自我鉴定 工作自我鉴定材料（推荐15篇）
*同志鉴定材料
**同志,现任***房管所副所长,自2004年6月始挂职任**街办**村支部副书记。
一、主要表现
1、思想政治方面:善于理论联系实际,能够站在讲大局的高度,服从安排,团结同志,深入群众，把负责的工作开展得有声有色。在做好本职工作的同时,该同志还多次协助支部书记组织村两委人员、全村党员干部进行政治理论学习 ,促进了村干部思想政治素质的提高。
2、工作能力方面:该同志勤于学习、善于总结,能够在较短时间内快速适应农村工作,把握住工作重点,掌握农村工作的方式、方法,表现出良好的个人素质、较强学习能力和较高的组织协调能力。
3、工作实绩方面：该同志不计个人得失，踏实肯干，取得显著成绩。（1）在招商引资工作上，坚持与村企办主任一道,深入企业和企业老板交朋友,通过他们引进了***有限公司等5有潜力、税收好的企业。
（2）在党建工作上，组织了全体党员干部学习了“两个条例”和《行政许可法》等党的方针、政策以及法律、法规，提高了村干部依法行政意识；积极参与村党支部书记公推直选工作和村委会换届选举工作，坚持与村两委干部一起,不辞辛劳,加班加点的做好选举的各项工作，确保了选举顺利推进。（3）在为民办实事上，**同志作为区房管局下属单位干部,多次与房管局领导积极联系,使**村各项工作得到了房管局的大力支持。特别是在**路的整治上,区房管局专门为拨款10万元,建设选材区,对皮材一条街实行选材、经营分离;种植1700余棵行道树,对道路进行美化,大大改观了**路的面貌,也改善了沿路群众的生活环境。
（4）在其它工作上，一是指导村城管办规范收费行为，做到专款专用；二是组织村老协会员开展了丰富多彩的文体活动；三是对村农房工作进行指导，并与农房员深入村民小组开展工作，受到了干部群众的好评。
二、存在的缺点和不足
工作上某些方式、方法与农村工作不适应,希望进一步改进。中共***街办党工委
东磁股份有限公司开发的永磁锶钡铁氧体料粉、超低损耗DMR47材料、N52烧结钕铁硼永磁材料、DM4229永磁锶铁氧体料粉、DMR60锰锌铁氧体高频低损耗材料五只产品通过省级新产品鉴定。
永磁锶钡铁氧体料粉突破了常规工艺, 采用了新材料和先进的自动化工艺, 和常规产品相比更具价格优势。DMR47材料的试制成功, 打破了日本TDK公司对同类材料生产的垄断地位。东磁的N52烧结钕铁硼永磁材料, 采用了节约稀土资源的新工艺, 产品质量稳定, 得到了多家客户的认可。DM4229永磁锶铁氧体料粉具有高剩磁的特点, 该材料解决了常规材料因生产成本太高而无法经济地用于音响永磁铁氧体领域的难题, 填补了国内技术空白。
一、检案中常见有问题的病历材料及产生原因
1. 错误诊断，有的临床医生或检验医师诊疗水平低，对疾病或外伤的发生发展过程不清楚以致误诊，如将X片中陈旧性骨折误诊为新鲜骨折。
2. 缺少记录，有的临床医生缺乏法医学检验鉴定知识，对于外伤创口的长度宽度等不进行测量，病历记载缺乏就医时第一手材料的记录。
3. 瑕疵记录，有的临床医生缺乏责任心，临床检查不全面，记载病历不客观不真实，或片面听取伤者或陪护人的陈述，隐瞒或夸大病情。
4. 虚假病历，有的个别医生受贿或受亲友之托，故意出具虚假证明或伪造病歷。
二、法医检案时对于问题病历材料需要注意的事项
法医鉴定人检案时，应当结合案情，认真检查，全面分析，综合判断。对有问题或疑点的送检病历材料，要区别情况，不同对待。
第一，对鉴定不会产生实质性影响的病历材料。如医务人员只是病历书写记录不规范，对疾病或伤情的描述较准确、检查记录较客观。该类病历材料不会影响到病历的真实性，可以作为鉴定依据使用。
第二，可能会影响到鉴定结果的病历材料应酌情选用。如有的病历诊断错误、症状体征的记录与客观检查结果相矛盾。对于此类病历材料，本人认为可以酌情选用，以客观检查作为主要参考依据。以原发性损伤为鉴定依据的，损伤当时的情况可以要求办案部门协助提供。
第三，伪造篡改的病历资料。病历系伪造、病历中的关键部分被篡改、病历中许多重要部分已经被销毁等等。依据现有的病历资料无法对伤情进行客观公正的评判，应弃之不用。（文/河北省衡水市检察院 刘书萍）
XX同志于2011年5月至2011年9月被抽调到我XXX创文办公室工作。在其工作的4个月里，该同志能以高度的责任感和使命感，全身心的投入到XX市创建全国文明城市的工作中去。工作勤奋上进、兢兢业业，作风正派严谨，在各方面都取得了有目共睹的成绩。现对其鉴定如下：
政治坚定：该同志能以马列主义、邓小平理论和三个代表等重要思想为指导，认真全面贯彻落实科学发展观，坚决执行党的各项方针政策，并把“创文”工作和党的理论学习相结合，提出了许多创建全国文明城市的新理论和新观点，表现出了一名优秀共产党员的优良作风。
学习勤奋：该同志能始终把学习作为自我完善和提高的重要途径，坚持经常学习“创文”政策理论文献等业务知识，做到勤学善思、学以致用，他对“创文”工作相关文件政策的规定自觉要求自己熟捻于心，他总结的一些“创文”办法，对于推动我区整个文明建设，卓有成效，意义深远。
工作务实：该同志在工作中始终坚持用心谋事、务实干事，做事勤勤恳恳、任劳伤怨。作为创文办的工作人员，能时刻做到服从领导的安排，认真履行岗位职责，与同事经常加班加点勤奋-1-
工作，在积极协助办公室主任做好办公室日常事务处理工作的同时，还积极参与 “创文”资料的领取与发放、报表的收集与上报，并且，积极做好创文办与相关单位之间的协调工作，推进了工作整体合力的形成,取得了全单位上下的一致好评。
作风优良:该同志能坚持严于律己，宽于待人；生活作风严谨、生活态度积极向上，注重团结同志，待人主动热情；恪守规章制度，严格奉公办事。
XXXXXXXXXXXX
___，男，19_年8月生，汉族，___柏树人，19_年7月四川省达县师范学校普师专业毕业，同年8月被分配到___县柏树乡中心小学工作，20_年9月加入中国共产党，20_年9月取得达县师范高等专科学校函授汉语言文学专科文凭，20_年12月自考四川省教育学院教育管理专业本科毕业。现任柏树乡中心小学党支部书记、副校长。
二、个人简历
___同志19_年7月在柏树乡中心小学参加工作;20_年9月担任学校教务主任;20_年9月竞聘为学校副校长;20_年4月被任命为学校党支部书记;20_年5月调到县教育局工作。
三、现实表现
(一)思想素质过硬，政治立场坚定。
该同志积极学习党的政治理论，不断提高自身的政治素质，以一个共产党员的标准严格要求自己，起到了模范带头作用，他政治立场坚定，思想上与党组织保持一致，工作讲党性、讲正气，讲原则，受到教职工的一致好评。
(二)具有较强的工作能力和协调能力。
该同志在工作中能贯彻党的教育路线、方针、政策，认真履行自己的岗位职责，能卓有成效的开展工作，分管和负责的工作总能出色的完成，能及时解决工作中遇到的问题和困难，工作善于总结、勤于思考、勇于创新，方法灵活多样;他注重协调处理学校内部的各种关系，工作中他做到尊重领导、团结同事、创设和谐的工作氛围，努力为领导分忧，为教师解难，保证学校的决策和分管的工作落到实处。
(三)作风严谨，责任心强，遵纪守法，清正廉洁。
该同志坚持提早上班，不迟到、旷教，带头遵守学校的各项规章制度，要求教师做到的自己先做到，发挥党员的先锋模范作用。他工作勤勤恳恳，任劳任怨，不喊口号，不唱高调，作风朴实严谨，注重细节，责任心强，踏踏实实的做好工作中的每一件事。他能正确对待利益，自觉抵制腐朽思想的侵蚀，处事公道，不谋私利，清正廉洁。
(四)工作实绩。
由于该同志不懈的努力，工作取得了可喜的成绩：20_年分管的教学工作获文教局教学质量“升位奖”;20_年柏树党委授予柏树乡中心小学支部为“先进党支部”;20_年在，柏树中心校党支部在深入开展学习实践_活动中获得乡党委和县巡视组的好评。
四、主要缺点和不足
龙洞小学：刘江
时间过得真快，我来龙洞小学工作已经一年了，在这365个日子里，让我感同身受的是来自每一位领导和老师给予我的信任、关心、支持和帮助，我也在大家庭中慢慢成长，古语说：滴水之恩，涌泉相报，我先借此机会向各位领导，同事们表示最衷心的感谢。为了更好地做好今后的工作，总结经验、吸取教训，本人从德能勤绩四方面作工作小结如下：
一、思想品德方面：
一年来，本人热爱党，热爱人民,坚持党的教育方针，忠诚党的教育事业。踏上工作岗位后认真学习了《教师法》、《未成年人保护法》、《义务教育法》等，思想端正，作风正派，服从领导的工作安排，积极参加各种会议，办事认真负责。热爱教育事业，把自己的精力、能力全部用于学校的教学过程中，并能自觉遵守职业道德，在学生中树立了良好的教师形象。能够主动与同事研究业务，互相学习，配合默契，教学水平共同提高，能够顾全大局，团结协作，顺利完成了各项任务。孔子说：三人行必有我师，特别是对我这个刚从事教学工作来说，学校领导和同行都给了我非常大的帮助，我也在听课评课中提高自己，反思自己的教学方式方法。
二、业务知识和工作能力方面：
一年来，我主要担任了两个班级的数学教学工作，班级的数学教学工作，在教学中我更深刻的理解课本，在把握课本的同时，采用多种教学手段，把新课改的要求体现到教学中去。提高学生分析问题和解决问题能力，培养学生学习数学的兴趣，积极开展各种数学活动，开阔大家的视野，帮助学生拓展思路，对基础知识能灵活运用，从而使同学们分析、解决问题的能力不断提高。
三、工作态度勤奋敬业方面：
一年时间里从未无故缺席，第一学期我带两个班的数学教学工作，每周分别为15课时，第二学期每周15课时，准时到校上班，上课时精神饱满，积极参加各种会议，认真听课。
四、工作业绩方面：
一、生物样品中无机化学毒物快速鉴定技术研究
1. 原子荧光测定法测定尿液、血液中锑的含量。
(1) 测定原理。将样品经湿法消解后, 在酸性条件下, 加入硫脲和抗坏血酸, 使五价锑预还原为三价锑, 再加入硼氢化钠或硼氢化钾使三价锑还原生成锑化氢, 将氩气载入石英原子化器中, 将锑化氢中的锑分解为原子态锑。原子态锑在锑空心阴极灯的发射光激发下产生原子荧光, 原子荧光发光强度在固定条件下与被测液中的锑浓度成正比, 因此可以通过检测原子荧光发光强度来计算血液中锑的浓度。
(2) 测定方法。取1 mL样品放入锥形瓶中, 加入3 mL H2O2和4.5 mL HNO3 (即H2O2与HNO3体积比为2∶3) , 放置3 h, 用恒热电热板在100℃时加热处理30 min, 再在110℃时加热赶酸, 直至近干, 冷却后转移至5 mL比色管中, 同时加入2.5 mL质量分数为10%的HCl, 用质量浓度为10 g/L的抗坏血酸-硫脲混合液定容至5 mL。实验过程中比较酸度、硼氢化钾浓度、载气及屏蔽气流速等因素对测定结果的影响。样品处理选用H2O2和HNO3的混合液作为消解试剂, 所得结果精密度符合要求, 且整个方法重现性好, 取样量少, 灵敏度高, 操作简单、快速, 基体干扰少, 测定仪器价格低, 适合于职业接触或中毒人群尿液、血液中锑的含量分析。
2. 微分电位溶出分析法测定生物材料中镓的含量。
将待测样品置于10 m L的比色管中, 分别加入适量的镓标准溶液、0.2 mL质量分数为15%的KCl溶液、1 mL质量分数为0.15%的甲酸溶液和150μg Hg2+, 定容至5 m L, 放入微分电位仪测定镓含量。该方法不需要特殊试剂, 样品处理过程简单, 灵敏度高, 可快速测定, 回收率能够控制在90%～111%。但是要消除溶液中各种金属离子的干扰, 消除方法方法如下。
(1) 消除Zn2+的干扰。首先将富集电位调到-1.2 V, 搅拌富集80 s;然后将电位调到-1.0 V, 静止富集30 s, 使锌从汞膜中溶出, 从而减少互化物。
(2) 消除Cu2+的干扰。选择质量浓度为1 mg/L的锗, 以阻止铜与镓的互化物的形成。
(3) 消除Fe3+的干扰。待样品消化完全后, 取1mL质量分数为20%的盐酸羟胺放入三角瓶中, 在电热板上加热煮沸5 min, 即可把Fe3+还原为Fe2+。
3. 石墨炉原子吸收法测定尿液、血液中铊的含量。
(1) 尿液中铊含量的测定。先将尿样用质量分数为1%的HNO3酸化, 再以PdCl2为基体改进剂消除干扰, 然后使用石墨炉原子吸收法直接测定尿样中铊的含量。该方法质量浓度检出限为0.56μg/L, 加标回收率为98.8%～101.5%, 该方法简单快速, 精密度和稳定性好, 符合尿液中铊的测定要求。
(2) 血液中铊含量的测定。由于血液的前处理过程比较复杂, 且铊为易挥发元素, 容易在前处理过程中造成铊损失, 所以要先用质量分数为5%的HNO3酸化, 再以质量浓度为1 g/L的钒为基体改进剂消除干扰, 放入微分电位仪测定全血中的铊含量, 该方法操作简便, 灵敏度较高, 符合血液中铊检测的要求。
4. 微分电位溶出分析法测定脏器 (肝、肾、肺) 中的铊。
取样品1 g, 倒入聚四氟乙烯消化罐中, 再加入3 mL消化液, 在170℃时消化12 h, 用物质的量浓度为5 mol/L的NaOH将pH值调为7, 并定容至100 mL。取上述溶液1 mL倒入50 mL小烧杯中, 加入物质的量浓度为0.3 mol/L的醋酸和物质的量浓度为0.25 mol/L的醋酸钾缓冲溶液各5 mL、物质的量浓度为0.1 mol/L的EDTA2.5 mL和水16.5 mL, 放入电位溶出分析法仪测定, 用标准加入法定量 (铊的溶出电位为-0.7 V) , 该方法灵敏度、准确度高。
5. 氢化物原子荧光测定法测定尿液中铅的含量。
将1.0 mL尿样倒入浓HNO3荡洗过的100 mL三角瓶中, 加2 mL混合酸溶液 (混合酸溶液中HNO3与HClO3体积比为3∶1) , 在电热板上消化至无色近干后取下。加5.0 mL去离子水, 摇匀后取2.0 mL置于一次性塑料管中, 再加入0.4 mL混合溶液 (由质量浓度为80 g/L的铁氰化钾和质量浓度为4 g/L的草酸、质量分数为8%的HCl组成) 和1.6 mL去离子水, 摇匀, 放入原子荧光光度计测定。该方法质量浓度的检出限为0.2μg/L, 相对标准偏差为2.7%。
6. 涂镧石墨管-石墨炉原子吸收光谱测定法测定尿液中的微量钡。
先将热解平台石墨管放入质量分数为5.4%的硝酸镧溶液中浸泡24 h, 再用超声处理15 min, 以赶尽石墨管表面的气泡, 使涂层均匀。自然风干后, 放入烘箱中, 在120℃条件下干燥2 h, 把石墨管两端及外面用纸擦干净, 以防止石墨管污染石墨锥。将其放入石墨炉中, 在120℃条件下加热30 s, 900℃条件下加热30 s, 2 000℃条件下加热10 s, 2 600℃条件下加热10 s, 连续加热3次, 加热时氩气流速为250 mL/min。尿样用100+2比例 (尿样与浓酸的体积比为100∶2) 的浓酸消化, 将有机物质破坏, 使钡以离子形式存在于待测液中, 有利于钡的原子化。该方法以质量分数为40%的硝酸铵和质量分数为6%的硝酸镁为混合基体改进剂, 改善尿样中的基体, 可以有效消除背景吸收, 用质量分数为5.4%的硝酸镧涂层平台石墨管, 能有效抑制碳化钡的生成, 此外, 涂层石墨管也避免了高温石墨管本身在可见区的强辐射, 有利于尿样中微量钡的测定。该测定方法简便, 准确度高。
7. 石墨炉原子吸收法直接测尿液、血清中铬的含量。
(1) 尿液中铬含量的测定。尿样按100+2的比例 (尿样和浓HNO3的体积比为100∶2) 加入浓HNO3消化, 采用质量分数为4%的NH4NO3为基体改进剂, 用石墨炉原子吸收法测定尿液中铬的含量。该方法用NH4NO3为基体改进剂, 改善尿样基体, 减少背景干扰, 样品不需繁琐的预处理, 减少了样品污染和损失的机会。该方法简便、快速, 适用于大批量的尿样中铬含量的测定, 该方法测定的精密度和准确度较好, 质量浓度检出限为0.12μg/L。
(2) 血清中铬含量的测定。将血清用浓HNO3酸化, 以质量浓度为4 mg/L的硝酸镁作为基体改进剂, 放入石墨炉原子吸收光谱仪测定血清中铬的含量。该方法样品不需进行复杂的化学前处理即可测定, 克服了生物样品背景吸收过大的缺点, 减少了污染, 简化了操作过程, 降低了误差, 大大缩短了分析时间, 且质量浓度检出限低, 经方法学研究和对若干份混合血清样品测定, 均取得了满意的结果。
二、生物样品中有机化学毒物快速鉴定技术研究
1. 带捕集阱顶空-气相色谱法技术 (FID) 应用研究。
采用正交设计方法, 以四氯乙烯为研究对象, 探讨用捕集阱顶空-气相色谱法测定氯代烃的最佳条件, 包括测定氯代烃时所采用的温度、时间、压强等检测条件, 并对这些条件进行优化, 得到了使用顶空仪器的最佳条件:取样针温度100℃, 传输线温度100℃, 炉温80℃, 保温时间30.0 min, 干吹时间2.5 min, 捕集阱保持时间6.0 min, 解析时间1.1 min, 加压时间1 min, 释压时间0.8 min, 色谱柱压强275.79 k Pa, 瓶压强206.84 kPa, 解吸压强103.42 kPa。所得最佳条件可应用于生物样品中氯代烃的测定。
2. 带捕集阱顶空-气相色谱法测定血液中四氯乙烯的含量。
用5 mL肝素钠真空抗凝管采集静脉血5 mL, 摇匀, 抽取2 mL肝素钠抗凝全血于顶空样品瓶中, 注入3 mL的蒸馏水, 立即密封好顶空瓶口, 进行测定。用带捕集阱顶空仪进样, 经气相色谱仪 (Elite-5MS毛细管柱) 分离后使用氢火焰离子化检测器检测, 峰形分离较为理想。温度超过70℃时, 血液会凝固, 因此顶空仪炉温设为65℃, 以减少传统分析方法中对血液的复杂前处理, 保证结果的准确性。该方法操作简便, 灵敏度高, 可对高浓度四氯乙烯接触者的血液中四氯乙烯的浓度进行检测。
3. 带捕集阱顶空-气相色谱电子捕获 (ECD) 法测定血液中四氯乙烯的含量。
样品经带捕集阱顶空仪前处理后进入气相色谱仪, 经Elite-1701毛细管柱分离后使用电子捕获检测器测定四氯乙烯含量。该方法不仅降低了血液中碳氢有机物质的干扰, 而且提高了灵敏度, ECD检测器信号强度比FID检测器提高了大约30倍, 校准曲线线性范围为0～160μg/L, 线性相关系数为0.999 9, 质量浓度检出限达到0.9μg/L, 对高、中、低浓度样品进行测定, 精密度值的相对标准偏差分别为2.15%, 4.46%, 4.77%, 回收率为90%～110%。该方法适用于对低浓度四氯乙烯接触者以及正常人群血液中四氯乙烯浓度的检测, 而且操作方便, 适宜于做大批样本的测定。
4. 带捕集阱顶空-气相色谱法测定血液中挥发性氯代烃的含量。
该方法以三氯乙烯为研究对象, 探讨三氯乙烯测定条件和方法的线性关系、质量浓度检出限、回收率及稳定性。校准曲线线性范围为0～80μg/L, 线性相关系数为0.999 2, 质量浓度检出限为0.5μg/L。在线性范围内, 分别对高、中、低浓度样品进行测定, 精密度值的相对标准偏差分别为4.05%, 7.28%, 7.44%, 回收率为96.83%～105.00%。该方法同时可用于血液中三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷、三氯乙烯和四氯乙烯等挥发性氯代烃的测定。
5. 血清中毒鼠强含量的快速化学检测方法研究。
以硫酸为分解剂, 变色酸为显色剂, 测定血清中的微量毒鼠强。该方法灵敏度高, 质量浓度检测下限达到0.1 mg/L, 检测成本低, 实用性强, 实验操作简便、快捷。
6. 分光光度法快速测定尿液中百草枯的含量。
先以酸沉淀法或滤纸过滤法消除蛋白质的干扰, 再通过百草枯与连二亚硫酸钠反应生成的有色物质来定性。定量检测常用方法有两种。
(1) 方法一。用塑料试管取尿液4 mL, 加入物质的量浓度为1 mol/L的HCl溶液酸化, 摇匀, 离心分离15 min (离心机转速为3 500 r/min) 后, 取上层清液2.5 mL加人另一个塑料试管, 加入0.5 mL物质的量浓度为1 mol/L NaOH溶液, 然后加入2 mLNH4 C1-NH3溶液 (p H=10.3) , 最后加入4滴质量分数为10%的连二亚硫酸钠, 倒入比色皿比色, 比色时吸收波长为395 nm。通过工作曲线紫外光度法来定量, 获得了满意的结果。
(2) 方法二。取2.5 mL样品, 加入2.5 mL水、0.3 g无水碳酸钠和0.1 g碳酸氢钠, 摇匀, 用慢速定量滤纸过滤, 滤液倒入比色皿比色, 比色时吸收波长为396 nm, 所得吸光度为尿样的空白吸光度A0;将比色皿中的溶液倒回原试管中, 加入0.05 g连二亚硫酸钠, 摇匀, 再于396 nm比色, 所得吸光度为样品吸光度A样0 (即A样-A0) , 通过线性回归方程计算得到的值乘以2即为尿中百草枯的浓度。
三、全自动微量元素分析仪
笔者所在项目组研发的全自动微量元素分析仪以电化学原理为测定依据, 将测试杯转盘装置中的转盘安装在机架上并通过传动机构与转盘电机连接, 转盘在垂直平面内转动, 其圆周体壁均匀安装一定数量的固定套, 每一个固定套中安装一个测试杯, 二者为转动配合, 并在测试杯下部套装固定齿轮, 该齿轮和测试杯转动电机的齿轮相连接。自动微量元素分析仪包含测试杯转盘装置、电极装置、样品盘、自动加样装置、底液或活化液加液装置、清洗装置及计算机控制装置。该发明使用电子技术控制分析仪, 各个机械装置自动运转, 具有自动加样、自动加活化液、自动测量、自动记录、自动清洗测试杯和自动干燥测试杯等功能, 检测过程实现了自动化, 并且具有设计新颖、测量精度高等优点。
关键词：材料投放；幼儿自我发展；区域活动；
蒙泰梭利基于对儿童内发性的深刻信赖，提出了自我教育的原理。所谓自我教育的原理，就是充分尊重幼儿的自由，使幼儿在自由活动中达到自我教育的目的。她说：“科学的教育学的基本原理，实际上就是保障儿童的自由，即保障儿童内在的一个一个的自发发现得到发展的自由。” 一切都立足于幼儿能自己选择，自由取用、自由操作。幼儿既可以自由地选择教具，也可以自由地选择游戏场地。幼儿不管选择哪一种活动，不管在何种发展阶段上热衷于什么活动，都由他们自身决定。她所主张的“培养自我活动的教育”，正是通过教具来实现的。幼儿们在使用教具的过程中，通过一系列的活动去进行比较、推理、观察、体检，最终达到感知事物的法则，从幼儿内在的感受力是通过教具给予刺激这一点上看，蒙泰梭利的自我教育原理是通过教具去“激发内在动机”的。
当今幼儿园开展的区域活动就是根据蒙泰梭利所创设的“幼儿之家”而创设的。区域活动也称活动区活动，是当前幼儿园实施素质教育，推进幼教改革的一种主要的教育活动形式，区域活动是教师根据教育目标和幼儿发展水平，有目的地创设活动环境投放活动材料，让幼儿按照自己的意愿和能力，以操作摆弄为主的方式进行个别化的自主学习活动。它是深受幼儿喜爱的活动之一，是幼儿自主学习的主要场所和幼儿自我概念形成的源泉。在这宽松、愉悦的学习环境中，幼儿根据自己的兴趣和能力，选择活动内容，体验操作和交往的乐趣，积极主动地发现、探索和表现，有效落实《幼儿园教育指导纲要》精神，是对集体教育教学活动的有效补充，是促进幼儿全面发展的较理想的教育手段之一。可以说材料是幼儿区域活动的物质支柱，是幼儿游戏的工具，幼儿通过操作各种材料在区域中学习、活动，它更是幼儿实现自我价值的一种载体。但是由于我们的教师对区域活动的目标、形式、指导等理解认识比较肤浅、笼统，对不同年龄幼儿的生理心理特点与发展水平等把握不够，以致于在投放中也存在着诸多问题, 因此，教师必须准确把握好区域活动中材料的“度”，活动材料是幼儿探索和学习的中介、桥梁，活动的发展目标、活动的内容以及期望幼儿获得的经验都蕴涵在所提供的材料中。
那么，该如何来选择、投放活动材料呢？以下几个方面是我们比较关注的，也是我们努力在做的：
一、活动材料投放要有足够的量
在实践过程中我们经常会发现，幼儿在某一角落中经过几分钟的专注思考，很快地完成活动目的，然后就东张西望、无事可干。另外有的老师为完成活动目的，常常东拼西凑完成材料的提供，即时的应付一下区域活动，以致于出现“僧多粥少”的现象，几个幼儿抢着一种材料，幼儿间的矛盾就自然增多了，也有的幼儿选不到合理的材料就干坐在那里。也有的老师在材料内容的安排上考虑不均衡。再有，区域材料内容数量上缺乏均衡多样性和全面性。如美工区中有粘贴、绘画、剪纸、吹画、泥工，探索区中有磁铁、走迷宫，生活区中有编辫子、编织、钉纽扣，操作区中有积木，显然该教师强调了美工区、生活区而忽略了探索区、操作区。著名心理学家皮亚杰认为：“游戏是指不断重复一些行为，而主要是希望从中得到快乐。”对于幼儿喜欢玩的活动材料要投放足够的数量，一般来说材料的投放数量要多余人手一至两份，以充分满足幼儿操作的需要，避免发生争抢的现象。在具体的自主活动中，有的材料可以一下子都投放出来，给幼儿大量选择的机会，有的则要按照难易分批进行投放，让幼儿通过练习都有不同程度地进步。如中班快乐屋中的活动“各种各样的纽扣”，老师第一次只提供两种颜色的纽扣和布条，请幼儿把同种颜色的纽扣钉在与它相同颜色的布上。等过了一段时间，老师再投入更多种颜色的布条和纽扣，并且穿插了花纽扣和花布，把同种颜色的纽扣钉在与它相同顏色的布上。这样通过材料的追加，促使幼儿在游戏中丰富更多的科学知识。
二、活动材料的投放要具有可操作性
皮亚杰提出“儿童的智慧源于操作”，儿童就是在对材料的操作、摆弄过程中建构自己的认知结构的，因此提供给幼儿游戏的任何一件材料都必须具备可操作性。只具装饰效果的材料对于孩子来说教育价值不大，它只不过是活动室的一个点缀。如我们经常会发现活动室里的墙面上贴着许多不能变化的动物图象，高高地挂在那儿,一年四季一成不变，可能在开学的时候对孩子来说还有些新意，他们或许会拉着家人的手问这问那，天天面对了，也不觉得新奇了，久而久之，图片上有的只是一层淡淡的灰尘。还有那些星星点点的装饰物，在教育过程中也起不到多大的意思。这些只具装饰效果的材料只会增加老师工作的负担，对于孩子来说毫无教育意义。他们需要的是可以操作的、能够玩的材料，即便是廉价的、自己用废旧材料制成的，对于孩子来说这些材料往往能引起他们浓厚的兴趣。在和“可操作的材料”互动中，他们会乐此不疲。因此我们选择区域活动材料首要考虑的就是“可操作性原则”，科学区、数学区等的材料一般具有很明显的操作功能，但表演区、语言区、主题墙等的活动材料操作性就不是很明显了。为此我们充分调动孩子的积极性，让他们通过区域间的互动合作，使这些区域的材料也能活起来。如美工区的孩子画好头饰、做好服装、道具等，送到表演区，表演区的孩子根据故事情节，对以上物品提出修改意见，然后重新回到美工区修改。这样通过区域间的合作，这些材料真正就活起来了。
三、活动材料的投放要注重个体差异，有层次性
每个幼儿都是一个独特的个体，这些个体之间难免会存在这样那样的差异，而幼儿教育要允许幼儿以适合自己的方式、速度去学习、探索，只有这样，才能让每个幼儿都体验到成功，从而满怀信心地对待生活，对待明天。刚开始开展区域化学习活动时，我们根据每个活动的教育目标提供统一的活动材料。一段时间下来，我们发现有的幼儿对活动明显缺乏兴趣，究其原因，是由于幼儿的学习水平发展不平衡，有的幼儿能力较弱，思维还达不到这些活动的要求。找到原因后，我们在选择和投放材料时，总是深入了解孩子在想什么，需要什么，喜欢什么，准备做什么，根据幼儿的能力水平，针对同一学习内容，在同一活动中投放不同层次的材料，让幼儿根据自己的方式去学习，去探索，去发展。在“拼图”游戏中，我们投入了不同数量、不同形状的拼图，让每个幼儿都能在活动中找到适合自己的材料。能力强的幼儿可以选择数量多一些，拼接口不规则的拼图；而能力弱的幼儿则可以选择数量较少，拼接口较整齐的拼图。由于在游戏中找到了难度适当的材料，幼儿兴趣浓厚，且随着操作次数的增多，幼儿逐渐选择数量多、难度大的拼图，空间形象思维较以前灵活了很多。为此，我们又增添了一些其它类型的、难度较高的拼图，更好地满足了幼儿的操作愿望。通过操作活动，每个孩子都能充分地学习和发展，从现有的水平上向前迈进。
材料的投放要有层次性，材料的层次性是指材料能满足不同层次幼儿和幼儿游戏不同角度的需要。然而有的老师在投放材料时往往出现这一现象，如：生活区中，中班的教师为幼儿提供了给袜子配对、扣纽扣、系鞋带这一内容，可大班也同样提供了这些材料的话，这显然不合适。中班孩子与大班孩子的能力明显有差异，这些材料对于大班孩子来说似乎简单了点，幼儿只能机械操作，达不到更高层次的教育目标。因此我们可以根据不同年龄段幼儿的身心发展特点，投入相应的材料，如“丰收的秋天”主题中，小班美工区是让幼儿在教师画好的树叶中填上不同的颜色。而中班的美工区则是幼儿在教师画好的大树里添上形状不一的树叶，并且填色。大班的美工区内是孩子们捡来的形状各异的树叶，他们以此制作树叶标本，进行树叶粘贴画等。通过不同难度的活动，使不同年龄的孩子在活动中都能感受秋天的到来。材料的层次性不仅体现在年龄上，还要体现在能力上。幼儿的学习是一种个体性的学习，由于遗传、环境等因素的影响，幼儿间存在着个体差异，且这差异表现在方方面面，有能力、思维、动作、观察、表征等方面，正因为有着差异的存在，教师在区域材料的选择还得考虑层次性，要更多地思考怎样使材料促进不同幼儿更有效的发展。如语言区一活动“自制图书讲故事”，老师为不同能力的孩子提供了不同的材料，给能力强的孩子只提供空白纸和画笔及一些辅助材料，需要他自己构思画面，自己制成图书；给能力一般的孩子提供了一大堆废旧画报，孩子需要根据故事进行筛选，然后将图象剪贴组合，制成一本图书；能力较弱的孩子则根据故事提供现成的图象，只需他边听故事边将图象粘贴在空白图书上。这样通过有层次的材料活动，不同能力的孩子都能成功地完成这一活动。即便能力弱的孩子他如果完成了最低层次的材料，只要他愿意，他仍可尝试再难一点的材料操作。
四、活动材料的投放要有能变化性
幼儿是一个不断发展的个体，区域活动内容和材料也应根据幼儿的发展而变化。区域的材料应始终处于动态变化过程中，每个区域的活动内容与材料也应尽可能贴近幼儿已有的知识经验，利于幼儿获得新的知识经验，循序渐进。笔者认为，一成不变的材料投放不仅增加了教师的工作量，同时更是教育资源的极端浪费。在日常活动中，我们也会发现很多材料并没有充分发挥作用，如各种形状的积木只在建筑区里作建筑材料使用，各色绒线只在美工区做美工材料，各种图书只是语言区里的阅读材料……殊不知，这些材料的用途是无限的，只要每个教育工作者挖掘，很多材料都可在不同的场合发挥不同的教育作用。如何挖掘活动材料的可变性呢？我们需要对活动材料的结构、类型和功能、使用方式进行多方面分析，找到这些材料的变化点，然后引导幼儿进行发现、探索，激发创造的愿望和需要，使幼儿对活动材料进行反复组合、加工和创新，从而使这些材料的教育价值被最大限度地挖掘。如废旧雪碧瓶在美工区就是制作树木、花篮的原材料，在科学区是浇花的工具、漏沙的器皿、探索平衡的材料，在建筑区是造房的辅助材料，在音乐区是变换节奏的乐器――沙球，在体育区是练习跳高的器械……师生通过灵巧的双手，将如此廉价、普通易寻的雪碧瓶的可变性充分挖掘，使之在不同的区域发挥着不同的功能，充分满足了孩子探索、游戏的需要。
五、活动材料最好具有功能性，趣味性，直观形象性，安全性
（一）由于受到班级环境的限制，玩具橱柜較长，无法轻易移动的限制，我充分利用班级有限的内外空间环境设计各种区域角，并根据活动提供材料，如自然角设在班级的门口，那里光线充足，有利于一些植物动物生长，供幼儿浇水，喂食，实际操作方便。再比如将快乐屋、宝宝诊所、小超市摆放在一个比较宽阔的环境，摆上所需的材料，垫上泡沫垫，以便幼儿操作，拿取方便。
（二）留给幼儿创新的余地，提供未成品材料，让幼儿在操作中思考，培养幼儿发现问题与解决问题的能力，如美工区提供一些牙膏，铁丝，奶罐，皮筋，胶水等，幼儿共同合作，有的钻洞，有的剪，有的画，没有的材料自己想办法，到活动结束时，在小朋友一双双稚弱、灵巧的小手摆弄下，坦克、火车、花蓝形象地出现在操作面上，虽然显得粗糙，但也是他们的成果。
六、材料的投放要有利于幼儿创造性的发挥
当前社会，培养和造就适应未来时代需要的创新型人才，已成为教育的主旋律，创造力是幼儿发展所不可缺少的一种品质。每个健康的孩子，都有潜在的创造力，而我们所要做的，便是如何将他们的创造力激发出来。
在幼儿自主学习的过程中，材料是活动的物质支柱，幼儿往往会在玩具或材料的启发下产生联想和创造愿望.因此，在区域化学习活动中，我们注意为幼儿提供丰富多彩的、具有启发性的活动材料，从而解放幼儿的头脑和手脚，给予幼儿足够的自由度，使幼儿充分地表现自我，勇于创新。
如在“沉和浮”科学活动中，我先让幼儿把木块、石块、回形针、纸片、插塑玩具、有盖无盖的玻璃瓶等材料放入水中，观察哪些东西会沉下去，哪些东西会浮在水面上。在幼儿把这些材料按沉、浮进行分类后，我又给幼儿每人一块橡皮泥，让他们试试怎样使橡皮泥稳稳当当地浮在水面上。幼儿在反复的“玩”中，学会了把橡皮泥做成船形。在这个活动中，橡皮泥是半成品，幼儿就是通过自己的操作，开动脑筋，想办法解决问题，从而把潜在的创造性表现了出来。
材料的投放是区域活动的一个重要因素， 是幼儿活动区探索活动的物质支柱，教师应充分发挥主导作用，准备的活动材料应体现因人施教的思想，做到难易结合，繁简结合，单一与多功能结合，让每个幼儿都能轻松、自如地使用材料，使幼儿在活动中各方面得到更好的发展，真正达到自我发展的目的
尊敬的领导：
近段时间以来，我进一步学习了我台开展的“三检查三对照”相关会议精神，使自己的思惟更加明确，政治思惟觉悟得到进步，同时也坚定了搞好本职工作的决心信念和决心。现对自身存在的问题进一步反思和剖析。
一、平时自己固然也正视政治理论的学习，能够及时、正确的学习有关政策，但不系统，缺乏全面的、系统的钻研精神，仅仅知足于有关会议学习，学过了事，在学习的自觉性方面还存在着较大的差距，对于学过的东西没有进行反思，没有深刻钻研。
二、对本职工作知识把握得不深不全，工作能力有待进一步加强。有时候也学习业务专业知识，但有些实用主义的思惟，急用先学，存在时紧时松的现象，造成学习的内容不系统，不全面，不广泛，不深刻。
三、全局意识不够强。有时做事情、干工作只从自身业务或本部门出发，对一些关系全局发展的工作理解不透，尽管也按领导要求完成了要做的工作，心理上仍是有一些其他的想法主意，在工作中有时带有个人情绪，也没有时刻全身心的投入工作。
四、在无私奉献上做得还不够好，有时在思惟深处还掺杂着私心，有一些患得患失的情绪等等。在工作上不够精细，处理问题表面化，有时停留在指出问题点到为止，没有主动的追究问题发生的根源，较少主动思索举一反三，共同戒免。
五、存在自我满足现象。过去在自己的本职工作中做出了一些成绩，就自我感觉不错，对自身要求降低。有很多的工作都是想做又不敢做，畏畏缩缩，缺乏果断和胆量。很多情况下，没有针对实际情况，主动地去寻出路，想办法，解难题，因此，工作上起色不大。
我决心通过这次自我批评，找准自我问题，抓住产生问题的根源，认清今后努力的方向，要在今后的工作、生活中努力克服自己存在的不足，加强学习，不断提高自身的素质，积极开拓进取，提高工作水平，严格要求自己。
汭丰中心小学代海涛
我叫代海涛，2007年从兰州师专毕业在汭丰教育办任教。参加工作5年来，我严格遵照各类教育法规制度，老老实实做人。踏踏实实干事。原以为自己的各方面表现还过得去。但是对照这次教师作风集中教育整顿的要求，我认真学习，深刻反思，发现自己还存在以下的问题，现汇报于下：
一、存在的问题及表现
1.工作上存在“慢”的问题。主要表现是工作主动性差，节奏慢，工作效率不高，教学质量不是很高。
2.工作上着存在“混”的问题。主要表现是在教育教学工作研究不够深入，思考不够深入，教学实绩不突出，对事业缺乏责任，对工作缺乏热情。
3.工作上存在“满”的问题。主要表现是你自己的要求太低，在工作上去的一点点成绩就沾沾自喜，缺乏远大理想和长远眼光，平时疏于学习，没有加大力度从提高自身的素质和能力上努力，遇事往往满足于一知半解，眼高手低，服从意识不强，工作凭感觉，教学凭心情等问。
5.工作上存在“浮”的问题。主要表现是没有严格的抓学生管理、抓教学，事业心、责任心不够强强，没有静心教书，潜心育人。
6.工作上存在“懒”的问题。主要表现是平时懒于学习、懒于动脑、懒于动手、懒于干事。
二、努力方向及改进措施
1、加强学习，提高自身的素质和能力
认真学习各方面的知识，做到全面学习和重点学习相结合，不断给自己“加油”和“充电”，经常和同事们相互交流、相互竞赛，努力提高自己的教学水平和能力；认真学习各种规章制度，树立爱岗敬业和安全教学的责任意识；积极参加学校的思想政治学习，努力提高自己的思想素质。
2、严于律已，增强为学生服务的意识
对很多人来讲,当下是最坏的时代,经济危机致使他们失业,成为百万求职大军中的一员。然而,同样身处艰难时世,却有人能够独善其身,他们跳槽成功,薪金丰厚,对他们来讲,现在又是最好的时代。
“职场导师”鲍利斯用近40年的研究心得,告诉我们在学校永远也学不到的求职秘诀:求职者不是行乞者,而是挑选雇主的人;找到理想的工作,依靠的不是运气和学历,而是技巧和努力;利用关系网求职成功率更高;面试不是一门科学,而是一门非常感性的艺术;不要相信人力资源专家的经验之谈,那往往是一派胡言……
雇主花钱雇人想得到什么?是你的三项技能:特殊知识、可转换技能、做事的方式。特殊知识就是那些雇主愿意买单的,你从经验中学来的知识,这些知识可能涵盖不同的领域、专业、课题、技能或者“诀窍”;可转换技能,是那些你所知道的做事的方法,不管这些事情涉及哪些专业或行业;做事的方式通常在生活里也被称为特点或者性格特征。
人胚胎干细胞(hESC)和人诱导多能干细胞(Human in-duced pluripotent stem cells,hiPSC)均属于人全能干细胞,具有无限分化潜能,可分化为所有组织和器官。因此,人全能干细胞可为特殊疾病发病机理的研究与治疗[1-4]、再生医学[5]和药物筛选[6]等提供最佳研究平台。但是人全能干细胞各种用途的前提就是要通过体外细胞培养技术获得大量同质未分化的细胞。目前,体外扩增hESC和hiPSC的方法主要有两种:滋养层培养(Feeder cell culture)和无滋养层培养(Feeder free cell culture)。传统的滋养层培养[7],即将鼠胚胎源成纤维细胞(MEFs)在组织培养中用聚苯乙烯板(TCPS)表面贴壁单层培养,制备成滋养层细胞结构,再用 γ射线照射或丝裂霉素C灭活滋养层细胞,制备成细胞滋养层,然后将干细胞接种在滋养层细胞上进行扩增培养。此种方法培养的全能干细胞很大程度依赖于所用的滋养层细胞,存在着诸多不足和缺陷,如采用 γ射线照射滋养层细胞,会阻碍滋养层细胞的增殖,诱导细胞凋亡,也会影响可溶性因子释放,导致细胞外基质组分降解。如果将全能干细胞用于人体再生医学中,培养MEFs的培养基中补加的胎牛血清会使hESC和hiPSC暴露于动物源细胞的风险之中,且死亡的MEFs的DNA会进入上层全能干细胞中,造成基因污染[8，9]。无滋养层培养,即不采用滋养细胞,直接在功能性基底材料表面或内部进行扩增和培养,可有效避免因使用滋养层细胞而导致的染色体异常和不明病原体的负面影响。本文主要综述了几类能够促进人全能干细胞体外长期自我更新和未分化增殖的无滋养层基底材料,期望能为无滋养层材料的设计、开发和应用提供借鉴和指导。
1 无滋养层培养
无滋养层培养,即不采用小鼠细胞或其他细胞制备滋养层,而是在能支持hESC和hiPSC体外大量未分化扩增的功能性基底材料表面直接培养细胞。目前,用于无滋养层的基底主要有基质胶(Matrigel)涂层,人工提取、分离、纯化后的细胞外基质蛋白涂层,重组DNA技术获得的重组蛋白涂层,聚合物或其与蛋白、多肽的复合物涂层,水凝胶和膜材料等。
无滋养层培养hESC和hiPSC时,由于脱离了滋养细胞,全能干细胞所处的微环境发生了变化。采用MEF-CM培养基(即培养过小鼠胚胎成纤维细胞的完全培养基,其中包含小鼠细胞分泌的生长因子、细胞外基质和细胞粘附分子)可以有效地促使hESC和hiPSC的粘附、铺展、迁移和长期自我更新。MEF-CM培养基现在多被用作hESC和hiP-SC无滋养层扩增的培养基,但是MEF-CM是培养过MEF的培养基,间接与hESC和hiPSC接触,仍无法避开动物源细胞污染的危险。若采用无MEF-CM培养基和无滋养层培养hESC和hiPSC时,通常基础培养基中需要补加高浓度的纤维母细胞生长因子FGF(如bFGF、FGF-2 等),其对于hESC和hiPSC的自我更新非常重要。另外,其他可溶性因子也在hESC和hiPSC体外长期未分化自我更新中扮演着重要角色,如激活素A可调节多功能标记基因Nanog的表达[10，11],维生素A能提升特定转录因子Nanog与Oct4的表达水平[12],外源凝集素(Lectin)[13]可调节细胞间的识别和粘附。
1.1 基质胶
基质胶(Matrigel)是一种可以替代依赖于滋养层的全能干细胞的无滋养层基质,主要成分包括层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、硫酸软骨素蛋白聚糖、巢蛋白,同时含有各种细胞因子(TGF-β、EGF与FGF),组织纤维酶原活化因子和其他在小鼠恶性肿瘤中自然表达的生长因子。Matrigel已被证实可用于多种hESC和hiPSC细胞系的多功能性维持与自我更新[14-18]。室温下,Matrigel可自动聚集产生类似于哺乳动物细胞基底膜的生物活性基质膜材料。虽然Matrigel使用方便,但其成分复杂且含有未知蛋白质,依然存在不同批次间的差异和异种动物交叉感染的危险,也不适合干细胞的大量扩增培养。
1.2 细胞外基质涂层
当基底表面涂覆了胶原蛋白(或降解产物明胶)、纤粘连蛋白(Fibronectin)、层粘连蛋白(Laminin)和玻连蛋白(Vitronectin)等粘附蛋白中的一种或几种时,即可替代Ma-trigel或滋养细胞[19],在MEF-CM培养基下很好地促使hESC未分化增殖。因此,可以将细胞外基质蛋白以物理涂层的方式对TCPS板进行预处理,进而可以提高细胞在基底表面的粘附性能。基质蛋白涂层用于hESC无滋养基底的研究已经非常成熟,多种蛋白已被证实能够支持多种hESC干细胞系体外长期扩增。
在MEF-CM培养基条件下,Ⅳ 型胶原不能维持hESC的自我更新和多功能性,但层粘连蛋白可以。层粘连蛋白是Matrigel中最主要的成分,是最先被分离纯化的细胞外基质蛋白,Xu等[20]的研究表明它能够促使hESC粘附和增殖。明胶是胶原的水解产物,Kitajima等[21]的研究表明,明胶涂层可以在没有任何滋养层细胞存在的情况下,用作KhES-1hESC干细胞系和253G1hiPSC干细胞系的无滋养层基底,但是培养体系中需要结合Rho激酶抑制剂Y-27632和可溶性纤粘连蛋白来维持干细胞的未分化增殖。Braam等[22]证明玻连蛋白也能使hESC在mTeSR1培养基中未分化扩增,并详细研究了潜在机理。
这些从细胞外基质中提取、分离、纯化的粘附性蛋白具备与细胞表面受体相互作用的配体,可与细胞发生特异性结合,且化学成分明确,不存在动物源性病原体污染及异种基因污染等问题,但应用它们时大多需要在培养基中补加血清替代品或使用MEF-CM培养基。
1.3 人重组基质蛋白涂层
采用重组DNA(或重组RNA)技术得到重组蛋白或短肽序列,其化学成分明确,氨基酸序列确定,具备与细胞表面受体作用的特异性配体,同样也具有支持人全能干细胞增殖的效果。
Miyazaki等[23]研究了3种hESC细胞系与人重组层粘连蛋白rhLN-511、rhLN-411、rhLN-332、rhLN-211和rhLN-111的相互作用。研究发现,hESC中 α6β1整合素的表达水平最高,它是层粘连蛋白的特异性受体,细胞优先与rhLN-111、rhLN-332和rhLN-511相应配体特异性结合,利于细胞在涂层上的粘附、铺展、迁移和自我更新。rhLN-111、rhLN-332和rhLN-511能支持hESC未分化扩增10代,且细胞染色体组型正常,体外分化能力与Matrigel相当。
Rodin等[24]报道在mTeSR1 培养基条件下,rhLN-511支持HS420、HS207和HS401三种hESC细胞系和两种hiP-SC细胞系BJ#12和LDS1.4的长期扩增,并且rhLN-511表面的细胞多功能标记基因(OCT4、SOX2、Nanog)表达水平显著高于Matrigel。α6β1整合素对于hESC细胞在rhLN-511表面粘附非常重要,24h内单层细胞培养结果显示,细胞铺展面积逐渐增加,说明细胞在rhLN-511表面能够有效地粘附和迁移。
E-钙粘素(E-cadherin)是一种Ca2+依赖性的细胞-细胞间粘附分子,其对于细胞间粘附和hESC的增殖非常重要,未分化的hESC可表达大量的E-钙粘素[25]。Nagaoka等[26]制备了E-cadherin和IgG Fc的融合蛋白,hESC在MEF-CM或mTeSR1条件下,可保持多功能性并传代35次,能在体外形成拟胚体,在体内形成畸胎瘤,并经组织学分析发现3个胚层,证明了hESC的多功能性。
人重组蛋白的化学成分和结构明确,但是制备和纯化重组蛋白成本高,产品存在批次间的差异,且可行灭菌方式受限(不可以辐射灭菌,因为辐射易导致多肽降解)。另外,需要在无菌条件下将人重组蛋白涂覆到基底表面,操作繁琐。文献报道的纯化蛋白质涂层的实验方案存在很多不足(如制备涂层时大多需要在无菌条件操作几个小时,且所得涂层是一次性的,不可反复使用),仍需进一步优化。
1.4 糖胺聚糖-硫酸乙酰肝素
硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate)蛋白聚糖大量出现在活细胞表面,然后逐渐被分泌到细胞外基质中。硫酸乙酰肝素及肝素类似物具有保护成纤维细胞生长因子FGF-2,防止其在细胞培养过程中过早降解的作用[27]。稳定的FGF-2浓度水平对于hESC和hiPSC的未分化自我更新非常重要[28]。
Matrigel和细胞外基质蛋白都可以很好地用作hESC和hiPSC未分化扩增的无滋养层基底。然而,如果要完全避开滋养细胞,并且不使用MEF-CM培养基,二者都需要在培养基中补加高质量浓度的FGF-2(40~120ng/mL)[29]和其他因子来维持细胞的多功能性。硫酸乙酰肝素可以与生长因子很好地结合,使其维持在一定浓度范围内,并同时保持其固有活性。Stelling等[30]发现存在硫酸乙酰肝素时,只需低浓度的FGF-2就可以维持hESC长期的未分化增殖,他将结合硫酸乙酰肝素的基底同乙醇固定的MEF鼠胚胎成纤维细胞滋养层和MEF活细胞滋养层进行对比,发现结合硫酸乙酰肝素的基底表面的细胞多功能标记基因(Oct-4、SOX-2、Nanog、TRA-1-60与SSEA-4)表达水平与后两者相当,同时也能形成拟胚体;而不结合硫酸乙酰肝素的基底表面,hESC不粘附,也不增殖。因此,材料表面固定硫酸乙酰肝素等生物活性物质对于hESC的未分化增殖有明显促进作用。
1.5 聚合物涂层
虽然细胞外基质蛋白涂层可以很好地促进细胞粘附与增殖,但是直接的物理涂层不能使基质蛋白与TCPS板牢固结合,会在细胞培养过程中造成粘附性蛋白流失,不宜长期使用。另外,细胞外基质蛋白存在整合素配体的多重结合域,其与各种各样的细胞表面受体间形成复杂的相互作用,使它们的相互作用机理非常复杂。
1.5.1 聚合物基底结合短肽序列
目前商业化的SynthemaxTM是结合源于细胞外基质蛋白某一肽段的丙烯酸酯基底(PAS)。Melkoumian等[31]研究发现在几种多肽中,只有骨涎蛋白源的Ac-KGGNGEPRGD-TYRAY和层粘连蛋白源的多肽Ac-KGGPQVTRGDVFT-MP支持H1和H7两种hESC细胞系在化学成分明确、无血清培养基中未分化扩增超过10代,且培养在PAS上的细胞形态、表型标记表达与Matrigel类似;而其他含有整合素结合域(如RGD)的多肽,并不利于细胞的长期增殖,且早期易出现分化,因此仅含有RGD序列的短肽不足以替代Matri-gel或细胞外基质蛋白。
Kiessling[32]利用硫醇自组装单分子层表面结合多肽序列合成了一些功能性多肽,它们具有结合整合素、细胞信号受体或粘多糖(GAGs)的能力。在众多测试的多肽序列中,发现肝素结合肽GKKQRFRHRNRKG能够很好地结合肝素粘多糖,形成的蛋白多糖复合物对于调节细胞粘附、细胞-基底间相互作用和生长因子信号传导具有非常重要的作用。加入软骨素酶后,肝素粘多糖水解,hESC急速脱离基质表面,因此,细胞表面的GAGs在细胞粘附与增殖方面非常重要。
肝素结合肽是与细胞表面的GAGs直接发生作用而不是浓缩聚集细胞分泌的GAGs促细胞粘附,因为外加的可溶性GAGs竞争性地与肝素结合肽作用,反而抑制细胞粘附。结合肝素结合肽GKKQRFRHRNRKG的基底不仅可用于短期的hESC和hiPSC细胞培养,也可作为最佳的基底,用于hESC和hiPSC的长期培养。初步试验表明,细胞可以在其表面自我更新超过3 个月,而对于含其他多肽序列的基底,虽然细胞能在其表面粘附,但之后出现明显的细胞分化。
1.5.2 纯聚合物涂层
细胞接种后,初期吸附在基底表面的粘附蛋白大多来源于所用培养基中的血清,同时所培养的细胞在增殖的过程中也会分泌细胞外基质蛋白,与成纤维细胞不同,hESC和hiP-SC不能分泌足量的粘附蛋白来维持自身处于一种未分化的状态。因此,研究合成可以很好吸附粘附蛋白的聚合物对hESC和hiPSC在无血清条件下的培养是很有意义的。
Mei等[33]从22种不同亲疏水性丙烯酸酯类单体出发,通过它们之间的排列组合,采用长波紫外光引发自由基聚合的方法,制备了细胞相容性的生物材料微阵列,并筛选了几种能够维持hESC和hiPSC克隆性增殖的聚合物表面。材料表面可调节所吸附的蛋白质的量并能改变蛋白质的构象,从而与细胞表面受体相互作用,进而诱导信号传导,改变细胞行为。为研究涂层吸附的不同粘附性蛋白的差异性,Fi-bronectin、Laminin、BSA和FBS分别被吸附在涂层表面,其中FBS能够有效地支持hESC在整个微阵列上的增殖,Fi-bronectin和Laminin则会导致更多的细胞分化,较少的细胞出现在BSA涂层的微阵列表面。这些聚合物表面并不是直接带有受体或配体,而是通过优化涂层表面从培养基中吸附玻连蛋白的量,间接利于细胞的粘附和增殖。
Brafman等[34]通过高通量筛选技术,鉴定了几种可以支持hESC和hiPSC自我更新的聚合物,但是大部分聚合物(如聚2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸(AMPS)和聚苯乙烯磺酸钠)仅能维持hESC和hiPSC的短期增殖,只有甲基乙烯醚与顺丁烯二酸酐的交替共聚物(PMVE-alt-MA)能够支持HUES1、HUES9和hiPSC三种细胞系的长期粘附和自我更新,且细胞能够很好地保持其形态,染色体核型稳定和高水平表达多功能性标记基因。PMVE-alt-MA涂层上的hESC和hiPSC可高水平表达整合素 α5与 αv,而 α5与 αv在调节hESC和hiPSC在细胞外基质蛋白和Matrigel涂层表面粘附方面起着重要作用。实验还发现,PMVE-alt-MA涂层不仅从培养基中吸附外源性的蛋白,而且吸附hESC和hiPSC增殖过程中干细胞自分泌的蛋白;同时也发现它与肝素类似,具有结合各种生长因子(如bFGF)的能力,PMVE-alt-MA涂层支持hESC和hiPSC未分化增殖的机理与含有肝素的MEF滋养层培养或MEF-CM培养基的机理类似。
Ross等[35]通过紫外臭氧活化TCPS板表面,使表面产生自由基,然后接枝聚3-[N,N-二甲基-[2-(2-甲基丙-2-烯酰氧基)乙基]铵]丙烷-1-磺酸钠盐(PMEDSAH),使TCPS表面形成聚两性电解质涂层。在MEF-CM条件下,涂层支持BG01和H9两种hESC细胞系粘附和未分化的长期增殖。但是这种涂层对H9细胞系而言,采用mTeSR1培养基时,H9细胞系无法进行多次传代(mTeSR1培养基中缺少某些必须的信号因子),而采用StemPro培养基时,H9细胞系可以稳定传代10次。
1.6 细菌纤维素膜
Oliveira等[36]分别将hiPSC以同样的密度(1×104cells/cm2)接种在细菌纤维素膜及Matrigel涂层表面,1天后,检测细胞粘附效率,细菌纤维素膜表面粘附率为25.5%,低于Matrigel涂层细胞粘附率(69.6%),培养3天后,细菌纤维素表面细胞增殖5倍(125.8%),而Matrigel涂层表面细胞仅增殖2.8倍(193.8%)。免疫荧光分析OCT-4与SSEA-4的基因表达水平、结合细胞活性、碱性磷酸酶活性等参数结果表明hiPSC在细菌纤维素表面与Matrigel涂层表面效果相当。
1.7 水凝胶
高分子凝胶是由溶剂和高分子三维网络所组成的复合体系,是介于液体和固体之间的软物质材料。它具有与人体软组织类似的性能,可代替软组织在人体中工作,水凝胶作为细胞外基质,能给人体软组织细胞提供一个更好的生长空间。
与肝素相似,聚对乙烯基苯磺酸钠(PNaSS)能结合碱性成纤维细胞生长因子bFGF,而bFGF对于hESC和hiPSC体外自我更新非常重要。Chang等[37]采用自由基聚合的方法,制备了一种丙烯酰胺与苯乙烯磺酸钠的共聚物水凝胶PAm6-co-NaSS2,发现它能够用于HUES9、HUES9-Oct4-GFP、HUES6和hiPS等多种hESC和hiPSC的培养并能保持细胞长期处于未分化的状态。实验还发现,在较硬的(弹性模量约为344kPa)水凝胶表面,HUES9-Oct4-GFP细胞可以很好地粘附,并能保持克隆性增殖和多功能性。另外,HUES9细胞在较低弹性模量(54kPa)的PAm6-co-PSS2水凝胶表面细胞粘附较少,中等弹性模量(138kPa)的水凝胶表面细胞可以很好地粘附,但是会出现大量分化的细胞。
Irwin等[38]通过氧气等离子体法活化12孔TCPS板,使其表面产生自由基,将氨丙基甲基丙烯酰胺(APMAAm)单体溶液、交联剂与光引发剂直接加入到孔板中,紫外光辐射引发交联反应,直接在12孔板表面制备水凝胶,接种在其上的hESC在mTeSR1培养基中成功传代20次,并能保持其多功能性。他们还发现,培养基中补加的牛血清蛋白(BSA)对于细胞在凝胶表面的粘附非常重要。
Zhang等[39]从120种聚合物中最终筛选了25种,并将其涂覆在玻璃片上用于培养hESC,研究了细胞在聚合物基底表面的粘附、细胞活性和细胞形态。他们还选取丙烯酰胺-2-羟丙酯三甲基氯化铵(AEtMA-Cl)和2-(二乙氨基)丙烯酸乙酯(DEAEA)制备了一种温敏水凝胶。研究发现,当AEt-MA-Cl与DEAEA的物质的量比为3∶1时,制得的HG21水凝胶能够支持多种hESC细胞系长期未分化增殖;并且当温度由37℃降至15℃后,约30min即可实现无损伤的细胞脱附和细胞传代。
透明质酸(Hyaluronic acid,HA)是糖胺聚糖中的一种酸性粘多糖,广泛分布于人体及动物体的各个部位。Liu等[40]将巯基化修饰的透明质酸和明胶用聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)交联,制备了一种水凝胶HyStem-CTM,另外,交联前物理混入纤粘连蛋白(FN)制得HyStem-CTM+FN水凝胶。在MEF-CM培养基中,YK26-hiPSC在HyStem-CTM及HyStem-CTM+FN基底表面传代12次后,细胞多功能性标记基因表达率仍大于98%,效果与Matrigel相仿,而NutriS-temTM培养基中,不含FN的HyStem-CTM细胞不出现增殖。研究还发现,不含明胶的透明质酸水凝胶由于缺少直接的细胞粘附位点,表面带有大量羧酸基团,亲水性太强,细胞不发生粘附。而加入明胶的水凝胶,无论是否含有FN都能很好地促进细胞粘附。FN对于细胞粘附和信号传导有所帮助,在MEF-CM培养基下,不添加FN也可获得同样效果。
2 结语
从滋养层到无滋养层的基质胶、细胞外基质蛋白、人重组蛋白、合成短肽和合成聚合物,人全能干细胞培养经历了从未定义基底到定义基底的跨越,但是截止到目前,基质胶涂层TCPS结合定义培养基仍是hESC和hiPSC无滋养层培养,长期未分化扩增的最有效方法。
将从以下几个方面深入研究hESC和hiPSC细胞体外长期自我更新基底材料:
(1)研究合成聚合物共价结合短肽序列复合物,其中的短肽序列不易水解降解,稳定性好,差异小,可控性好,安全和低价。
(2)研究开发更多可用于hESC和hiPSC细胞长期扩增的聚合物涂层,并对材料表面化学和物理特性(亲疏水性、电荷密度、硬度和粗糙度等)及与细胞相互作用的机理进行深入研究。
镇龙中学：徐阳
2000年的金秋季节，不才毕业于绵阳师范学院地理教育专业。毕业至今一直钟情于四川省平昌县镇龙中学，从事高中地理教育工作十多年了。本人从事教育工作以来，我严格遵守各类教育法规制度，认认真真做人。兢兢业业干事。一直自信的我，原以为自己的各方面都很优秀。但是对照这次教师作风整顿的要求，我认真学习，深刻思考，回首过去，金无足赤，人无完人，缺点尤在，现剖析于下：
一、存在的问题及表现
1.以往的工作上着存在“挣工度日”的问题。主要表现是在教育教学工作研究不够深入，教学成绩不是很突出，对事业责任不是最强，对工作热情不是最高。
2.以往的工作上存在“自满自足”的问题。主要表现是你自己的要求不是最高，在工作上取得一点点成绩就自以为是，平时疏于学习，没有加大力度学习而提高自已，遇事往往粗糙解决，工作不够细致，服从意识不上最强，工作凭激情，教学凭经验等问。
3.工作上存在“粗枝大叶”的问题。主要表现是没有严格要求学生。心太软，太放纵学生。
二、今后努力方向及改进措施
1、从现在起加强学习，提高自身的素质和能力
努力、认真学习各方面的知识，做到全面学习和重点学习相结合，不断给自己“加油”和“充电”，经常和同事们相互交流、相互竞赛，努力提高自己的教学水平和能力；认真学习各种规章制度，树立爱岗敬业和安全教学的责任意识；积极参加学校的思想政治学习，努力提高自己的思想素质和业务水平。
2、从现在起严于律已，增强为学生服务的意识
为贯彻落实全县“高标准工作”大讨论活动精神，结合我乡“高标准工作”大讨论活动的实施方案，通过认真思考、深刻剖析，发现了自身存在的一些问题和不足，尤其是开拓创新方面做得不够，通过进一步加强学习，使自己的言行和工作作风更加符合党和国家对一个基层干部的要求。现根据自身实际情况，把自我剖析的情况汇报如下：
一是思想不够解放，观念比较陈旧。工作中习惯于按部就班，不能探索新路子，工作缺乏开拓创新精神，在当前的新形势下，自己的思想还不够解放，观念比较陈旧，看问题、办事情往往习惯于老观点、老经验，老办法，缺乏以先进的思路引导农村先进生产发展的新观念。虽然经常了解学习解放思想、更新观念的先进经验，使自己的思想有所解放，但解放思想、更新观念的程度还是不够高，解决问题的思路和手段还比较落后，还没能很好地适应当前的社会形势。
二是工作缺乏较强的内动力，存在工作乏力现象。面对复杂的工作事务，自己思想上存在做多做少一个样的不良思想。主要问题表现在：工作任务的完成缺乏坚强的意志和毅力，不愿意去多做事、多管事，对自己分管的工作有督促检查不严的表现，有怕得罪人的想法，工作缺乏主动性，缺乏较强的内动力。三是作风不够深入。进村入户少，调查研究较少，对农村情况掌握不细，掌握不深，对农村事务基本上一般都是凭经验去分析和处理，虽然有时能较好地解决问题，但是对一些新情况、新问题解决起来还有不恰当的方面，抓工作落实的力度还不够，在践行群众路线方面不够扎实。另外，有些工作习惯于搞形式，对能否解决多大实际问题并没有深入研究。有时对工作处理不很及时，对村干部的思想工作做得不深不细，交心谈心的时间较少。
档案是国家和人民的宝贵历史财富, 对当前和未来都具有重要作用, 对从事社会实践活动的主体具有凭证和情报作用。档案部门所保存的每一个案卷、每一份文件, 其价值不尽相同, 有的长久起作用, 有的只是在一段时间内发挥作用, 有的则由于时间和条件的变化而降低或失去了保存价值。如果不论档案有无价值和价值大小, 玉、石不分地全部保存起来, 同时还在源源不断地吸纳这样新的档案, 势必造成原有的档案体系逐渐拥塞庞大起来, 致使有价值的档案淹没于大量失去保存价值的档案之中, 一方面增大库存, 另一方面影响档案的检索查找。这就需要档案的鉴定工作。
档案的鉴定工作主要包括5项内容:1.按照国家档案行政管理部门的规定, 制定档案保管期限表, 具体审核档案材料的保存价值并确定它们的保管期限;2.确定需要保存的档案, 划分保管期限;3.定期审查超过保管期限的档案, 对确无保存价值的, 经过严格批准手续, 予以销毁;4.档案鉴定的组织管理工作;5.对历史档案确定其保存价值, 酌情销毁。这5项内容归纳起来主要是两个方面:一方面, 确定哪些档案应该保存, 保存多长时间;另一方面, 确定哪些档案不予以保存, 进行销毁。
鉴定档案, 必须从国家和人民的整体利益出发, 运用全面的、历史的、辨证的以及发展的观点, 正确分析和鉴别档案的保存价值, 准确划分档案的保管期限, 这是档案鉴定工作的原则。
档案是人类历史活动的产物, 档案的内容、形式与其形成的历史条件密切相关, 所以要分析档案的价值必须把它放在形成的历史条件中去, 具体分析档案的内容和形式, 以及档案之间的相互联系、特定作用。所谓全面的观点, 是要分析档案方方面面特征, 包括档案的来源、内容、形成、时间、文本以及载体形式等, 最后综合判定档案价值, 还要全面预测社会对档案利用的需要。档案的价值有时效性和扩展性的特点, 所以鉴定档案要有发展的眼光, 既要看到当前作用, 也要看到未来需要, 从而预测档案的长远价值。
档案鉴定的标准分为内容标准、职能标准、来源标准和形式特征四类。
分析档案的内容是鉴定档案价值最重要的一个方面。在内容的鉴定过程中要审阅文件正文中记述和说明的事情、事件和问题, 分析对社会利用的意义及其满足利用需要的程度。这些因素对档案的保存价值往往具有决定性的影响。这里需要强调一点, 一般来说, 内容重要、价值较大的, 如本机关职能活动中形成的重要业务文件材料, 本机关召开重大会议、举办重要活动等形成的文件材料, 本机关人事管理工作形成的文件材料, 本机关事务管理中形成的重要文件材料, 本机关关于重大业务问题的请示与上级机关的批复、批示, 年度工作报告、总结、统计报表等以及上级机关制发的属于本机关主管业务的文件材料等等反映机关基本职能活动和历史面貌的文件属于永久保存。而反映一般日常事务性活动和内容重复的文件, 价值就不大。
分析文件的职能首先分析文件是否反映了立档单位主要职能活动和基本历史面貌, 如果同样是内部组织机构, 主要职能部门形成的文件的保存价值往往大于部门形成的文件价值;其次分析立档单位在社会上的地位和作用, 一般来说, 比较重要的机构形成的档案的价值相对大些。
在实际操作中, 往往会发现同类内容的文件, 由于来源和形式特点的不同, 反映的文件的作用就不尽不同, 其保存价值便产生很大差别。这就要求在甄别文件保存价值的时候要密切联系文件的来源和形式特点, 进行综合分析判定。分析文件的来源就是从档案的形成者, 即立档单位和文件作者方面去分析文件的价值。本单位形成的文件材料, 直接反映了本单位的基本职能活动、组织机构沿革和发展轨迹, 应作为保存的重点。分析文件的形式就是分析文件文种的名称, 文种的名称标志着文件的不同用途, 例如, 决定、命令、会议记录比起通知和函, 价值就大。从而也可以看出文件的不同价值。
分析文件的形式特点, 如制成材料、笔迹、图案等的不同, 也影响档案价值的判定。
文书档案的鉴定程序十分复杂。在具体鉴定时, 需要拆卷、重新组卷, 重新抄写卷内文件目录, 调整档号, 再重新组卷, 再调整检索工具。这样, 才能保证留存档案的日后管理和利用。同时, 案卷目录、全引目录、专题目录等检索工具都需作相应调整、更改。这是牵一发而动全身的操作。随着以件为保管单位的档案整理方法的诞生, 并辅助于计算机管理档案、档案鉴定的诸多环节趋于便捷, 便于随时剔除失去保管价值的文件。如剔除某份文件, 可不必考虑拆卷这一棘手问题。在档案的保管期限进行调整时, 可利用计算机进行检索工具的调整、删改, 极大地提高了工作效率。
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