微生物学检验基本技术

微生物学检验基本技术（共8篇）

微生物学检验基本技术 篇1

作者：苏德模出版时间：2012年5月

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第一篇 微生物学检验基础

第一章 细菌的基本性状 第二章 真菌的基本性状 第三章 病毒的基本性状 第四章 微生物与感染

第五篇 药物抗菌作用的测定

第一章 药物抗菌作用测定法 第二章 抗生素微生物检定法

第三章 防腐剂及消毒剂效力测定

第六篇 微生物制剂检验与GMP的微生物学检测技术

第一章 微生物制剂检查法

第二章 空气洁净度的微生物检测技术

第二篇 微生物学检验基本技术

第一章 细菌检验技术 第二章 真菌检验技术 第三章 病毒检验技术

第四章 细菌对抗菌药物的敏感试验 第五章 动物实验技术

第七篇 药品微生物学实验技术

第一章 微生物学基本操作技术第二章 消毒与灭菌

第三章 微生物实验室常用仪器第四章 微生物的形态学检查法第五章 培养基

第六章 微生物的生化试验第七章 常用血清学试验

第三篇 无菌检查

第一章 灭菌制剂的无菌检查 第二章 生物制品的无菌检查法

第四篇 微生物限度检查法

第一章 药品微生物限度标准第二章 供试品、供试液的制备第三章 细菌计数

第八篇 药品微生物检测分析技术 第四章 霉菌数及酵母菌数测定

第五章 大肠埃希菌检查法第一章 微生物镜检及染色技术 第六章 沙门菌检查法第二章 微生物接种、分离、培养技术 第七章 志贺菌检查法第三章 微生物菌种保藏技术 第八章 肠杆菌科及某些革兰阴性菌检查法第四章 制药过程微生物控制技术 第九章 金黄色葡萄球菌检查法葡萄球菌属简述第五章 药品微生物检测方法验证技术 第十章 铜绿假单胞菌检查法第六章 药品无菌检测技术 第十一章 梭菌检查法第七章 药品微生物限度检测技术 第十二章 药品染螨的检验法第八章 药品中螨类检测技术 第十三章 产毒真菌及真菌毒素的检验 第九章 药品中细菌内毒素检测技术

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中国医药科技出版社2012年6月出版豪华精装烫金版（上下册）定价：690.00元

微生物学检验基本技术 篇2

1 制定适合医学检验技术4年制的教学大纲并 选择合适的教材

医学检验技术专业培养的目标是培养具有良好的思想品德和高尚的职业道德,具备医学检验技术的基本理论知识和技能,拥有终身学习能力和良好的职业素养,能适应经济和社会发展需要的,有能力在各级医院、教育、防疫等部门从事医学检验、医学实验室技术、 富有实践能力和创新精神的复合型人才。根据这一目标和要求,制定出了新的《临床微生物学检验》教学大纲,把重点内容放在掌握常见的病原微生物的检验程序和方法、掌握药敏试验方法、检验报告的解读、指导临床合理使用抗菌药物上。教材暂时选择人民卫生出版社倪语新等主编的《临床微生物学检验》第5版,这本教材的重点内容落实在微生物的检验上[1]。目前微生物专家正在积极组织一班人员,编写新的人卫版教材,如果正式出版,内容比较合适的话可以考虑换新的教材。

2 理论教学的创新

2.1 以点带面的教学模式

临床微生物检验涉及学科范围广、内容繁琐、知识点众多,可大纲安排该门课的学时数又不多,理论学时通常在50学时左右,如何利用有限的学时把教材内容更好的传授给学生?很多教师讲课喜欢面面俱到, 讲课语速过快,学生思维跟不上,对上课失去兴趣,通常是打瞌睡或低头刷微博。作者所在教研室根据《临床微生物学检验》的特点,同时结合临床需要,选择所要讲授的内容,采取“抛砖引玉”的教学模式[2],也就是在授课过程中,挑选临床分离率比较高的细菌作为重点讲授的内容,同一类别的细菌略讲或不讲,由学生课后自学,教师采用提问的方式来考察学生是否达到自学的目的,由点及面,促使学生能全面掌握该教材的内容。

2.2 围绕病种进行特殊的微生物讲解

大部分教师喜欢按照课本内容进行微生物学检验的理论教学,而这种教学模式通常以菌种性质来分类进行系统学习,往往偏向医学微生物的基础知识,重复的教学内容很容易让学生失去学习兴趣,而这种按照教科书内容来讲解的教学模式又与临床关联不大。建议把教科书有关联的章节与临床标本结合来讲解,围绕病种进行微生物的检验[3]。以临床大便标本培养肠道致病菌为例,先讲述大便培养的临床意义,肠道致病菌感染的临床症状,大便培养的临床路径:临床症状疑似肠道感染→粪便标本收集→挑选可疑的粪便进行常规筛选→涂片大便常规检查、接种麦康凯平板、血平板、SS平板、CIN平板、CCFA平板、TCBS平板、碱胨水等培养基培养→挑选可疑菌落→微生物的检验→其他特殊检测方法筛查。最后详细进行结果判断,具体分析各种肠道感染菌如沙门菌、志贺菌、小肠结肠耶尔森菌、艰难梭菌、弯曲菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等的性质、检测方法和临床意义。此种教学模式的改革,不是将一种单纯菌株放在那儿让学生来做验证性实验,而是还原了目前检验科微生物室如何将病人大便标本进行分离培养和鉴定这一操作过程,将微生物基础知识和临床标本的培养更好地结合到一起,有利于学生认识和理解做微生物的培养鉴定是与病人的标本紧密联系一起的,同一份标本培养的目的不同,所要选择的培养基就不一样,最后鉴定病原微生物的操作流程也不一样。根据病种进行相关微生物内容讲解,一方面把微生物基础知识进行了串解;另一方面加强了学生临床实践能力,同时也达到了把学生培养成为理论与临床相结合成为综合性人才这一目的。

2.3 启发式教学

长期以来高校一直处于教师是教育者,学生是受教育者的状态,教师讲学生听,在教学活动中学生只能被动地接受教师的教育,课堂气氛沉闷,学生思维受到极大的压抑,从而失去了学习的主动性和创造性。启发式教学就是采用诱导式办法传授知识,培养学生积极主动、自觉地参与到专业课的学习中,养成自主学习的能力,营造不断创新的学习环境,创造一个和谐愉悦的课堂氛围,使其创新能力得到充分发挥。达到的效果就是让学生变为主体、教师为主导,学生积极主动参与到课堂的学习中来,诱发学生的创新潜能。启发式教学对于教师的要求就是两个“转化”:把知识转化为学生的具体知识,再进一步把学生的具体知识转化为能力。教师的主导作用表现在这两个转化上,例如在学习肠杆菌科这一章节时,首先要让学生弄清楚肠杆菌与非发酵菌、弧菌科、巴斯德菌的区别,然后再用葡萄糖酸盐和苯丙氨酸脱羧酶两个关键的实验把肠杆菌科区分开,最后鉴定到种,让学生熟悉肠杆菌科鉴定的操作流程,然后把这一流程运用到肠杆菌科鉴定的综合性实验当中,实现把知识转化成能力的过程。

2.4 加强与临床沟通能力

在医疗实践中,微生物检验与临床抗感染治疗之间关系非常密切,临床医师希望发出的检验报告是一份诊断报告,对临床治疗有实际的指导意义,因此从事微生物检验的工作人员和临床医师应该经常进行交流与沟通。重视学生与临床医护人员之间的沟通能力, 是培养一名优秀的临床检验师所必需的素质,就今后医疗行业发展的趋势来看,注重是单病种多学科联合会诊中心的诊断、学科之间交叉越来越紧密,这就要求从事检验的人员更多参与到临床科室对疾病的诊断当中。但从目前的情况来看,这方面的交流还远远不够。 为此,重视学生的综合素质培养,提高学生人际沟通能力是大学生素质教育必不可缺少的一方面。通过特殊的培养与临床医师沟通是职业素质培养的一方面,教会学生多与抗感染医生进行沟通,与临床医师对于微生物检验相关病例进行沟通,通过沟通,可以了解临床医师对该疾病的预期判断、疾病的进程以及用药后的疗效。与临床医师沟通的方法有多种,可以直接参与到病案讨论会诊中,可以就标本取样的时间、取样的部位、需做厌氧培养是否采用了运送培养基等方法与临床医生沟通、也可以在血培养出现阳性报警时就危急值报告与临床医师进行什么疾病、用过什么治疗方法等沟通,这些信息可以给学生选择合适的培养基、以及后续细菌的培养鉴定提供新的思路。学生就可以快速、及时、准确地把检验报告发送到临床,让临床医师真正认识到学生发送的报告是诊断报告,而不是垃圾报告。

3 实验教学的创新

3.1 加强基本操作技能的训练

五年制的医学检验专业转化成四年制的医学检验技术专业,从专业的转化过程来看,今后四年制的学生要重视实验操作技术。而实验技能训练,不仅是基本功的训练,也是科学素质的训练,必须从严抓起。在实验教学中,把学生实验基本操作基本技能的训练放在首位,如革兰染色、抗酸染色、墨汁染色、细菌的分离培养、各类生化反应结果的判断等,这些基本操作,贯穿微生物学检验学科实验教学全过程,是所有实验规范化操作的基础。因此,要求学生对每一个基本操作步骤,都应该按照实验操作的规范化流程来做,特别要强调无菌操作技术,在带教数年过程中发现学生对无菌操作概念观念淡漠、学生没有意识到不按照无菌操作技术来做,很可能导致最终的结果错误,给临床治疗带来很严重的后果。因此,每次微生物实验时都要强调无菌技术、标准化地操作流程,目的是让学生全面熟练掌握这些基本操作技能。

3.2 增加综合性实验

无论是以前的五年制,还是今后的四年,《临床微生物学检验》实验教学中,都没有按照《临床微生物学检验实验指导》的内容来进行实验,实验指导中都是给出某一个具体的菌株,让学生进行验证,实际上就是一个验证性实验,因为为同一种菌株,所以学生结果都一样,不利于调动学生的积极性。在微生物实验教学中, 开设的是综合性设计性实验。如开设了球菌的鉴定、 肠杆菌科的鉴定、非发酵的鉴定、真菌的鉴定几大板块,每一个实验每位学生的菌株都不一样,要求学生根据革兰染色的结果设计后面的鉴定流程。以非发酵鉴定为例,确定革兰阴性杆菌之后,要做KIA、OF、动力、 氧化酶实验与肠杆菌科、弧菌科、巴斯德菌科区分开, 然后根据菌落、菌体特点设计微量管进行生化鉴定,或者做API 20NE鉴定条鉴定,或到检验科做VITEK 2进行全自动化细菌鉴定,学生设计好方案后让教师过目,教师根据学生的方案提问为什么这样做,有问题的方案教师会提出建议,剩下的问题学生自己实施方案进行鉴定。开设综合设计性实验能充分调动学生的积极性,综合性实验只给出实验目的,学生自己预先设计实验路径,选择实验器材,到达实验目的,使学生真正成为实验的主角,提高学生独立设计、独立实验的能力。同时综合性设计性实验还具有实验内容较为丰 富,实验方法较为多样,实验形式较为灵活等特点,给学生提供了极大自由发挥的空间,培养了学生的创造性思维能力。

3.3 “临床标本“进课堂

在实验教学工作中,就地取材,把医院检验科的临床需要做病原菌培养的标本拿来作为实验教学标本。 如:血液、痰、脑脊液、尿液、粪便等各类体液或分泌物标本的细菌学检验。这些标本有些是临床病人的标本,有些是带教教师模拟制作的。用临床标本或临床模拟标本进行实验,则有利于调动学生的思维积极性, 传统实验课往往为了减少标准菌株在培养分析过程中因不典型反应带来理论与实验结果不匹配的现象,教师常常对标准菌株增菌分纯培养后再用分纯的单个菌落进行实验,虽然实验结果与课本上的菌株符合程度高,但不利于调动学生的积极性,学生经常处于被动依赖状态,教师怎么说,学生就怎么做。现在用模拟标本给学生进行操作实验,让其有进入临床实习操作的感觉,需要学生思考,考虑应该按怎样的步骤进行,选择什么样的培养基等,使学生的思辨能力由被动变为主动思考,让其思考能力及动手的积极性得以充分发挥; 学生多动脑勤动手,教师则积极互动,解决学生在实验过程中遇到的问题,帮他们分析当实验结果与理论结果不符时是什么原因造成的,是不是有些菌株在用药的过程中发生了变异等;使学生尽力发挥自己的理论与实验操作水平,这样既有利于建立学生参与临床的成就感,又有利于增强学生进一步深入学习知识的信心。临床实验标本能使学生快速适应临床实习,由于学生在校时既然多次接触“真”标本,而且是启发式、互动式教学,所以学生记忆比较深刻,故其进入临床实习阶段能很快地适应工作。

3.4 安排学生到医院见习

检验专业培养的学生以后是要到临床上工作的, 他们面临的是患者的标本,通过对病人的标本进行处理,进行分离培养及鉴定,最后把准确的结果发到临床科室,给临床医生提供治疗的依据,要求每一个检验人员要有很强的责任心,对发出的检验报告负责。而传统的教学模式是封闭式的,课堂教学安排的内容有限, 并且这样培养出的学生责任心不强,缺乏生物安全意识。无菌操作贯穿整个微生物检验实验中,虽然教师每堂实验课一再强调每一步的操作都要有无菌意识, 但学生依旧不以为然,无菌操作意识淡薄,标本不被环境和操作者污染是试验成败的关键,虽然学生最后都有毕业实习,但是在上课的过程中能够适当安排学生到医院进行见习,带学生到医院检验科细菌室参观,利用医院检验科先进的检测设备和技术优势培养他们, 向他们展示微生物全自动鉴定系统及自动药敏检测系统拓宽学生的视野,使学生收获课堂上学不到的东西。 另外临床上面临的是从患者的标本中分离到的病原微生物,学生为自身安全考虑会格外注意生物安全,在课堂上不容易培养的生物安全意识通过见习就轻松的得到解决。临床检验工作人员处理标本时标准化的无菌操作技术及认真负责的工作态度可以培养学生的无菌操作意识,增强学生的责任心,为将来培养优秀的临床检验工作者奠定基础。

3.5 改变实验考核方式

考试是检查教学质量的重要手段,考试形式对学生的学习态度、方法以及教学效果有着重要的导向作用。临床微生物学检验是一门操作性很强的专业核心课程,教学计划中微生物学检验实验课与理论课的比例为4:5,今后还有增加的可能性,最好能达到1:1的比例,因此实验课的考核成绩占总成绩的比重也应当相应提高。教研室将实验课成绩的比例提高到40%, 在这40%里面,平时成绩和实验报告各占10%,综合性实验考试占20%,平时成绩除包括学生能否按时上课外,还应加上平时在课堂上布置的思考题,以及每次实验课上对学生动手能力的评估[4]。综合性实验考核调整为:给学生一块带有菌落的平板,让其根据菌落特点,自己选择一些相应的实验来判断出该细菌的名称, 教师依据该学生实验选择的正确性、规范化操作水平、 以及最后的结果综合评定该学生的实验考试成绩。通过以上做法,极大激发了学生学习的积极性,培养了学生严格认真的科学态度,实事求是的工作作风,增强了责任感,提高了学生观察、发现和独立分析问题的能力。

4 结语

高职食品微生物检验技术教学改革 篇3

关键词:食品微生物检验技术;高职教学;因材施教

食品微生物检验技术与食品理化检验、食品感官检验构成食品检验工的三大技能板块,是食品检验工作岗位群的职业素质基础之一。因此,食品微生物检验技术课程是高职食品类专业的职业技术核心课和专业基础课,是食品检验工国家职业资格考试中的主要内容之一。本课程具有很强的实践性、实用性和技能性,而且高职教育强调根据学生的学习特点进行教学,特别强调教学内容的实用性,以便学生走出校门就能适应工作岗位的需求。因此,在本课程的教学过程中要避免探索适合高职教育的教学方法。

高职教育是个系统工程,涉及学生的情商、智商以及习惯的改造,特别注重理论与实践的结合以及学生实践技能的培养。笔者在食品微生物检验技术这一课程的教学过程中进行了初步的探索和实践,获得了较好的教学效果,就此进行经验总结,抛砖引玉。

一、明确教学目标,模块化整合教学内容

食品微生物检验技术涉及面非常广,教学内容由多个知识点组成,这就要求教师必须非常清楚教学内容的详略点,精心把握教学内容,才能引导好学生。根据食品微生物检验的国家标准和实际工作的岗位需求,笔者认为,食品微生物检验技术是应用微生物学的理论和方法,检测食品中的菌落总数、大肠菌群及致病菌。为进一步确定这门课程的知识、技能和素质三个层次上的教学目标,具体来说,要求学生学完这门课程后,要达到的知識目标是:明白是什么(认识微生物的类群与形态)、怎么样(理解微生物营养与生长)、为什么(了解微生物对食品、食品工业及人体健康的影响)和怎么做(理解国内外食品微生物一些重要标准,理解食品微生物检验的基础知识);技能目标是能够出具一份合格的食品卫生学检验报告,能够“检得了、检得出、检得准、检得快”;素质目标是在生活、工作和职业生涯三个方面的素质有显著提高,转变日常生活中的卫生习惯,增强食品质量和安全观念,形成严谨、求实、耐心、细心的检验工作作风。

课程内容可以设置一系列案例或模块进行整合,使学生掌握微生物检验的基本原理和技术。一是让学生设计实验,判定未知菌革兰氏染色结果是否正确,引导学生灵活掌握微生物形态学知识和革兰氏染色技术,并且使学生意识到实验方案设计的严谨性;二是让学生对一种食品进行栅栏因子分析,可以使学生理解微生物生理学知识、掌握影响微生物生长的理化因素,将知识转化为能力;三是让学生判定平板上的单菌落是否纯,培养并设计实验验证,可引导学生掌握微生物培养的方法,并且理解微生物分离纯化和无菌操作的原理。

实训实验也可模块化设计:基本技能的训练及验证性等基础实验可设计为基本技能模块;综合性、设计性实验可启发学生,促其思考,由此锻炼其发现问题、研究问题、解决问题的能力,真正将所学知识融会贯通,这部分可设计为技能发展模块;研究性实验需要学生熟练掌握微生物基本知识和技能,可针对部分学有余力的学生,作为兴趣模块。

二、尊重学生差异,改进教学方法

一般认为,高职学生不大适应系统性的、理论性的学习,对较抽象的理论学习普遍有困难,而且高职学生知识积累有限,独立思考、自我学习和解决问题能力相对比较差;缺乏学习主动性和自觉性,业余活动丰富,自我约束能力不强;容易受短期目标驱动;中学阶段所养成的视考试分数为“命根”的观念较根深蒂固。高职学生存在的这些现象给我们的启示是:教师可以通过及时反馈学习效果,让学生慢慢由“不知道自己不知道”转变到“知道自己不知道”,如此可较好地满足他们追求短期目标的心理,增强学习目标性和自主性。且理论学习效果的反馈可以通过及时公布平时的作业成绩来实现,实践技能学习效果的反馈可以通过实验操作过程中的巡检点评和实验报告来反映,教师也可以利用网络平台在班级QQ群公布平时成绩、小组实验成绩等。

高职学生在写作业和实验报告中常见的问题是缺少思考,抄袭现象严重。解决这一问题可以通过量化的方法来避免,即教师要事前告诉学生判罚规则:两个同学的作业或报告,一句话中有连续七个以上的字相同,就可以判定为抄袭,作业成绩需判为最低等级。并且,要求在写作业和实验报告时,凡是在书上和网络上摘抄的文字必须简洁,鼓励学生用自己所掌握的术语、行话来准确描述、分析和解答问题,要让学生们清楚,工作岗位需要的是会思考的人。

三、采用挫折教学法,强化实验训练技能

学生在这门课程的实训实验中常见的问题就是不愿意动手,眼高手低。实际上每个操作都具有丰富的知识内涵,需要学生多动手才能深刻体会。针对学生这些问题,除了强调要进行技能考试之外,还需要合理安排实验内容。因此,我们安排了标准溶液细菌、真菌总数计数和标准溶液中大肠菌群计数这两个独立的实验,并且最后一次实验安排的是综合实训:要求学生检查一种食品产品中的细菌数、真菌数和大肠菌群数。最后一次实验是前面所有技能的综合练习,学生即使失败,也有重新再来的机会。这也是学生经历“挫折—反思—提高”的一个过程,通过“理论—实践—再理论—再实践”的循环,激发学生掌握知识的渴望,强化学生对技能的理解和掌握,让学生体会到经过自己努力后,尝到成功的乐趣,看见自己的进步。

四、开展团队合作,促进生生互助

高职院校一般是大班上课,40人一个班,就实际情况来看,高职院校教学资源基本比较紧张,每次实验都是大班开课、多人一组,一般3人一组进行实验,教师很难同时注意到实验室中每位学生的表现,也不利于培养学生的动手能力。针对这一情况,我们开展了团队活动,借助麦肯锡的“高效团队”构建方法,即:为数不多的成员、互补的技能、共同的业绩目标、相互承担责任,采取小组实验成绩代替个人成绩的方法,每次实验采取小组实验结果和业绩的方式来进行考评,促使团队成员相互提醒、协作,有效提高了团队各成员的学习效果。

(作者单位:中山市火炬职业技术学院)

参考文献:

[1] 中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会.食品卫生微生物学检验[S]. 中华人民共和国国家标准 GB/T 4789.2004.

[2] 罗雪云, 刘宏道. 食品卫生微生物检测标准手册[M]. 北京:中国标准出版社, 1995.

[3] 朱宏飞. 微生物教学中激发学生兴趣的几点探索[J].微生物学通报,2007,(1).

微生物学检验基本技术 篇4

1改革之见

1．1五段教学法

本校对实践技能中的基本操作技能采用经典的五阶段教学法，即准备→教师示教→学生模仿→练习→总结。学生规模为30人以下。

（1）准备阶段：教师首先介绍此次实验课所要学习的操作方法及其应用；展示本次实验所需的工具及其用途，从而调动学生学习的积极性。

（2）教师示范阶段：教师首先按照实验操作步骤，完整示范整个操作过程，然后将操作过程分解为若干个步骤，边示范边解释如何做，为什么这样做。

（3）学生模仿阶段：随机指定几名学生或某些学生自愿模仿教师的操作，学生在模仿过程中会出现一些不规范地操作，待学生操作结束后，首先肯定其在尝试中的成绩，然后指出其在操作中的错误之处并解释，教师再次完整规范地示范操作过程。

（4）练习与总结阶段：让学生各自独立进行实验过程的操作练习。学生在操作过程相互观摩，相互指正。教师巡回观察结果，待学生操作结束后，对学生的实验结果进行逐个评价，肯定其成绩，指出不足。操作情况作为技能操作的平时成绩进行记录。最后与学生共同讨论本次实验的成果。

1．2讲学练同步法

微生物学各论内容，如病原性球菌、肠道杆菌等内容采取讲学练同步教学法，收到很好效果。这种教学方法使理论、实验融为一体，教师讲授的同时学生直接观察实物标本并进行操作，学生动手时间充足，保证了学生观察、分析、判断结果的时间。讲学练同步教学避免了理论实验分离、实验课重复理论知识、学生动手时间少、时间仓促结果观察不仔细、一些学生放弃结果观察等诸多弊端。

1．3项目教学法

项目教学法属于综合能力培养方法，是师生通过实施一个完整的“项目”工作而进行的教学行动。课程组结合微生物学检验技术课程的实际，制订项目教学方案，学生规模为30人以下，每4～6人为一个学习小组。此教学法一般要求：制订项目任务→确定学习时间→制订该项目教学目标→指出学生学习的相关知识→制订完成项目的工作计划→组织项目实施→评估反馈。

1．4实际操作法

对操作性较强的内容，如细菌革兰染色、细菌接种技术、培养基制备等，由教师演示操作步骤，讲授注意事项，学生利用实习实训时间反复练习，教师巡回指导，肯定取得的成绩，指出不足，耐心解答，并进行阶段性考核。

1．5案例教学法

由于微生物学检验，尤其是细菌学各论及检验的内容多而杂，并且每种细菌形态特点、生化反应、生长特性等既有相同和相似之处，还有不同及特殊之处，虽然理解容易，但却不容易记忆，而且枯燥无味。引入临床微生物学病例分析，学生首先接触到的是患者及病例，课堂讨论以病例为中心，教师预设几个问题，给学生以悬念，再将学生每4～6人分为小组，展开讨论，进行分析，可使临床微生物学检验各论内容变得生动，缩短了理论与实际应用的距离，为培养临床微生物检验人才夯实了基础。

1．6问题讨论法

细菌学各论及检验的实验课常常需要做许多鉴定试验，如细菌的生物化学试验、血清学试验，学生以小组为单位（每组4～6人）进行实验，讨论分析实验现象，记录结果，每组1名同学将结果和结论写在黑板上，发现错误，可随时进行更正。教师评价各组结果时，对该组的同学进行提问。讨论情况与参与程度记入平时成绩。

1．7临床见习法

临床见习是《微生物学检验》教学过程中理论联系实际的重要阶段，不仅积累了丰富的实践操作经验，同时将所学的基础理论密切联系临床实际，提高了学生学习的积极性，有助于培养学生分析问题、解决问题的能力。在进行教学安排的过程中，计划12学时的时间，按照教学进程，分3次让学生利用3个上午的时间在医院微生物室集中进行临床见习，感受岗位氛围和工作环境，了解工作程序。

2意义

2．1避免了教学方法单一、枯燥

传统的教学方法是教师先讲授理论，实验课上将实验内容讲的面面俱到，实验用品放在学生面前，学生只需在教师指导下按部就班，得出结果，容易养成不预习，不思考的习惯，学生学习兴趣不高。

2．2弥补了理论与实践教学的脱节

根据医学检验技术专业的特点，在教学时间的安排上采取灵活编排，并非按照常规以2～3个学时为教学单位安排课程，而是将课程安排一个上午或一个下午，全部在实验室进行，教师可根据教学内容的不同，有计划、科学合理地安排教学，可先讲理论，再做实验，或先做实验，再归纳理论，也可边讲理论边做实验，也可利用一个上午到医院微生物检验室临床见习。

2．3调动了学生学习的兴趣

学生在学习知识技能的过程中，能运用所学知识解决问题，获得表扬、鼓励，同时能力得到大家的肯定与赞赏，体验到了学习的乐趣，使之积极参与到学习中，激发了学习的积极性。

2．4培养了学生的技能水平，发挥了学生的主体作用

革新后的教学方法不仅使学生学到了扎实的理论，实验技能水平得到极大提高，熟悉了微生物检验的`基本流程，同时分析问题、解决问题的能力也得到了提高。通过教师教学方式的改变，改变以往学生被动接受知识的局面，学生带着问题，耳、口、眼、手、心全面参与学习的全过程，独立思考，相互交流，充分展示自己的才华，发挥自己的个性特长，从而成为学习活动的实践者，成为学习的主体。

2．5提高了课堂教学效果

微生物学检验基本技术 篇5

·

C、无特殊病原体动物

D、清洁动物

E、普通动物

7、近交系动物是实验研究中常用品系，其特点不包括（）。A、由兄妹交配繁殖20代以上而形成B、没有固定的遗传学特征

C、实验敏感性一致

D、实验结果重复性好

E、应用最广泛的是纯系小鼠

8、悉生动物是（）。A、无菌动物

B、无菌动物引入已知细菌

C、清洁动物

D、突变动物

E、无特殊病原体动物

答案部分

一、A1

1、【正确答案】 B 【答案解析】 它除了适用于血培养外，还可用于其他无菌部位标本如脑脊液、胸水、腹水和关节液等的细菌和真菌培养检测。

【答疑编号100786649,点击提问】

2、【正确答案】 E 【答案解析】 在选择实验动物时，可以不考虑动物的颜色。【答疑编号100786648,点击提问】

3、【正确答案】 E 【答案解析】 根据实验的目的动物的接种有皮内注射、皮下注射、肌内注射、静脉注射、腹腔注射、脑内注射、脚掌（垫）接种。

【答疑编号100786647,点击提问】

4、【正确答案】 D 【答案解析】 实验动物死亡后，应及时解剖和微生物学检验。到期未死的动物，通常亦应麻醉后剖验。【答疑编号100786646,点击提问】

5、【正确答案】 B 【答案解析】 悉生动物是给无菌动物引入已知5～17种正常肠道菌丛培育而成的动物。【答疑编号100786645,点击提问】

6、

·

【正确答案】 A 【答案解析】 无菌动物无论体表或肠道中均无微生物存在，并且体内不含任何抗体。【答疑编号100786644,点击提问】

7、【正确答案】 B 【答案解析】近交系动物是一般称的纯系动物。此类动物是指采用兄妹交配（或亲子交配）繁殖20代以上的纯品系动物。

【答疑编号100786643,点击提问】

8、【正确答案】 B 【答案解析】 悉生动物是给无菌动物引入已知5～17种正常肠道菌丛培育而成的动物。【答疑编号100786642,点击提问】

食品微生物检验技术分析以及发展 篇6

随着科技和知识水平的进步,食品微生物检验技术向着更加全面与完善的趋势进行。目前对食品微生物检验的主要内容为污染指示菌和致病菌,而检验的技术已经在传统检验方法的基础之上有所提升。食品微生物的污染是由多种原因造成的,包括出产的环境和原料中菌落的数量等。绝大多数的食品都含有一定数量的有害微生物,只要保证其在安全值以内,这些微生物就不会对食品造成负面影响。而如何检验这些微生物以及未来的发展趋势将是本文的研究重点。

食品微生物检验内容

检验污染指示菌

第一,对食品中同一菌落的细菌总数以及所有菌落的细菌总数进行检测,方法为对食品和生活饮水取样后处理,经过相应条件的培养之后,取1 cm3的样本进行检测,判断食品和生活饮水的污染程度。

第二,对食品样本进行环境培养,温度为37℃,时间为1 d,如果发酵后产生了乳糖和气泡以及兼性厌氧无芽孢菌,则证明样本中含有大肠菌群系,这种细菌主要来自于人和牲畜的排泄和排遗产物,因此常以粪便的培养指标评价食品的卫生状况。

检验致病菌

对于致病菌的含量,我国早已做出明确的要求,当超过标准时,就判定该食品的卫生状况不符合要求。在研究食品的卫生要求时,除了对指示菌进行检测之外,还要对致病菌进行检测,例如金黄色葡萄球菌和沙门菌等常见致病菌。

食品微生物检验技术

电阻抗法

当对细菌进行培养时,它们会在繁殖的过程中产生大量的碳水化合物、蛋白质和脂类物质。因此,对培养基内的这些物质进行检测,通过检测结果计算食品内细菌的含量,由此就可以判断食品是否符合卫生标准。细菌代谢所产生的上述物质均具有电活性,并且均为小分子物质。因此,通过对培养基进行导电处理,测量导电后的电阻数值,就可以基本计算出细菌代谢产物的含量,进而计算出细菌的数量。当然,此方法具有一定的局限性,只能用于对部分细菌的含量进行检测。例如霉菌或大肠杆菌等细菌。

快速酶触反应法

细菌在生长和繁殖时,往往会合成并释放较为独特的酶,例如各类抗生素的主要成分。而不同细菌所释放的酶具有不同的特性。因此,通过对菌落产生的酶进行检测就可以判断该培养基内的菌落成分和细菌种类。最常用的工具是微生物测试片,该工具具有方便、快速的优势,并且能够准确测定细菌总数。

借助仪器法

常用的仪器有两种:微型全自动荧光酶标分析仪和全自动微生物分析系统。微型全自动荧光酶标分析仪采用敏感性很强的检测设备,并运用了特异性的酶联荧光技术,所得荧光数据和抗体中的抗原含量呈正比;全自动微生物分析系统可以同时分析数十个乃至数百个样本,功能非常强大,并且,检测鉴定只需耗时3 h以内,效率极高。

食品微生物检验的发展趋势

代谢学技术

新陈代谢是生命的本质,每种生物都具有自身独特的新陈代谢特点。因此,利用代谢学技术可以非常准确地测定食品样本中的微生物种类及含量。代谢学主要研究食品中的微生物在培养基内繁殖之后的产物,该产物会对培养基的成分乃至状态、外观都产生一定的改变。现在普遍运用的电阻抗法和快速酶触反应法都是代谢学技术所涵盖的范围。因此,通过进一步提升代谢学的相关理论研究和技术水平,就能发展更多、更有效、更快速的检验方法。

抗体检测法

这是当前比较常用的检测方法,目前已经趋近于完善,因此该技术将在不久的将来发挥更重要的作用。根据检测的原理,抗体检测法分为酶联免疫吸附法和乳胶凝集反应法两种。酶联免疫技术有利于识别免疫检测法的特异性,而乳胶凝集反映的原理是吸附聚集抗原体和大颗粒的乳胶。

免疫检测技术

此技术是以免疫学理论为基础,融合抗原体特异性的理论对抗原体进行识别和结合反映。由于抗原分子的质量较高,人们就可以利用这些大分子作为载体,结合小分子合成抗原,以此测定食品微生物的含量和类型。

分子生物技术

分为核酸探针技术和聚合酶链式繁育技术。前一检验技术利用了脱氧核糖核苷酸分子中的碱基特异性,后者则利用不同细菌在遗传物质上的不同,通过基因探针技术进行检测。

结语

微生物学检验基本技术 篇7

[关键词] 微生物；食品；检验

文章编号：1004-7484（2014）-03-1756-02

微生物污染造成的食源性疾病仍然是世界食品安全中最突出的问题[1]。目前，已经有很多致病菌和水源致病菌。由食源性致病菌，如沙门氏菌、埃希氏大肠杆菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、李斯特氏菌等引起的病例越来越多。由于食品微生物污染的广泛发生，严重影响人民的健康，因此食品微生物检验工作对评价食品卫生质量，保证消费者饮食卫生有着极为重要的作用，并且研究特异性更强、灵敏度更高、简便快捷的食品安全检测技术和方法，建立和完善食品安全微生物检测技术和体系迫在眉睫。为了更好地开展食品微生物检验和调查研究工作，提高食品的卫生质量，保证消费者饮食安全，本文对微生物的检验技术在食品检验中的研究动向进行详细的介绍。

1 微生物检测技术在食品检验中的特点

1.1 食品微生物检验的范围较广包括 ①引起食品腐败变质的微生物；②经食物传播的病原微生物，是人类疾病病原微生物、畜禽疫病的病原微生物、人兽共患传染病病原微生物。这几类微生物可达数百种；③食品工业微生物，如酿造发酵工业用霉菌酵母等曲种、保健食品中双岐杆菌、乳酸菌等。在食品微生物检验中，采集样品极为重要。因此采样品必须有代表性。

1.2 食品微生物检验需要准确、快速。

1.3 食品中微生物检验具有数量观念。诊断食物中毒仅作定性试验是不够的，还需对致病菌定量检验。

1.4 因为食品中待分离的细菌较少，而杂菌有相对的比较多，所以对待检验的细菌的检验工作就有比较大的干扰。

1.5 对食品中的微生物检验有一定的法律性质。

2 微生物检测在食品检验技术的应用

2.1 电阻抗技术 ①电阻抗法：电阻抗法是近年发展起来的一项生物学技术，已经开始应用于食品微生物的检验[2]。②微量生化法。人们增加了对细菌快速检验的要求，所以高精度和高重现性试剂就有了飞速的发展。现在常用的MICRO—ID、API等。③快速酶触反应及代谢产物的检测。快速酶触反应是根据细菌在生长繁殖过程中可合成和释放某些特异性的酶，根据酶的特性，选用相应的底物和指示剂，反应的测定结果有助于细菌快速诊断。④放射检测技术。

2.2 采用分子生物学技术 其又包括两种技术：

2.2.1 核酸探针技术 根据碱基互补的原则，用特定的方法测定标记物。其优点是①特异性；②敏感性。但探针检测技术中也存在一定的问题，如检测一种菌就需要制备一种探针；要达到检测量还要对样品进行一定时间的培养；探针检测是分析基因序列，对毒素污染的食品有时因样品中不含产毒菌而无法检测。

2.2.2 聚合酶链式反应（PCR）技术 其原理为通过加热使双链DNA经裂解成两条单链，成为引物和DNA聚合酶的模板；然后降低温度，使寡聚核苷酸引物与DNA分子上的互补序列退火。一般情况下退火温度越高，扩增特异性越好。测定PCR产物的方法较多，如凝胶电泳法、比色测定法及化学发光测定法等。

2.3 采用仪器法 ①流式细胞术（FCM）。用流式细胞仪对细胞悬液进行自动快速定量分析和分选的新技术，根据FCM检测到的荧光强度强弱与DNA片段的大小成比例，根据荧光浓度的就可以知道细菌的DNA指纹图谱，从而确定细菌的种类。②全自动微生物检测法。其优点在于全自动操作，所有样品的结合、洗涤、基质读数及报告说明等都是全自动操作；快速测定，可以同时对60-480个样品进行分析，并且鉴定时间只需2-3h，这是效率非常高的一个检验系统，并且也是今后食品微生物检验技术发展的一个方向。③ATP生物发光法。ATP生物发光法快速，甚至可以将细菌计数时间缩短至几分钟[3]，操作简便、灵敏度高，具有其他微生物快速检测方法不可比拟的优势，曾被称为是检测环境中微生物最方便可靠的方法[4]。④免疫磁性微球。这种技术不仅仅只在医学领域方面得到应用，在食品微生物的检验方面也能见到。由于食品的样品检验多为固液混合体，所以采用常规方法很难将少量的微生物提取出来。⑤电阻电导检测器。这种方法的工作原理是当细菌进行繁殖时，将蛋白质、各种糖类等大分子物质分解成氨基酸、有机物等相对小一些的物质，在就培养液的电导度进行一定的改变，这样，根据电阻和电导度的变化，就可以计算出被检验样品的含菌数是多少。

总之，我们在对食品微生物检验时要遵守职业道德，严谨科学态度，注意各个环节来确保微生物检验数据的准确性，为食品卫生和安全提供可靠的依据。并且随着现代技术的发展，今后食品微生物检验技术的发展方向会是：①采用快速和大批量的检验方法，来提高检验效率；②形成标准化的实验条件；③提高和保证检验的精度和灵敏度。

参考文献

[1] 王云国，李怀燕.食品微生物检验内容及检测技术[J].粮油食品科技，2010.3.

[2] 张洁梅.食品微生物检验技术的研究进展[J].现代食品科技，2005，21（2）：221-222.

[3] 舒柏华，孙丹陵，王胜利，等.肉类食品细菌污染生物发光快速分析技术研究[J].中国公共卫生，2003，19（4）：483-484.

食品微生物检验的一般流程 篇8

食品微生物检验是一门应用微生物学理论与实验方法的一门科学，是对食品和微生 物的存在与否及种类和数量的验证。众所周知，在生物科学中，微生物学是一门实践性 最强的学科之一，它有一套自己独特的研究方法。要学习好微生物检验，必须具有医学 微生物学、兽医微生物学、食品微生物学、传染病学、病理学等学科的基础，要了解食物中毒的临床症状和流行病学，熟悉各种致病菌的生物学特性；掌握各种致病菌、霉菌 和病毒的检验程序。

食品微生物检验的一般步骤，可按图1的程序图进行，此图对各类食品各项微生物 指标的检验具有一定的指导性。

一、检验前准备

(1)准备好所需的各种仪器，如冰箱、恒温水浴箱、显微镜等。

(2)各种玻璃仪器，如吸管、平皿、广口瓶、试管等均需刷洗干净(121℃20min)或干法(160℃一170℃，2h)灭菌，冷却后送无菌室备用

(3)准备好实验所需的各种试剂、药品，做好普通琼脂培养基或其他选择性培养基，根据需要分装试管或灭菌后倾注平板或保存在46℃的水浴中或保存在4℃的冰箱中备 用。

(4)无菌室灭菌；如用紫外灯法灭菌，时间不应少于45mln，关灯半小时后方可进入 工作；如用超净工作台，需提前半小时开机。必要时进行无菌室的空气检验，把琼脂平板暴露在空气中15min，培养后每个平板上不得超过15个菌落。

(5)检验人员的工作衣、帽、鞋、口罩等灭菌后备用。工作人员进入无菌室后． 实验没完成前不得随便出入无菌室。

二、样品的采集与处理

在食品的检验中，样品的采集是极为重要的一个步骤。所采集的样品必须具有代表 性，这就要求检验入员不但要掌握正确的采样方法，而且要了解食品加工的批号、原料 的来源、加工方法、保藏条件、运输、销售中的各环节，以及销售入员的责任心和卫生 知识水平等。样品可分为大样、中样、小样三种。大样指一整批，中样是从样品各部分 取的混合样，一般为200g小样又称为检样，一般以25g为准，用于检验。样品的种类 不同，采样的数量及采样的方法也不一样。但是，一切样品的采集必须具有代表性，即 所取的样品能够代表食物的所有成分。如果采集的样品没有代表性，即使一系列检验工 作非常精密、淮确，其结果也毫无价值，甚至会出现错误的结论。

取样及样品处理是任何检验工作中最重要的组成部分，以检验结果的准确性来说，实 验室收到的样品是否具代表性及其状态如何是关键问题。如果取样没有代表性或对样品 的处理不当，得出的检验结果可能毫无意义。如果根据一小份样品的检验结果去说明一 大批食品的质量或一起食物中毒的性质，那么设计一种科学的取样方案及采取正确的样 品制备方法是必不可少的条件。

(一)食品微生物检验的取样方案

采用什么样的取样方案主要取决于检验的目的．例如用一般的食品的卫生学微生物 检验去判定一批食品合格与否；查找食物中毒病原微生物；鉴定畜禽产品中是否含有人 兽共患病原体等等。目的不同，取样方案也不同。

1．食品卫生学微生物检验的取样方案

目前国内外使用的取样方案多种多样，如一批产品采若干个样后混合在一起检验，按 百分比抽样；按食品的危害程度不同抽样；按数理统计的方法决定抽样个数等等。不管 采取何种方案，对抽样代表性的要求是一致的。最好对整批产品的单位包装进行编号，实 行随机抽样。下而列举当今世界上较为常见的几种取样方案。(1)ICMSF的取样方案

国际食品微生物规范委员会(简称IcMSF)的取样方案是依据事先给食品进行的危

害程度划分来确定的，将所有食品分成三种危害度，I类危害：老人和婴幼儿食品及在 食用前可能会增加危害的食品5E类危害：立即食用的食品，在食用前危害基本不变5a 类危害：食用前经加热处理，危害减小的食品。另外，将检验指标对食品卫生的重要程 度分成一般、中等和严重三档，根据以上危害度的分类，又将取样方案分成二级法和三 级法。

①二级法：设定取样数n，指标值m，超过指标值m的样品数为c，只要c＞o，就 判定整批产品不合格。

⑧三级法：设定取样数n，指标值m，附加指标值M，介于m与M之间的样品数c。只要有一个样品值超过M或C规定的数就判整批产品不合格。具体使用方法见表1。

(2)美国FDA的取样方案

食R9D药品管理局(FDA)的取样方案与IcM5F的取样方案基本一致，所不同的是严重指标苗所取的15、30、60个样可以分别混合，混合的样品量最大不超过375g。也就是说所取的样品每个为100g，从中取出25g，然后将15个25g混合成一个375g样品，混匀后再取258作为试样检验，剩余样品妥善保存备用。

(3)世界粮农组织(FAo)规定的食品微生物质量

1979年版FA()食品与营养报告中的食品质量控制手吩的微生物学分析中列举了各 种食品的微生物限量标准，由于是按ICMsF的取样方案判定的，所以在此引用，见表2。

2．食物中毒微生物检验的取样

当怀疑发生食物中毒时，应及时收集可疑中毒源食品或餐具物、粪便或血液等。

3．人畜共用病病原微生物检验的取样

当怀疑某一动物产品可能带有入兽共患病病原体时，应结合知识，采取病原体最集中、最易检出的组织或体液送实验室检验。

(二)食品微生物检验采样方法

按照上述采样方案，能采取最小包装的食品就采取完整包装按无菌操作进行。不同类型的食品应采用不同的工具和方法：

①液体食品，充分混匀，用无菌操作开启包装菌盛样容器。②固体样品，大块整体食品应用无菌刀具和镊子从不同部位割取，割取时应兼顾表面与深部，注意样品的代表性，小块大包装食品应从不同部位的小块上切取样品，放入无菌盛样容器。④冷冻食品，大包装小块冷冻食品按小块个体采取，大块冷冻食品可以用无菌刀从不同部位削取样品或用无菌小手锯从冻块上锯取样品，也可以用无菌钻头钻取碎屑状样品，放入盛样容器。

②④所述食品取样还应注意检验目的 需检验其品质情况，应取探部样品。⑤生产工序监测采样： 若需检验食品污染情况

a．车间用水：自来水样从车间各水龙头上采取冷却水；汤料等从车间容器不同部位用100mL无菌注射器抽取。

b．车间台面、用具及加工人员手的卫生监测：用5cmz孔无菌采样板及5支无菌棉签擦拭25cm2面积《若所采表面干燥，则用无菌稀释液湿润棉签后擦拭，若表面有水，则用下棉签擦拭，擦拭后立即将棉签头用无菌剪刀剪入盛样容器。

c．车间空气采样：育接沉降法。将5个直径90mm的普通营养琼脂乎板分别置于车间的四角和中部，打开乎皿盖5min，然后盖盖送检。

(三)食品微生物检验的样品处理

样品处理应在无菌室内进行，若是冷冻样品必须事先在原容器中解冻2℃一5C不超过18h或45℃不超过15min。

一般固体食品的样品处理方法有以下几种：

1．捣碎均质方法

将100g或100g以上样品剪碎混匀，从中取25g放入带225mI稀释液的无菌均质杯中8000r／min一10000r／min均质1min一2mm，这是对大部分食品样品都适用的办法。

2．剪碎振摇法

将100g或100g以上样品剪碎混匀，从中取25g进一步剪碎，放入带有225mL稀释液和适量45mm左右玻璃珠的稀释瓶中，盖紧瓶盖，用力快速振摇50次，振幅不小于40cm。

3．研磨法

将100g或100g以上样品剪碎混匀，取25g放入无菌乳钵充分研磨后再放入带有225mI无菌稀释液的稀释瓶中，盖紧盖后充分摇匀。

4．整粒振摇法

有完整自然保护膜的颖粒状样品(如蒜瓣、青豆等)可以直接称取25s整粒样品入带有225mL无菌稀释液和适量玻璃珠的无菌稀释瓶中，盖紧瓶盖，用力快速振摇50次，振幅在40cm以上。冻蒜瓣样品若剪碎或均质，由于大蒜素的杀菌作用，所得结果大大低于实际水平。

5.胃蠕动均质法

这是国外使用的一种新型的均质样品的方法，将一定量的样品和稀释液放入无菌均质袋中，开机均质。均质器有一个长方形金属盒，其旁安有金属叶板，可打击塑树袋，金属M L板由恒速马达带动，作前后移动而撞碎样品。

三、样品的送检与检验

(1)采集好的样品应及时送到食品微生物检验室，越快越好，一般不应超过3h，如果路途遥远，可将不需冷冻的样品保持在1℃一5℃的环境中，勿使冻结，以免细菌遭受破坏；如需保持冷冻状态，则需保存在泡沫塑料隔热箱内(箱内有干冰可维持在0℃以下)，应防止反复冰凉和溶解。

(2]样品送检时，必须认真填写申请单，以供检验入员参考。

(3)检验人员接到送检单后，应立即登记，填写序号，并按检验要求放在冰箱或冰盒中，并积极准备条件进行检验。

(4)食品微生物检验室必须备有专用冰箱存放样品，一般阳性样品发出报告后3d(持殊情况可适当延长)方能处理样品；进口食品的阳性样品，需保存六个月方能处理，每种指标都有一种或几种检验方法，应根据不同的食品、不同的检验目的来选择恰当的检验方法。本书重点介绍的是通常所用的常规检验方法，主要参考现行国家标准。但除了国标外，国内尚有行业标准(如出口食品微生物检验方法)，国外尚有国际标准(如FAo标准、wHo标准等)和每个食品进口因的标准(如美国FDA标准h日本厚生省标准、欧共体标准等)。总之应根据食品的消费去向选择相应的检验方法。

五、结果报告

样品检验完毕后，检验人员应及时填写报告单，签名后送主管人核章，以示生效，并立即交给食品卫生监督人员处理。第五节食品微生物检验染色法