4-BSA和P4-OVA抗原合成
采用紫外分光光度法测定蛋白的浓度，将P4-BSA和P4-OVA作100倍稀释，测定其在280 nm、260 nm处的吸光度值。测定P4-BSA抗原的浓度为11.1 mg/m L, P4-OVA抗原的浓度为4.5 mg/m L。
3.2 P4-BSA抗体制备
经紫外分光光度计测量其浓度为1.42 mg/m L。
3.3 胶体金制备
试验选用的胶体金颗粒直径约为15 nm，胶体金分光光度计扫描结果显示主峰宽度较小，研究表明，制备的胶体金颗粒较均匀，λmax为518.50 nm (见图1) ，其粒度约为15 nm。将胶体金溶液进行透射电镜扫描，可以看见胶体金颗粒为单分散系，且大小均匀，质量较好，结果比较理想。
3.4 最适标记蛋白量
经测定最适标记蛋白量为5μg/m L。
3.5 试纸条组装与检测
试纸条的组装结构见图2。试验以完全看不见检测线为最低检测限。将P4-11α-半琥珀酸酯标准品配制成0.005, 0.01, 0.02, 0.04, 0.08, 0.16, 0.32, 0.64, 1.28, 2.56μg/m L 10个标准溶液，用上述检测方法进行检测，最低检测限为40 ng/m L (见图3) 。
4 讨论
检测小分子物质大多采用免疫层析法中的竞争法，一般灵敏度在20～200 ng/m L，用孕酮水平诊断孕牛的检测限值有不同的报道[4,5,6]，研究采用纯化多抗标记胶体金，制成快速诊断试纸条，最低检测
值为40 ng/m L，具有较好的灵敏性，操作方便快捷。
胶体金颗粒的大小直接决定了金颗粒吸附蛋白以及检测结果的显示，颗粒大小由制备胶体金时加入的柠檬酸三钠量决定，柠檬酸三钠量越多，胶体金颗粒也越多，但颗粒直径越小;反之胶体金颗粒越大。研究中胶体金颗粒大小为15 nm，具有较佳的蛋白吸附和显色能力。
奶牛早期妊娠诊断是改善奶牛饲养管理、提高繁殖率的一项重要措施。传统的诊断方法有RIA、EIA、ELISA，我国在孕酮免疫原合成和孕酮抗体的制备以及RIA、ELISA等方面的技术已逐步成熟，但由于操作步骤比较复杂需要专业设备以及技术人员等原因至今未能得到广泛的推广使用。试验研制的奶牛孕酮检测试纸条可直接取牛奶进行检测，操作简便，3～5 min即可得出结果，是一种理想的奶牛妊娠早期孕酮水平的快速检测方法。
摘要：为了及时、准确地诊断母奶牛妊娠状态, 研究建立了奶牛孕酮 (P4) 胶体金免疫层析法的快速检测技术。先制备完全抗原 (P4-BSA) , 用其免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体, 抗体经亲和纯化后测定其浓度。采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒直径为15 nm的胶体金, 以P4-OVA和羊抗鼠二抗分别作为检测带和质控带包被在硝酸纤维素膜上, 将金标记抗体喷涂在玻璃纤维垫上, 制成免疫层析快速检测试纸条, 通过可见的颜色显示检测样品中孕酮状况。结果表明:试纸条法的奶牛孕酮最低检测限为40 ng/mL, 检测时间为3～5 m in, 适用于奶牛妊娠早期孕酮水平的快速检测。
关键词：奶牛,孕酮,胶体金
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有一天上午第四節课，是班主任王老师的课。他教我们语文，戴着一副眼镜，古诗词基本功很好，能将随便一首诗词，分析得鸟语花香、春光灿烂，让我们沉浸其中，难以自拔。
可是，他有一个缺点。他把班上的女生男生看得忒紧，不许我们走得太近，不许有恋爱迹象，用他的话说：“豆子大的娃娃，好好读书。”
那天上课时，他正在滔滔不绝地讲课，眼睛突然一斜，马上停下了，然后快步走到我面前，伸出手说：“拿出来！”我红了脸，悄悄把手中那张没来得及打开的纸条揉成团，丢到地上，左顾右盼，假装不知道他说的是什么意思。他俯下身子，拾起那个纸团，严肃地对大家说：“这是吴晓蒙给周至的纸条。”吴晓蒙是我的同桌，周至就是我。
他转身问同学们：“这样的纸条被发现该怎么办？”大家听了，异口同声地回答：“读！”
他打开来看，眉毛一挑，瞪大了眼睛。同学们都起哄道：“读，读。”他咳嗽一声，字正腔圆地读起来：“周至同学你好，你的英语那么棒，能教一下我吗？我特别想考上重点高中。”
他读完，大家都不说话了，望着我们俩。
“不是我们想象的那么回事。”他叹了口气，“看来，是我想错了，把同学们的关系想得太复杂了。现在，我得向他们道歉。”说完，他真的向我们道歉了。接着，他号召全班同学向吴晓蒙和周至学习，同桌之间组成学习小组，互相帮助，共同进步。而且，他当场预言，吴晓蒙同学和周至同学有如此认真的学习态度，一定能考上重点高中。
全班同学听了，都鼓起掌来。他笑着把纸条随手装入衣兜，也跟着鼓起掌。
以后，我们班的同学整日挤在一起，叽叽喳喳地讨论着学习，如一群鸟儿。我和吴晓蒙，竟然成了大家效仿的对象。我们当然不甘落后，不只是因为我们成了大家的榜样，更因为，王老师在课堂上为我们打了保票，说我们一定能考上重点高中。那年，我们班考得出奇的好。我和吴晓蒙都如愿以偿考上了重点高中。临走，王老师拿出那张纸条，悄悄还给了我。纸条上写着：周至，我很喜欢你，你呢？
我小时候就特别喜欢看书。有一次，我经过一家书店，看见了一本我最喜欢的书——《笑猫日记》，我摸了摸自己的口袋，没有一分钱，我只好失望地回家了。
回到家，我灵光一现，跑进妈妈的卧室。妈妈有一个柜子，里面装着许多纸币和硬币，于是，我打开了柜子。
我的一只手慢慢地伸进了柜子里，这时，我的另一只手抓住了那只掏钱的小手，好像在说：“不行，这样就成了小偷。”掏钱的小手却不甘示弱，好像说：“就拿一点点，没事的，下不为例。”一番纠结之后，最终，我拿了十元钱。
我来到书店，买到了自己梦寐以求的书，津津有味地看了起来。
一天过去了……三天过去了……妈妈似乎没有发现我偷钱买书的事，我松了一口气。就这样，一个星期又过去了。
有一天，经过书店，我又看见了一本新出的《笑猫日记》，我又打起了买书的念头。
我回到家，再次来到妈妈的卧室，又像上次一样，打开柜子。就在我掏出十元钱的一刹那，我看见了一张纸条。我拿上纸条和十元钱，走到桌子旁边坐下来，打开纸条一看，上面的那一行字让我呆住了，那上面写道：孩子，妈妈相信你不是那样的人……
顿时，我的心里七上八下，感到十分愧疚。我再次回到柜子前，把那十元钱放了进去，关上柜门。我拿着那张小纸条回到自己的房间，又盯着上面的那行字看了一会，然后把它放进了一个精美的盒子里。
“我，我……只考……考了81分。”看着妈妈急切又期待的`眼神，我结结巴巴地说。
“什么!最近怎么搞的，只考了这么几分!”妈妈的脸瞬间来了个晴转阴，两眼直冒火光。她咬牙切齿，像马上要撕碎我手中的试卷一样。
我害怕极了，连忙辩解道：“这次试卷难，连班长都只考了90分呢。”
“那你为什么不是90分呢?难道她比你多一个脑袋?你脑子到底在想什么……”妈妈的问题犹如一把被激怒的chongfeng枪，一个接一个地向我打来，使我无回击之力。
我红着眼睛跑回了房间，心中充满了委屈。
晚上，我睡了，迷迷糊糊中感觉有人进来给我盖被子。早上醒来，一张纸条放在我床头，上面写着：“对不起，宝贝。是妈妈不好，我不该向你发脾气，请原谅。早餐在锅里，自己拿，小心烫。新的一天要更加努力哦。爱你的妈妈。”
长期以来，β-内酰胺类抗生素被广泛地应用于人和动物疾病的防治，尤其是在治疗牛乳房炎方面具有显著疗效。但抗生素通过乳牛机体的血液在一定时间内残留于生牛奶中，如果不正当使用或者没有遵守奶牛停药期规定，将会造成抗生素在乳制品中的残留，如若经常饮用含有抗生素残留的牛奶，相当于长期间接地吸收低剂量的抗生素，致使人体内病原菌对多种抗生素产生耐药性，从而造成免疫力降低。
因此，我们有必要建立一类准确、快速、简便的β-内酰胺类抗生素检测方法，以保障人类健康和维护正常的进出口贸易。由于试纸条法具有灵敏度高、检测时间短、准确度高、易贮存、携带方便、可进行现场操作等特点，因而成为牛奶中违禁抗生素筛查时的首选产品。本文主要研究了β-内酰胺类抗生素中常见的几种药物如青霉素G、氨苄青霉素、阿莫西林、苯唑青霉素、邻青霉素、双青霉素、萘夫西林、头孢哌酮、头孢曲松、头孢噻呋、头孢洛宁和头孢喹肟的试纸条分析检测。
1 材料与方法
1.1 试验材料
牛奶样品购自市场;β-内酰胺类各种抗生素标准品购自美国Sigma公司;β-内酰胺类抗生素快速检测试纸条购自北京某生物技术有限公司;微量移液器购自美国Thermo公司。
1.2 试验方法
1.2.1 试样制备
阴性牛奶样品：取空白牛奶样品任1份5 m L，置于50 mL塑料瓶中，再分别加入适量β-内酰胺类各种抗生素标准品，配制浓度分别为0和β-内酰胺类试纸条检测限下限的1/2，混匀备用，现配现用。
阳性牛奶样品：取空白牛奶样品任1份5 mL，置于50 m L塑料瓶中，再分别加入适量β-内酰胺类各种抗生素标准品，配制浓度分别为β-内酰胺类试纸条检测限下限和检测限下限的2倍，混匀备用，现配现用。
1.2.2 试纸条的使用步骤
用微量移液器吸取200μL待检牛奶样品溶液于微孔中，缓慢抽吸且充分与微孔中的试剂混匀。将试纸条插入微孔中(印有“MAX”线的一端朝下)，充分浸入溶液中。室温(20～25℃)孵育5 min后，取出试纸条观察颜色，判定结果。
1.2.3 结果判定
如果C线和T线都显色，无论颜色深浅，均表示牛奶样品中β-内酰胺类抗生素浓度低于检测限，为阴性结果;如果C线显色，T线不显色，表示牛奶样品中β-内酰胺类抗生素浓度高于检测限，为阳性结果;如果未出现C线，表明操作过程不正确或试纸条已变质失效(如图1)。
1.2.4 检测阈值的测定
用β-内酰胺类试纸条分别对添加各种抗生素的阴性牛奶、阳性牛奶进行检测，每个样品作2个重复，记录每种抗生素呈现阳性的最低浓度值。如果检测限下限浓度的阳性牛奶样品不呈现阳性，则根据检测限(检测限有下限和上限的，则在检测限内选择更高的浓度进行检测)配制浓度更高的阳性牛奶样品进行检测，直至出现阳性结果为止。
1.2.5 假阳性率的测定
取空白牛奶样品50份，每份10 mL，按照1.2.1阴性牛奶样品的制备方法，制备B1、B2、B3、……、B50等100份阴性牛奶样品。对阴性牛奶样品用试纸条检测，每个样品作2个重复，统计假阳性数，按照下面的公式计算假阳性率。
1.2.6 假阴性率的测定
取空白牛奶样品50份，每份10 mL，按照1.2.1阳性牛奶样品的制备方法，制备B1、B2、B3、……、B50等100份阳性牛奶样品。对阳性牛奶样品用试纸条检测，每个样品作2个重复，统计假阴性数，按照下面的公式计算假阴性率。
2 结果
用β-内酰胺类试纸条对该类12种抗生素进行了检测限、假阳性率、假阴性率验证，结果如表1所示。
3 讨论
3.1 本试验的检测阈值基本在检测限范围内，因此可以判定，试纸条检测限指标合格。同时由于每一批次抗体存在质量上的差异，所以在制定检测限时，采用了以一个浓度范围作为检测限的方式。
3.2 检测限即试纸条对样品所能检测出来的最低浓度值。当检测阈值与试纸条标示的检测限相符时，该试纸条为合格;当其小于检测限时，则会导致假阳性检测结果的出现;当其大于检测限时，则会导致假阴性检测结果的出现。目前，国内外对于快速检测技术的一个基本原则是：绝不能有假阴性，但允许有假阳性。按照农业部兽药残留专家委员会“试剂盒备案参考评判标准”，快速检测试纸条的假阳性率应小于10%。
摘要：本研究通过验证β-内酰胺类抗生素快速检测试纸条的检测限、假阳性率、假阴性率等三个质量参数,证明此类试纸条的检测阈值与检测限一致,没有假阴性结果出现,假阳性率在国家规定范围内。说明该试纸条具有可靠性,并且能快速、方便地检测牛奶中的抗生素残留,验证牛奶质量,保证检测结果有效。由此证明,β-内酰胺类抗生素试纸条可用于牛奶中12种β-内酰胺类抗生素的检测。
关键词：β-内酰胺类抗生素,牛奶,快速检测试纸条
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